专利名称：一种促血管新生的中药复方制剂的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种中药复方制剂，尤其涉及一种促血管新生的中药复方制剂。
背景技术：
目前缺血性心脏病的治疗方法主要有药物治疗、冠状动脉旁路移植术(CABG)、经皮冠脉内血管成形术(PTCA)以及心肌内激光打孔等，但部分患者药物效果不佳，又不适宜血管重建术，且CABG和PTCA术后25％-50％的再狭窄率至今尚无完全解决的办法，因此国际上心血管病学者设想通过治疗性血管新生来减轻心肌缺血，即血管新生疗法受到越来越多的重视，现已成为冠心病治疗研究的最新热点。机体组织缺血时往往有侧枝形成，如冠状动脉急性闭塞时主要通过原有小动脉扩张维持灌注量，而渐进性闭塞时，血管新生侧枝形成则对血流量的维持更为重要。血管新生疗法正是通过强化这一过程来治疗冠心病。研究发现多种生长因子能促进血管新生，因而通过给予外源性生长因子或促进它们产生的药物，可以达到自身冠脉搭桥的目的。
中草药治疗冠心病虽然有着悠久的历史，但按照现代医学，尤其是循证医学的标准，中草药治疗冠心病心肌缺血尚未获得确切疗效的证据。如果中草药能够促血管新生，其作用机理与应用值得探讨。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种促血管新生的中药复方制剂，其具有促进缺血心肌血管生成的作用，从而能有效治疗冠心病心肌缺血。
为解决上述技术问题，本发明一种促血管新生的中药复方制剂，由以下重量比的原料药制成降香5％～95％，红景天5％～95％。
优选为降香75％，红景天25％。
本发明选择降香、红景天进行组合，将这些药材组合使得各药物功效产生协同作用，从而能有效促血管新生。其中，降香为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T.Chen树干和根的干燥心材；红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.L.Thoms.)H.Ohba的干燥根及根茎。降香具有理气、补气的功效，红景天具有活血化淤的功效。
为了达到更好的疗效，本发明还与白芍进行组合。白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。白芍具有补血养血的功效。三味药合用，可平补气血，行气化瘀，使补而不滞，虚实兼顾。
本发明中药复方制剂还可以由以下重量比的原料药制成降香8％～90％，红景天8％～90％，白芍2％～40％。
优选为降香40％，红景天20％，白芍40％。
本发明中药复方制剂是中药内服制剂，优选为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
本发明的中药复方制剂可以采用中药制剂的常规方法制备。例如可以在一定量、一定组成的原料药中，加入一定量的萃取剂，分别加热回流提取2次，时间分别为2h、1h，过滤，合并萃取液，浓缩，得中间体。加入一定的辅料，可得不同剂型的内服制剂，如颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
本发明中药复方制剂的用量和疗程可根据剂型、患者的年龄、疾病的轻重程度作适当调整，但一般为每日口服2次，每次2片(粒)(袋)(瓶)，以6个月为一个疗程，可连续使用3个疗程或更长时间。
本发明具有以下有益效果经过药效学研究，比较单味药物降香、红景天、白芍和本发明中药复方制剂的量效曲线，在常用浓度下，复方提取物的药效要比单味药物更为强大，证实了本发明复方制剂的合理性和配伍的必要性。采用ABC法检测鸡胚CAM组织中血管内皮VIII因子，证实了滴加本发明复方提取物药液后，胚层增生，间充质中的新生血管确实增加。这些实验结果提示本发明中药复方制剂在心脏内科临床，具有促进缺血心肌血管生成作用，从而能有效治疗冠心病心肌缺血。
图1是补气理气药物的促血管新生比较图；图2是活血化淤药物的促血管新生比较图；图3是养血补血药物的促血管新生比较图；图4是本发明各药物的促血管新生效应和浓度的关系曲线图。
具体实施例方式
以下通过试验例对本发明的有益效果作进一步的阐述试验例1促血管新生作用研究(单味药物)选择11种中草药降香、前胡、黄芪、党参、红花、丹参、红景天、赤芍、川芎、当归和白芍，在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型上，以生理盐水为阴性对照，生长因子FGF为阳性对照，以血管指数为主要药效指标，研究其促血管新生的作用。
1.原料和试剂1)选取三组待选药物中草药，理气补气组降香、前胡、黄芪、党参；活血化淤组红花、丹参、红景天、赤芍、川芎；养血补血组药物当归、白芍(购自上海众益达号中药店)；2)孵育第7天的鸡胚(上海沪广家禽育种有限公司)；3)0.45μm和0.25μm微孔滤膜；4)阳性对照药物bFGF(即贝复济，珠海东大生物制药有限公司生产，批号(98)卫药准字S-01号，总浓度36000Au/ml)。
2.仪器微量进样器，眼科镊及剪，无菌透明膜，解剖显微镜(8X或16X)，打孔器(直径5mm)等。
3.实验方法3.1被测物的制备(1)各中药提取物的制备在各中药中，加入10倍药材量的水，浸泡1小时，加热回流提取2小时，过滤。药渣中再加入8倍量水继续加热回流1小时，过滤。合并两次滤液，于水浴上浓缩成每毫升相当于原药材0.5g/ml的母液，用0.22μm的微孔滤膜过滤消毒后备用。
(2)滤膜载体的制备利用打孔器将0.45μm的微孔滤膜制成直径5mm的圆片，121℃高压灭菌30分钟后待用。
3.2中药对CAM血管生成影响效应之测定(参考张树成等法[1])(1)鸡胚孵育若干白皮种蛋消毒后放入37℃孵化箱，气室向上，每天小心转动3-4次，至第6天用照卵灯选择良好的鸡胚供实验使用；(2)取孵化第7天的鸡胚在气室端钻约1.0mm的小孔，并穿透气室壳膜，在胚头右下方划定1cm×1cm的位置开窗，揭除该处蛋壳及壳膜，小心露出绒毛尿囊膜；(3)将滤膜放在绒毛尿囊膜的血管较少部位，用微量进样器将待测液(0.5g/ml)或生理盐水5μl滴入，灭菌透明胶带封窗后放入孵化箱；(4)孵化72小时后，取出鸡胚，用甲醇∶丙醇＝1∶1的混和固定液固定30分钟后将膜取出展开，贴在滤纸上，晾干后拍照保存；(5)血管计数采用“血管指数”进行盲法计数。计数时，以滤膜的圆心为圆心，在其周围形成一个1mm的圆环。凡经过圆环的放射状血管，只要可以辨认，无论是毛细血管、小动脉，还是小静脉，若与滤膜半径的夹角小于45度者即可计数。在环内分支出的新血管应单独计数。
4.结果研究结果显示理气补气、活血化淤和养血补血中药都存在不同程度的促血管新生作用，但和阳性对照药bFGF相比都呈弱势，并有统计学上的差异，分析可能与药物浓度或中药中有效成分的纯度有关。三组药物中，从对血管计数这一指标的影响来看，降香、红景天和白芍在各组中表现最显著，与阴性对照组的差异最明显，而其余各药均有一定效果。
同类举例
第一组补气理气药物
如图1所示，在上述补气理气药物中，从对血管计数这一指标的影响来看，降香的表现最显著，促血管新生效果最明显。
第二组活血化瘀药物
如图2所示，在上述活血化瘀药物中，从对血管计数这一指标的影响来看，红景天的表现最显著，促血管新生效果最明显。
第三组养血补血药物
如图3所示，在上述养血补血药物中，从对血管计数这一指标的影响来看，白芍的表现最显著，促血管新生效果最明显。
试验例2促血管新生作用研究(组合药物)将75％的降香、25％的红景天配伍得中药复方1；将40％的降香、20％的红景天、40％的白芍配伍得中药复方2。对于五种中药提取物(降香、红景天、白芍、复方1、复方2)采用5个剂量组，及阳性对照(bFGF)分别采用3个剂量组，进行检测，并对实验结果加以比较
结果1.六种药物的血管指数值
2.平滑曲线的描绘如图4所示。
结果表明采用同一浓度时，复方1、复方2的促血管新生效应均强于其他单味药物，且复方1与复方2作用的效果及趋势几乎是一致的。
试验例3免疫组化法鉴定新生的血管内皮细胞和血管结构1.原料和试剂标本CAM组织标本，取样时要求同Barnhill和Ryan的组织学分析，取得阴性对照组、阳性对照组和新复方制剂组的代表样本，石蜡切片，厚4μm。
试剂1)兔抗人第八因子多克隆抗体(注DAKO兔抗人八因子抗体与鸡有强烈的交叉反应)，工作浓度1∶100，DAKO产品；2)生物素兔抗小鼠IgG(b-RAMC)，工作浓度1∶100，Vecter公司产品；3)ABC试剂(至少在用前半小时配制)，工作浓度1∶100，Vecter公司产品；4)正常兔血清，工作浓度1∶20，实验室自制；5)0.3％H2O2-甲醇溶液(临用前配1ml的30％H2O2加甲醇溶液至100ml，充分混匀)；6)0.1％胰蛋白酶消化液(称取胰蛋白酶100mg，无水Cacl2100mg，放于小烧杯内，加少量蒸馏水调成糊状，再稀释至100ml，用0.1％mol/LNaOH调PH至7.8，用前预温，使溶液温度达到37℃)；7)DAB显色液(即3，3’-二氨基联苯胺显色液)DAB取5mg，0.05mol/LpH7.6的TBS10ml，30％H2O25ul，将DAB溶于TBS中，充分搅拌使之溶解后，用双层滤纸过滤，用前加30％H2O25μl，显色时间5-10min，显色阳性结果为棕褐色。(注0.05mol/L pH7.6 TBS配制0.2mol/Ltris250ml；0.1mol/L Hcl400ml；Nacl8.5g；蒸馏水加至1000ml)；8)0.01mol/l pH7.4 PBS；9)1％甲基绿。
2.实验方法染色步骤1)石蜡切片常规脱蜡后，用自来水洗，再用蒸馏水洗；2)切片入0.3％H2O2-甲醇溶液，37℃，30min，以消除组织内源性过氧化物酶活性；3)切片经水洗，蒸馏水洗，入已预热的0.1％胰蛋白酶消化液，37℃，30min；4)切片经蒸馏水洗，再用PBS洗5min*3次；
5)擦去组织周围PBS，滴加1∶20正常兔血清，置切片于湿盒内，37℃，20min；6)倾去正常兔血清，滴加1∶100的多克隆抗体，37℃，1小时，移至4℃冰箱过夜；7)隔夜取出的切片以PBS洗5min*3次；8)滴加1∶100b-RAMC，37℃，1小时，切片以PBS洗5min*3次；9)滴加1∶100的ABC试剂，37℃，30min-45min，切片以PBS洗5min*3次；10)滴加DAB显色液，显色时间为5-10min(显微镜下控制显色程度)；11)切片经蒸馏水洗，入1％甲基绿复染细胞核；切片脱水、透明、封固、镜下观察。
3.结果观察标本的横切面，上下两层为鸡胚尿囊膜外胚层的上皮，中间是间充质血管层，其中可见一根中等程度大小的血管，而当给予药物刺激后，可见有上层的外胚层上皮增生，中间的间充质层血管到处可见，即使在低倍镜视野中也能观察得很清楚。
血管八因子的检测结果从另一方面显示复方1、复方2与阴性对照相比，明显存在较多的阳性细胞，和阳性对照组的结果很接近。这一组织学检测结果和观察血管指数定量指标的结论是一致的，血管新生不仅表现在宏观上的血管数目增多，血管直径加大，而且有一致的组织学变化，通过第八因子多克隆抗体和血管内抗原结合染色后观察血管内皮细胞，提示新生血管的生成和较大血管的数目较阴性对照组明显增多。
研究表明采用ABC法检测鸡胚CAM组织中血管内皮VIII因子，证实了滴加本发明的复方1、复方2药液后，胚层均增生，间充质中的新生血管确实增加。
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述实施例1称取原料药降香30克，红景天570克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤；弃药渣，合并两次萃取液。浓缩，干燥，得干浸膏；再加入适量辅料后，制得颗粒剂。
实施例2称取原料药降香450克，红景天150克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤；弃药渣，合并两次萃取液。浓缩，干燥，得干浸膏；再加入适量辅料后，制得片剂。
实施例3称取原料药降香570克，红景天30克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤，取滤液，浓缩至一定体积，加入适量辅料，灌装制得口服液。
实施例4称取原料药降香48克，红景天540克，白芍12克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤；弃药渣，合并两次萃取液。浓缩，干燥，得干浸膏；加入适量辅料，制粒，灌制成胶囊剂。
实施例5称取原料药降香240克，红景天120克，白芍240克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤；弃药渣，合并两次萃取液。浓缩，干燥，得干浸膏；再加入适量辅料后，制得颗粒剂。
实施例6称取原料药降香540克，红景天48克，白芍12克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤；弃药渣，合并两次萃取液。浓缩，干燥，得干浸膏；再加入适量辅料后，制得片剂。
实施例7称取原料药降香300克，红景天300克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤，取滤液，浓缩至一定体积，加入适量辅料，灌装制得口服液。
实施例8称取原料药降香360克，红景天120克，白芍120克，在该原料药中，加入10倍量的水，加热回流提取2h，过滤；再加入8倍量的水，加热回流提取1h，过滤；弃药渣，合并两次萃取液。浓缩，干燥，得干浸膏；加入适量辅料，制粒，灌制成胶囊剂。
权利要求
1.一种促血管新生的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量比的原料药制成降香5％～95％，红景天5％～95％。
2.如权利要求1所述的中药复方制剂，其特征在于，所述原料药的重量比为降香75％，红景天25％。
3.如权利要求1所述的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量比的原料药制成降香8％～90％，红景天8％～90％，还包括白芍2％～40％。
4.如权利要求3所述的中药复方制剂，其特征在于，所述原料药的重量比为降香40％，红景天20％，白芍40％。
5.如权利要求1所述的中药复方制剂，其特征在于，所述的中药复方制剂是中药内服制剂。
6.如权利要求5所述的中药复方制剂，其特征在于，所述的中药内服制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液。
全文摘要
本发明公开了一种促血管新生的中药复方制剂，其主要是由降香、红景天按一定重量比制备而成。本发明中药复方制剂具有促进缺血心肌血管生成作用，能有效治疗冠心病心肌缺血。
文档编号A61K9/20GK1951414SQ20051003061
公开日2007年4月25日 申请日期2005年10月18日 优先权日2005年10月18日
发明者范维虎, 阮克锋, 李勇, 王娟, 蒋霞, 沈平孃, 叶子, 林志宏 申请人:国家中药制药工程技术研究中心, 上海中药制药技术有限公司