专利名称：一类非核苷类抗病毒抑制剂及其制备方法和用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一类抗病毒抑制剂，具体指一类可作为非核苷类抗病毒抑制剂的双五元杂环串联小分子有机化合物，该类化合物可用作治疗流感、乙型肝炎、疱疹、爱滋病等疾病的药物。本发明还涉及该抗病毒抑制剂的制备方法。
背景技术：
人类致病病毒是一种核酸颗粒，结构极为简单，多数缺乏酶系统，只能依赖宿主细胞复制其核酸和蛋白质，然后装配成病毒颗粒而增殖。病毒感染引起多种疾病，严重危害人类的健康和生命。据不完全统计，约60％流行性传染病是由病毒感染引起地。迄今，全世界已发现的病毒超过3000种，而且新的病毒还在不断被发现。2002年8月在巴黎召开的世界病毒学大会上，由国际病毒分类委员会提出的第7份报告收录了3600多种病毒，其中使人类致病的病毒有1200多种，分为29个科，7个亚科，53个属。当前，发病率高、危害大的病毒主要有流感病毒、乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、疱疹病毒等。
对病毒性疾病的治疗至今仍缺乏专属性强的药物，临床上常用的药物主要有如下几类抑制病毒复制的抗病毒药；增强机体免疫功能的免疫调节剂；针对临床症状的止咳、镇痛、解热和消炎等治疗药；防止继发感染的抗感染药；预防病毒感染的疫苗及阻断病毒传播的消毒药等。
国外对治疗病毒性疾病新药的研制侧重于开发抗病毒药。目前，抗流感病毒药物有金刚烷胺类药物、流感病毒神经氨酸酶抑制剂、流感病毒受体阻断剂和抗流感病毒反义寡核苷酸等，临床应用的主要为金刚烷胺类药物和神经氨酸酶抑制剂。肝炎病毒感染是当今国际公认的治疗学难题，在肝炎病毒中的乙型(HBV)、丙型(HCV)和丁型(HDV)在急性感染后有80％以上会转为慢性，其中，20％若持续感染有可能发展成肝硬化，其中的1％～5％转为肝癌，国际卫生组织已把肝炎列为世界第九死因。我国是病毒性肝炎的高发区，乙型肝炎病毒携带者有1.2亿人，估计每年因病毒性肝炎导致直接经济损失300亿～500亿人民币。因此，探索与开发抗病毒药物是国内外医药学家工作的重点。80年代曾进行试验的阿糖腺苷、磷酸阿糖腺苷、阿昔洛韦、齐多夫定因疗效不佳，毒性反应大，在国外已不再用于治疗乙肝。近几年各大型企业利用已建立的肝癌细胞株，肝炎病毒转染细胞株或转基因细胞株和转基因小鼠肝炎动物模型遴选抗乙型和丙型肝炎病毒药，开发了多种核苷类药物，对HBV有明显的抑制作用。如拉米夫定(lamivudine)、泛昔洛韦(famciclovir)、洛布卡韦(lobucavir)、阿地福韦(adefovir dipivoxiil)、FTC(二脱氧氟硫代胞嘧啶)、FMAU(氟甲阿糖尿嘧啶)、FDDC(氟二脱氧胞嘧啶)、BMS 200475(环氧羟碳脱氧鸟苷)。1998～2002年国外学者先后对30多个品种进行临床前实验研究。近期进入II～III期临床试验的药物有21个，在这些试验药物中，用于抗乙肝病毒的试验药物多数来自抗HIV逆转酶抑制剂和抗疱疹病毒DNA聚合酶抑制剂，其中，恩替卡韦(enticavir)已经入三期临床，有望在2005年上市。而用于抗丙肝病毒的试验药物多数来自广谱抗病毒药或RNA病毒抑制剂以及具有抗病毒活性的免疫调节剂。
目前已批准的抗病毒药物中，绝大多数是核苷类化合物，在临床运用过程中发现它们主要存在以下缺点1)细胞毒性；2)长期用药产生的抗药性病毒变异株的出现，需要结构不相关的不同药物来对抗，因此发展非核苷类抗病毒药物成为一个引人注意的方向。
发明内容
本发明的目的在于设计与合成一类新型的双五元杂环串联小分子有机化合物作为抗病毒抑制剂，从而为寻找抗病毒药物研究的先导化合物或抗病毒药物开辟途径。本发明的另一目的在于提供制备该类化合物的方法。
本发明所述的一类非核苷类抗病毒抑制剂的具体结构如下
X1为NH，O，S，或CR1；X2为NH，O，S，或CR2；X3为NH，O，S，或CR3；X4为NH，O，S，或CR4；Y1为NH，O，S，或CR5；Y2为NH，O，S，或CR6；Y3为NH，O，S，或CR7；Y4为NH，O，S，或CR8。
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8各自独立地为H；卤素原子；苯基或取代苯基；苄基；C1-C13烷基，其中含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的取代烷基；噻唑基；C2-C6的烯基；C3-C6的环烷基；氧取代的烷基、烯基、苯基、苄基；C1-C2烷氧羰基；羧基；胺甲酰基(
或
腈基取代乙酰基
取代胺基取代烷基
其中R9为H、异丙基或者苄基，其中R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、烷氧基取代烷酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、含有包括烷氧基、烷胺基、卤素原子、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团的取代苯甲酰基、苄酰基、噻吩甲酰基、吡啶甲酰基、酰氨基、叔丁氧羰基(Boc)、2-溴-噻唑-4甲酰基
2，5-二溴-噻唑-4甲酰基
、2-甲基-噻唑-4甲酰基
3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基
2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为I时
Y1为O或者S；
R2为H或者取代胺基取代烷基
其中R9为H、异丙基或者苄基，其中R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、烷氧基取代烷酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、(含有包括烷氧基、烷胺基、卤素原子、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团)取代的苯甲酰基、苄酰基、噻吩甲酰基、吡啶甲酰基、叔丁氧羰基(Boc)、2-溴-噻唑-4甲酰基
2，5-二溴-噻唑-4甲酰基
2-甲基-噻唑-4甲酰基
3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基
2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基
R4为H，C1-C6烷基，苄基；
R6为H，C1-C6烷基；
R7为羧基，C1-C2烷氧羰基，胺甲酰基
胺甲酰基
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为II时
R9为异丙基、苄基，
R7为羧基，
R10为环戊基甲酰基、邻甲氧基苯甲酰基、环戊基-1-烯-乙酰基
邻氟苯甲酰基、噻吩甲酰基；
或者R9为异丙基、苄基、H，
R7为甲烷氧羰基，
R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、苄氧基取代乙酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、(含有包括甲氧基、氟原子、氨基、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团)取代的苯甲酰基、苄酰基、噻吩甲酰基、吡啶甲酰基、3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基
2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基
2-溴-噻唑-4甲酰基
2，5-二溴-噻唑-4甲酰基
2-甲基-噻唑-4甲酰基
或者R9为异丙基，
R7为胺甲酰基
R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、苄氧基取代乙酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、含有氟原子的任意单取代的苯甲酰基、苄酰基、吡啶甲酰基、3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基
2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为III时
其中R2，R3，R6，R7各自独立地为H；卤素原子；苯基或取代苯基；苄基；C1-C13烷基；含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的取代烷基；C2-C6的烯基；C3-C6的环烷基；氧取代的烷基、烯基、苯基、苄基；酰氨基；C1-C2烷氧羰基；羧基。
X4为O、S或者NH。
X1为N或者CH2。
Y1为O、S或者NH。
Y4为N或者CH2。
当R2为H，Y4为N时；
R3为C1-C6烷基；
R6为C1-C13烷基，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，(含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的)取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，卤素原子；
R7为H，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，C1-C13烷基，(含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的)取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，氧取代的烷基，C1-C2烷氧羰基，羧基；
X4为O、S或者NH；
X1为N或者CH2；
Y1为O、S或者NH。
当R3为H，R2为H，Y4为N时；
R6为C1-C13烷基，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，卤素原子；
R7为H，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，C1-C13烷基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，C1-C2烷氧羰基，羧基；
X4为O、S或者NH；
X1为N或者CH2；
Y1为O、S或者NH。
当R3为H，R2为H，Y4为N时；
R7为C1-C2烷氧羰基，羧基；
R6为C1-C13烷基，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；
X4为O或者S；
X1为N或者CH2；
Y1为O、S或者NH。
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为IV时
R6为C1-C2烷氧基；R3为噻唑基，噻吩基，苯基，苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；R1为苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基；X4为O或者S；Y1为O或者S。
本发明通过下列步骤实施
根据化学反应式
aEDC，DMAP/DMF，bNH4OAc，NaOAc or Lawesson’s reagent or POCl3
其中R6为苯基或2-氯，4-氟取代苯基，C1-C13烷基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；R3为H，C1-C6烷基。
X1为N或者CH2。Y1为O，S或者NH。
Lawesson’s试剂结构式
或者根据化学反应式
其中R6为苯基或2-氯，4-氟取代苯基，H，正丁基，甲氧基乙基，2-氯，4-氟苄基。
X4为O或者S。
或者根据化学反应式
a)25％NH4OH，KCN，NH4Cl；b)EDC，DMAP，DMF，
Thiazole-2-carboxylic acid or
Thiophene-2-carboxylic acid c)PPh3，CCl4，
CH3CN
其中R7为苯基，苄基，正丁基。
X1为N或者CH2。
或者根据化学反应式
其中R6为H，异丁基，苄基，正丁基。
或者根据化学反应式
其中R10为C2-C8的烯酰基，C2-C6的烷酰基，苄氧基取代乙酰基，C3-C6的环烷酰基，苯甲酰基，含有包括甲氧基、氟原子、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团取代的苯甲酰基，苄酰基，甲酰基；
或者根据化学反应式
其中R10为C2-C8的烯酰基。
或者根据化学反应式
其中R10为吡啶甲酰基，3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基
2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基
2-溴-噻唑-4甲酰基
2，5-二溴-噻唑-4甲酰基
2-甲基-噻唑-4甲酰基
，吡啶甲酰基，邻氨基苯甲酰基，邻甲氧基苯甲酰基，邻羟基苯甲酰基，噻吩甲酰基；
或者根据化学反应式
其中R10为环戊基甲酰基，邻甲氧基苯甲酰基，环戊基-1-烯-乙酰基，噻吩甲酰基，邻氟苯甲酰基；R9为苄基，异丁基。
或者根据化学反应式
其中R10为C2-C8的烯酰基，C2-C6的烷酰基，苄氧基取代乙酰基，C3-C6的环烷酰基，苯甲酰基，含有氟原子在内的任意单取代的苯甲酰基，苄酰基，甲酰基；
或者根据化学反应式
其中R2为C2-C8的烯酰基；
或者根据化学反应式
其中R2为吡啶甲酰基，3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基
2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基
或者根据化学反应式
或者根据化学反应式
或者根据化学反应式
其中R6为H，甲基。
或者根据化学反应式
aTFA(三氟乙酸)，吡啶，CH2Cl2；bTHF，EDCI，DMAP，DMF；CIBX，甲苯/DMSO；dPOCl3
其中R6为C1-C2烷氧基；R3为噻唑基，噻吩基，苯基，苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；R1为苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基；X4为O或者S；Y1为O或者S。
IBX结构式
以上反应在如下溶剂中进行反应N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈(CH3CN)、甲醇、二氯甲烷、四氢呋喃(THF)、二氯乙烷、甲苯、苯、二氧六环、水或上述溶剂的混合溶剂。有时反应还需要加入吡啶、N-甲基吗啡啉、氯甲酸异丁酸酯、三乙胺、二乙丙基乙基胺或DMAP等活化剂。根据具体化合物的反应情况，反应温度一般为-78℃(如化合物26)至室温(如Wng413.49等)或加热温度从45℃至130℃(如Wang279等)。反应时间根据具体反应物而定。通常用TLC来跟踪测定反应的完成程度，反应完毕后一般采用的后处理方法包括抽滤、浓缩反应液除尽溶剂、萃取、柱层析分离等。最终产物用NMR来检测证明。
本发明中双五元杂环串联小分子有机化合物的合成方法参阅
1.J.Org.Chem.1973；38；3571.2.WO9831687，1997.3.Org.Process Res.Dev.2003；7；696.4.Org.Lett.2004；6；929.5.Chem.Pharm.Bull.1983；31；4549.6.J.Org.Chem.2003；68；1636.7.Org.Lett.2000；2；2769.等文献。
抗乙型肝炎病毒(HBV)活性测试试验
一、试验目的
样品化合物抗乙型肝炎病毒(HBV)活性筛选。试验包括在病毒—细胞水平的试验中，检测样品化合物的细胞毒性、对乙型肝炎病毒表面和核心抗原的分泌，以及病毒核酸(DNA)的复制水平的影响作用。
二、试验原理
乙型肝炎病毒(HBV)转基因人肝癌细胞HepG2.2.15细胞株，在培养时能分泌乙肝病毒颗粒(含抗原和DNA)于培养上清中。
在抗病毒药物的干预下，检测细胞分泌到培养上清中的HBsAg、HBeAg以及病毒DNA含量，参照未加药对照组的含量，可以观测样品药物的抗病毒活性作用；同时检测样品药物的细胞毒性作用。运用MTT法检测样品药物导致50％细胞毒性死亡的数值浓度为(CC50)；用ELISA方法检测样品药物达到抑制HBsAg、HBeAg分泌，以及运用荧光定量PCR法检测样品药物抑制病毒DNA复制量的50％时的浓度数值为(IC50)。
三、实验样品
临时配成实验所需样品药物浓度，每个样品药物做7个稀释浓度的试验，并设拉米夫定等抗病毒药物作为试验的阳性对照药，检测每次试验反应的正常与否。
四、实验方法
a)实验方法及培养上清收集
将HepG2.2.15细胞接种于96孔板中，次日加入样品药物，经定期更换培养液及同浓度的样品药物，于第八天收集培养上清待测。向96孔板中的细胞加MTT，4小时后加MTT溶解液反应过夜，次日在酶标仪上测OD570。根据OD值计算出样品药物对HepG2.2.15细胞的毒性作用，影响细胞生长的状况，导致半数细胞死亡量所需的浓度(CC50)。
b)培养上清中HBsAg和HBeAg含量的检测(ELISA法)
运用HBsAg和HBeAg检测用试剂盒进行检测。向包被好的条形板中加入样品，并加入等量的酶标结合物，37℃反应1小时后洗板，重复5次。加入显色液A和B，15分钟后终止反应，测定OD450/630，并根据OD值计算出样品对HBV抗原的半数抑制率(IC50)。
c)荧光定量PCR法检测培养上清HBV-DNA含量
取适量的培养上清加入到等体积的病毒提取液中，混匀后煮沸，然后于室温10000rpm离心5分钟，取适量的上清用于PCR扩增，同时设置HBV-DNA标准样品5个，做标准曲线。并根据检测所得的病毒DNA复制值，计算出每个样品药物各浓度时对HBV-DNA复制的抑制率，然后再进行样品药物半数抑制率计算获得其(IC50)，对不能进行IC50值计算的样品，给与ICX表示并给出相应的浓度数值。
试验用PCR引物为
P15’ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT3’
P25’ACAGTGGGGAAAGCCCTACGAA3’.
试验用PCR探针为
5’TGGCTAGTTTACTAGTGCCATTTTG3’
五、实验结果
Table 1
Table 2
Table 3
注CC50为样品药物对HepG2.2.15细胞的生长的影响，半数50％致死浓度。
IC50为样品对抗原或DNA拷贝的抑制达半数50％时的浓度。
SI为样品生物活性选择系数。SI值＞2为有效，且越大越好。
NC为无明显生物活性或无法进行计算。
抗流感病毒、疱疹病毒、HIV-1逆转录酶、HIV整合酶活性测试试验
生物活性测试
样品抗HIV-1逆转录酶筛选将HIV-1逆转录酶作用的模板包被在酶标板上，在最适酶反应条件和反应体系中，HIV-1 RT可将含有Biotin-dUTP底物加到反应模板上，用链亲合素标记的辣根过氧化物酶检测酶反应产物中Biotin-dUTP掺入量来反映酶的活性。在反应体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。
样品抗HIV-1整合酶筛选用合成的30个寡核苷酸作供体底物，用合成的20个寡核苷酸作靶底物，在96孔板被供体底物加入纯化的HIV-1整合酶，进行ELISA反应，检测靶DNA的链转移的产物，以生物素标记的碱性磷酸酶系统显色，酶标仪测定OD值。在反应体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。
样品抗疱疹病毒I、II型筛选以Vero(非洲绿猴肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制疱疹病毒I、II型引起Vero细胞病变程度。
样品抗流感甲、乙型病毒筛选以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(CPE)。
部分化合物测试结果
IC50，TC50单位μg/ml。
Table 4
注(1)表中“-”表示样品在最大无毒剂量无抗疱疹病毒活性。
(2)TC50半数有毒浓度；IC50对病毒半数抑制浓度；SI＝TC50/IC50。
Table 5
注TC50半数有毒浓度；IC50对病毒半数抑制浓度；SI＝TC50/IC50。
Table 6
注(1)表中“-”表示样品在初始浓度无抑制HIV-1蛋白酶活性和抑制HIV整合酶活性。
奈非那韦和牛膝多糖(ABPS-y)分别为测试抑制HIV-1蛋白酶和HIV整合酶活性的阳性对照药。
有益效果
本发明设计与合成了一类新型的非核苷类抗病毒抑制剂，能有效抑制流感病毒复制以及乙肝病毒DNA复制、乙肝病毒s抗原和e抗原的合成，可用于制成治疗病毒性疾病的药物，且克服现有核苷类药物存在的细胞毒性，长期用药产生的抗药性病毒变异株的出现，需要结构不相关的不同药物来对抗等缺陷。本发明化合物结构相对简单，易于制备。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
下述制备例中，NMR用Varian生产的Mercury-Vx 300M仪器测定，NMR定标δH/C 7.26/77.0ppm(CDCl3)；试剂主要由上海化学试剂公司提供，产品纯化主要用柱色谱法，硅胶(200-300目)，柱色谱法所用的硅胶型号为粗空(ZLX-II)，由青岛海洋化工厂分厂生产。
实施例1
aEDC，DMAP/DMF，bNH4OAc，NaOAc or Lawesson’s reagent or POCl3
将噻唑2-甲酸1(384mg，3mmol)、化合物2(672mg，3mmol)、N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)(630mg，3.3mmol)、N，N-二甲基吡啶(DMAP)(37mg，0.3mmol)和分子筛混合，冰浴(0℃)条件下冷却，随后依次加入DMF、吡啶(0.35mL，4.5mmol)，TLC来跟踪测定反应的完成程度，反应完毕后用水稀释，EtOAc萃取、浓缩除尽溶剂、柱层析分离得到化合物3(117mg，产率60％)。之后，将化合物3(88mg，0.3mg)与醋酸铵(NH4Ac)(1.2g，15mmol)、醋酸钠(NaOAc)(2.55g，30mmol)混合，加热至130℃，TLC来跟踪测定反应的完成程度，随后冷却至室温，用水稀释，乙酸乙酯萃取、浓缩除尽溶剂、以石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1)柱层析分离等得到化合物4(Wang279)(25mg，产率31％)。用同样方法合成以下化合物
实施例2
将化合物3(88mg，0.3mg)与Lawesson’s试剂(181mg，0.45mmol)混合，之后加入THF(5mL)，回流，TLC来跟踪测定反应的完成程度，随后冷却至室温，浓缩反应液除尽溶剂、萃取、以石油醚/乙酸乙脂(体积比3∶1)柱层析分离得到化合物4(44mg，产率50％)。
用同样方法合成以下化合物
实施例3
将化合物3(88mg，0.3mg)与POCl3(3mL)混合，加热至80℃，TLC来跟踪测定反应的完成程度，之后将反应液倒至0℃的碳酸氢钠(NaHCO3)溶液，除去POCl3，之后乙酸乙酯萃取、浓缩除尽溶剂、以石油醚/乙酸乙脂(体积比4∶1)柱层析分离等得到化合物4(64mg，产率80％).用同样方法合成以下化合物
实施例4
将化合物5(443mg，1.6mmol)溶于苯(10mL)中，依次加入6(3.2mmol)的THF(4mL)溶液、催化剂四三苯基磷钯(Pd(PPh3)4)(10mg)，加热至100℃，TLC跟踪反应，反应液浓缩，以石油醚/乙酸乙脂(体积比3∶1)柱层析分离得产物7(Wang282-1)(100mg，产率25％).用同样方法合成以下化合物
实施例5
a)25％NH4OH，KCN，NH4Cl；b)EDC，DMAP，DMF，
Thiazole-2-carboxylic acid；c)PPh3，CCl4，CH3CN
将苯甲醛(2.7g，25mmol)加至含氰化钾(KCN)(1.95g，30mmol)、氯化氨(2.0g，37.5mmol)的25％的氨水溶液(20mL)中，室温搅拌56小时，TLC跟踪，二氯甲烷萃取，硫酸镁(MgSO4)干燥，浓缩溶剂得到化合物9(2.9g，产率90％)；将9(0.8g，6mmol)与EDC(1.4g，7.8mmol)，、DMAP(73mg，0.6mmol)、噻唑2-甲酸(774mg，6mmol)混合，冰浴(0℃)条件下冷却，随后加入DMF(15mL)，TLC来跟踪测定反应的完成程度，TLC跟踪反应，反应结束后，用水稀释，乙酸乙酯萃取、浓缩除尽溶剂、柱层析分离等得到化合物10(0.76g，产率50％)；将10(0.76g，3.1mmol)与三苯基磷(Ph3P)(2.3g，7.75mmol)、四氯化碳(CCl4)(0.48mL，7.75mmol)混合溶于乙腈(20mL)，在45℃反应，TLC跟踪反应，反应结束后，缩除尽溶剂、以石油醚/乙酸乙脂(体积比5∶1)柱层析分离等得到化合物11(Wang261)(485mg，产率60％)。用同样方法合成以下化合物
实施例6
将化合物12(15mg)与氢氧化锂(LiOH)(20mg)混合，加入MeOH和水的混合溶剂，室温反应，TLC跟踪，反应完毕，浓缩溶剂，用1mol/L的盐酸酸化，乙酸乙酯萃取、浓缩除尽溶剂得到化合物13(Wang268)(产率98％)。
实施例7
将化合物14(29.5mg，0.1mmol)与NaHCO3(84mg，1mmol)混合，加入H2O/EtOAc(0.2mL/0.8mL)，渐渐加入酰氯(16mg，0.15mmol)，1小时后淬灭反应。反应液用EtOAc稀释，水相用EtOAc萃取。合并有机相，饱和NaCl溶液洗有机相3遍，MgSO4干燥，浓缩除尽溶剂。混合物经色谱柱纯化，得30mg产品15(Wang363.43-1)，产率83％。同样方法合成以下化合物
实施例8
将3-丁烯酸(10.3mg，0.12mmol)溶于CH2Cl2(2mL)中，冰盐(0℃)浴冷却，10分钟后，依次加入N-甲基吗啡啉(NMM)(0.15mmol)，氯甲酸异丁酸酯(ClCOOiBu)(0.13mmol)，继续搅拌半小时，加入化合物14(29.5mg，0.1mmol)。继续搅拌，逐渐升至室温，TLC跟踪反应，反应完毕用水淬灭反应。用EtOAc萃取，EtOAc相用饱和食盐水洗3遍，MgSO4干燥，浓缩溶剂。混合物经色谱柱纯化(石油醚∶乙酸乙脂＝2∶1(体积比))，得20mg产品16(Wang363.43-2)。产率55％。同样方法合成以下化合物
实施例9
将化合物14(12mg，0.04mmol)与分子筛(100mg)，HOBt(18mg)混合，加入2mL处理DMF，冰盐浴(18℃)冷却，搅拌10分钟。加入噻唑甲酸(6mg，0.045mmol)，继续搅拌半小时后，加入N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(9mg)。继续冰盐浴下反应半小时，逐渐升至室温。TLC跟踪反应。反应完全之后，体系用50mLEtOAc稀释，EtOAc相用100mL水洗3遍，饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩溶剂。混合物经色谱柱纯化(石油醚∶乙酸乙脂＝2∶1(体积比))，得16mg产品17(Wang405.49)。产率96％。同样方法合成以下化合物
实施例10
将化合物18(27mg，0.063mmol)溶于MeOH/H2O(0.8mL/0.2mL)中，冰浴冷却10分钟之后，加入LiOH(26mg)，逐渐升至室温，TLC跟踪反应。甲酯反应完全，反应液浓缩。加入水6mL稀释，稀HCl酸化至酸性，50mLEtOAc萃取，有机相用饱和NaCl洗3遍，MgSO4干燥，浓缩溶剂，得25mg产品19(Wang415.46)。同样方法合成以下化合物
实施例11
将化合物20(20mg，0.05mmol)与NaHCO3(42mg，0.5mmol)混合，加入H2O/EtOAc(0.2mL/0.8mL)，渐渐加入苯甲酰氯(0.075mmol)，1小时后淬灭反应。反应液用EtOAc20mL稀释，水相用EtOAc萃取2遍。合并EtOAc相，饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩溶剂。混合物经色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1))，得20mg产品21(Wang537.59)，产率75％。同样方法合成以下化合物
实施例12
将4-甲基-3-戊烯酸(0.06mmol)溶于CH2Cl2(5mL)中，冰盐浴(-18℃)冷却，10分钟后，依次加入N-甲基吗啡啉(NMM)(0.075mmol)，氯甲酸异丁酸酯(ClCOOiBu)(0.065mmol)，继续搅拌半小时，之后加入化合物20(22mg，0.05mmol)。继续搅拌，逐渐升至室温，TLC跟踪反应。反应完全，用水淬灭反应。EtOAc萃取，有机相饱和食盐水洗，MgSO4干燥，浓缩。混合物经色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1))，得13mg产品22(Wang529.61-2)。产率50％。
同样方法合成以下化合物
实施例13
将化合物20(10mg，0.023mmol)与分子筛(100mg)，HOBt(10mg)混合，加入1mL处理DMF，冰盐浴(-18℃)冷却，搅拌10分钟。之后，加入化合物37(7mg，0.023mmol)，继续搅拌半小时后，加入N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(6mg)。继续冰盐浴下反应半小时，之后逐渐升至室温。反应完全，体系用50mLEtOAc稀释，有机相用50mL水洗3遍，饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩溶剂。混合物经色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1))，得16mg产品23(Wang715.84)。产率97％。同样方法合成以下化合物
实施例14
将化合物24(30mg)与分子筛(100mg)，HOBt(10mg)混合，加入1mL处理DMF，冰盐浴(-18℃)冷却，搅拌10分钟。之后，加入化合物甘氨酸甲酯(10mg)，继续搅拌半小时后，加入N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(6mg)。继续冰盐浴下反应半小时，之后逐渐升至室温。反应完全，体系用50mLEtOAc稀释，有机相用50mL水洗3遍，饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩溶剂。混合物经色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1))，得25mg产品25。
同样方法合成以下化合物
实施例15
将乙腈(4μL，0.08mmol)溶于THF(2mL)，-78℃冷却，加入丁基锂(65μL，0.1mmol)，反应10分钟。加入化合物26(15mg)，-78℃反应。一小时后，用饱和NH4Cl淬灭反应，EtOAc萃取，MgSO4干燥，浓缩。混合物经色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1))，得9mg产品27，产率56％。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.04(d，3H)，1.07(d，3H)，2.58(m，1H)，2.74(s，3H)，4.18(s，2H)，5.47(dd，1H)，6.93(d，1H)，7.44-7.55(3H)，7.83-7.86(2H)，7.94(s，1H).
实施例16
将化合物28(144mg，1eq)与K2CO3(1.06g，10eq)混合，溶于50mLCH2Cl2，室温下加入化合物29(200mg，1.1eq)，TLC来跟踪测定反应的完成程度。浓缩反应液，色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比5∶1))得产品30(144mg，产率60％)。
实施例17
aTFA(三氟乙酸)，吡啶，CH2Cl2；b4N HCl in dioxane，酸，EDCI，DMAP，DMF；CIBX，甲苯/DMSO；dPOCl3
将化合物31(1.24g)、32(0.82mL)、吡啶(1.61mL)与100mL CH2Cl2混合，在-10℃下加入TFA(0.75mL)，保持该温度反应2小时，然后升至室温反应，TLC来跟踪测定反应的完成程度。浓缩反应液，150mL EtOAc溶解，加入水，1N盐酸(30mL)酸化，分离EtOAc相，有机相用50mL饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩有机相。混合物经色谱柱纯化(石油醚/乙酸乙脂(体积比3∶1))得产品33(1.25g，产率66％)。将33(650mg)与4N二氧六环的氯化氢溶液(7mL)在0℃混合，TLC来跟踪测定反应的完成程度，反应完毕，浓缩反应液，得产物；将产物与酸(241mg)，EDCI(392mg)，DMAP(42mg)，吡啶(0.3mL)混合，加入DMF(7mL)，室温反应，TLC来跟踪测定反应的完成程度，反应完全，体系用100mL EtOAc稀释，有机相用100mL水洗3遍，50mL饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩有机相。混合物经色谱柱纯化((石油醚/乙酸乙脂(体积比1∶1))得产品34(220mg)。将34(90mg)与IBX(77.5mg)混合，加入甲苯/DMSO(1mL/0.5mL)混合溶剂，50℃反应2小时，抽滤除去固体，100mL乙醚稀释，50mL饱和NaHCO3溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩有机相得产物35(80mg)。将化合物35(25mg)与POCl3(0.5mL)混合，加热至80℃，TLC来跟踪测定反应的完成程度，之后将反应液倒至0℃的50mL饱和碳酸氢钠(NaHCO3)溶液，除去POCl3，之后50mL乙酸乙酯萃取，50mL饱和NaCl溶液洗3遍，MgSO4干燥，浓缩有机相。混合物经色谱柱纯化((石油醚/乙酸乙脂(体积比2∶1))得产品36(8mg)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.47(t，3H)，4.20(q，2H)，4.26(s，1H)，6.28(s，1H)，7.11(dd，1H)，7.23(dd，1H)，7.27～7.31(m，2H)，7.38～7.41(m，2H)，7.45(d，1H)，7.77(d，1H)
权利要求
1.一类结构式如下的非核苷类抗病毒抑制剂
X1为NH，O，S，或CR1；X2为NH，O，S，或CR2；X3为NH，O，S，或CR3；X4为NH，O，S，或CR4；Y1为NH，O，S，或CR5；Y2为NH，O，S，或CR6；Y3为NH，O，S，或CR7；Y4为NH，O，S，或CR8。
其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8各自独立地为H；卤素原子；苯基或取代苯基；苄基；C1-C13烷基其中含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的取代烷基；噻唑基；C2-C6的烯基；C3-C6的环烷基；氧取代的烷基、烯基、苯基、苄基；C1-C2烷氧羰基；羧基；胺甲酰基(
)，或(
)；腈基取代乙酰基；取代胺基取代烷基(
)，其中R9为H、异丙基或者苄基，其中R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、烷氧基取代烷酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、(含有包括烷氧基、烷胺基、卤素原子、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团)取代的苯甲酰基、苄酰基、噻吩甲酰基、吡啶甲酰基、酰氨基、叔丁氧羰基(Boc)、2-溴-噻唑-4甲酰基(
)、2，5-二溴-噻唑-4甲酰基(
)、2-甲基-噻唑-4甲酰基(
)、3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基(
)、2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基(
)。
2.根据权利要求1所述的非核苷类抗病毒抑制剂，其特征在于
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为I时
R2为H或者取代胺基取代烷基(
)，其中R9为H、异丙基或者苄基，其中R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、烷氧基取代烷酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、(含有包括烷氧基、烷胺基、卤素原子、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团)取代的苯甲酰基、苄酰基、噻吩甲酰基、吡啶甲酰基、叔丁氧羰基(Boc)、2-溴-噻唑-4甲酰基(
)、2，5-二溴-噻唑-4甲酰基(
)、2-甲基-噻唑-4甲酰基(
)、3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基(
)、2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基(
)；
R4为H，C1-C6烷基，苄基；
R6为H，C1-C6烷基；
R7为羧基，C1-C2烷氧羰基，胺甲酰基(
)，胺甲酰基
3.根据权利要求2所述的非核苷类抗病毒抑制剂，其特征在于
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为II时
R9为异丙基、H，
R7为羧基，
R10为环戊基甲酰基、邻甲氧基苯甲酰基、环戊基-1-烯-乙酰基
、邻氟苯甲酰基、噻吩甲酰基；
或者R9为异丙基、苄基、H，
R7为甲烷氧羰基，
R10为H、C2-C8的烯酰基、C2-C6的烷酰基、苄氧基取代乙酰基、C3-C6的环烷酰基、苯甲酰基、(含有包括甲氧基、氟原子、氨基、羟基在内的任意一个、两个或者三个基团)取代的苯甲酰基、苄酰基、噻吩甲酰基、吡啶甲酰基、3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基(
)、2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基(
)、2-溴-噻唑-4甲酰基(
)、2，5-二溴-噻唑-4甲酰基(
)、2-甲基-噻唑-4甲酰基(
)；
或者R9为异丙基，
R7为胺甲酰基(
)，
R10为H、苄氧基取代乙酰基、苯甲酰基、含有氟原子的任意单取代的苯甲酰基、苄酰基、吡啶甲酰基、3-叔丁氧羰基胺基取代吡啶甲酰基(
)、2-取代烷氨基-4-噻唑甲酰基(
)。
4.根据权利要求1所述的非核苷类抗病毒抑制剂，其特征在于
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为III时
其中R2，R3，R6，R7各自独立地为H；卤素原子；苯基或取代苯基；苄基；C1-C13烷基，其中含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的取代烷基；C2-C6的烯基；C3-C6的环烷基；氧取代的烷基、烯基、苯基、苄基；酰氨基；C1-C2烷氧羰基；羧基；
X4为O、S或者NH
X1为N或者CH2
Y1为O、S或者NH
Y4为N或者CH2。
5.根据权利要求4所述的非核苷类抗病毒抑制剂，其特征在于
当R2为H，Y4为N时，
R3为C1-C6烷基；
R6为C1-C13烷基，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，卤素原子；
R7为H，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，C1-C13烷基，含有包括卤素原子、烷氧基或羟基在内的取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，氧取代的烷基，C1-C2烷氧羰基，羧基；
X4为O、S或者NH；
X1为N或者CH2；
Y1为O、S或者NH
6.根据权利要求4所述的非核苷类抗病毒抑制剂，其特征在于
当R3为H，R2为H，Y4为N时；
R6为C1-C13烷基，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，卤素原子；
R7为H，苯基或2-氯，4-氟取代苯基，苄基，C1-C13烷基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基，C1-C2烷氧羰基，羧基；
X4为O、S或者NH；
X1为N或者CH2；
Y1为O、S或者NH。
7.根据权利要求1所述的非核苷类抗病毒抑制剂，其特征在于
当双五元杂环串联小分子有机化合物的具体结构为IV时
R6为C1-C2烷氧基；R3为噻唑基，噻吩基，苯基，苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；R1为苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基；X4为O或者S；Y1为O或者S。
8.如权利要求1所述的非核苷类抗病毒抑制剂的制备方法，其特征在于由化合物1和化合物2缩合制得化合物3，然后环化制得化合物4，
aEDC，DMAP/DMF，bNH4OAc，NaOAc or Lawesson’s reagent or POCl3
反应温度为-78℃至室温或加热温度从45℃至130℃
其中R6为苯基或2-氯，4-氟取代苯基，C1-C13烷基，烷氧基取代烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；R3为H，C1-C6烷基；X1为N或者CH2；Y1为O，S，NH。
9.根据权利要求1所述的非核苷类抗病毒抑制剂的制备方法，其特征在于由化合物31、32经4步反应得到36，
aTFA(三氟乙酸)，吡啶，CH2Cl2；bTHF，EDCI，DMAP，DMF；CIBX，甲苯/DMSO；dPOCl3反应温度为-78℃至室温或加热温度从45℃至130℃
其中R6为C1-C2烷氧基；R3为噻唑基，噻吩基，苯基，苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基，C3-C6的环烷基；R1为苄基，C1-C6烷基，C2-C6的烯基；X4为O或者S；Y1为O或者S。
10.如权利要求1所述的非核苷类抗病毒抑制剂的用途为在制备治疗病毒性疾病的药物中应用。
全文摘要
本发明提供一类非核苷类抗乙肝病毒(HBV)抑制剂，其具体结构如下经药理试验表明该抑制剂能有效抑制流感病毒以及乙肝病毒DNA复制、乙肝病毒s抗原和e抗原的合成。本发明还提供了该抑制剂的制备方法。
文档编号A61K31/427GK1834095SQ200510024468
公开日2006年9月20日 申请日期2005年3月18日 优先权日2005年3月18日
发明者南发俊, 左建平, 王文龙, 王桂凤, 陈海军, 何佩岚 申请人:中国科学院上海药物研究所