牙周病治疗用和/或预防用组合物的利记博彩app

专利名称：牙周病治疗用和/或预防用组合物的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及含有赤竹(Sasa)提取物的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
背景技术：
很早就已知变形链球菌(Streptococcus mutans)与龋齿有很深的关系。
牙周疾病与牙周袋中牙周病相关微生物的异常增殖有关。牙周病相关微生物有伴放线放线杆菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、福赛斯拟杆菌(Bacteroides forthythus)、中间普雷沃氏菌(Prevotellaintermedia)、具核梭杆菌(fusobacterium nucleatum)、二氧化碳嗜纤维菌属某些种(Capnocytophaga spp.)、腐蚀生物(沃林氏菌属某些种(Wolinella spp.)、纤细弯曲菌(Campylobacter gracilis)、啮蚀艾肯氏菌(Eikenella corrodens))、优杆菌属某些种(Eubacterium spp.)、密螺旋体的某些种(Treponema spp.)等，已知它们以各种程度与牙周病相关。目前认为，其中的前两种菌伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌的重要性高。
另外，已知白色念珠菌(Candida albicans)是“鹅口疮”的病原菌，近年来，有人认为口腔内的念珠菌属的某些种(Candida spp.)的异常增殖与牙周疾病具有关联性。
很早就已知赤竹提取物具有抗菌性。例如有报告指出其对于创伤感染症病因菌的细菌——金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌的抗菌效果，以及对被视为胃溃疡病因菌的幽门螺杆菌的抗菌效果。本发明人首先发现通过以固态部分浓度为1-10质量％、优选2-8质量％、进一步优选3-7质量％含有赤竹提取物，可显著表达以往低浓度时从未见过的对特应性等的改善效果、止痒效果，创伤愈合效果也显著提高(例如WO 02/07745)。
但是，赤竹提取物是否对所有细菌都具有有效的抗菌活性，这尚未明确，对细菌具有抗菌活性的天然提取物对念珠菌等霉菌是否也具有抗菌活性，这通常也未明确。

发明内容
本发明的目的在于提供对牙周病的预防和/或治疗有效的组合物。
本发明提供含有赤竹提取物的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
本发明还提供含有赤竹提取物和有机酸的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物优选为乳膏的形态。
本说明书中，“牙周病”不仅包含与牙周袋中牙周病相关微生物的异常增殖有关“牙周疾病”，还包含与变形链球菌有很深关系的“龋齿”。因此，本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物包含“牙周疾病”和“龋齿”的治疗用和/或预防用组合物。
附图简述

图1是在不含赤竹提取物(TWEBS)的培养基上生长的菌苔的扫描电子显微镜(SEM)照片(15000×)。
图2是在存在0.2％赤竹提取物(TWEBS)的培养基上生长的菌苔的扫描电子显微镜(SEM)照片(15000×)。
图3是在不含赤竹提取物(TWEBS)的培养基上生长的菌苔的扫描电子显微镜(SEM)照片(3000×)。
图4是在存在0.2％赤竹提取物(TWEBS)的培养基上生长的菌苔的扫描电子显微镜(SEM)照片(3000×)。
实施发明的最佳方式本发明人研究了赤竹提取物对各种菌类的抗菌效果，发现以固态部分含有1-50质量％、优选2-25质量％、进一步优选4-15质量％赤竹提取物的物质对牙周病相关微生物(伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、福赛斯拟杆菌、中间普雷沃氏菌、具核梭杆菌、二氧化碳嗜纤维菌属的某些种、腐蚀生物(沃林氏菌属的某些种、纤细弯曲菌、侵蚀艾肯菌)、优杆菌属的某些种、密螺旋体的某些种等)、以及链球菌(Streptococcus)等龋齿相关细菌、念珠菌等霉菌类具有显著的抗菌效果，通过在赤竹提取物中含有苹果酸等有机酸，可显著提高抗菌性，从而完成了本发明。赤竹提取物的固态部分浓度低于1质量％，则作为目标的牙周病治疗和/或预防效果表现不充分，而超过50质量％，则刺激过于强烈，不优选。
作为本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物的有效成分——赤竹提取物的原料使用的竹并没有特别限定，可以例举属于赤竹属(SasaMakino et Shibata)的全部竹。例如九枚笹(Sasa paniculata Makino etShibata)、山白竹(Sasa albo-marginata)、白纹阴阳竹(Sasa kurilensisMakino et Shibata)、OKUYAMA Sasa、EZOMIYAMA Sasa、粽笹(Sasapalmate Nakai)、YAHIKO Sasa、Sasa megalophylla Makino et Uchida、MIYAMA Sasa、仙台笹(SENDAI Sasa)、YUKAWA Sasa、ABOI Sasa、ONUKA Sasa等。其中，市售商品的具体例子有九枚笹、山白竹等。例如优选在北海道天盐山系中，于7-10月份采收的九枚笹、山白竹的水提取物。
本发明中所使用的赤竹提取物优选为在100-180℃的水中，对赤竹的鲜叶或干燥叶、优选干燥叶进行常压或加压提取而得到的提取物。
提取方法没有特别限定，例如可使用日本特许第3212278号(日本特开平11-196818号公报)中记载的方法。更具体地说，通过加压热水提取器，在100-180℃处理5-30分钟，提取提取液，将该提取液用水分分离器分离出含水固态部分(含水率40-70％)，接着用饱和水蒸汽处理器将该含水固态部分在100℃-200℃处理5分钟-60分钟，然后再次通过加压热水提取器在100℃-180℃处理5-30分钟，提取提取物，将第一次和第二次的提取物合并使用。也可以使用例如在60-100℃的水中将赤竹干燥叶提取30分钟-12小时左右而得到的提取物。
以固态部分含有50质量％赤竹提取物的市售品有株式会社凤凰堂制造的“TWEBS”、Chloroland Moshiri株式会社制造的“AHSS”。
这样得到的赤竹提取物含有硫成分，换算为硫，则每1g固态部分的赤竹提取物，其含量为约4-10mg，通常约为6-9mg。硫成分中主要的成分可能是含硫氨基酸。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物中，将来自赤竹提取物的硫成分换算为硫，则每100g优选含有4-500mg、进一步优选8-250mg、最优选16-150mg。
赤竹提取物含有鞣质，其含量相对于赤竹提取物的固态部分为5-15质量％左右。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物中，优选以固态部分浓度含有0.05-7.5质量％、进一步优选0.1-6质量％赤竹鞣质。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物可以只含有赤竹提取物作为有效成分，也可以通过将其与适量的有机酸结合使用，进一步提高抗菌效果。所述有机酸有苹果酸、柠檬酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、乙酸、苯甲酸、苯基乙酸、水杨酸、酚类等。特别优选苹果酸。
关于有机酸的使用量，在本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物中优选0.01-5质量％、进一步优选0.02-3质量％、最优选0.05-1.5质量％。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物可以只由赤竹提取物、或赤竹提取物和有机酸构成，也可以将它们与其它成分、载体混合。本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物的剂型可以是液体状、固体状、气体状的任意形式。本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物可以以口服、胃肠道外给予的任意给予形式给予。口服形式有片剂、丸剂、粉剂、液剂、香口胶、糖、巧克力、面包、点心、面、乌冬等食品形式，胃肠道外给予形式有牙膏、漱口剂、局部给予剂(乳膏、软膏等)等。局部给予剂的剂型的例子有将本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物含浸在天然纤维或合成纤维纱布等载体中。
其中乳膏、软膏的形式适合直接涂抹于牙周病患部或龋齿处，因而优选。
制造本发明的各种剂型的牙周病治疗用和/或预防用组合物时，除规定量的上述赤竹提取物之外，还可以使用通常的药物组合物、化妆品、皮肤用组合物、口腔组合物(牙膏、漱口剂)等中所使用的油性成分等基材成分、保湿剂、防腐剂等。
牙周病治疗用和/或预防用组合物中所使用的水可以是自来水、天然水、纯净水等，没有特别限定，通常优选离子交换水等高纯度的水。
油性成分有角鲨烷、牛油、猪油、马油、羊毛脂、蜜蜡等动物性油，橄榄油、葡萄籽油、棕榈油、霍霍巴油、胚芽油(例如米胚油)等植物性油，液体石蜡、高级脂肪酸酯(例如棕榈酸辛酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯)、有机硅油等合成油、半合成油。
油性成分可以结合保护皮肤、赋予软化性效果(用薄膜覆盖皮肤表面、防止干燥，同时具有柔软性、弹性的效果)、清爽感等要求性能适当组合使用。角鲨烷、橄榄油和肉豆蔻酸辛基十二醇酯的组合是优选的例子之一。
为了调节牙周病治疗用和/或预防用组合物的硬度、流动性，可以使用硬脂酸、硬脂醇、山嵛酸、鲸蜡醇、凡士林等固体油，优选硬脂酸和鲸蜡醇组合使用。
为将本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物制造成乳膏组合物，可以使用将赤竹提取物、水、油性成分制成乳膏状的乳化剂。乳化剂没有特别限定，通常将单硬脂酸甘油酯和自乳化型单硬脂酸甘油酯(单硬脂酸甘油酯中添加有乳化剂而得到的)组合使用。
还可根据需要，使本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物中含有稳定剂、保湿剂(湿润剂)、创伤愈合剂、防腐剂、表面活性剂、粘结剂、发泡剂、甜味剂、清凉剂、研磨剂等。
稳定剂有羧基乙烯基聚合物和氢氧化钾的组合、二硬脂酸聚乙二醇酯、磷酸镁等。特别是倍半硬脂酸聚乙二醇酯(二硬脂酸聚乙二醇酯和单硬脂酸聚乙二醇酯的1∶1混合物)(聚乙二醇酯的分子量为1000-2万)，其稳定性高、水相和油相不分离，还可以有效调节乳膏组合物涂抹于皮肤时的硬度。
保湿剂(湿润剂)有透明质酸钠、胶原、芦荟提取物(特别优选来自木立芦荟的芦荟提取物(2))、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸钠等。
创伤愈合剂有尿囊素、甘草酸二钾、甘草提取物、蒿叶提取物等。
赤竹提取物本身具有抗菌作用，因此防腐剂是辅助性应用的物质。例如有苯甲酸钠、对羟基苯甲酸低级烷基酯(例如甲基、乙基、丙基或丁基酯等被称为对羟基苯甲酸酯的化合物)、丙酸钠、混合脂肪酸酯(癸酸甘油酯、月桂酸聚甘油酯-2、月桂酸聚甘油酯-10的混合物)、苯氧基乙醇、感光染料201号(黄色染料)、1，2-戊二醇等，优选对羟基苯甲酸酯、混合脂肪酸酯、1，2-戊二醇。
表面活性剂的例子有N-酰基-L-谷氨酸钠、聚氧乙烯山梨糖醇酐一硬脂酸酯等。
粘结剂有羧甲基纤维素钠等，发泡剂有月桂基硫酸钠、月桂酰基谷氨酸钠、月桂酰基肌氨酸钠等，甜味剂有木糖醇、山梨醇、糖精钠等，清凉剂有薄荷油等，研磨剂有磷酸钙、磷酸氢钙、二氧化硅等。
还可根据需要含有香料成分，例如橙油、柠檬油、橙皮油、香料等。
在以上各成分中加入水、以及根据需要加入有机酸，使总量为100质量％。
将本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物制成乳膏组合物时，各成分的优选混合量(质量％)如以下表1所示。水分以外的各成分的混合量为除掉水分的物质的质量％。
表1

将以上各成分装入具备搅拌翼、优选具备乳化器的加热混合釜中，在70-90℃搅拌混合1-2小时，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物除乳膏组合物之外，还可以以软膏、液状、果冻状、凝胶状、气溶胶、其它形式使用，但乳膏组合物的形式简便且效果大。还可以制成半固体或液体的形式。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物可适量、例如采用乳膏组合物时，可以将0.1-1g左右以每天1-5次、通常1-3次左右涂抹患处、例如牙周病患部或龋齿的齿根、牙周部。涂抹量、涂抹次数可以结合症状的程度适当增减。
在口服摄取时，本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物可以是按照每1kg体重0.01-0.1g左右赤竹提取物固态部分、每天1-5次、通常为1-3次左右摄取。摄取量、摄取次数可根据症状适当增减。
在胃肠道外摄取时，本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物可以是按照每1kg体重0.01-0.1g左右赤竹提取物固态部分、每天1-5次、通常为1-3次左右摄取。摄取量、摄取次数可根据症状适当增减。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物的有效成分赤竹提取物是赤竹属的提取物，其1.25质量％的水溶液对来自人胎儿肾脏的293细胞未显示毒性。
按照固态部分计，本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物含有50质量％的赤竹提取物，对牙周病相关微生物、念珠菌等显示显著的抗菌效果。
本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物的优选实施方案如下。
1.含有赤竹提取物(按固态部分计为1-50质量％)、水、油性成分和乳化剂的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
2.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中油性成分为选自动物性油、植物性油、合成油和半合成油的至少一种。
3.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中油性成分为选自角鲨烷、牛油、猪油、马油、羊毛脂、蜜蜡、橄榄油、葡萄籽油、棕榈油、霍霍巴油、胚芽油(例如米胚油)、液体石蜡、棕榈酸辛酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、有机硅油、硬脂酸、硬脂醇、山嵛酸、鲸蜡醇、凡士林的至少一种。
4.上述1～3中任一项的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中乳化剂是单硬脂酸甘油酯和自乳化型单硬脂酸甘油酯的组合。
5.上述1-4中任一项的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物还含有至少一种选自有机酸、稳定剂、保湿剂、创伤愈合剂、防腐剂和表面活性剂的成分。
6.上述5的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中稳定剂为选自羧基乙烯基聚合物和氢氧化钾的组合、二硬脂酸聚乙二醇酯的至少一种。
7.上述5的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中保湿剂为选自透明质酸钠、胶原、芦荟提取物、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸钠的至少一种。
8.上述5的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中创伤愈合剂为选自尿囊素、甘草酸二钾、甘草提取物、蒿叶提取物的至少一种。
9.上述5的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中防腐剂为选自苯甲酸钠、对羟基苯甲酸低级烷基酯、丙酸钠、混合脂肪酸酯、苯氧基乙醇、1，2-戊二醇、黄色染料的至少一种。
10.上述5的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物还含有至少一种选自橙油、柠檬油、橙皮油、香料的成分。
11.上述牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有赤竹提取物、水、油性成分、乳化剂、稳定剂、保湿剂、创伤愈合剂、防腐剂和表面活性剂，其中油性成分为选自角鲨烷、牛油、猪油、马油、羊毛脂、蜜蜡、橄榄油、葡萄籽油、棕榈油、霍霍巴油、胚芽油、液体石蜡、棕榈酸辛酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、有机硅油、硬脂酸、硬脂醇、山嵛酸、鲸蜡醇、凡士林的至少一种，乳化剂是单硬脂酸甘油酯和自乳化型单硬脂酸甘油酯的组合，稳定剂为选自羧基乙烯基聚合物和氢氧化钾的组合、二硬脂酸聚乙二醇酯的至少一种，保湿剂为选自透明质酸钠、胶原、芦荟提取物、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸钠的至少一种，创伤愈合剂为选自尿囊素、甘草酸二钾、甘草提取物、蒿叶提取物的至少一种，防腐剂为选自苯甲酸钠、对羟基苯甲酸低级烷基酯、丙酸钠、混合脂肪酸酯、苯氧基乙醇、黄色染料的至少一种，表面活性剂为N-酰基-L-谷氨酸钠。
12.上述11的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物还含有至少一种选自橙油、柠檬油、橙皮油、香料的成分。
13.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有赤竹提取物、水、角鲨烷、橄榄油、单硬脂酸甘油酯、自乳化型单硬脂酸甘油酯、羧基乙烯基聚合物、氢氧化钾、尿素、1，3-丁二醇、尿囊素、对羟基苯甲酸低级烷基酯、硬脂酸、N-酰基-L-谷氨酸钠、柠檬油。
14.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有赤竹提取物、水、角鲨烷、橄榄油、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、自乳化型单硬脂酸甘油酯、羧基乙烯基聚合物、氢氧化钾、尿素、1，3-丁二醇、尿囊素、混合脂肪酸酯、硬脂酸、N-酰基-L-谷氨酸钠、橙油。
15.上述1-14中任一项的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有倍半硬脂酸聚乙二醇酯。
16.上述1-15中任一项的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中有机酸为选自苹果酸、柠檬酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、乙酸、苯甲酸、苯基乙酸、水杨酸、酚类的至少一种。
17.上述16的牙周病治疗用和/或预防用组合物，其中有机酸为苹果酸。
18.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有磷酸氢钙、水、山梨醇、甘油、赤竹提取物、二氧化硅、羧甲基纤维素、月桂基硫酸钠、木糖醇、薄荷油、磷酸镁、月桂酰基肌氨酸钠、糖精钠。
19.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有磷酸氢钙、水、山梨醇、甘油、赤竹提取物、二氧化硅、羧甲基纤维素、月桂酰基谷氨酸钠、木糖醇、薄荷油、磷酸镁、月桂酰基肌氨酸钠。
20.上述1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有水、山梨醇、甘油、赤竹提取物、羧甲基纤维素、月桂酰基谷氨酸钠、木糖醇、薄荷油、磷酸镁、月桂酰基肌氨酸钠。
下面给出参考例、实施例和试验例，进一步详细说明本发明。
参考例1赤竹提取物的制备将9月份采集于日本北海道天盐山系的赤竹的干燥叶装入加压热水提取罐，在125℃处理10分钟，用冷却水将热水冷却至80℃左右，用螺杆挤压机分离为提取物和含水固态部分，含水率约为50质量％。接着，将约50质量％含水固态部分装入高压釜，180℃进行10分钟饱和水蒸汽的加压热处理。将经处理的含水固态部分再次装入加压热水提取罐，在110℃处理5分钟，提取提取物。将第一次和第二次的提取物合并，硅藻土过滤，减压浓缩至固态部分为50质量％，经110-130℃的流动灭菌处理，得到赤竹提取物。
该赤竹提取物中硫含量为3850μg/ml(7.7mg/1g固态部分)。
参考例2对竹提取物(Bambuseae Sasa)(株式会社凤凰堂制造“TWEBS”)的成分进行分析，得到以下结果。
水 59.5质量％蛋白质 8.6脂质 0.6
矿物质 9.0碳水化合物 19.8鞣质 2.5实施例1-4将下表2所示的成分按照表2所示的质量比混合，加入到具备搅拌翼和乳化器的加热混合釜中，在80℃搅拌混合2小时，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物。实施例1-4中，固态部分浓度为8质量％的赤竹提取物(将参考例1制造的固态部分为50质量％的赤竹提取物用水稀释得到)的添加量分别为12.5、25、37.5和75质量％(因此赤竹提取物固态部分的含量为1、2、3和6质量％，100g牙周病治疗用和/或预防用组合物中，硫含量为7.7mg、15.4mg、23.1mg和46.2mg)。
表2

实施例5将下表3所示的成分按照表3所示的质量比混合，与实施例1-4同样，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
表3

100g该牙周病治疗用和/或预防用组合物中的硫含量为46.2mg。
实施例6将下表4所示的成分按照表4所示的质量比混合，加入到备有搅拌翼和乳化器的加热混合釜中，在80℃搅拌混合2小时，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
表4

该乳膏的pH为6.00。
实施例7将下表5所示的成分按照表5所示的质量比混合，加入到备有搅拌翼和乳化器的加热混合釜中，在80℃搅拌混合2小时，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物乳膏。
表5

该乳膏的pH为4.68。
实施例8将下表6所示的成分按照表6所示的质量比混合，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物(牙膏组合物)。
表6

实施例9-11实施例7中，调节纯净水的量，使赤竹提取物(固态部分含量为50质量％)的量为16质量％、20质量％和30质量％，其它均同样，得到赤竹提取物固态部分含量为8质量％、10质量％和15质量％的本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物乳膏。
实施例12将下表7所示的成分按照表7所示的质量比混合，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物(牙膏组合物)。
表7

实施例13将下表8所示的成分按照表8所示的质量比混合，得到本发明的牙周病治疗用和/或预防用组合物(牙膏组合物)。
表8


试验例1使用株式会社凤凰堂制造的“TWEBS”(含有固态部分浓度为50质量％的赤竹提取物、1质量％苹果酸的pH约为5.0的溶液)作为实验液。使用无菌蒸馏水进行稀释。细菌进行2倍稀释，为4、2、1、0.5％，念珠菌改变为8、7、6、5、4、3、2、1％，测定MIC。
以GAM琼脂培养基作为感受性测定用培养基，通过琼脂平板稀释法，测定最小生长抑制浓度(MIC)。对兼性菌在24小时有氧培养后实施判定，对厌氧菌在48小时厌氧培养后实施判定。接种菌量为每点约106个。根据需要，使用2N NaOH水溶液或10％氯化氢水溶液进行培养基pH的调节。
念珠菌属的某些种使用在Mycocell琼脂培养基(BD)中培养48小时而得到的受试菌株的菌落，在MH broth(Difco)中调节为McFarland#1浊度的菌液，通过划线涂布法将1白金环(10μl)接种于一系列含有试验液的平板上。1白金环含有约106个细菌。在35℃培养24小时，然后肉眼观察有无生长。确认有生长，则判定为(+)。
使用大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25922、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923作为MIC精度管理用菌株。
使用变形链球菌GTC 218作为龋齿相关细菌。作为对照菌，使用5株认为与龋齿无关的、包含口腔、咽头等上呼吸道病原菌化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)ATCC19615、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)ATCC 6305的革兰氏阳性球菌。将有氧培养的血液琼脂培养基上的纯培养菌用于试验。
牙周病相关微生物使用牙龈卟啉单胞菌ATCC33277、中间普雷沃氏菌ATCC25611、福赛斯拟杆菌、具核梭杆菌ATCC25586、伴放线放线杆菌、Capnocytophaga ohraceus GAI-5586。得到Brucella HK血液琼脂培养基上的纯培养菌并使用。培养使用厌氧性球形培养箱进行。
使用白色念珠菌和光滑假丝酵母(Candida glabrata)共13株。它们是于2002年由各种临床材料分离得到，保存于岐阜大学医学部附属厌氧性菌试验设施中的菌株。
结果如表9-11所示。
表9 对龋齿相关细菌和其它非相关球菌菌群的抗菌力106ml

表10 对牙周病相关细菌的抗菌力 107ml

表11 对白色念珠菌和光滑假丝酵母的抗真菌作用 106ml

总结本发明的赤竹提取物在酸性条件下(pH 6.0-5.0)可以以2％抑制变形链球菌的生长。在相同条件下，也可以以2％抑制本次试验的4种牙周病相关微生物的生长。可以以5％抑制念珠菌属的某些种的生长。
试验例2TWEBS的亚MIC浓度使牙龈卟啉单胞菌(Pg菌)的菌体外分泌物量减少牙垢是表示在牙齿表面形成的生物膜的术语。该生物膜是藏于来自细菌的聚合物或来自唾液的聚合物(例如胞外多糖物质或糖萼(glycocalyx))中生存的多种细菌的集团。牙齿表面的生物膜与口腔粘膜或舌粘膜表面的生物膜相比，其特征在于难以剥落，不受各种杀菌性物质的作用，因此可以理解其作为牙周病的病因，是极为重要的。为了治疗牙周病，破坏该膜是很重要的，对其研究也得到进展。
Pg菌是与牙周病相关的最重要的厌氧菌之一，已知它能生产强力的蛋白酶，在牙龈的破坏中扮演着重要的作用。Pg菌于菌体外产生糖萼。Pg菌的蛋白酶通过小泡释放到菌体外。
如试验例1所示，可知TWEBS对Pg菌显示极强的抗菌作用，可以以0.5％的浓度抑制生长。该试验例中研究了TWEBS对Pg菌的糖萼生产能力的影响。
实验方法使用菌株牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277TWEBS对本菌株的最小生长抑制浓度(MIC)为0.5％或以下。
培养基使用改性GAM琼脂培养基(Nissui制造)培养采用使用ANEROPACK(Sugiyamagen制造)的厌氧培养法。
方法使Pg菌在含有TWEBS的亚MIC浓度的改性GAM琼脂培养基中生长，用电子显微镜(SEM、TEM)观察其菌苔。
A.在改性GAM琼脂培养基中生长的菌苔的肉眼观察1)用涂布棒收集在0.2％TWEBS存在下生长的菌苔、在不含TWEBS的培养基中生长的菌苔。在0.2％TWEBS存在下生长的菌苔与在不含TWEBS的培养基中生长的菌苔相比，粘稠性明显低，在固定液中的扩散性也可见显著差异。
B.对在0.2％TWEBS存在下生长的菌苔的扫描电子显微镜(SEM)观察1)在不含TWEBS的培养基中生长的Pg菌周围可见大量类似糖萼的分泌物的存在，随处可观察到菌体被该糖萼覆盖的图像(图1和图3)。
2)在含有0.2％TWEBS的培养基表面增殖的Pg菌的周围，类似糖萼的分泌物少，菌体被该糖萼覆盖的图像极少。菌体周围的分泌物的量少。可观察到菌体露出的图像(图2和图4)。
Pg菌体的周围可观察到类似小泡的结构物的存在。
总结TWEBS以0.5％或以下的浓度抑制Pg菌的增殖(MIC 0.5％)，这由试验例1可知，但由试验例2可知TWEBS以比MIC低的浓度，即所谓的亚MIC(0.2％)浓度抑制被认为是Pg菌的糖萼的菌体外物质的产生或释放。
产业实用性本发明的组合物可用作牙周袋中与牙周病相关微生物的异常增殖有关的“牙周疾病”和与变形链球菌有很深关系的“龋齿”等牙周病的治疗用和/或预防用组合物。
权利要求
1.牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物含有赤竹提取物。
2.权利要求1的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物还含有有机酸。
3.权利要求1或2的牙周病治疗用和/或预防用组合物，该组合物为乳膏的形态。
全文摘要
本发明涉及含有赤竹提取物的牙周病治疗用和/或预防用组合物，含有赤竹提取物和有机酸的牙周病治疗用和/或预防用组合物。
文档编号A61K47/12GK1832751SQ20048002238
公开日2006年9月13日 申请日期2004年7月29日 优先权日2003年7月29日
发明者土田裕三, 河边光郎, 渡边邦友, 土田小太郎 申请人:株式会社凤凰堂