专利名称：一种穿山龙冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，具体涉及一种穿山龙冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
风湿性关节炎属于慢性疾病，现代中医学中记载与论述的痹征，是指凡由于风、寒、湿、热等外邪侵袭人体，闭阻经络，气血运行不畅所致的以肌肉、筋骨、关节发生酸痛、麻木、重着、屈伸不利，甚至关节肿大灼热等为主要临床表现的病征，中医治疗风湿性关节炎，从痹征进行辩证论治，中医痹征的范围比较广泛，除风湿性关节炎外，现代医学的类风湿性关节炎、痛风性关节炎、骨关节炎以及坐骨神经等疾病均属于痹征。风湿性关节炎属于中医的痹征，对于痹征的辩证，首先要辨清风寒湿痹与热痹不同，热痹以关节红肿灼热疼痛为特点，多见于急性风湿性关节炎，其中从关节疼痛游走不定者为行痹；痛有定处，疼痛剧烈乾痛痹肢体酸痛，肌肤不仁者为着痹，病程日久者，还应辨别有无气血损伤及脏腑亏虚的征候，此型多见于慢性风湿性关节炎，给患者带来巨大的痛苦，临床医生为了缓解患者的疼痛，用中药除湿和西药缓解疼痛的方法，而西药大多是激素类药物，短期应用会缓解症状，但风湿性关节炎需要长期治疗，其治愈过程时间较长，如果长期应用激素类药物会给患者带来很大的副作用，虽然患者也了解用药的危害，但为了缓解病症带来的巨大疼痛只好应用这类药物；治疗风湿性关节炎的中药大多以除湿为目的，对患者的疼痛症状需要西药的配合，并且需要患者具有很好的用药依从性才能达到治疗目的，由于这些原因给患者增加较大负担，因此开发一种具有镇痛效果好、副作用小的治疗风湿性关节炎的中药药物是很多医药工作者的目的。
穿山龙，别名有野山药、串地龙、地龙骨、龙萆，来源为薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino的根茎，主要含薯蓣皂甙(dioscin)等多种甾体皂甙，具有舒筋活血，止咳化痰，祛风止痛的作用，用于腰腿疼痛、筋骨麻木、跌打损伤、闪腰、咳嗽喘息、气管炎。穿山龙中含有薯蓣皂苷，属于甾体皂甙，其皂苷元是合成甾体激素的原料，薯蓣皂苷具有很好的镇痛作用，还具有提高免疫力、抗变态反应等作用，因此，以穿山龙为原料，研究开发治疗风湿性关节炎的注射制剂具有很高的价值。
专利“由黄姜、穿山龙提取薯蓣皂素的方法及用其废渣生产生物有机肥 ”(申请号03127944)采用浓硫酸裂解反应提取，超临界萃取等反应，该方法在大生产中操作危险性较大，生产成本较高，不利于推广；专利“一种制备薯蓣皂苷元的新方法”(申请号02153997) 采用乙醇提取的方法，该方法能够得到目的物，但该方法得到的产物有效成分含量不高，在药用方面缺乏纯化过程，还有待作进一步研究。
发明内容
基于上述原因，本发明采用超声水提取、乙醇沉淀、大孔树脂纯化的方法对穿山龙进行提取纯化得到有效部位，与药用辅料混合，制备成冻干粉针剂，其中控制薯蓣皂苷含量为50％-85％；药理实验结果表明，本发明粉针剂对风湿性关节炎具有很好的镇痛作用，与市售同类品种比较，具有更好的药理作用。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法(1)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水10-20倍，超声提取15-30分钟，放出提取液，再加8-12倍水，超声提取10-20分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.05-1.10，加入乙醇，使溶液含醇量为60％-80％，静置12-24小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；
(2)将上述浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用8-12倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用4-8倍柱体积、浓度为50％-80％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位；(薯蓣皂苷元含量为50％-85％)(3)本发明制剂处方为穿山龙有效部位18-50重量份，药用辅料为50-82重量份；(3)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂。
本发明所用大孔吸附树脂是非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂。
二.检测分析高效液相色谱法进行检测分析实验药物本发明工艺穿山龙有效部位(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)根据标准WS3-B-32制备的穿山龙有效部位(广东天之骄药物开发限公司实验室提供)薯蓣皂苷元(中国药品生物制品检定所)实验方法色谱条件与系统适用性试验用辛基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(97.5∶2.5)为流动相；检测波长为299nm。
理论板数按薯蓣皂甙元的苯甲酰氯衍生物峰计算，应不低于4300。
薯蓣皂甙元的苯甲酰氯衍生物与邻近峰的分离度应符合要求。
对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂甙元对照品12mg，置50ml量瓶中，加苯稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置具塞玻璃瓶中，加入吡啶2滴、苯甲酰氯150μl，摇匀，置80℃水浴中加热1小时，随即加入甲醇2ml，摇匀，开启瓶塞，置水浴中蒸发至4～5ml，移至10ml量瓶中，加少量苯洗涤容器，洗液并入量瓶中，加苯至刻度，摇匀，即得(每1ml中含薯蓣皂甙元0.12mg)供试品溶液的制备分别精密量取不同穿山龙有效部位60mg，分别置150ml圆底烧瓶中，加水17ml，加入2mol/L硫酸溶液20ml，加热回流1.5小时，冰浴冷却，滤过(刷下烧瓶壁附着物，一并滤过)，滤渣及滤纸用水洗至中性，在80℃烘干(约2小时)，置索氏提取器中，加适量苯，加热回流1.5小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约20ml，移至25ml量瓶中，加苯至刻度，摇匀，即得苯提取液；分别精密量取苯提取液5ml，照对照品溶液制备项下的方法，自“置具塞玻璃瓶中”起依法操作，即得。
测定法分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1表1 不同有效部位薯蓣皂苷元含量比较组别薯蓣皂苷元含量根据标准制备的穿山龙有效部位 46.9％本发明穿山龙有效部位 79.8％结论通过以上检测分析实验，我们可以得出本发明穿山龙有效部位中薯蓣皂苷元含量有很大的提高，充分说明本发明工艺具有实际意义。
三.药理实施例实施例1对醋酸致痛的镇痛作用实验药物本发明冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)穿山龙注射液(山东中圣药业股份有限公司)生理盐水(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)实验动物昆明种小鼠(20±2)g，雌雄兼用。
实验方法小鼠30只，分为3组，每组10只，将本发明冻干粉针剂用注射用水溶解与穿山龙注射液相同生药量的溶液，按照2g生药/kg给药剂量给小鼠尾静脉给药，每天1次，给药3天，生理盐水组给药容量0.5ml/只，每天1次，给药3天，于末次给药后1h，ip1％醋酸致痛，观察记录20min内各组小鼠出现扭体动物数及扭体反应次数，与对照组比较，作显著性测定。结果见表2表2 小鼠扭体次数比较组别 扭体动物 扭体次数 抑制率(％))(％)生理盐水10046.9±8.7 -穿山龙注射液10034.2±5.6**27.1本发明冻干粉针剂10020.1±3.8**[*] 57.1[*]注与生理盐水组比较**P＜0.01，与阳性对照组比较[*]P＜0.05实施例2对二甲苯引起小鼠耳壳炎症的影响实验药物本发明冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)穿山龙注射液(山东中圣药业股份有限公司)生理盐水(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)实验动物昆明种小鼠(20±2)g，雌雄兼用。
实验方法小鼠30只，分为3组，每组10只，将本发明冻干粉针剂用注射用水溶解与穿山龙注射液相同生药量的溶液，按照2g生药/kg给药剂量给小鼠尾静脉给药，每天1次，给药3天，生理盐水组给药容量0.5ml/只，每天1次，给药3天，于末次给药后1h，取二甲苯0.05ml/只均匀涂于左耳前后两面致炎，15min后，处死动物，剪下耳壳，两耳重叠，用直径为8mm打孔器取圆片，称量，左右耳重之差作为肿胀度，求出给药组的肿胀抑制率。结果见表3
表3 对二甲苯引起小鼠耳壳炎症的影响组别 动物数 肿胀度 抑制率(只) (mg) (％)生理盐水10 20.59±6.1-穿山龙注射液10 15.61±5.3**24.2本发明粉针剂10 10.35±4.1**[*]49.7[*]注与生理盐水组比较**P＜0.01，与阳性对照组比较[*]P＜0.05结论通过以上药理实验表明，本发明冻干粉针剂具有更好的药理作用。
四.制备实施例实施例1(1)本发明原料药穿山龙2000克(2)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水20倍，超声提取30分钟，放出提取液，再加12倍水，超声提取20分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.10，加入乙醇，使溶液含醇量为80％，静置24小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(3)将上述浓缩液上NKA型大孔吸附树脂柱，先用12倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用8倍柱体积、浓度为80％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位18克；(薯蓣皂苷元含量为85％)(4)本发明制剂处方为穿山龙有效部位18克，药用辅料蔗糖为82克；(5)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂1000瓶。
实施例2(1)本发明原料药
穿山龙2000克(2)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水10倍，超声提取15分钟，放出提取液，再加8倍水，超声提取10分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.05，加入乙醇，使溶液含醇量为60％，静置12小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(3)将上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用8倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用4倍柱体积、浓度为50％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位50克；(薯蓣皂苷元含量为50％)(4)本发明制剂处方为穿山龙有效部位50克，药用辅料乳糖为50克；(5)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂1000瓶。
实施例3(1)本发明原料药穿山龙2000克(2)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水15倍，超声提取20分钟，放出提取液，再加10倍水，超声提取15分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.08，加入乙醇，使溶液含醇量为70％，静置20小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(3)将上述浓缩液上D101型大孔吸附树脂柱，先用10倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用6倍柱体积、浓度为65％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位45克；(薯蓣皂苷元含量为75％)(4)本发明制剂处方为
穿山龙有效部位45克，药用辅料甘露醇为55克；(5)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂1000瓶。
实施例4(1)本发明原料药穿山龙2000克(2)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水12倍，超声提取18分钟，放出提取液，再加9倍水，超声提取12分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.06，加入乙醇，使溶液含醇量为65％，静置15小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(3)将上述浓缩液上NKA型大孔吸附树脂柱，先用9倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用5倍柱体积、浓度为60％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位29克；(薯蓣皂苷元含量为55％)(4)本发明制剂处方为穿山龙有效部位29克，药用辅料蔗糖、甘露醇71克；(5)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂1000瓶。
实施例5(1)本发明原料药穿山龙2000克(2)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水18倍，超声提取28分钟，放出提取液，再加11倍水，超声提取19分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.09，加入乙醇，使溶液含醇量为75％，静置22小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(3)将上述浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用11倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用7倍柱体积、浓度为75％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位36克；(薯蓣皂苷元含量为73％)(4)本发明制剂处方为穿山龙有效部位36克，药用辅料甘露醇、乳糖为64克；(5)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂1000瓶。
实施例6(1)本发明原料药穿山龙20000克(2)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水19倍，超声提取28分钟，放出提取液，再加9倍水，超声提取14分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.07，加入乙醇，使溶液含醇量为65％，静置21小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(3)将上述浓缩液上D101型大孔吸附树脂柱，先用12倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用5倍柱体积、浓度为70％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位359克；(薯蓣皂苷元含量为69％)(4)本发明制剂处方为穿山龙有效部位359克，药用辅料甘露醇为641克；(5)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂10000瓶。
权利要求
1.一种穿山龙冻干粉针剂，其特征在于它是由穿山龙有效部位18-50重量份，药用辅料为50-82重量份组成的，其中穿山龙有效部位中薯蓣皂苷元含量为50％-85％。
2.根据权利要求1所述的穿山龙冻干粉针剂，其特征在于该粉针剂是将穿山龙采用超声水提、乙醇沉淀、大孔树脂柱纯化的方法，得到穿山龙有效部位，与药用辅料混合，制备成的。
3.根据权利要求1所述一种穿山龙冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)取穿山龙饮片，粉碎，放入超声提取罐中，加水10-20倍，超声提取15-30分钟，放出提取液，再加8-12倍水，超声提取10-20分钟，合并两次提取液，浓缩到50℃时相对密度为1.05-1.10，加入乙醇，使溶液含醇量为60％-80％，静置12-24小时，过滤，得到滤液，回收乙醇至尽，得到浓缩液；(2)将上述浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用8-12倍柱体积的水洗，弃去洗脱液，再用4-8倍柱体积、浓度为50％-80％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到穿山龙有效部位；(3)将穿山龙有效部位与药用辅料混合，加注射用水溶解完全，用0.22um滤芯过滤，滤液注入西林瓶中，冷冻干燥，得到穿山龙冻干粉针剂。
4.根据权利要求2所述的大孔吸附树脂是非极性大孔吸附树脂。
5.根据权利要求2所述的大孔吸附树脂是弱极性大孔吸附树脂。
全文摘要
本发明公开了一种穿山龙冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于从中药穿山龙提取纯化的有效部位，与药用辅料组合，制备成冻干粉针剂；其特征还在于穿山龙有效部位中薯蓣皂苷元含量为50％－85％；药理实验结果表明，本发明冻干粉针剂具有更好的药理作用。
文档编号A61P19/02GK1634153SQ200410086729
公开日2005年7月6日 申请日期2004年10月29日 优先权日2004年10月29日
发明者张平 申请人:张平