专利名称：补骨脂抗幽门螺旋杆菌感染及治疗相关性疾病的应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及传统中药的新用途，具体涉及补骨脂及其提取物在抗幽门螺旋杆菌感染及治疗与幽门螺旋杆菌感染相关的疾病上的应用。
背景技术：
慢性活动性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡、胃MALT淋巴瘤和胃癌是严重危害人类健康及生命的疾病，医学研究证实以上疾病均与幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，简称Hp)感染有关。资料显示，全世界约有50％以上的人口感染幽门螺旋杆菌，以发展中国家尤为严重，成年人幽门螺旋杆菌感染率达60-80％。1994年国际癌症研究机构(IARC)将Hp列为人类I类致癌源。目前国内外都采用抗内分泌药及抗生素联合疗法来治疗Hp的感染，但由于副作用大，病人耐受性差，又易产生耐药性，疗效及应用受到了影响。因此，寻找抗Hp感染和治疗与其相关疾病的新途径成了人们关注的研究课题。
豆科植物补骨脂(Psoralea corylifolia L.)为常用传统中药，现代药理学研究表明，其提取物或有效成分具有扩张冠脉、抗肿瘤、抗早孕、增强机体免疫力、对抗组织胺引起的气管收缩、杀虫抗菌等作用，临床上常用于治疗银屑病、白癜风、斑秃、外阴白斑、白细胞减少症及支气管哮喘等疾病。
补骨脂含有多种脂溶性化学成分，如黄酮类成分补骨脂甲素(bavachin)、补骨脂乙素(isobavachalcone)、补骨脂甲素甲醚(bavachinin)、异补骨脂甲素(isobavachin)等，补骨脂酚(d-backuchiol)、查耳酮类成分补骨脂查耳酮(bavachalcone)、新补骨脂查耳酮(neobavachalcone)、异新补骨脂查耳酮(isoneobavachalcone)、补骨脂呋喃查耳酮(bakuchalcone)等，异黄酮类成分补骨脂宁(corylin)、新补骨脂异黄酮(neobavaisoflavone)等。
然而，迄今为止，关于补骨脂及其提取物抗幽门螺旋杆菌感染和治疗与幽门螺旋杆菌感染有关的疾病方面尚无文献报道。
本发明者在对传统中药进行抗幽门螺旋杆菌活性的筛选中发现补骨脂、其总提取物及其中的脂溶性部位令人惊奇地具有良好的抗幽门螺旋杆菌作用并对幽门螺旋杆菌引起的胃粘膜损伤具有修复作用，从而完成了本发明。
发明内容
本发明的目的是在常用中药中开发新的疗效显著的抗幽门螺旋杆菌和治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的胃溃疡等疾病的药物。
按照本发明，提供了补骨脂、其总提取物及其脂溶性部位在制备抗幽门螺旋杆菌感染的药物中的应用。
按照本发明，也提供了补骨脂、其总提取物及其脂溶性部位在制备治疗与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病的药物中的应用。
本发明应用的补骨脂，其各部分均可药用，特别是种子，可例如水煎服或粉碎成粉末后服用。本发明应用的补骨脂总提取物和其脂溶性部位可采用一般的化学提取方法从补骨脂中得到，如用补骨脂种子粉末，以95％的乙醇(甲醇、水或其它有机溶剂)提取，得到总提取物。总提取物溶于水后，分别以石油醚、乙酸乙酯(氯仿，二氯甲烷等)萃取，得石油醚部分、乙酸乙酯(氯仿，二氯甲烷等)部分和水溶性部分。石油醚部分和乙酸乙酯(氯仿，二氯甲烷等)部分即为本发明的补骨脂脂溶性部位。补骨脂脂溶性部位也可直接通过二氧化碳(CO2)超临界萃取获得。
经药效学试验证明，补骨脂、其总提取物及其脂溶性部位均有抗幽门螺旋杆菌作用，并在幽门螺旋杆菌感染引起的胃粘膜损伤动物模型上显示较强的治疗作用。
因此，本发明具体涉及补骨脂提取物和其脂溶性部位在制备抗幽门螺旋杆菌、治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的活动性胃炎、胃糜烂药物中的应用；在制备治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的胃溃疡(无论有无并发症如胃出血、胃穿孔)药物中的应用；在制备治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的十二指肠溃疡药物中的应用。本发明还涉及补骨脂提取物和脂溶性部位在制备治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的胃淋巴组织(MALT)淋巴瘤及中度肠腺化生或不典型增生药中的应用。
小鼠急性毒性试验证明，补骨脂、其总提取物及其脂溶性部位基本安全无毒。
补骨脂原料来源丰富，价廉，制备工艺简单，并可制成片剂、口服液、胶囊、颗粒剂等多种口服剂型，使用方便。
因此，本发明为传统中药补骨脂开拓了一个新的应用领域，其提取物和其脂溶性部位将有很好的开发和药用前景。
图1是在小鼠幽门螺旋杆菌感染引起的胃粘膜损伤动物模型上补骨脂脂溶性部位的治疗效果组织学切片图。其中，图1a是病变模型组；图1b是阳性对照组；图1c是高剂量给药组；图1d是正常动物组。
具体实施例方式
下面主要以补骨脂总提取物和脂溶性部位(乙酸乙酯萃取)为例，描述本发明的几个实施例，但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。
实施例1采用常规提取方法，将补骨脂种子粉末以95％乙醇提取，得到总提取物。总提取物溶于水后，分别以石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚部分、乙酸乙酯部分和水溶性部分。石油醚部分和乙酸乙酯部分(脂溶性部位)的提取率为9.0-15.0％。
实施例2 体外抗幽门螺旋杆菌的作用将一定剂量的待测样品补骨脂总提取物和脂溶性部位分别定量加入到一定量营养琼脂培养基中，混合均匀，倾注成无菌平板，并接种107CFU/ml处于对数生长的幽门螺旋杆菌。微需氧培养5天后，盲刮转移至无药培养基中，37℃微需氧培养4-5天，观察有无幽门螺旋杆菌生长，测得最低杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentrations，MBCs)。
表1 补骨脂总提取物和脂溶性部位的体外抗幽门螺旋杆菌(Hp)作用对不同Hp菌株的最低杀菌浓度(MBCs)(μg/mL)样品Hp-Sydney strain 1(Hp，SS1) Hp-F44 Hp-沪东阳性对照(甲硝唑)1.0 1.0 1.0补骨脂总提取物 50.0 50.0 50.0补骨脂脂溶性部位25.0 50.0 50.0其中Hp-Sydney strain 1(Hp，SS 1)为标准菌株；Hp-F44和Hp-沪东为临床菌株。
实施例3 小鼠体内药理学试验二级C57BL/6小鼠50只，体重20-25g，用一定菌浓的幽门螺旋杆菌(HpSS1)灌胃，实现体内的Hp定植。将Hp定植的小鼠随机分为空白对照组、阳性药物对照组、补骨脂脂溶性部位高剂量组(600mg/kg)、中等剂量组(400mg/kg)和低剂量(200mg/kg)共五组，每组10只。阳性对照组采用当前西医使用的三联疗法以奥美拉唑5.2mg/kg、克拉霉素65mg/kg和甲硝唑104mg/kg联合使用。空白对照组为相应的赋形剂。以上实验药物用0.6％羧甲基纤维素钠-色拉油(1∶1)配制成一定浓度的悬浮液，经胃管灌服，每天两次(每只小鼠0.5mL)，连续给药14天。停止给药30天后，于无菌室内解剖小鼠，作以下检查(1)快速尿素酶试验和细菌培养法检查幽门螺旋杆菌(Hp)的根除率。
(2)组织学检查检查幽门螺旋杆菌感染引起的小鼠胃粘膜损伤(包括糜烂、腺体增生和形成腺瘤等)的恢复情况(如图1所示)，有效治疗率见表2。
图1是在小鼠幽门螺旋杆菌感染引起的胃粘膜损伤动物模型上补骨脂脂溶性部位的治疗效果组织学切片图。图1a病变模型组胃幽门处粘膜腺体增生，呈息肉状(HE染色，×4)。图1b阳性对照组胃幽门处粘膜上皮及腺体部分恢复正常，但仍有部分腺体增生(HE染色，×10)。图1c高剂量给药组胃幽门处粘膜上皮及腺体基本恢复正常(HE染色，×4)。图1d正常动物组胃幽门处粘膜上皮及腺体基本正常(HE染色，×4)。
表2补骨脂脂溶性部位的体内药理结果组别 Hp根除率(％) 有效治疗率(％)阳性对照组 80 30恢复正常，70部分恢复空白对照组 00高剂量组 90 80恢复正常，20部分恢复中等剂量组 50 40恢复正常，60部分恢复低剂量组 40 30恢复正常，70部分恢复实施例4 小鼠毒性试验按常规方法，将小鼠随机分组，各组分别灌服一定量的本发明的补骨脂提取物或脂溶性部位，观察7天，测得补骨脂提取物、脂溶性部位的LD50分别为5.0和3.7g/kg。
实施例5选用下列量的补骨脂脂溶性部位与附加剂混合均匀，用10％预胶化淀粉浆作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入适量硬脂酸镁混合，压制成片剂。
补骨脂提取物或脂溶性部位250g；羟丙纤维素120g；微粉硅胶30g；预胶化淀粉20g；硬脂酸镁适量；制成1000片。
小鼠体内药理学试验同上，即二级C57BL/6小鼠50只，体重20-25g，用一定菌浓的幽门螺旋杆菌(Hp SS1)灌胃，实现体内的Hp定植。将Hp定植的小鼠分为空白对照组、阳性药物对照组、补骨脂脂溶性部位片剂的高剂量组(3片，相当于750mg补骨脂脂溶性部位/kg)、中等剂量组(2片，相当于500mg补骨脂脂溶性部位/kg)和低剂量组(1片，相当于250mg补骨脂脂溶性部位/kg)共五组，每组10只。阳性对照组采用当前西医使用的三联疗法以奥美拉唑5.2mg/kg，克拉霉素65mg/kg和甲硝唑104mg/kg联合使用；空白对照组为对照溶剂。将以上实验药物研磨成粉末，用0.6％的羧甲基纤维素钠-色拉油(1∶1)溶解配制成一定浓度(按照所含补骨脂脂溶性部位的量计算)的悬浮液，每组口服给药，每天两次(每只小鼠0.5mL)，连续给药14天。停止给药30天后，于无菌室内解剖小鼠，作以下检查(1)快速尿素酶试验和细菌培养法检查幽门螺旋杆菌(Hp)的根除率。
(2)组织学检查检查幽门螺旋杆菌感染引起的小鼠胃黏膜损伤(包括糜烂、腺体增生和形成腺瘤等)的恢复情况，即有效治疗率。
补骨脂脂溶性部位片剂的体内动物实验结果见表3。
表3补骨脂脂溶性部位的片剂体内药理结果组别 Hp根除率(％) 有效治疗率(％)阳性对照组 70 30恢复正常，70部分恢复空白对照组 00高剂量组90 80恢复正常，20部分恢复中等剂量组 50 50恢复正常，50部分恢复低剂量组40 40恢复正常，60部分恢复实施例6以与实施例1同样方法得到补骨脂提取物或脂溶性部位。
取补骨脂提取物的脂溶性部位500g、蔗糖250g、羟丙纤维素120g、微粉硅胶30g、枸橼酸、碳酸氢钠适量混合均匀，以适量70％乙醇作湿润剂，湿法制粒，过筛，烘干，分装制成2000袋颗粒剂。
实施例7以与实施例1同样方法得到补骨脂提取物的脂溶性部位。取补骨脂提取物的脂溶性部位500g、羟丙纤维素120g、微粉硅胶30g、枸橼酸、碳酸氢钠适量混合均匀，以适量70％乙醇作湿润剂，湿法制粒，过筛，烘干，加入适量硬脂酸镁，混合均匀，分装制成2000粒硬胶囊。
实施例8以与实施例1同样方法得到补骨脂提取物的脂溶性部位。
取蒸馏水适量，加入100g聚山梨酯-80制成溶液，再加入补骨脂脂溶性部位500g，边加热边搅拌使溶解，另外，将蔗糖20g、防腐剂适量溶于蒸馏水，在搅拌下缓缓加入上述溶液中，加蒸馏水至1000ml，混匀，冷却，过滤，分装为200支，灭菌，制得口服液。
动物实验方法同实施例3，补骨脂脂溶性部位口服液的高剂量组(1.5mL口服液，相当于750mg补骨脂脂溶性部位/kg)、中等剂量组(1.0mL口服液，相当于500mg补骨脂脂溶性部位/kg)和低剂量(0.5mL口服液，相当于250mg补骨脂脂溶性部位/kg)。将以上实验药物的口服液用0.6％的羧甲基纤维素钠-色拉油(1∶1)溶解配制成一定浓度(按照所含补骨脂脂溶性部位的量计算)的悬浮液，每组口服给药，每天两次(每只小鼠0.5mL)，连续给药14天。实验结果见表6。
表6补骨脂脂溶性部位的口服液体内药理结果组别 Hp根除率(％)有效治疗率(％)阳性对照组70 20恢复正常，80部分恢复空白对照组0 0高剂量组 90 90恢复正常，10部分恢复中等剂量组50 70恢复正常，30部分恢复低剂量组 40 60恢复正常，40部分恢复以上仅仅是举例说明本发明的补骨脂提取物、脂溶性部位的制备和应用的实施例。但对本领域的技术人员来说可以作出种种修改和变化，而不背离本发明的精神和范围，所附的权利要求书覆盖本发明范围内的所有这些修改。
权利要求
1.补骨脂、其总提取物或其脂溶性部位在制备抗幽门螺旋杆菌感染的药物中的应用。
2.补骨脂、其总提取物或其脂溶性部位在制备治疗与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病的药物中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其中所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病是活动性胃炎、胃糜烂。
4.如权利要求2所述的应用，其中所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病是胃溃疡。
5.如权利要求2所述的应用，其中所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病是十二指肠溃疡。
6.如权利要求2所述的应用，其中所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病是胃淋巴组织淋巴瘤。
7.如权利要求2所述的应用，其中所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病是早期胃癌。
8.如权利要求2所述的应用，其中所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病是中度肠腺化生或不典型增生。
全文摘要
本发明涉及补骨脂提取物及其脂溶性部位在医药中的新用途。它们具有显著的抗幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori，简称Hp)作用，用于治疗由于幽门螺旋杆菌感染而引起的胃炎、消化性溃疡等疾病，尤其对活动性胃炎、胃糜烂、胃溃疡及十二指肠溃疡有良好的治疗作用。并对胃淋巴组织(MALT)淋巴瘤及早期胃癌、中度肠腺化生或不典型增生等疾病有着治疗及预防作用。
文档编号A61P31/00GK1502346SQ0214532
公开日2004年6月9日 申请日期2002年11月21日 优先权日2002年11月21日
发明者岳建民, 樊成奇, 董蕾, 吴艳 申请人:中国科学院上海药物研究所