专利名称：黄芩甙锌配合物药物用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及黄芩甙锌配合物在药物制备中的用途。
黄芩甙锌分子式ZnC23O13H20(1-3.5)H2O(简称BA-Zn)，分子量为587-632，结构式见
图1和《发明专利申请公开说明书》(申请日990419，申请号99114810.X，
公开日000216，公开号1244533A)。黄芩甙锌是由黄芩甙(简称BA)与二价锌离子(Zn2+)形成的配合物。黄芩甙是中药黄芩的主要有效成份，黄芩在中药学上主要用于清热解毒抗菌消炎。国内外对黄芩的研究已有较完整的理论基础，并积累了丰富的临床经验。实验证明金属锌离子本身具有修复粘膜组织的作用。因此，黄芩甙与金属锌离子结合形成络合物后不但加强了抗菌消炎的作用，而且还具有修复粘膜组织促进溃疡愈合等新的药理作用。黄芩甙锌主要用于治疗各种溃疡性疾病，如口腔溃疡、鼻粘膜炎、宫颈炎、宫颈糜烂等。另据《生物化学杂志》1991年7卷6期“黄芩甙及其铜、锌配合物对超氧自由基的排除作用”、《铁道医学》1989年17卷6期“黄芩甙锌络合物对小鼠免疫功能影响的初步观察”、《西北药学杂志》1994年9卷4期“黄芩甙锌配合物与黄芩甙对免疫反应的初步比较研究”文献报道，黄芩甙与Zn2+结合后，具有以下几方面的药理作用(1)对超氧自由基具有消除作用；(2)黄芩甙锌不仅有抗I型变态反应作用，而且对小鼠非特异性免疫和细胞免疫系统功能有较好的增强作用；(3)黄芩甙锌对脂加氧酶具有抑制作用；(4)黄芩甙锌具有抗炎抗变态反应作用。
本发明目的在于提供黄芩甙锌配合物在制备预防和治疗艾滋病的药物中的应用。
发明人发现黄芩甙锌具有抗艾滋病病毒HIV-1活性。
本发明的实验结果表明黄芩甙锌的细胞毒性低于黄芩甙，对HIV-1的治疗指数(TI)高于黄芩甙。BA-Zn对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用与BA的相似，BA-Zn的TI值约为4，BA的TI值约为1。BA与BA-Zn均能抑制HIV-1感染细胞与正常细胞间的融合，BA-Zn的效果好于BA。融合阻断的结果和化合物在不同时间段对HIV-1诱导C8166合胞体形成的抑制作用的结果均提示BA与BA-Zn抗HIV-1活性作用的机制可能为阻断HIV与细胞的结合或融合。
图1黄芩甙锌的化学结构式。
图2黄芩甙BA对C8166细胞的毒性作用。
图3黄芩甙锌BA-Zn对C8166细胞的毒性作用。
图4黄芩甙BA对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用。
图5黄芩甙锌BA-Zn对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用。
图6不同浓度的黄芩甙BA在不同时间段的抗HIV-1活性。
图7不同浓度的黄芩甙锌BA-Zn在不同时间段的抗HIV-1活性。
以下为黄芩甙锌抗HIV-1的活性实验。
试验材料1.试剂和溶液(1)试剂MTT(3，(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide)；SDS(sodium dodecyl sulfate)购自Sigma公司；L-谷氨酰胺、HEPES和2-巯基乙醇购自Bio-Rad公司；DMF(N，N-dimethyl formamine)为上海试剂一厂产品。
(2)RPMI-1640完全培养基，含有10％新生小牛血清(自制)，2mM谷氨酰胺，10mM HEPES，50μM 2-巯基乙醇，100000IU青霉素，100μg/ml硫酸链霉素。
2.黄芩甙和黄芩甙锌黄芩甙锌(baicalin-Zn，简称BA-Zn)和黄芩甙(Baicalin，简称BA)昆明贵金属研究所提供。BA-Zn溶于DMSO中，4℃保存，储存浓度为25mg/ml。BA溶于RPMI-1640培养基中，过滤除菌。4℃保存，贮存液浓度为2.5mg/ml。
3.细胞和病毒C8166是T淋巴细胞系，为HIV敏感宿主细胞，由中国科学院动物研究所保存和提供。C8166HIV-1IIIB/H9均由英国Medical Researchcouncil，AIDS Reagent Project惠赠。按常规方法制备HIV-IIIB，滴定并计算出病毒的TCID50。病毒储存液分装后，置70℃保存。细胞和病毒均按常规方法冻存和复苏。
试验方法和结果实施例1黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn对C8166的细胞毒性检测实验3×106/ml C8166细胞悬液100μl与不同浓度的BA或BA-Zn化合物溶液混合，同时设置不含化合物的对照孔，37℃ 5％CO2培养三天，采用MTT法检测细胞毒性。490nm EL×800ELISA仪测定OD值。计算化合物对细胞的CC50(50％Cytotoxic Concentration，即引起50％细胞死亡的化合物浓度)。
黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn配合物对C8166的细胞毒性作用见图2和图3，黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn配合物对C8166的细胞毒性的CC50分别为20μg/ml和92.2μg/ml。实验结果表明黄芩甙锌BA-Zn的细胞毒性比黄芩甙BA低。
实施例2黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn对HIV-1诱导C8816合胞体形成的抑制实验将6×105/ml C8166细胞50μl与不同浓度的BA或BA-Zn化合物溶液混合，加入50μl HIV-1稀释上清，M.O.I为0.0099，同时设置不含化合物的对照孔，37℃，5％CO2培养三天，倒置显微镜下(100×)计数合胞体(五个视野)。计算化合物的EC50(50％Effective Concentration，即化合物抑制50％合胞体形成的浓度)。计算化合物的TI(TherapeuticIndex，即选择指数，其值等于CC50/EC50)。
表1列出了多次实验中BA和BA-Zn对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用的EC50。图4和图5分别显示了不同浓度的黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的量效关系。实验结果表明，BA-Zn抗HIV活性的作用效果与BA相似，但由于BA-Zn的细胞毒性比BA低，因此BA-Zn的治疗指数较BA高。BA和BA-Zn的治疗指数分别为约1和4。
表1.BA和BA-Zn体外对HIV-1诱导的合胞体形成的抑制作用
实施例3黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn化合物对HIV-1慢性感染H9细胞与正常C8166细胞间融合的阻断作用实验将3×105/ml正常C8166细胞50ul与1×105/ml H9/HIV-1 IIIB感染细胞50ul同时加入到100ul含有不同浓度的BA或BA-Zn化合物溶液中，同时设置不含化合物的对照孔，HIV-1慢性感染H9细胞与正常C8166细胞比为1∶3，37℃，5％CO2培养4h，倒置显微镜下(100×)计数HIV-1慢性感染H9细胞与正常C8166细胞间融合形成的合胞体数(五个视野)。计算化合物的EC50(50％ Effective Concentration，即化合物抑制50％HIV-1慢性感染H9细胞与正常C8166细胞间融合形成合胞体的浓度)。
表2列出了多次实验中BA和BA-Zn对H9/HIV-1慢性感染细胞与正常C8166细胞间融合的阻断作用的EC50。结果表明，BA和BA-Zn抗HIV活性的作用机制可能是阻断病毒与细胞的结合和融合，BA-Zn阻断病毒与细胞的结合和融合的作用较BA强。表2.BA和BA-Zn化合物对H9/HIV-1慢性感染细胞与正常C8166细胞间融合的阻断作用
实施例4BA或BA-Zn化合物在不同时间段对HIV-1诱导C8166合胞体形成的抑制实验在HIV-1感染前1小时、感染同时和感染后1小时，分别加入不同浓度的BA或BA-Zn化合物溶液，同时设置不含化合物的对照孔，37℃，5％CO2培养3d，倒置显微镜下(100×)计数合胞体(五个视野)。计算化合物的EC50(50％Effective Concentration，即化合物抑制50％合胞体形成的浓度)。
为了研究黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn配合物的作用机制，以黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn处理HIV-1感染细胞前后的抗HIV活性。表3列出了BA和BA-Zn在不同时间段抑制HIV-1诱导C8166合胞体形成的EC50值。图6和图7分别显示了不同浓度的BA和BA-Zn在不同时间段抗HIV-1活性的量效关系。结果表明HIV-1感染前和感染同时处理病毒感染宿主细胞比感染后加入化合物效果好。进一步表明黄芩甙BA和黄芩甙锌BA-Zn配合物抗HIV活性的作用机制可能是阻断病毒进入细胞，黄芩甙锌BA-Zn配合物阻断病毒与细胞的结合和融合的作用比黄芩甙BA配合物强。表3.不同时段化合物对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用
权利要求
1.配合物黄芩甙锌ZnC23O13H20(1-3.5)H2O在制备预防和治疗艾滋病的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了配合物黄芩甙锌在制备预防和治疗艾滋病的药物中的应用，其结构式见图1，分子式为ZnC
文档编号A61P31/00GK1462619SQ0212250
公开日2003年12月24日 申请日期2002年5月28日 优先权日2002年5月28日
发明者普绍平, 郑永唐, 王玉天, 王茜, 刘伟平, 刘祝东, 高文桂, 余尧 申请人:昆明贵金属研究所, 中国科学院昆明动物研究所