预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物的利记博彩app

专利名称：预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物的利记博彩app
技术领域：
本发明是一种预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，具体地说以中草药为原料制备的中成药。
现临床用药有双磷酸盐、特异雌激素受体调节剂、抑钙素及雌激素，上述药物都是作用在抑制破骨细胞上，而作用在造骨细胞上的只有副甲状腺素，这些药都有其副作用，且长期使用的安全性还不清楚，不幸的是骨质疏松症的病人都需长期服用，其中抑钙素和副甲状腺素是属于蛋白质药物，必须以注射或喷鼻方式投药，十分不便。
而在目前提倡自然疗法的时代，一般强调治疗或是保健骨质疏松症，不外运用多摄食含钙量高的食物，如多喝牛奶或是乳制品，小鱼干、豆类食品及深色蔬菜等。当然适当的负重运动能抑制骨质流失速度，预防骨质疏松症。若运动量不足，骨质流失较快。
虽然在某些文献或是专利中论及运用天然食品或是中草药，可实现预防或是治疗骨质疏松症的效果。例如Diane Feskanich等人于1999年Am.J.Clin.Nutr.第69卷第674-679页报导，38-63岁妇女由莴苣(非本发明之莴苣子)摄取维生素K，有益于骨骼健康与血液凝结。LCui.Y.F.Ma.等人于1999年J.of Bone and Mineral Research第14卷第Suppl.1期S283页报导，摘除卵巢的老鼠日喂食1.0g/kg经热水萃取的淫羊藿、黄耆与白术混合粉末，可抑制骨吸收。胡学攀于1995年中国专利号为94105130.7的专利公开了，以石膏、桂枝、陈皮、麻黄、白芍、枳壳、川芎、茯苓、牡丹皮、半夏、白术、厚朴、黄苓、青皮、苏子、西党参、当归、柴胡、附子、桃仁的散剂处方，有消炎健骨、治疗骨髓炎、骨质增生作用。柳海峰于1993年中国专利号为93104876.1号专利，公开了以沉香、西红花、木香、川芎、桂枝、白芷、三七、川续断、土鳖虫、骨碎补、制马钱子、牛膝、黄瓜子、鸡骨、大黄、自然铜、冰片、血竭的散剂处方，具有补肾强骨，治疗成骨不全、软骨发育不良的作用。船田正等人于1992年日本第4-266820号公开专利，由米糠油分离出来含有碳数22至38的直链饱和醇类，可预防骨质流失且增加骨质增生。
本发明的解决方案是基于祖国医学对骨折及骨质疏松症的认识及治疗原则，参考现代药理研究成就，从祖国医药宝库中，筛选出天然食用植物药，按中医理论组方，提取精华，使其发挥刺激骨形态产生蛋白质-2及成骨细胞分裂作用，提高骨折后的愈合速度，降低骨质疏松症发生的速度，并可对骨质疏松症有治疗作用。
本发明药物包括下列原料沉香、稻米、乳香、莴苣子、白术、菟丝子。
本发明药物的各组分的配比为(用量为重量份)沉香2～20 稻米 1～5乳香0.1～1莴苣子0.1～1白术0.1～1菟丝子0.1～1本发明药物的优选配比为(用量为重量份)沉香3～7稻米 1～3乳香0.3～0.7莴苣子0.3～0.7白术0.2～0.4菟丝子0.3～0.7本发明药物的最佳配比为(用量为重量份)沉香5 稻米 2乳香0.5 莴苣子0.5白术0.25菟丝子0.5
上述六种药材中，莴苣子是菊科植物莴苣的干燥种子；沉香是瑞香科植物沉香的含树脂木材；稻米是禾本科植物稻的果实；乳香是橄榄科植物卡氏乳香树或同属植物的树干皮部所得的胶状树脂；白术是菊科植物白术的干燥根茎；菟丝子是旋花科植物菟丝子、南方菟丝子或日本菟丝子的干燥种子。
本发明药物按常规的方法可制成锭剂、软胶囊、颗粒、粉剂、液剂、胶囊或丸剂、注射剂、软膏剂。
本发明药物的粉剂中可添加佐料，如乳糖、淀粉、微晶纤维素、帝摩杰(PRIMOJELTM)普杰(PREJELTM)枯罗素摩罗钠(sodiumcrosscarmellose)、羟甲基纤维素、波维栋(povidone)及硬脂酸镁或其它常用的赋形剂，制成所需要的剂型。
本发明可依照传统或是现代的中药方剂的制备方法制成传统的或是现代的中药方剂，也可依照一般西药剂型的制备方法制成常用的西药剂型。
图2为家兔桡骨在手术后23天给药组，骨折断端的组织照片。
图3为家兔桡骨在手术后30天对照组，骨折断端的组织照片。
图4为家兔桡骨在手术后30天给药组，骨折断端的组织照片。
图5为老鼠假手术对照组，股骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。
图6为老鼠去势30天的去势组，股骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。
图7为老鼠去势70天的去势组，般骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。
图8为老鼠去势30天后再给药处理40天组，股骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。
图9为老鼠假手术组，股骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。


图10为老鼠去势100天的去势组，股骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。
图11为老鼠去势30天后再给药处理70天组，股骨下端骨骺板下骨小梁结构照片。
具体实施例方式
本发明药物的生物活性试验包括(1)刺激骨形态产生蛋白质-2作用试验；(2)对成骨细胞分裂刺激作用的试验；(3)促进家兔骨折模型愈合的体内试验；(4)防治去势大鼠骨质疏松症体内试验；(5)小鼠醋酸扭体体内试验；(6)小鼠游泳能力(负重)体内试验；(7)大鼠口服急性毒性体内试验；(8)大鼠口服长期毒性体内试验；上述的(1)试验用本发明药物散剂A、散剂B；上述的(2)试验用本发明药物散剂C；上述的(3)试验用本发明药物蜜丸；上述的(4)试验用本发明药物散剂C；上述的(5)试验用本发明药物散剂B；上述的(6)试验用本发明药物散剂B；上述的(7)试验用本发明药物散剂C；上述的(8)试验用本发明药物散剂B；散剂A剂型的制备方法如下将2000克沉香、800克稻米、200克乳香、200克莴苣子、100克白术及200克菟丝子，分别粉碎成粉末并混合均匀，过100目筛网制成。
散剂B剂型的制备方法如下将400克沉香、267克稻米分别研磨成粉，并经60目筛网过筛；另取533克稻米、200克乳香、1600克沉香、200克莴苣子、100克白术及200克菟丝子置于萃取锅内，以去离子水加以浸泡，并加热至100℃持续2.5小时。收取萃取液，经100目筛网过筛后，减压加热浓缩。
将浓缩液与已经过筛的267克稻米粉末及400克沉香粉末混合，制成颗粒，将颗粒置于烘箱，以60℃干燥4小时至水分为9％以下，再经200目筛网过筛制成。
散剂C剂型的制备方法如下将2000克沉香、800克稻米、200克乳香、200克莴苣子、100克白术及200克菟丝子置于萃取锅内，以去离子水加以浸泡，并加热至100℃持续2.5小时，收取萃取液，经100目筛网过滤，此萃取液再以喷雾干燥机喷雾干燥成粉末。
密丸剂型的制备方法如下；取散剂A剂型的粉末，另取蜂蜜煮至滴水成珠，以1∶1的比例混合制成蜜丸。
胶囊剂型的制备方法如下取散剂B剂型或散剂C剂型的粉末，添加药学上常用的赋形剂、载体、或稀释剂混合，过筛后，装填入胶囊。
锭剂剂型制备方法如下取散剂B剂型或散剂C剂型的粉末，添加药学上常用的赋形剂、载体、或稀释剂混合，过筛后，直接打成锭剂；也可经已知药学上常用的造粒技术制成颗粒后，打成锭剂。
口服液剂型制备方法如下取散剂B剂型或散剂C剂型的粉末，添加药学上常用的悬浮剂及去离子水制成口服液剂型。
生物活性试验一、体外试验本发明药物对骨形态产生蛋白质-2启动子活性的作用。
参考刊登于1999年Science第286卷第1946～1949页Stimulation ofBone Formation in Vitro and in Rodents by Statins，刊登于2000年BiochemBiophys Res.Commun.第271卷第3期第688～92页Compactin andsimvastatin，but not pravastatin，induce bone morphogenetic proteim-2 inhuman osteosarcoma cells，以及刊登于2001年J.Bone Joint Surg.Am.第83-Asuppl.1(Pt 2)卷第S99～104页In vitro and in vivo studies of bonemorphogenetic protein-2 expressing adenoviral vector等方法。
将骨形态产生蛋白质-2基因5′启动子(promotor)片断连接构建到萤光素酶(luciferase)报导基因载体(reporter vector)上，而转染到成骨细胞内，经由测定萤光素酶活性，可以得知骨形态产生蛋白质-2基因的表现程度。
所有转染实验均为脂质体介导的瞬时转染，转染细胞为成骨细胞，萤光素酶活性测试仪及试剂均为美国TR0PLEX产生，仪器名称为TR717Microplate Luminometer，实验用本发明的散剂A、散剂B。
表一 本发明药物对骨形态产生蛋白质-2启动子活性影响

表一以下列公式计算活性值增加率；活性值增加率(d项-b项)/b项×100＝(160-94)/94×100＝70.2％活性值增加率(e项-b项)/b项×100＝(212-94)/94×100＝125.5％培养液是指达柏胶培养基(DMEM，Dulbecco’sModified EagleMedium)，萤光素酶底物是指萤光素(Luciferrin)PGL3载体是指BasicLuciferse reporter plasmid，药物浓度(％)是以W/V％表示。试验结果表二 本发明药物中发光物质及萤光素酶活性测定

如表二所示，本发明药物本身并不含萤光素酶活性。如表一所示，加上0.3％浓度的本发明药物散剂A，可以使骨形态产生蛋白质-2的活性增加70.2％；加上0.3％浓度的本发明药物散剂B，可以使骨形态发生蛋白质-2的活性增加125.5％。二、体外试验本发明药物对成骨细胞分裂的刺激作用参考刊登于1999年5月中国骨质疏松杂志第5卷第2期第58～62页的骨质疏松症防治药物的体外细胞药效评价，1999年5月中国骨质疏松杂志第5卷第2期第70页的淫羊藿对成骨细胞增殖分化的影响，以及1997年CMLS，Cell.mal.life sci.第53卷第967～976页Menadione-induced cytotoxicity to rat osteoblasts等方法。
Wistar新生鼠颅顶骨(calvaria)以连续二次，各30分钟，37℃的胶原酶(collagenase)消化方式取得(丢弃第一消化所释出的细胞)，然后在含100U/ml盘尼西林G，10％胎血清的柏胶培养基，100μg/ml链霉素，含5％二氧化碳空气，在37℃下培养。将1×104细胞/cm2成骨细胞培养于96槽(well)培养皿中，48小时后，加上0.1、1、10、100、1000μg/ml等不同浓度溶解于二甲基亚砜的本发明药物，分别于第一组继续培养1天，第二组继续培养3天。
各组在培养后，取1mg/ml浓度的贾诺秀(MTT，[3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide]100μl处理细胞4小时，将上清液除去，加上100μl含有0.04N盐酸的异丙醇溶解，然后以波长570nm的倚莱纱分析器(ELISA)来读数。
以下列公式计算表现促进率的百分率促进率＝[(加药物的平均吸收值-无药物的平均吸收值)/无药物的平均吸收值]×100，平均吸收值(AOD，average optical density)，标准差(SD，Standard Deviation)。试验结果表三 本发明药物对成骨细胞分裂的刺激作用

由表三的结果所示，本发明药物在24小时内可以刺激成骨细胞增生，随着药物浓度的提高，其促进率也提高；而在72小时后，仍可以刺激成骨细胞增生，药物浓度愈高，其促进率也愈高。在1mg/ml本发明药物的高浓度下，三天内没有细胞毒性产生。
三、本发明药物促进家兔骨折模型愈合的体内试验参考刊登于1981年Clinical Orthopaedics & Related Research第154卷第286～92页的Experimental femoral fracture immobilized by rigid andflexible rods(a rabbit model)，刊登于1992年Hsueh Tsa Chih ChineseJurnal of Stomatology第27卷第4期第215～216页的An experimentalstudy of dan sheng improving the mandibular bone fracthuehealing.Cheeng-Hua Kou Chiang，刊登于1998年Clinical Orthopaedics &Related Research第353卷第231～237页的Effect of nicotine on the rateand strength of long bone fracture healing.
体重在1.5-2公斤，家兔40只，雌雄各半，在观察一周无异状后，经麻醉以无菌手术切开前臂，在桡骨上段1/3处，利用电据制成2mm的标准横断骨折，缝合伤口。40只家兔依照预定日期分为5，12，17，23，30天组等5组，每组8只，每组内实验组5只，对照组3只，对照组喂以标准复合饲料，而实验组喂以标准饲料外，各组在预定日期内每日早晚给药，实验用药蜜丸剂型，该药丸含生药3克，每组在预定日期处死，进行X光片与病理学观察。
预定日期处死的分组方式，是与骨折模型各个愈合时期配合，通常愈合初期为伤口产生到愈合5～12天，愈合中期为17～23天，愈合后期为23～30天。
试验结果如下(1)体能观察实验组较对照组恢复得快，实验组的前肢较对照组早些能支持体重。(2)X光片检查实验组骨折愈合情况，在各个时间点都比对照组好。(3)病理组织学观察a.手术后5天；对照组骨折断端可见血肿及坏死组织，皮质骨、内骨没有明显改变；本发明药物组骨折断端有血肿及组织坏死，伤患处有血管长入，皮质骨有造骨细胞增生，骨内有微血管增生。
b.手术后12天对照组还有一些血肿及坏死组织，纤维性骨痂形成，皮质骨有些生物活性发生，少量区域有软骨性骨痂；本发明药物组在骨折断端形成纤维性骨痂，骨折近端皮质骨生骨明显，有骨性骨痂。
c.手术后17天对照组骨折断端有大量软骨性骨痂，骨髓腔尚未被骨痂封闭；本发明药物组在骨折断端生骨明显，骨痂有矿化现象发生，骨髓腔已被骨痂封闭，并可看见血管。
d.手术后23天对照组骨折断端已多为骨性骨痂，但骨痂尚未安全骨性连接，断端中端仍有软骨性骨痂存在，如图1所示；本发明药物组骨折端已完全骨性愈合，外骨痂已出现明显的塑型，骨小梁内血运丰富，如图2所示；而在高倍镜下，内骨痂封闭的骨髓腔端，出现明显的破骨及造骨细胞的骨吸收，骨改建过程，骨髓腔再通。
e.手术后30天对照组骨折断端骨痂成熟度差，仍有软骨钙化影像，皮质骨改建塑型不明显，断端及骨痂连接不良，四环素标记多为单标，如图3所示；本发明药物组骨折断端骨痂成熟，骨痂与断端骨皮质连接良好，原断端皮质骨也出现骨改建，四环素双标记明显，已达临床愈合标准，如图4所示。
根据以上结果，本发明药物在家兔骨折模型各个愈合时期中，都表现出明显的愈合促进作用，愈合初期时，本发明药物可促进骨折断端间血肿机化，刺激成骨细胞增生分化，骨小梁形成；在愈合中期，本发明药物有利于骨小梁成熟及矿化，促进骨痂形成；在愈合后期，本发明药物可促进骨塑型改建，加速骨髓腔再通。
四、本发明药物防治去势大鼠骨质疏松症体内试验参考刊登于1999年5月中国骨质疏松杂志第5卷第2期第67页的骨康防治去势大鼠骨质疏松的实验研究，刊登于1998年ClinBiomech(Bristol，Avon)第13卷第7期第480～484页的Effect ofovariectomy and calcium deficiency on the ultrasound velocity，mineraldensity and strength in the rat femur.，刊登于2001年Biomed Sci.Instrum.第37卷第281～286页的The use of estrogen，DHEA，and diosgenin in asustained delivery setting as a novel treatment approach for osteoporosis inthe ovariectomized adult rat model.，以及刊登于1999年Zhonghua FuChan Ke Za.Zhi.第34卷第2期第86～89页的Study of nylestriol effect onbone histomorphometric parameters in ovariectomized rats.。
52只体重200克的SD(Spraque-Dawley)雌鼠分成四组(1)假手术对照组；(2)去势(摘除卵巢)组；(3)去势30天后再给本发明药物40天组；(4)去势30天后再给本发明药物70天组。
(一)去势手术老鼠麻醉后，在无菌状态下施行假手术或去势手术，一个月后，处死假手术对照组与去势组各5只，观察是否已发生骨质疏松。
试验结果如下假手术对照组老鼠股骨下端骨骺板下骨小梁结构成熟，排列连接紧密，平均骨小梁壁的厚度较为一致，如图5所示；去势30天后老鼠股骨下端骨骺板下骨小梁结构极不成熟，骨小梁间连接很差，出现大量骨小梁盲端，骨小梁表面出现大量类骨质，表明骨再建增加，呈现典型的高转换型骨质疏松模型，如图6所示；去势老鼠在30天后的骨小梁结构，与假手术对照组有极明显的差异。
(二)去势手术后再给药去势一个月后，给药组每日口服给予0.12克(相当于生药量1克)散剂C。40天后，四组各处死4只老鼠，测试骨密度及病理组织学观察。第四组再继续给药处理30天后，各组剩下的老鼠全部处死，进行骨密度、病理组织学、骨组织形态计量学观察。
骨密度测试老鼠右股骨以Hologic QDR-4500W(S/N 47192)来测试骨密度。
骨组织形态计量学观察各组切片均选择骨骺板下1毫米内骨小梁，区分为内、中、外三点选取3个图像，录入电脑，每个样品采用三种观察方法泽米(Gemisa)染色做组织学观察，翁轲沙(Von Kossa)染色做类骨质观察，萤光显微镜做四环素标记观察，进行以下项目骨组织形态计量分析平均骨体积(TBV)、四环素单标记表面(STS)、四环素双标记表面(DTS)、四环素单、双标记表面比(STS/DTS)、类骨质表面(TOS)，平均类骨质宽度(MOSW)、矿化时间、骨重建时间、骨表面、骨吸收表面、骨矿化沉积率(MAR)、纠正骨矿化沉积率(iMAR)。
以上实验结果分述如下a.去势手术后再给本发明药物40天组组织病理学观察去势组(去势70天)股骨下端骨骺板下，骨小梁结构比去势30天时排列更稀疏，分散而薄，骨小梁表面类骨质清晰可见，骨的生成与改建十分活跃，出现高转换型骨质疏松模型的典型表现，如图7所示。如图8所示，再给本发明药物处理40天后，该组虽然未达到与假手术对照组相近似的程度，但与去势组比较，骨小梁结构明显增加，也变得致密，小梁间连接也明显改善。
表四 老鼠右股骨骨密度(给药40天)

骨密度结果如表四所示，显示再给本发明药物处理40天后，该组右股骨密度与去势组比较，并无明显差异，此二组的骨密度均比假手术对照组低。
b.去势手术后再给药处理70天组组织病理学观察假手术组老鼠股骨下端骨骺板下骨小梁结构成熟，排列连接紧密，有规则，骨小梁各壁的厚度较为一致，如图9所示；去势组在去势100天后股骨下端骨骺板下骨小梁结构排列稀疏，总量及密度明显减少，小梁间连接性差，厚度不一，有许多骨小梁盲端，小梁表面类骨质增多，表明骨再建增加，仍呈现典型高转换型骨质疏松症，如图10所示。
去势手术后再给本发明药物处理70天，如图11所示，该组大鼠股骨下端骨骺板下骨小梁结构排列紧密，形态与假手术对照组相似，小梁间连接成网，排列有序，厚度较为均一，小梁表面类骨质较少，与正常相似，表明骨重建较不活跃。
表五 老鼠右股骨骨密度(给药70天)

*去势组与假手术对照组比较，P＜0.01**给本发明药物70天组与去势组比较，P＜0.05***再给本发明药物70天组与去势组比较，P＜0.01骨密度结果如表五所示，去势手术后再给本发明药物处理70天后，该组右股骨的骨密度与去势组比较有明显差异(P＜0.01)，且回复达假手术对照组的程度。
骨组织形态计量学观察
表六 假手术对照组、去势组、去势手术后再给药处理组的骨形态计量学(一)

*去势组与假手术对照组比较，P＜0.01**去势组与假手术对照组比较，P＜0.001# 去势+本发明药物组与去势组比较，P＜0.01## 去势+本发明药物组与去势组比较，P＜0.001表七 假手术对照组、去势组、去势手术后再给药处理组的骨形态计量学(二)

**去势组与假手术对照组比较，P＜0.001# 去势+本发明药物组与去势组比较，P＜0.0 1## 去势+本发明药物组与去势组比较，P＜0.001
表八 假手术对照组、去势组、去势手术后再给药处理组的骨形态计量学(三)

*去势组与假手术对照组比较，P＜0.01**去势组与假手术对照组比较，P＜0.001# 去势+本发明药物组与去势组比较，P＜0.01## 去势+本发明药物组与去势组比较，P＜0.001综合表六、七、八的结果，本发明药物骨松症骨组织形态学的作用如下平均骨体积去势小鼠手术后再给本发明药物处理70天后，平均骨体积恢复到假手术对照组程度。四环素单标记表面小鼠去势手术后再给本发明药物处理70天后，四环素单标记表面恢复到假手术对照组程度。四环素双标记表面本发明药物处理去势小鼠70天后，四环素双标记表面恢复到假手术对照组程度。四环素单、双标记表面比比例在三组之间没有明显差异。类骨质表面在去势组类骨质表面比假手术对照组高，再给本发明药物处理70天后，该组的类骨质表面则高于假手术对照组，而类似于去势组。平均类骨质宽度去势组与去势手术再给本发明药物组的平均类骨质宽度均明显大于假手术对照组。矿化时间三组之间没有明显差异。骨重建时间假手术对照组及去势手术后再给本发明药物组的骨重建时间明显的较去势组长。骨表面去势组及去势手术后再给本发明药物组的骨表面积明显的大于假手术对照组。骨再吸收表面去势组及去势手术后再给本发明药物组的骨再吸收表面积明显的大于假手术对照组，而去势手术后再给本发明药物组的骨再吸收表面积又明显的大于去势组。骨矿化沉积率去势组及去势手术后再给本发明药物组的骨矿化沉积率比假手术对照组高，而去势组的骨矿化沉积率又较去势手术后再给本发明药物组高。纠正骨矿化沉积率去势手术后再给本发明药物组的纠正骨矿化沉积率较去势组低，且已恢复到假手术对照组的速度。
很明显可以看出本发明药物影响骨形成及骨吸收的活性，本发明药物会促进成骨细胞生成，类骨质及矿物沉积于基质中。去势后再给本发明药物处理70天组的平均骨体积、四环素单标记表面、四环素双标记表面、骨重建时间、纠正骨矿化沉积率等骨代谢指标，都恢复到假手术对照组的正常程度。
五、小鼠醋酸扭体(镇痛作用)体内试验参考刊登于2001年Pain第89卷第2-3期第221～227页的Peripheral and preemptive opioid antinociception in a mouse visceral painmodel.，刊登于2000年J.Ethnopharmacol.第73卷第1-2期第307～311页的Preliminary studies on the analgesic activity of latex of calotroprisprocera.，刊登于2000年J.Ethnopharmacol.第71卷第1-2期第153～160页的Studies on the anti-inflammatory and related pharmacologicalproperties of the aqueous extract of Bridelia ferruginea stem bark.。
昆明种小鼠72只，雌雄各半，体重18～22g，按体重随机分为6组，禁食过夜，分别投予生理食盐水，0.2g/kg阿司匹林与不同剂量本发明药物。本发明药物是散剂B剂型，各剂量分别代表相当于含生药0.5、1.0、2.0、4.0g/kg。
给药1小时后，每只小鼠腹腔注射0.3％的醋酸溶液0.2ml，观察20分钟内，以小鼠扭体次数，判定药效。小鼠扭体次数愈少，表示具有镇痛作用。试验结果表九 本发明药物对小鼠醋酸扭体实验的影响(平均±SD，n＝12)

*，**与生理食盐水组比较P＜0.05，0.01如表九所示，本发明药物具有明显的抑制醋酸诱发小鼠扭体的作用，其中1.0、2.0、4.0g生药/kg组与生理食盐水组比较具有统计学差异，0.5g生药/kg组的扭体数比较生理食盐水组略微降低，但未见统计学差异。表明本药具有一定的镇痛作用。
六、小鼠游泳能力(增强肌力)体内试验参考刊登于1990年Calcif Tissue Int.第47卷第3期第173～177页的The effect of swimming on bone modeling and composition in youngadult rats.，刊登于1997年Jpn.J.physiol.第47卷第1期第51～57页的Effects of exposure to hypobaric-hypoxia on body weight，muscular andhematological characteristics，and work performance in rats.，刊登于1996年Biol.Pharm.Bull.第19卷第1期第62～66页的Pharmacological study onAgkistrodon blomhoffii BOIE.V.anti-fatigue effect of the 50％ethanolextract in acute weight-loaded forced swimming-treated rats.
昆明种小鼠72只，雌雄各半，体重18～22g，按体重随机分为6组，禁食过夜，分别连续给药3天投予生理食盐水，骨疏康3g/kg，与不同剂量本发明药物。本发明药物是散剂B剂型，各剂量相当于含生药0.5、1.0、2.0、4.0g/kg。骨疏康为中国核准上市治疗骨疏松症的复方中药，其成分为淫羊藿、熟地黄、黄耆、丹参、骨碎补。
末次给药1小时后，于小鼠尾部加挂质重2g法码后，投入25℃、15cm深的水池中，开始计时，小鼠体力耗竭标准为小鼠鼻孔沉入水面10秒钟以上，停止计时。投予各种药物组与生理食盐水组比较，判定药效。试验结果表十 本发明药物对小鼠负重游泳时间的影响(平均±SD，n＝12)

*，**与生理食盐水组比较P＜0.05，0.01如表十所示，本发明药物具有明显的延长小鼠负重游泳时间的效果，四个剂量组(0.5、1.0、2.0、4.0g生药/kg)与生理食盐水组比较均具有统计学差异，实验结果显示本发明预防及治疗骨折与骨质疏松症的复方中草药具有一定的增强体力、抗疲劳作用。
七、本发明药物的大鼠口服急性毒性体内试验24只体重约在200克的Spraque-Dawley纯种大鼠，雌雄各半，以LIMS系统随机分成二组，一组为对照组，一组为本发明药物处理组。所用的本发明药物为散剂C剂型，以1％羧甲基纤维素配成浓稠悬液，浓度为250mg/ml。本发明药物处理组以250mg/ml散剂C喂食10ml/kg，对照组以1％羧甲基纤维素喂食，一天二次，每次间隔2小时，进行临床观察14天。试验结果表十一 本发明药物的大鼠口服急性毒性测试-体重变化(平均±SD，N＝6)

如表十一显示，不论喂食本发明药物浓稠悬浮液或对照溶液的组别在14天观察后，全部动物存活。在14天观察期间、动物均无任何临床毒性症状，且本发明药物组中雄、雌鼠的体重成长速度与对照组相近。试验终结尸体解剖后，肉眼检查器官，组织变化，二组均无肉眼可观察到的任何病变。本发明药物5000mg/kg为不造成任何影响的剂量，可归类为实际无毒性的物质。
八、本发明药物的大鼠口服长期毒性体内试验Wistar种(二级)大鼠，选取80-100克大鼠饲养1周后进行试验。鼠龄6-7周，雌雄各半，由中国医学科学院实验动物研究所提供。合格证号SCXR1100-0006。
试验方法药物剂量、给药方法与动物数试验设溶媒对照组和16g生药/kg给药组，药液浓度每毫升1.333g生药，给药容积为1.2ml/100g体重，溶媒对照组给予等容量1％羧甲基纤维素悬浮液。每天一次，每周6次，连续3个月。
动物数选取上述大鼠，饲养1周后按性别、体重随机分为2组，溶媒对照组和给药组，均雌雄各半，分笼饲养，自由饮水，体重和食料量每周称量一次。
给药3个月处死大鼠，取血进行血液学及血液生化学指标测定，取脏器称重，并进行病理组织学检查。
试验结果a.一般观察在给药期，各组大鼠活动情况正常，外观体征、粪便、食料量均正常。雄性大鼠体重变化；溶媒对照组由121±2.2克(第0周)增加至365±20.0克(第十二周)；本发明药物组由123±2.7克增加至357.5±23.3克。雌性大鼠体重变化溶媒对照组由119±4.2克(第0周)增加至231±16.4克(第十二周)；本发明药物组由117±2.7克增加至220±10.8克。表明给药组体重与溶媒对照组比较，无明显差异。食料量给药组与对照组比较，无明显差异。
b.血液学指标
表十二 本发明药物灌胃给药3个月对大鼠血液学的影响(平均±SD)

如表十二显示，给药期各组的血红素(Hb)、红血球数(RBC)、白血球数(WBC)、血小板数(PLT)、凝血时间(CT)结果显示连续给药三个月，给药组各项血液学指标与对照组比较，均无明显差异。c.血液生化学指标表十三(A) 本发明药物灌胃给药3个月对雄性大鼠血液生化的影响(平均±SD)

表十三(B) 本发明药物灌胃给药3个月对雌性大鼠血液生化的影响(平均±SD)

如表十三(A、B)显示，给药后的血液生化学检测结果。结果显示连续给药三个月，给药组各项生化指标与对照组比较，均无明显差异。d.对大鼠脏器系数的影响各组大鼠均在给药3个月结束后处死，取各主要脏器称重即为湿重，将湿重再除以体重，即得每100g体重的湿重(g)视为脏器系数。表十四(A) 本发明药物灌胃给药3个月对雄性大鼠脏器系数的影响(g/100g体重，平均±SD)

表十四(B) 本发明药物灌胃给药3个月对雌性大鼠脏器系数的影响(g/100g体重，平均±SD)

结果如表十四(A、B)所示，给药组的各脏器系数与对照组比较，均无明显差异。
e.大鼠脏器的病理组织学检查连续给药3个月后，处死各组大鼠，分别取心脏、肝脏、脾脏、肾脏、膀胱、肺脏、胃、十二指肠、回肠、结肠、胰脏、子宫、卵巢、睾丸、副睾丸、前列腺、脑、垂体、甲状腺、肾上腺、胸腺、淋巴结及骨髓等23种脏器，进行病理组织学检查。结果显示给药组与对照组相比，均无明显的病理学改变。试验结论给药组试验中以每kg大鼠投予本发明药物16g生药，大鼠连续灌胃给药3个月，进行一般观察、血液学、血液生化学、病理组织学等检查。试验结果表明，各项指标均未发现明显异常，脏器病理组织学检查也未发现与药物有关的病理学改变。
给药组大鼠长期毒性试验结果表明，大鼠在106倍于人用剂量(9g生药/天/人)的连续给药3个月，未见明显毒性反应。
经过以上生物活性测试结果，本发明药物是一种没有毒性，在体外能刺激骨形态产生蛋白质-2表现及成骨细胞增生的复方，它在动物实验中显示，具有镇痛作用及增强肌力作用，可以促进骨折愈合及治疗骨质疏松症，所以本发明药物可以预防及治疗骨折及骨质疏松症。
权利要求
1.一种预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，其特征在于它是由下列原料制成的药剂莴苣子、沉香、稻米、乳香、白术、菟丝子，其中各原料的重量份配比是沉香2～20 稻米 1～5乳香0.1～1莴苣子0.1～1白术0.1～1菟丝子0.1～1
2.按照权利要求1所述的一种预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，其特征在于其中各原料的重量份配比是沉香3～7稻米 1～3乳香0.3～0.7莴苣子0.3～0.7白术0.2～0.4菟丝子0.3～0.7
3.按照权利要求2所述的一种预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，其特征在于其中各原料的重量份配比是沉香5 稻米 2乳香0.5 莴苣子0.5白术0.25菟丝子0.5
4.按照权利要求1或2或3所述的一种预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，其特征在于所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
5.按照权利要求4所述的一种预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，其特征在于所说的剂型为锭剂或软胶囊或颗粒剂或粉末剂或液剂或胶囊剂或丸剂，或注射剂或软膏剂。
全文摘要
本发明公开了一种新的预防及治疗骨折与骨质疏松症的药物，它是以莴苣子、沉香、稻米、乳香、白术及菟丝子为原料，药物的各组分配比为(用量为重量份)沉香2～20，稻米1～5，白术0.1～1，菟丝子0.1～1，乳香0.1～1，莴苣子0.1～1。以传统的中医方法及萃取方法制成的锭剂或软胶囊或颗粒剂或液剂或胶囊剂或丸剂。本发明配方独特，预防及治疗骨折与骨质疏松症的效果显著。
文档编号A61K36/00GK1457822SQ0211918
公开日2003年11月26日 申请日期2002年5月14日 优先权日2002年5月14日
发明者刘素莹, 蔡宜明 申请人:天騵生化科技股份有限公司