专利名称：含丙烯酮衍生物的药用组合物的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及包含2种或2种以上抗反转录病毒活性剂的药用组合物，更具体来说，涉及包含丙烯酮衍生物的药用组合物。
联合治疗时，较之相同类型的药物，更多推荐使用不同作用机制的药物。联合应用不同类型药物能够通过其协同作用机制强烈抑制反转录病毒复制。例如，优选核苷型反转录酶抑制剂与非核苷型反转录酶抑制剂联合应用、反转录酶抑制剂(核苷型反转录酶抑制剂或非核苷型反转录酶抑制剂)与蛋白酶抑制剂联合应用等。
JP7-508997公开了作为联合应用多种抗人类免疫缺陷病毒活性剂表现出协同作用的实例，即联合应用核苷型反转录酶抑制剂拉米夫定(3TC)和非核苷型反转录酶抑制剂{[(苯并噁唑-2-基)甲基]氨基}-5-烷基-6-烷基-2-(1H)-吡啶酮；JP国家公开(TOKUHYO)7-508998公开了联合应用核苷型反转录酶抑制剂拉米夫定(3TC)和非核苷型反转录酶抑制剂11-环丙基-5，11-二氢-4-甲基-6H-二吡啶并[3，3-b；21，31-e][1，4]二氮杂-6-酮。JP国家公开(TOKUHYO)2000-503986、WO98/20888、JP国家公开(TOKUHYO)11-507632、JP国家公开(TOKUHYO)11-508884、JP国家公开(TOKUHYO)9-507859等公开了抗人类免疫缺陷病毒活性剂的其它联合应用实例。
此外，目前市售的Combivir为一种联合疗法的药用混合物，其为齐多夫定(AZT)和拉米夫定(3TC)的混合物。因此，需要开发与反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂作用机制不同的药物(例如整合酶抑制剂)与抗反转录病毒活性剂的联合应用以及包含其作为药物活性成分的药用组合物。
作为一个实施方案，本发明提供抗反转录病毒组合物，其包含作为活性成分的式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A和B如上所述，其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂。
进而，本发明提供治疗或预防反转录病毒感染的方法，该方法包括同时或连续给予式(I)化合物、或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种不同类型抗HIV活性剂。
作为另一个实施方案，本发明提供式(I)化合物、或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐、或溶剂化物和一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防反转录病毒感染。
进而本发明涉及抑制反转录病毒复制的方法，其包括使式(I)化合物、或其互变异构体、前体药物、药学上接受的盐或溶剂化物以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂与反转录病毒接触。
此外，本发明涉及式(I)化合物、或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物和一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂的组合。
也就是说，本发明涉及(1)抗反转录病毒组合物，其包含作为活性成分的式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂；(2)(1)项所述抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂与式(I)化合物、或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物组合表现出协同效应；(3)(1)或(2)项所述抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为整合酶抑制剂以外的抗反转录病毒活性剂；(4)(1)-(3)任一项所述抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为核苷型反转录酶抑制剂、非核苷型反转录酶抑制剂和/或蛋白酶抑制剂；(5)(1)-(4)任一项所述抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、替诺福韦、替诺福韦disoproxil、奈韦拉平、地拉韦啶、乙米韦林、洛韦胺、依法韦仑、曲韦定、卡普韦林、TIBO、他韦林、UC781、沙奎那伟、奈非那韦、利托那韦、茚地那韦、KNI-272、洛匹那韦、VX-478、VB-19026、BILA-2011-BS、A-77003、A-80987、DMP-323和/或XM-450；(6)(1)-(5)任一项所述抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为齐多夫定、拉米夫定、司他夫定、奈韦拉平、卡普韦林和/或奈非那韦；
(7)(1)-(6)任一项所述抗反转录病毒组合物，其中式(I)化合物中的A为任选取代的呋喃基、任选取代的噻吩基或任选取代的吡啶基；式(I)化合物中的B为任选取代的三唑基、任选取代的四唑基、任选取代的吡啶基或任选取代的噁唑基；(8)(1)-(7)任一项所述抗反转录病毒组合物，其中式(I)化合物中的A为5-(4-氟苄基)呋喃-2-基；式(1)化合物中的B为1H-1，2，4-三唑-3-基；(9)(1)-(8)任一项所述抗反转录病毒组合物，其中反转录病毒为人类免疫缺陷病毒；(10)一种药用组合物，其包含一种化合物，该化合物具有增强抗反转录病毒活性剂的抗反转录病毒活性的作用，它表示为式(I)A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物；(11)一种治疗或预防反转录病毒感染的方法，该方法包括同时或连续给予式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物；以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂；(12)式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐、或溶剂化物和一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防反转录病毒感染。
附图简述
图1图示化合物1-16与齐多夫定的协同作用。X轴和Y轴表示药物浓度(ng/ml)，Z轴表示协同作用(μM2％)。
特别优选这样的化合物其中式(I)化合物中的A为任选取代的呋喃基、任选取代的噻吩基或任选取代的吡啶基，而式(I)化合物中的B为任选取代的三唑基、任选取代的四唑基、任选取代的吡啶基或任选取代的噁唑基。
进一步优选其中A为5-(4-氟苄基)呋喃-2-基而B为1H-1，2，4-三唑-3-基的式(I)化合物。
术语“杂芳基”包括如下定义的单环杂芳基和稠杂芳基。
术语“单环杂芳基”是指在环中包含1-4个氧原子、硫原子和/或氮原子的5-元至8-元杂芳基，其可以在任何可取代位置例如碳原子或氮原子上存在基团。
术语“单环杂芳基”包括呋喃基(例如呋喃-2-基，呋喃-3-基)、噻吩基(例如噻吩-2-基，噻吩-3-基)、吡咯基(例如吡咯-1-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基)、咪唑基(例如咪唑-1-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基)、吡唑基(例如吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基)、三唑基(例如1H-1，2，4-三唑基-1-基、4H-1，2，4-三唑基-1-基、1H-1，2，4-三唑-3-基)、四唑基(例如1H-四唑-1-基、2H-四唑-2-基、1H-四唑-5-基、2H-四唑-5-基)、噁唑基(例如噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基)、异噁唑基(例如异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基)、噻唑基(例如噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基)、异噻唑基(例如异噻唑-3-基、异噻唑-4-基、异噻唑-5-基)、吡啶基(例如吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基)、哒嗪基(例如哒嗪-3-基，哒嗪-4-基)、嘧啶基(例如嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基)、呋咱基(例如呋咱-3-基)、吡嗪基(例如吡嗪-2-基)、噻二唑基(例如1，3，4-噻二唑-2-基)、噁二唑基(例如1，3，4-噁二唑-2-基)等。
术语“稠杂芳基”是指这样的杂芳基其中环中包含1-4个氧原子、硫原子和/或氮原子的5-元至8-元芳族环与1-4个5-元至8-元芳族碳环或其它5-元至8-元杂芳环稠合，所述杂芳基的任何可取代位置例如碳原子或氮原子以及单环杂芳基上存在基团。所述基团可以在杂芳环或芳族碳环上。
术语“稠杂芳基”包括苯并呋喃基(例如苯并[b]呋喃-2-基、苯并[b]呋喃-3-基、苯并[b]呋喃-4-基、苯并[b]呋喃-5-基、苯并[b]呋喃-6-基、苯并[b]呋喃-7-基)、苯并噻吩基(例如苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并[b]噻吩-4-基、苯并[b]噻吩-5-基、苯并[b]噻吩-6-基、苯并[b]噻吩-7-基)、苯并咪唑基(例如苯并咪唑-1-基、苯并咪唑-2-基、苯并咪唑-4-基、苯并咪唑-5-基)、苯并噻唑基(例如苯并噻唑-2-基、苯并噻唑-3-基、苯并噻唑-4-基、苯并噻唑-5-基、苯并噻唑-6-基、苯并噻唑-7-基)、吲哚基(例如吲哚-1-基、吲哚-2-基、吲哚-4-基、吲哚-5-基、吲哚-6-基、吲哚-7-基)、二苯并呋喃基、喹啉基(例如喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基、喹啉-8-基)、异喹啉基(例如异喹啉-1-基、异喹啉-3-基、异喹啉-4-基、异喹啉-5-基、异喹啉-6-基、异喹啉-7-基、异喹啉-8-基)、噌啉基(例如噌啉-3-基、噌啉-4-基、噌啉-5-基、噌啉-6-基、噌啉-7-基、噌啉-8-基)、喹唑啉基(例如喹唑啉-2-基、喹唑啉-4-基、喹唑啉-5-基、喹唑啉-6-基、喹唑啉-7-基、喹唑啉-8-基)、喹喔啉基(例如喹喔啉-2-基、喹喔啉-5-基、喹喔啉-6-基)、2，3-二氮杂萘基(例如2，3-二氮杂萘-1-基、2，3-二氮杂萘-5-基、2，3-二氮杂萘-6-基)、嘌呤基(例如嘌呤-2-基、嘌呤-6-基、嘌呤-7-基、嘌呤-8-基、嘌呤-9-基)、蝶啶基、咔唑基、菲啶基、吖啶基、吩嗪基、1，10-菲咯啉基、异吲哚基、1H-吲唑基、indolidinyl(例如indolidin-1-基)等。
术语“芳基”是指单环芳族烃基如苯基或多环芳族烃基例如萘基、菲基等。优选苯基或萘基。
当“芳基”或“杂芳基”有一个或多个取代基时，1-4个相同或不同取代基可以在任何可取代位置。
取代基的实例包括羟基、羧基、卤素(F、Cl、Br、I)、低级卤代烷基(例如CF3、CH2CF3)、低级烷基(例如甲基、乙基、异丙基、叔丁基)、低级链烯基(例如乙烯基、烯丙基)、低级链炔基(例如乙炔基)、环烷基(例如环丙基、环丁基、环己基)、环烯基(例如1-环己烯基)、低级烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基)、低级烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基)、硝基、亚硝基、氨基、低级烷基取代的氨基(例如甲氨基、乙氨基、二甲氨基)、叠氮基、脒基、胍基、任选取代的芳基(例如苯基、对甲苯基)、杂芳基(例如吡啶基、呋喃基)、杂芳基(低级)烷基(例如吡啶甲基)、任选取代的芳基(低级)烷基(例如苄基、4-甲基苄基、4-氟苄基)、芳基(低级)烷氧基(例如苄氧基)、芳基(低级)烷硫基(例如苄硫基)、氰基、异氰基、羟氨基、巯基、低级烷硫基(例如甲硫基)、氨基甲酰基、低级烷基取代的氨基甲酰基(例如N-甲基氨基甲酰基)、低级烷基磺酰基(例如甲磺酰基、乙磺酰基)、任选取代的芳基磺酰基(例如苯磺酰基、2-甲苯磺酰基、4-甲苯磺酰基)、氨磺酰基、磺氨基、甲酰基、低级烷基羰基(例如乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、对甲苯甲酰基、环己基羰基)、低级烷基羰氧基(例如乙酰氧基、苯甲酰氧基)、肼基、芳基氨基(例如苯氨基、甲苯氨基、二甲代苯氨基)、低级烷基羰基氨基(例如乙酰氨基)、芳基羰基氨基(例如苯酰氨基)、任选取代的芳硫基(例如苯硫基)、吗啉代、吗啉基(例如2-吗啉基，3-吗啉基)、式-Z1-Z2-Z3-R1的基团其中Z1和Z3均独立为单键、低级亚烷基或低级亚链烯基；Z2为单建、低级、低级亚烷基、低级亚链烯基、-CH(OH)-、-S-、-SO-、-SO2-、-SO2NH-、-NHSO2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-CONH-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-或-CO-；R1为任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基、任选取代的环烯基或任选取代的杂环基等。
术语“低级亚烷基”是指C1-C6直链或支链亚烷基，例如亚甲基、亚乙基、1，3-亚丙基、1，2-亚丙基、1，4-亚丁基、乙基亚乙基、1，5-亚戊基、1，6-亚己基等。优选C1-C4直链亚烷基例如亚甲基、亚乙基、1，3-亚丙基或1，4-亚丁基。
术语“低级亚链烯基”是指具有一个或多个双键的上述“低级亚烷基”的C2-C6直链或支链亚链烯基，例如亚乙烯基、1，3-亚丙烯基、1，4-亚丁烯基等。优选C2-3直链亚链烯基例如亚乙烯基或1，3-亚丙烯基。
术语“环烷基”是指C3-C8环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。优选C3-C6环烷基例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
术语“环链烯基”是指具有一个或多个双键的上述“环烷基”的C3-C8环链烯基，例如1-环丙烯-1-基、2-环丙烯-1-基、1-环丁烯-1-基、2-环丁烯-1-基、1-环戊烯-1-基、2-环戊烯-1-基、3-环戊烯-1-基、1-环己烯-1-基、2-环己烯-1-基、3-环己烯-1-基、1-环庚烯-1-基、2-环庚烯-1-基、3-环庚烯-1-基、4-环庚烯-1-基等。优选C3-C6环链烯基，例如1-环丙烯-1-基、2-环丙烯-1-基、1-环丁烯-1-基、2-环丁烯-1-基、1-环戊烯-1-基、2-环戊烯-1-基、3-环戊烯-1-基、1-环己烯-1-基、2-环己烯-1-基或3-环己烯-1-基。
术语“杂环”是指环中具有1-3个氧原子、硫原子和/或氮原子的上述“环烷基”或“环链烯基”的非芳族基团，例如环乙亚胺基(例如环乙亚胺-1-基、环乙亚胺-2-基)、哌啶子基、哌啶基(例如2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基)、吗啉代、吗啉基(例如2-吗啉基、3-吗啉基)、吡咯啉基(例如1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、4-吡咯啉基、5-吡咯啉基)、吡咯烷基(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基)、咪唑啉基(例如1-咪唑啉基、2-咪唑啉基、4-咪唑啉基)、哌嗪子基(piperazino)、哌嗪基(例如2-哌嗪基)、thiolanyl(例如thiolan-2-基，thiolan-3-基)、四氢呋喃基(例如四氢呋喃-2-基，四氢呋喃-3-基)、二氧六环基(例如1，4-二氧六环-2-基)、氧硫杂环己基(例如1，4-氧硫杂环己-2-基，1，4-氧硫杂环己-3-基)、四氢吡喃基(例如四氢吡喃-2-基、四氢吡喃-3-基、四氢吡喃-4-基)等。优选5-元或6-元含N杂环例如哌啶子基、哌啶基(例如2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基)、吗啉代、吗啉基(例如2-吗啉基，3-吗啉基)、吡咯啉基(例如1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、4-吡咯啉基、5-吡咯啉基)、吡咯烷基(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基)、咪唑啉基(例如1-咪唑啉基、2-咪唑啉基、4-咪唑啉基)、哌嗪子基、哌嗪基(例如2-哌嗪基)等。
例如其中A和B同上定义的式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B是PCT/JP99/07101中介绍的化合物。更优选以下化合物。(I-1)1-[1H-1-(4-氟苄基)吡唑-4-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-2)1-[4-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-3)1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-4)3-羟基-1-(5-苯基硫代呋喃-2-基)-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-5)1-(5-苯磺酰基呋喃-2-基)-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-6)1-(5-正丁基呋喃-2-基)-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-7)1-[5-(4-氟苄基)噻吩-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-8)1-(5-正丁基呋喃-2-基)-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-9)1-[5-(4-氟苄基)呋喃-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-10)1-[5-(4-氟苄基)吡咯-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-11)1-[3-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-12)1-[3-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-13)1-[4-(4-氟苄基)呋喃-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-14)1-[2H-2-(4-氟苄基)吡唑-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-15)1-[[4-(4-氟苄基)-1-甲氧基甲基]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-16)1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-17)1-[[4-(4-氟苄基)-1-丙基]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-18)1-[1，4-二-(4-氟苄基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-19)1-[4-(4-氟苄基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-20)1-[2-(4-氟苄基)呋喃-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-21)1-[[1-苯磺酰基-4-(2-苯基乙基)]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-22)3-羟基-1-[(4-(2-苯基乙基))吡咯-3-基]-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-23)1-[[1-苄基-4-(2-羧基乙烯基)]吡咯-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-24)1-[[1-苄基-4-(2-羧基乙烯基)]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-25)1-[2-(4-氟苄基)呋喃-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-26)1-[1-(4-氟苄基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-27)1-[2-(4-氟苄基)苯并噻吩-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-28)1-[2-(4-氟苄基)苯并呋喃-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-29)1-[(1-苄基-5-羧基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-30)1-[(1-苄基-5-乙氧基羰基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-31)1-[[1-苄基-5-(2-羧基乙烯基)]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-32)1-[1-(4-氟苄基)吡咯-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-33)1-[1-(4-氟苄基)吡咯-2-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-34)1-(1-苯磺酰基吡咯-3-基)-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-35)1-[2-(4-氟苄基)苯并呋喃-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-36)1-(2-苄基苯并呋喃-3-基)-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-37)1-[(1-苯磺酰基-4-乙基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-38)1-(1-苄基吡咯-3-基)-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，(I-39)1-[[1-苄基-5-(2-甲氧基羰基乙基)]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-40)1-[[1-苄基-5-(2-甲氧基羰基乙烯基)]吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-41)1-[(1-苄基-5-乙氧基羰基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-42)1-[(1-苄基-5-正丁基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-43)1-[(1-苄基-5-正丙基)吡咯-3-基]-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-44)1-(1-苄基吡咯-3-基)-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-45)1-(1-苯磺酰基吡咯-3-基)-3-羟基-3-(2H-四唑-5-基)丙烯酮，(I-46)1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(吡啶-2-基)丙烯酮，(I-47)1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(嘧啶-2-基)丙烯酮，(I-48)3-(5-羧基吡啶-2-基)-1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基丙烯酮，(I-49)3-(4-羧基吡啶-2-基)-1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基丙烯酮，(I-50)1-[2-(4-氟苄基)噁唑-5-基]-3-羟基-3-(吡啶-2-基)丙烯酮，(I-51)1-[2-(4-氟苄基)噁唑-5-基]-3-羟基-3-(嘧啶-2-基)丙烯酮。
尤其优选(I-16)1-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮。
式(I)化合物可以为式-CH＝C(OH)-取代基的任何E型和Z型结构，式(I)化合物包括所述两种化学结构的化合物。而且可以使用式(I)化合物互变异构体。即可以使用下列所示任何化学结构的化合物。 前体药物是指可以体内转化为式(I)化合物的化合物。举例来说，如果式(I)化合物具有氨基或羟基，则前体药物是指以下基团保护的化合物酰基(例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、新戊酰基、己酰基、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基、丙烯酰基、间丙烯酰基、氯甲酰基、丙酮酰基、乙二酸一酰基、甲草酰、乙草酰、环己基羰基、苯甲酰基、邻甲苯甲酰基、间甲苯甲酰基、对甲苯甲酰基、肉桂酰基、1-萘甲酰基、2-萘甲酰基、水杨酰基、茴香酰基)。当式(I)化合物具有羧基基团时，前体药物是指转化为其酯衍生物(例如甲酯、乙酯、苄酯)或其酰胺衍生物(例如甲基氨基羰基、苄基氨基羰基)的化合物。
式(I)化合物药学上可接受的盐的实例为无机酸的盐，例如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氟酸、氢溴酸，以及有机酸的盐，例如蚁酸、醋酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟脑磺酸，碱金属的盐，例如钠、钾、钙，或碱土金属的盐。
式(I)化合物的溶剂化物的实例为水合物(一水合物、二水合物)。
本发明中应用的“抗反转录病毒活性剂”是指用于预防或治疗反转录病毒感染的任何药物，包括不直接作用于反转录病毒的药物。其实例包括宿主性酶抑制剂(例如DNA聚合酶抑制剂)、抑制病毒进入宿主细胞的抑制剂(例如肽类似物，如gp120、gp41)、拮抗病毒在宿主体内结合受体的拮抗剂(例如CCR5拮抗剂)、化疗药物、免疫调节剂等。还包括用于预防或治疗机会感染的药物以及针对巨细胞病毒视网膜炎的治疗药物，后一种治疗药物为具有DNA聚合酶抑制作用和反转录酶抑制作用的磷卡萘。
作为“抗反转录病毒活性剂”，特别优选具有抗反转录病毒活性的物质，更优选直接作用于反转录病毒的物质。抗反转录病毒活性剂实例包括CCR5拮抗剂、核苷型反转录酶抑制剂、非核苷型反转录酶抑制剂、整合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂等，直接作用于反转录酶病毒的物质的实例包括核苷型反转录酶抑制剂、非核苷型反转录酶抑制剂、整合酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。
此外，作为用于本发明的抗反转录病毒活性剂，优选具有不同于式(I)化合物作用机制的活性剂，例如CCR5拮抗剂、核苷型反转录酶抑制剂、非核苷型反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。
而且，用于本发明的抗反转录病毒活性剂是指(但不限于)针对它们的检测评价具有抗反转录病毒活性的任何物质。例如，可用本发明说明书对比实施例2介绍的MTT法确定抗人类免疫缺陷病毒的活性剂。特别优选MTT检测方法的EC50值为10μmol/ml或10μmol/ml以下抗人类免疫缺陷病毒活性剂。
优选抗反转录病毒活性剂具体介绍如下，但是不能解释为限于这些物质。
具有CCR5拮抗作用的实例为TAK-779。
TAK-779为下式化合物 它公开于WO99/33976。
核苷型反转录酶抑制剂的实例为齐多夫定(AZT)、去羟肌苷(ddI)、扎西他滨(ddC)、司他夫定(d4T)、拉米夫定(3TC)、阿巴卡韦(ABC)、替诺福韦、替诺福韦disoproxil等。
齐多夫定为下式化合物 其化学名为3’-叠氮基-3’-脱氧胞嘧啶。齐多夫定可以按照US4,724,232介绍的方法制备及使用。
去羟肌苷为下式化合物 其化学名为2’，3’-二脱氧肌苷。去羟肌苷在US4,861,759和WO87/01283中公开。
扎西他滨为下式化合物 其化学名为2’，3’-二脱氧胞苷。扎西他滨在US4,879,277和WO87/01283中公开。
司他夫定为下式化合物 司他夫定在EP398230中公开。
拉米夫定为下式化合物 其化学名为(-)-2’，3’-二脱氧-3’-硫代胞苷。拉米夫定在EP0,382,526中公开。
阿巴卡韦为下式化合物 用阿巴卡韦生成其硫酸盐。在苯发明中，阿巴卡韦可以使用其药学上可接受的盐，主要为各种酸盐，优选硫酸盐。阿巴卡韦在EP434450中公开。
替诺福韦为下式化合物 其化学名为(R)-9-(2-膦酰基甲氧基丙基)腺嘌呤。替诺福韦在US5,733,788和WO94/03467中公开。
替诺福韦disoproxil为下式化合物 其化学名为(R)-[[2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基]甲基]膦酸双(异丙氧基羰氧基甲基)酯。用替诺福韦disoproxil生成其富马酸盐。本发明中，替诺福韦disoproxil可以使用其药学上可接受的盐，主要为各种酸盐，优选富马酸盐。替诺福韦在US5,922,695中公开。
非核苷型反转录酶抑制剂的实施例为奈韦拉平、地拉韦啶、乙米韦林、洛韦胺、依法韦仑、曲韦定、卡普韦林、TIBO、他韦林、UC781等。
奈韦拉平为下式化合物 奈韦拉平在EP429987中公开。
地拉韦啶为下式化合物 其化学名为1-[5-甲氨磺酰吲哚基-2-羰基]-4-[3-(1-甲基乙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪。地拉韦啶用作非核苷型反转录酶抑制剂，Upjohn命名为“RESCRIPTOR”出售。本发明中，地拉韦啶可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选甲磺酸盐。
乙米韦林为下式化合物 其化学名为6-苄基-1-(乙氧基甲基)-5-异丙基尿嘧啶。乙米韦林在EP420763中公开。
洛韦胺为下式化合物 其化学名为(±)-α-[(2-乙酰基-5-甲基苯基)氨基]-2，6-二氯苯乙酰胺。洛韦胺在EP0,538,301中公开。
依法韦仑为下式化合物 其化学名为(S)-(-)-6-氯-4-(环丙基乙炔基)-1，4-二氢-4-(三氟甲基)-2H-3，1-苯并噁嗪-2-酮。依法韦仑在WO94/03440和EP582455中公开。
曲韦定为下式化合物 其化学名为1-(5-溴-2-吡啶基)-3-[2-(2-吡啶基)乙基]-2-硫脲。本发明中，曲韦定可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选盐酸盐。曲韦定在WO93/03022中公开。
卡普韦林为下式化合物 其化学名为5-[(3，5-二氯苯基)硫代]-4-(1-甲基乙基)-1-(4-吡啶基甲基)-1H-咪唑-2-氨基甲酸甲酯。本发明中，卡普韦林可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选盐酸盐。卡普韦林在WO96/10019中公开。
TIBO为下式化合物 其化学名为(+)-S-4，5，6，7-四氢-S-甲基-6-(3-甲基-2-丁烯基)-咪唑并(4，5，1-jk)(1，4)-苯并二氮杂-2(1H)-硫酮。TIBO在EP384522中公开。
他韦林(HBY097)为下式化合物 他韦林(HBY097)在EP509398中公开。
UC781为下式化合物 UC781在WO97/19940中公开。
HIV蛋白酶抑制剂的实例为沙奎那韦、奈非那韦、利托那韦、茚地那韦、KNI-272、洛匹那韦、VX-478、VB-19026、BILA-2011-BS、A-77003、A-80907、DMP-323、XM-450等。
沙奎那韦为下式化合物 其化学名为N-叔丁基-十氢-2-[2(R)-羟基-4-苯基-3(S)-{[N-(2-喹啉基羰基)-L-门冬酰]氨基}丁基]-(4aS，8aS)-异喹啉-3(S)-甲酰胺。Roche出售命名为“INVIRASW”的沙奎那韦甲磺酸盐C30H50N6O5CH4O3S(分子量766.96)用作口服HIV蛋白酶抑制剂。本发明中，沙奎那韦可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选甲磺酸盐。沙奎那韦在US5,196,438中公开。
奈非那韦为下式化合物 其化学名为[3S-[2(2S*，3S*)，3α，4aβ，8aβ]]-N-(1，1-二甲基乙基)-十氢-2-[2-羟基-3-[(3-羟基-2-甲基苯甲酰基)氨基]-4-(苯硫基)丁基]-3-异喹啉甲酰胺。Agron出售命名为“VIRACEPT”的奈非那韦甲磺酸盐(分子量663.90)用作口服HIV蛋白酶抑制剂。本发明中，奈非那韦可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选甲磺酸盐。奈非那韦在WO95/09843和US5,484,926中公开。
利托那韦为下式化合物 其化学名为[5S-(5R*，8R*，10R*，11R*)]-10-羟基-2-甲基-5-(1-甲基乙基)-1-[2-(1-甲基乙基)-4-噻唑基]-3，6-二氧代-8，10-二(苯基甲基)-2，4，7，12-四氮杂十三烷-13-羟酸5-噻唑基甲酯(化学式C37H48N6O5S2，分子量720.95)。Abott.出售命名为“NORVIR”的利托那韦柠檬酸盐用作口服HIV蛋白酶抑制剂。本发明中，利托那韦可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选柠檬酸盐。利托那韦用WO94/14436公开的方法合成。
茚地那韦为下式化合物 其化学名为[1(1S，2R)，5(s)]-2，3，5-三脱氧-N-(2，3-二氢-2-羟基-1H-茚-1-基)-5-[2-{[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基}-4-(3-吡啶基甲基)-1-哌嗪基]-2-(苯基甲基)-D-赤型-戊酰胺。Merck出售命名为“CRIXIVAN”的茚地那韦硫酸盐(C36H47N5O4H2SO4，分子量711.88)用作口服HIV蛋白酶抑制剂。本发明中，利托那韦可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐，优选硫酸盐。茚地那韦在EP541168和US5,413,999中公开。
KNI-272为下式化合物 其化学名为(R)-N-叔2，3，5-丁基-3-[(2S，3S)-2-羟基-3-[(R)-2-(5-异喹啉基氧基乙酰基)氨基-3-甲基硫丙酰基(propanoyl)]氨基-4-苯基丁酰基(butanoyl)]-1，3-噻唑烷-4-甲酰胺。本发明中，KNI-272可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐。KNI-272在EP574135中公开。
洛匹那韦(ABT-378)为下式化合物 本发明中，洛匹那韦可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐。洛匹那韦在WO97/21685中公开。
VX-478为下式化合物 它在WO94/05639中公开。本发明中，VX-478可以使用其药学上可接受的盐，主要式各种酸盐。
VB-19026为下式化合物 VB-19026在WO97/27180中公开。
BILA-2011-BS为下式化合物 它在EP560268中公开。
A-77003为(2S，3R，4S，5S)-2，5-二-(N-(N-甲基)-N-(2-吡啶基)甲基)氨基)-羰基缬氨酰氨基)-3，4-二羟基-1，6-二苯基己烷。本发明中，A-77003可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐。A-77003在US5,142,056中公开。
A-80987为(2S，3R，5S)-2-(N-(N-((2-吡啶基)甲氧基羰基)缬氨酰基)氨基)-5-(N-(3-吡啶基)甲氧基羰基)氨基)-1，6-二苯基-3-羟基己烷。本发明中，A-80987可以使用其药学上可接受的盐，主要是各种酸盐。A-80987在US5,354,866中公开。
DMP-323为下式化合物 它在WO93/07128中公开。
XM-450为下式化合物 它在WO93/07128中公开。
在上述化合物中，特别优选齐多夫定、拉米夫定、司他夫定、奈韦拉平、卡普韦林和奈非那韦。
上述抗反转录病毒活性剂与式(I)化合物组合应用具有抗反转录病毒活性、尤其是抗HIV活性协同作用。
反转录病毒为具有反转录酶的病毒，包括人类免疫缺陷病毒(例如HIV-1、HIV-2)、人类T细胞白血病病毒(例如HTLV-I，HTLV-II)、猫免疫缺陷病毒(例如FIV)、猿猴免疫缺陷病毒(例如SIV)等。
上述病毒具有反转录酶、整合酶和蛋白酶，它们的反转录酶、整合酶和蛋白酶具有高度同源性，因为它们的功能相同。
所以，本发明抗反转录病毒组合物能够抑制各种反转录病毒的产生，因而用于治疗或预防反转录病毒感染。
例如式(I)化合物不仅能够抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)的整合酶，而且能够抑制其它反转录病毒的整合酶。
本发明抗反转录病毒组合物能够有效治疗或预防反转录病毒感染，因为本发明组合物与单一使用各抗反转录病毒活性剂相比，具有协同作用。
与没有副作用如毒性的各具体单一药物剂量相比，在本发明组合物中，即使更小剂量的各抗反转录病毒活性剂，也能够获得充分的抗反转录病毒作用，这是下列实施例所证实的协同作用的结果。
此外，在本发明组合物中，与各单一剂量相同剂量的各抗反转录病毒活性剂能够非常好地防止产生耐药性抗反转录病毒，因而获得强力有效的治疗。
如上所述，本发明抗反转录病毒组合物是抗反转录病毒感染非常有效的药用组合物，尤其为用于AIDS的治疗药物和预防药物。
另外，已知症状不是在感染后立即出现，存在潜伏期。本发明抗反转录病毒组合物可用作防止所述潜伏感染患者出现反转录病毒感染的预防药物。
本发明特征在于式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A和B如上所述，与一种或多种不同类型抗HIV活性剂组合应用获得的协同作用。
因此，各活性成分可以其单一制剂使用，或者用各自独立的制剂同时使用。另外，以合适间隔连续单独应用各活性成分可获得所述相似的协同作用，而不会降低协同作用。
可用本发明抗反转录病毒组合物治疗或预防的反转录病毒感染的实例包括人类免疫缺陷病毒感染(例如AIDS)、人类T细胞白血病病毒感染(人类T细胞白血病)等。此外，作为动物反转录病毒感染的实例包括猫免疫缺陷病毒感染(例如猫AIDS)、猿猴免疫缺陷病毒感染(例如猿猴AIDS)等。
另外，本发明抗反转录病毒组合物不仅可用于治疗及预防反转录病毒感染(例如AIDS)，而且可用于治疗及预防反转录病毒感染症状(例如相关临床症状，如AIDS相关并发症(ARC)，以及持续全身性淋巴结病(PGL)、AIDS相关性神经病症状，如多发性硬化)。进而，所涉及的AIDS相关并发症有卡波济氏肉瘤、卡氏肺囊虫肺炎、HIV脑病、念珠菌食管炎等。
另外，本发明抗反转录病毒组合物可用于治疗无症状感染、初期感染或反转录病毒引起或伴发的疾病。
本发明抗反转录病毒组合物可口服或胃肠外用药。口服用药时，本发明抗反转录病毒组合物的使用形式可以为任何常规制剂，例如固体制剂，如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、糖浆、颊制剂或舌下制剂。胃肠外用药时，本发明抗反转录病毒组合物的使用形式可以为任何常规制剂，例如肌肉用药注射剂、栓剂、皮下吸收剂、吸入剂。优选口服用药。
本发明抗反转录病毒组合物可以如下制备使有效量活性成分和适合最终给药制剂的各种药用添加剂适当混合，所述添加剂例如赋形剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、润滑剂和稀释剂。如果注射给药，通过与合适载体消毒而制备所述制剂。
具体来说，赋形剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、结晶纤维素等；粘合剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、明胶、聚乙烯聚吡咯烷酮等；崩解剂包括羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉、藻酸钠、琼脂、十二烷基硫酸钠等；润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁、聚乙二醇等。栓剂基质可以使用可可脂、聚乙二醇、甲基纤维素等。此外，当制备溶液或乳液或悬浮液注射剂时，可以在其中方便地加入常用溶解辅助剂、混悬剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂等，如果口服用药，可加入矫味剂、调味剂等。
本发明抗反转录病毒组合物活性成分可由式(I)化合物和一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂构成。
单独给予式(I)化合物或另一种抗反转录病毒活性剂时，各活性成分口服用药的日剂量可为0.05-3000mg，优选0.1-1000mg，胃肠外用药的日剂量为0.01-1000mg，优选0.05-500mg。上述剂量可通过测定用药后例如血液(或血浆)的CD4阳性细胞数、病毒RNA量确定。而且药物剂量的确定取决于患者对所述治疗的反应。
使用本发明抗反转录病毒组合物时，最好根据年龄、体重、患者状况和给药途径确定各所述成分的剂量。所述组合物可通过适当混合上述抗反转录病毒活性剂而制得，每种药物的剂量为单一用药的约0.1-1倍。所以，给予包含式(I)化合物和另一种抗反转录病毒活性剂的本发明抗反转录病毒组合物时，各活性成分口服用药的日剂量可为0.005-3000mg，优选0.01-1000mg，胃肠外用药的日剂量为0.001-1000mg，优选0.005-500mg。
而且，各活性剂以独立制剂同时或连续用药时，它们可以以上述相似方式配制和用药。
式(I)化合物用PCT/JP99/07101介绍的方法合成。合成实施例11-[5-(4-氟苄基)呋喃-2-基]-3-羟基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)丙烯酮，化合物(I-16)。 (1)按照Tetrahedron Letters，1979，5，p.469中介绍的方法，使2-呋喃羧酸(5.6g，50mmol)与4-氟苯甲醛(6.8g，55mmol)反应。经过后处理，获得的粗制晶体用异丙醚洗涤获得5-[[1-(4-氟苯基)-1-羟基]甲基]呋喃-2-羧酸(8.1g，收率69％)。m.p.139-140℃。NMR(CDCl3)δ5.88(1H，s)，6.28(1H，d，J＝3.6Hz)，7.07(2H，t，J＝8.7Hz)，7.25(1H，d，J＝3.6Hz)，7.39-7.44(2H，m)。
(2)按照Tetrahedron 1995，51，p.11043中介绍的方法，将上述化合物(4.72g，20mmol)用三甲基氯硅烷(10.8g，100mmol)和碘化钠(15g，100mmol)还原获得5-(4-氟苄基)-呋喃-2-羧酸晶体(3.52g，收率80％)。NMR(d6-DMSO)δ4.05(2H，s)，6.31(1H，d，J＝3.3Hz)，7.12-7.18(3H，m)，7.27-7.32(2H，m)，12.9(1H，brs)。
(3)按照Bull.Chem.Soc.Japan.，1974，47，p.1777中介绍的方法，使上述化合物(3.52g，16mmol)与二吡啶基二硫化物(4.2g，19.2mmol)以及三苯膦(5.04g，19.2mmol)反应获得5-(4-氟苄基)呋喃-2-羧酸2-吡啶硫基酯(3.7g，收率77％)。m.p.88-89℃。NMR(CDCl3)δ4.04(2H，s)，6.15(1H，d，J＝3.3Hz)，7.03(2H，t，J＝8.7Hz)，7.22(1H，d，J＝3.3Hz)，7.22-7.26(2H，m)，7.29-7.34(1H，m)，7.70-7.79(2H，m)，8.63-8.66(1H，m)。
(4)按照Bull.Chem.Soc.Japan.1974，47，p.1777中介绍的方法，将上述化合物(3.7g，12.4mmol)与甲基溴化镁的THF溶液(1M，14ml)反应获得油状2-乙酰基-5-(4-氟苄基)呋喃(2.7g)。NMR(CDCl3)δ2.43(3H，s)，4.01(2H，s)，6.10(1H，d，J＝3.6Hz)，7.01(2H，t，J＝9.0Hz)，7.10(1H，d，J＝3.6Hz)，7.18-7.23(2H，m)。
(5)将上述化合物(1.31g，6mmol)的THF(18mL)溶液冷却，保持在-70-65℃，向反应混合物中滴加1M双三甲硅烷基氨基锂的THF溶液(7.8mL，7.8mmol)。然后将反应混合物逐渐加温至-10℃，然后再冷却至-70℃，向反应混合物中滴加1-三苯甲基-1H-1，2，4-三唑-3-羧酸乙酯(2.99g，7.8mmol)的THF(30mL)溶液。将反应混合物逐渐加温至室温，搅拌1.5小时。反应混合物中加入过量氯化铵水溶液，用醋酸乙酯萃取，用盐水洗涤，干燥。除去溶剂，残余物中加入二氧六环(75mL)和1mol/dm3HCl(20mL)，将反应混合物在80℃、搅拌下加热0.5小时。然后减压除去二氧六环，残余物分配在醋酸乙酯和水之间。醋酸乙酯层用水洗涤，干燥。除去溶剂，将残余物溶于乙醚。将乙醚溶液用1mol/dm3NaOH(6mL)萃取三次。碱萃取液用乙醚洗涤2次，用1mol/dm3HCl中和，然后用醋酸乙酯萃取。将萃取液用水、盐水洗涤，干燥。除去溶剂，获得的粗制晶体用少量醋酸乙酯洗涤，用醋酸乙酯重结晶获得标题化合物(1.15g，收率61％)。m.p.183-185℃。C16H12FN3O3的分析值C，61.34；H，3.86；N，13.41；F，6.06。实测值C，61.22；H，3.72；N，13.41；F，6.03。NMR(d6-DMSO)δ4.15(2H，s)，6.47(1H，d，J＝3.3Hz)，6.93(1H，s)，7.17(2H，t，J＝9.0Hz)，7.31-7.37(2H，m)，7.50(1H，d，J＝3.3Hz)，8.70(1H，brs)。合成实施例2-51化合物(I-1)至(I-15)、(I-17)至(I-51)按照上述的类似方法合成。每个化合物的物理数据说明如下。化合物(I-1)m.p.203-206℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C15H12FN5O2的分析值C，57.51；H，3.86；N，22.35；F，6.06。实测值C，57.10；H，3.89；N，22.23；F，5.79。NMR(d6-DMSO)δ5.39(2H，s)，6.92(1H，s)，7.17-7.41(4H，m)，8.14(1H，s)，8.66(1H，brs)，8.76(1H，s)，14.3(1H，brs)。化合物(I-2)m.p.187-191℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C16H12FN3O3的分析值C，61.34；H，3.86；N，13.41；F，6.06。实测值C，61.08；H，3.87；N，13.72；F，6.08。NMR(d6-DMSO)δ3.81(2H，s)，6.97(1H，s)，7.14(2H，t，J＝9.0Hz)，7.30-7.35(2H，m)，7.45(1H，s)，7.92(1H，s)，8.75(1H，brs)。化合物(I-3)m.p.121-123℃(重结晶用溶剂乙醚)。C15H11FN4O3的分析值C，57.33；H，3.53；N，17.83；F，6.04。实测值C，57.25；H，3.58；N，17.53；F，5.81。NMR(d6-DMSO)δ4.16(2H，s)，6.51(1H，d，J＝3.6Hz)，7.05(1H，s)，7.18(2H，t，J＝8.7Hz)，7.32-7.38(2H，m)，7.65(1H，d，J＝3.6Hz)。化合物(I-4)m.p.144-147℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C15H11N3O3S0.3H2O的分析值C，56.52；H，3.67；N，13.18；S，10.06。实测值C，56.85；H，3.71；N，13.56；S，9.48。NMR(d6-DMSO)δ6.97(1H，s)，7.12(1H，d，J＝3.6Hz)，7.30-7.44(5H，m)，7.65(1H，d，J＝3.6Hz)，8.74(1H，brs)。化合物(I-5)m.p.207-210℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C15H11N3O5S1.2H2O的分析值C，49.10；H，3.68；N，11.45；S，8.74。实测值C，48.84；H，3.68；N，11.67；S，9.05。NMR(d6-DMSO)δ7.02(1H，s)，7.62-7.86(5H，m)，8.02-8.08(2H，m)，8.82(1H，brs)。化合物(I-6)m.p.72-73℃(重结晶用溶剂乙醚)。C13H15N3O30.25H2O的分析值C，58.75；H，5.88；N，15.81。实测值C，58.10；H，5.65；N，15.81。NMR(CDCl3)δ0.96(3H，t，J＝7.5Hz)，1.35-1.42(2H，m)，1.65-1.75(2H，m)，2.74(2H，t，J＝7.5Hz)，6.25(1H，d，J＝3.6Hz)，7.12(1H，s)，7.29(1H，d，J＝3.6Hz).8.44(1H，s)。化合物(I-7)m.p.185-187℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C16H12FN3O2S0.3H2O的分析值C，57.41；H，3.79；N，12.55；F，5.68；S，9.58。实测值C，57.58；H，3.82；N，12.77；F，5.49；S，9.31。NMR(d6-DMSO)δ4.25(2H，s)，7.04-7.40(6H，m)，7.98(1H，d，J＝3.8Hz)，8.77(1H，brs)，13.8(1H，brs)。化合物(I-8)m.p.124-125℃(重结晶用溶剂乙醚-己烷)。C12H14N4O3的分析值C，54.96；H，5.38；N，21.36。实测值C，55.02；H，5.43；N，21.09。NMR(CDCl3)δ0.95(3H，t，J＝7.8Hz)，1.37-1.45(2H，m)，1.65-1.73(2H，m)，2.76(2H，t，J＝7.8Hz)，6.30(1H，d，J＝3.6Hz)，7.23(1H，s)，7.39(1H，d，J＝3.6Hz)。化合物(I-9)m.p.176-179℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C16H12FN3O3的分析值C，61.34；H，3.86；N，13.41；F，6.06。实测值C，61.19；H，3.81；N，13.52；F，6.19。NMR(d6-DMSO)δ4.03(2H，s)，6.62(1H，d，J＝0.9Hz)，6.90(1H，s)，7.15(2H，t，J＝9.0Hz)，7.29-7.34(2H，m)，8.60(1H，d，J＝0.9Hz)，8.67(1H，brs)。化合物(I-10)m.p.180-183℃。C16H13FN4O20.2H2O的分析值C，60.83；H，4.28；N，17.74；F，6.01。实测值C，60.61；H，4.24；N，17.61；F，5.82。NMR(d6-DMSO)δ3.97(2H，s)，6.04(1H，s)，6.89(1H，s)，7.01-7.18(6H，m)，8.72(1H，brs)。化合物(I-11)m.p.171-174℃(重结晶用溶剂乙醚)。C15H11FN4O3的分析值C，57.33；H，3.53；N，17.86；F，6.05。实测值C，57.05；H，3.61；N，17.74；F，5.82。NMR(d6-DMSO)δ4.24(2H，s)，6.70(1H，d，J＝1.8Hz)，7.09(1H，s)，7.10-7.17(2H，m)，7.32-7.37(2H，m)，8.04(1H，d，J＝1.8Hz)。化合物(I-12)m.p.221-223℃(重结晶用溶剂乙醚)。C16H12FN3O3的分析值C，61.34；H，3.86；N，13.41；F，6.06。实测值C，61.04；H，3.98；N，13.28；F，5.87。NMR(d6-DMSO)δ4.23(2H，s)，6.65(1H，d，J＝1.8Hz)，7.03(1H，s)，7.10-7.16(2H，m)，7.31-7.36(2H，m)，7.97(1H，d，J＝1.8Hz)，8.74(1H，brs)，14.7(1H，brs)。化合物(I-13)m.p.217-220℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C16H12FN3O3的分析值C，6l.34；H，3.86；N，13.41；F，6.06。实测值C，61.19；H，4.04；N，13.16；F，5.90。NMR(d6-DMSO)δ4.02(2H，s)，6.93(1H，s)，7.09(2H，t，J＝9.0Hz)，7.25-7.31(2H，m)，7.56(1H，s)，8.66(1H，brs)，8.80(1H，s)。化合物(I-14)m.p.195-197℃(重结晶用溶剂乙醚)。C14H11FN6O2的分析值C，53.50；H，3.53；N，26.74；F，6.04。实测值C，53.65；H，3.53；N，26.71；F，5.92。NMR(d6-DMSO)δ5.79(2H，s)，7.12-7.26(5H，m)，7.47(1H，d，J＝2.1Hz)，7.74(1H，d，J＝2.1Hz)。化合物(I-15)m.p.189-191℃。C18H17FN4O30.2C4H8O2的分析值C，60.38；H，5.01；N，14.98；F，5.04。实测值C，60.53；H，4.79；N，14.71；F，5.05。NMR(d6-DMSO)δ3.20(3H，s)，5.20(2H，s)，6.68(1H，s)，6.88(1H，s)，7.02-7.25(2H，m)，7.32-7.42(2H，m)，8.05(1H，brs)，8.75(1H，brs)。化合物(I-17)m.p.210-211℃(重结晶用溶剂氯仿)。C19H19FN4O2的分析值C，64.40；H，5.40；N，15.81；F，5.36。实测值C，64.28；H，5.37；N，15.61；F，5.23。NMR(d6-DMSO)δ0.81(3H，t，J＝7.2Hz)，1.60-1.82(2H，m)，3.68-3.96(2H，m)，4.05(2H，s)，6.57(1H，d，J＝1.8Hz)，6.80-7.36(4H，m)，7.91(1H，d，J＝1.8Hz)，8.57(1H，brs)。化合物(I-18)m.p.166-168℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C23H18F2N4O2的分析值C，65.71；H，4.32；N，13.33；F，9.04。实测值C，65.82；H，4.33；N，13.03；F，8.78。NMR(d6-DMSO)δ4.03(2H，s)，5.10(2H，s)，6.65(1H，s)，6.84(1H，s)，7.00-7.40(8H，m)，8.04(1H，s)，8.58(1H，brs)。化合物(I-19)m.p.210-213℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-己烷)C16H13FN4O20.2H2O，0.2C2H6O的分析值C，60.59；H，4.53；N，17.23；F，5.84。实测值C，60.62；H，4.45；N，16.95；F，5.69。NMR(d6-DMSO)δ4.07(2H，s)，6.59(1H，s)，6.87(1H，s)，7.02-7.11(2H，m)，7.16-7.30(2H，m)，7.83(1H，s)，8.70(1H，brs)，11.5(1H，s)，14.6(1H，brs)。化合物(I-20)m.p.150-153℃(重结晶用溶剂乙醚)。C15H11FN4O3的分析值C，57.33；H，3.53；N，17.83；F，6.04。实测值C，57.29；H，3.72；N，17.74；F，5.84。NMR(CDCl3)δ4.40(2H，s)，6.75(1H，d，J＝2.1Hz)，6.99(2H，t，J＝8.7Hz)，7.01(1H，s)，7.24-7.29(2H，m)，7.39(1H，d，J＝2.1Hz)。化合物(I-21)m.p.178-181℃(重结晶用溶剂乙醚)。C22H19N5O4S的分析值C，58.79；H，4.26；N，15.58；S，7.13。实测值C，59.24；H，4.37；N，15.75；S，6.61。NMR(d6-DMSO)δ2.81-2.98(4H，m)，7.11-7.30(7H，m)，7.68-7.73(2H，m)，7.80-7.86(1H，m)，8.07-7.10(2H，m)，8.64(1H，d，J＝2.4Hz)。化合物(I-22)m.p.228-230℃(重结晶用溶剂乙醚)C16H15N5O20.16C2H4O2的分析值C，61.46；H，4.94；N，21.96。实测值C，61.74；H，4.88；N，21.67。NMR(d6-DMSO)δ2.84-3.02(4H，m)，6.74(1H，m)，7.04(1H，s)，7.17-7.32(5H，m)，7.96(1H，m)，11.6(1H，brs)。化合物(I-23)m.p.215-218℃(重结晶用溶剂氯仿)。C19H16N4O4的分析值C，62.63；H，4.43；N，15.38。实测值C，62.29；H，4.69；N，15.11。NMR(d6-DMSO)δ5.19(2H，s)，6.25(1H，d，J＝16.5Hz)，6.90(1H，s)，7.30-7.43(5H，m)，7.72(1H，s)，8.12-8.22(2H，m)，8.62(1H，brs)。化合物(I-24)m.p.226-228℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-己烷)。C19H16N4O40.1C4H8O2的分析值C，62.44；H，4.54；N，15.01。实测值C，62.06；H，4.61；N，14.82。NMR(d6-DMSO)δ5.19(2H，s)，6.25(1H，d，J＝16.2Hz)，6.90(1H，s)，7.28-7.44(5H，m)，7.72(1H，s)，8.12-8.20(2H，m)，8.63(1H，brs)。化合物(I-25)m.p.144-147℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)C16H12FN3O30.1H2O的分析值C，60.99；H，3.90；N，13.34；F，6.03。实测值C，61.01；H，4.07；N，13.47；F，5.99。NMR(d6-DMSO)δ4.41(2H，s)，6.92(1H，s)，7.04(1H，d，J＝1.8Hz)，7.14(2H，t，J＝9.3Hz)，7.28-7.33(2H，m)，7.72(1H，d，J＝1.8Hz)，8.70(1H，brs)。化合物(I-26)m.p.168-170℃。C15H12FN5O20.6H2O的分析值C，53.75；H，3.79；N，20.90；F，5.67。实测值C，53.83；H，3.73；N，21.20；F，5.50。NMR(d6-DMSO)δ5.20(2H，s)，6.68(1H，dd，J＝3.0，1.8Hz)，6.96(1H，s)，7.02-7.08(1H，s)，7.16-7.26(2H，m)，7.34-7.44(2H，m)，8.02-8.08(1H，m)。化合物(I-27)m.p.190-195℃(重结晶用溶剂乙醚)。C20H14FN3O2S的分析值C，63.31；H，3.72；N，11.08；F，5.01；S，8.45。实测值C，63.08；H，3.82；N，11.28；F，4.84；S，8.46。NMR(CDCl3)δ4.53(2H，s)，7.01(2H，t，J＝8.7Hz)，7.11(1H，s)，7.26-7.48(4H，m)，7.75(1H，d，J＝7.8Hz)，8.10(1H，d，J＝7.5Hz)，8.43(1H，brs)。化合物(I-4)m.p.122-124℃(重结晶用溶剂乙醚-己烷)。C20H14FN3O30.25H2O的分析值C，65.30；H，3.97；N，11.42；F，5.16。实测值C，65.50；H，3.99；N，11.24；F，4.99。NMR(CDCl3)δ4.54(2H，s)，6.98-7.04(2H，m)，7.26(1H，s)，7.34-7.41(4H，m)，7.47-7.50(1H，m)，7.96-7.99(1H，m)，8.38(1H，s)。化合物(I-29)m.p.264-265℃。C17H14N4O40.3H2O的分析值C，59.40；H，4.28；N，16.30。实测值C，59.21；H，4.30；N，16.20。NMR(d6-DMSO)δ5.63(2H，s)，6.95(1H，s)，7.16-7.40(6H，m)，8.27(1H，d，J＝1.8Hz)，8.69(1H，brs)，12.8(1H，brs)。化合物(I-30)m.p.204-206℃。C19H18N4O4的分析值C，62.29；H，4.95；N，15.29。实测值C，61.94；H，5.03；N，15.02。NMR(d6-DMSO)δ1.24(3H，t，J＝7.2Hz)，4.20(2H，q，J＝7.2Hz)，5.61(2H，s)，6.97(1H，s)，7.12-7.42(6H，m)，8.32(1H，s)，8.77(1H，s)。化合物(I-31)m.p.238-240℃。C20H18N4O40.4H2O的分析值C，62.30；H，4.91；N，14.53。实测值C，62.18；H，4.74；N，14.53。NMR(d6-DMSO)δ3.64(3H，s)，5.42(2H，s)，6.36(1H，d，J＝15.9Hz)，6.95(1H，s)，7.02-7.58(7H，m)，8.17(1H，s)，8.76(1H，s)。化合物(I-32)m.p.170-173℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C16H13FN4O20.2HCl的分析值C，60.13；H，4.16；N，17.53；F，5.94。实测值C，60.21；H，4.12；N，17.41；F，5.62。NMR(d6-DMSO)δ5.65(2H，s)，6.30-6.36(1H，m)，6.94(1H，m)，7.04-7.50(6H，m)，8.65(1H，brs)。化合物(I-33)m.p.147-150℃。C15H12FN5O20.2H2O的分析值C，56.85；H，3.94；N，22.10；F，6.00。实测值C，56.68；H，4.02；N，22.47；F，5.72。NMR(d6-DMSO)δ5.65(2H，s)，6.37(1H，dd，J＝3.0，2.7Hz)，7.05-7.20(5H，m)，7.47-7.58(2H，m)。化合物(I-34)m.p.258-264℃(重结晶用溶剂氯仿)。C15H12N4O4S的分析值C，52.32；H，3.51；N，16.27；S，9.31。实测值C，52.26；H，3.60；N，16.05；S，9.22。NMR(d6-DMSO)δ6.85(1H，m)，7.03(1H，s)，7.53(1H，m)，7.67-7.74(2H，m)，7.78-7.84(1H，m)，8.08-8.15(2H，m)，8.37(1H，m)，8.65(1H，brs)。化合物(I-35)m.p.164-168℃(重结晶用溶剂乙醚-己烷)C19H13FN4O30.2C4H10O的分析值C，62.72；H，3.99；N，14.78；F，5.01。实测值C，62.43；H，3.74；N，14.74；F，4.76。NMR(CDCl3)δ4.53(2H，s)，6.98-7.04(2H，m)，7.26(1H，s)，7.34-7.41(4H，m)，7.49-7.52(1H，m)，7.95-7.98(1H，m)。化合物(I-36)m.p.181-183℃(重结晶用溶剂氯仿)。C19H14N4O30.25H2O的分析值C，65.04；H，4.17；N，15.97。实测值C，65.02；H，3.96；N，16.10。NMR(d6-DMSO)δ4.61(2H，s)，7.17(1H，s)，7.26-7.47(7H，m)，7.68-7.70(1H，m)，7.95-7.98(1H，m)。化合物(I-37)m.p.178-180℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。NMR(d6-DMSO)δ1.19(3H，t，J＝7.6Hz)，2.73(2H，qd，J＝7.6，1.2Hz)，6.96-7.04(2H，m)，7.48-7.78(3H，m)，7.90-8.02(3H，m)。化合物(I-38)m.p.216-217℃。C16H14N4O20.05CHCl30.2H2O的分析值C，63.44；H，4.79；N，18.44。实测值C，63.47；H，4.79；N，18.39。NMR(d6-DMSO)δ5.20(2H，s)，6.60-6.62(1H，m)，6.84(1H，s)，7.00-7.02(1H，m)，7.29-7.40(5H，m)，7.92-7.93(1H，m)，8.69(1H，brs)，14.6(1H，brs)。化合物(I-39)m.p.178-180℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-己烷-乙醚)。C19H19N5O4的分析值C，59.84；H，5.02；N，18.36。实测值C，59.38；H，5.07；N，18.03。NMR(CDCl3)δ2.50-2.70(2H，m)，2.75-2.88(2H，m)，3.72(3H，s)，5.10(2H，s)，6.48(1H，s)，6.95(1H，s)，7.02-7.10(2H，m)，7.28-7.48(4H，s)。化合物(I-40)m.p.223-225℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-己烷)。C19H17N5O40.1C4H8O2的分析值C，60.03；H，4.62；N，18.04。实测值C，60.26；H，4.57；N，17.91。NMR(d6-DMSO)δ3.66(3H，s)，5.48(2H，s)，6.49(1H，d，J＝15.6Hz)，7.08(1H，s)，7.10-7.60(7H，m)，8.30(1H，s)。化合物(I-41)m.p.85-90℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)NMR(d6-DMSO)δ1.36(3H，t，J＝6.9Hz)，4.30(2H，q，J＝6.9Hz)，5.62(2H，s)，7.04(1H，s)，7.16-7.62(5H，m)。化合物(I-42)m.p.118-120℃(重结晶用溶剂乙醚-己烷-醋酸乙酯)C19H21N5O20.2C4H8O2的分析值C，64.44；H，6.17；N，18.98。实测值C，64.60；H，6.02；N，18.97。NMR(CDCl3)δ0.91(3H，t，J＝7.2Hz)，1.30-1.44(2H，m)，1.52-1.68(2H，m)，2.46(2H，t，J＝7.2Hz)，5.09(2H，s)，6.50(1H，s)，7.04-7.10(2H，m)，7.30-7.50(3H，m)。化合物(I-43)m.p.156-158℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-己烷)。C18H19N5O20.1C4H8O2的分析值C，63.84；H，5.77；N，20.23。实测值C，63.93；H，5.76；N，20.23。NMR(d6-DMSO)δ0.89(3H，t，J＝7.8Hz)，1.42-1.60(2H，m)，2.42(2H，t，J＝7.8Hz)，5.23(2H，s)，6.47(1H，s)，6.95(1H，s)，7.10-7.18(2H，m)，7.26-7.40(3H，m)，7.99(1H，s)。化合物(I-44)m.p.188-189℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C15H13N5O20.2H2O的分析值C，60.27；H，4.52；N，23.43。实测值C，60.39；H，4.51；N，23.39。NMR(d6-DMSO)δ5.22(2H，s)，6.68-6.69(1H，m)，6.97(1H，s)，7.05(1H，m)，7.31-7.40(5H，m)，8.06(1H，m)。化合物(I-45)m.p.203-204℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯)。C14H11N5O4S0.75H2O的分析值C，46.86；H，3.51；N，19.52；F，8.94。实测值C，47.22；H，3.48；N，19.32；F，8.95。NMR(d6-DMSO)δ6.89-6.92(1H，m)，7.21(1H，s)，7.56-7.57(1H，m)，7.68-7.73(2H，m)，7.80-7.84(1H，m)，8.12-8.15(2H，m)，8.52-8.53(1H，m)。化合物(I-46)m.p.84-85℃(重结晶用溶剂乙醚-己烷)。C19H14FNO30.2H2O的分析值C，69.80；H，4.44；N，4.28；F，5.81。实测值C，69.76；H，4.34；N，4.34；F，5.73。NMR(CDCl3)δ4.06(2H，s)，6.16(1H，d，J＝3.3Hz)，7.03(2H，t，J＝8.4Hz)，7.20-7.30(3H，m)，7.32(1H，s)，7.40-7.48(1H，m)，7.87(1H，dt，J＝1.5，7.5Hz)，8.11(1H，d，J＝7.5Hz)，8.68-8.74(1H，m)。化合物(I-47)m.p.77-80℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-氯仿)。C18H13FNO30.2H2O0.2C4H8O20.03CHCl3的分析值C，64.78；H，4.34；N，8.02；F，5.44。实测值C，65.04；H，4.04；N，7.77；F，5.56。NMR(CDCl3)δ4.07(2H，s)，6.18(1H，d，J＝3.2Hz)，7.03(2H，t，J＝8.8Hz)，7.18-7.22(3H，m)，7.39(1H，s)，7.39(1H，t，J＝4.8Hz)，8.92(2H，d，J＝4.8Hz)。化合物(I-48)m.p.196-198℃(重结晶用溶剂异丙醚)。C20H14FNO50.2H2O的分析值C，64.76；H，3.91；N，3.78；F，5.12。实测值C，64.95；H，3.73；N，3.93；F，4.99。NMR(CDCl3)δ4.08(2H，s)，6.18(1H，d，J＝3.6Hz)，7.03(2H，t，J＝9.0Hz)，7.20-7.32(3H，m)，7.37(1H，s)，8.20(1H，d，J＝8.4Hz)，8.51(1H，dd，J＝8.4，1.8Hz)，9.34(1H，brs)。化合物(I-49)m.p.208-210℃(重结晶用溶剂异丙醚)。C20H14FNO5的分析值C，65.40；H，3.84；N，3.81；F，5.17。实测值C，65.14；H，3.79；N，3.90；F，4.95。NMR(CDCl3)δ4.09(2H，s)，6.25(1H，d，J＝3.6Hz)，7.03(2H，t，J＝8.4Hz)，7.21-7.32(3H，m)，7.65(1H，s)，7.96-8.02(1H，m)，8.56(1H，brs)，8.85(1H，d，J＝5.1Hz)。化合物(I-50)m.p.108-109℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-异丙醚)。C18H13FN2O3的分析值C，66.66；H，4.04；N，8.64；F，5.86。实测值C，66.64；H，3.96；N，8.66；F，5.59。NMR(CDCl3)δ4.19(2H，s)，7.02-7.07(2H，m)，7.26-7.34(3H，m)，7.45-7.48(1H，m)，7.80(1H，s)，7.86-7.91(1H，m)，8.12(1H，d，J＝7.8Hz)，8.72(1H，d，J＝4.5Hz)。化合物(I-51)m.p.97-100℃(重结晶用溶剂醋酸乙酯-异丙醚)。C17H12FN3O30.4H2O的分析值C，61.41；H，3.88；N，12.64；F，5.71。实测值C，61.76；H，3.58；N，12.21；F，5.84。NMR(d6-DMSO)δ4.28(2H，s)，7.15-7.21(3H，m)，7.36-7.40(2H，m)，7.64(1H，brs)，8.11(1H，brs)，8.98-9.02(2H，m)。对比实施例1下面介绍结构式A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B化合物对各种反转录病毒整合酶的抑制活性。
本发明化合物对HIV-1整合酶的抑制作用用下述分析测定。
(1)制备DNA溶液通过Amersham Pharmacia Biotech合成下面所示序列的底物DNA和目标DNA，将其溶解于KTE缓冲液(组成100mM KCl，1mMEDTA，10mM Tri-HCl(pH7.6))，浓度分别为2pmol/μL和5pmol/μL。加热后通过缓慢冷却使DNA溶液与各自的互补物退火。
(底物DNA)5’-生物素-ACC CTT TTA GTC AGT GTG GAA AAT CTC TAGCAG T-3’3’-GAA AAT CAG TCA CAC CTT TTA GAG ATC GTC A-5’(目标DNA)5’-TGA CCA AGG GCT AAT TCA CT-Dig-3’
3’-Dig-ACT GGT TCC CGA TTA AGT GA-5’(2)计算抑制百分率(受试化合物的IC50)将得自Vector Laboratories的链霉抗生物素蛋白溶解于0.1M碳酸缓冲液中(组成90mM Na2CO3，10mM NaHCO3)，浓度为40μg/mL。微量滴定板(获自NUNC)各孔用50μL上述溶液于4℃包被过夜后，用PBS(组成13.7mM NaCl，0.27mM KCl，0.43mMNa2HPO4，0.14mM KH2PO4)洗涤各孔2次，并用300μL 1％脱脂乳的PBS溶液封闭30分钟。此外，用PBS洗涤各孔2次，加入50μL底物DNA溶液(2pmol/μL)。将微量滴定板在室温下放置30分钟。然后用PBS洗涤各孔2次，用H2O洗涤1次。
接下来，在以上准备的各孔中加入45μL由12μL缓冲液(组成150mM MOPS(pH7.2)，75mM MnCl2，50mM 2-巯基乙醇，25％甘油，500μg/mL牛血清白蛋白-组分V)制备的反应缓冲液、1μL目标DNA(5pmol/μL)和32μL蒸馏水。另外，将6μL受试化合物DMSO溶液或阳性对照(PC)的DMSO溶液与上述反应缓冲液混合，然后加入9μL整合酶溶液(30pmol)，充分混合。在阴性对照(NC)孔中加入9μL整合酶稀释缓冲液(组成20mM MOPS(pH7.2)，400mM谷氨酸钾，1mM EDTA，0.1％NP-40，20％甘油，1mM DTT，4M尿素)。
将微量滴定板于30℃温育1小时。取出反应溶液，用PBS洗涤各孔2次。然后，在微量滴定板各孔中加入100μl碱性磷酸酶标记的抗地高辛配基抗体(绵羊Fab片段从Boehringer获得)，于30℃温育1小时。然后用0.05％Tween20的PBS洗涤2次，用PBS洗涤1次。然后在各孔中加入150μL碱性磷酸酶反应缓冲液(组成10mM对硝基苯基磷酸酯(从Vector Laboratories获得)，5mM MgCl2，100mMNaCl，100mM Tris-HCl(pH9.5))。微量滴定板于30℃温育2小时，加入50μl 1N NaOH溶液终止反应。检测各孔405nm的光密度(OD)，用以下表达式确定抑制百分率抑制百分率(％)＝100[1-{(C abs.-NC abs.)/(PC abs.-NC abs.)}]
C abs.化合物孔ODNC abs.阴性对照(NC)的ODPC abs.阳性对照(PC)的OD当浓度xμg/ml时的抑制百分率(％)为X％，浓度yμg/ml的抑制百分率(％)为Y％，其中之一大于50％，另一个低于50％时，用以下表达式确定IC50IC50(μg/ml)＝x-{(X-50)(x-y)/(X-Y)}IC50为50％抑制百分率时的化合物浓度，见下表1。表1化合物编号同以上实施例化合物号。
表1化合物编号IC50(μg/mL)I-3 0.40I-11 0.42I-12 0.43I-16 0.53I-17 1.6I-19 0.63I-20 0.32I-21 0.54I-22 0.59I-25 0.48I-29 1.0I-46 0.44I-47 0.35I-50 0.40I-51 0.48应用下述测定检测了本发明所述化合物和抗反转录病毒活性剂对HIV-1、HIV-2、SIVmac和SIVagm整合酶的抑制作用。
(1)用HIV-1 NL432(4×106cpm)、HIV-2 Rod(8×106cpm)、SIVmac MA239(8×106cpm)和SIVagm SA212(8×106cpm)感染Molt-4细胞(2×106细胞)，在室温下温育1小时。
制备病毒①制备HIV-1病毒使用25cm2培养瓶，用加有10％胎牛血清的DMEM培养基培养SW480细胞。HIV-1感染分子DNA(40μg)pNL432通过磷酸钙共沉淀法转染所述细胞，转染后2-3天的上清液(2ml)感染M8166细胞(1×106细胞)。在37℃二氧化碳培养箱中，用加有10％胎牛血清的10ml RPMI培养基培养细胞。观测到明显巨细胞后，离心去除细胞，然后通过0.45μm滤膜过滤上清液，检测RT活性，保藏于-80℃，用作HIV-1病毒母液。
②制备HIV-2病毒HIV-2 Rod感染M8166细胞(1×106细胞)。细胞在加有10％胎牛血清的10mL RPMI培养基中于37℃的CO2培养箱培养。观测到明显巨细胞后，离心去除细胞，然后通过0.45μm滤膜过滤上清液，检测RT活性，保藏于-80℃，用作HIV-2病毒母液。
③制备SIVmac病毒使用25cm2培养瓶，将SW480细胞在加有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养。SIV mac MA239感染分子DNA(40μg)pMA239通过磷酸钙共沉淀法转染所述细胞，转染后2-3天的上清液(2ml)感染CEMX174细胞(1×106细胞)。在37℃二氧化碳培养箱中，用加有10％胎牛血清的10ml RPMI培养基培养细胞。观测到明显巨细胞后，离心去除细胞，然后通过0.45μm滤膜过滤上清液，检测RT活性，保藏于-80℃，用作SIVmac病毒母液。
④制备SIVagm病毒使用25cm2培养瓶，将SW480细胞在加有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养。SIVagm SA212感染分子DNA(40μg)pSA212通过磷酸钙共沉淀法转染所述细胞，转染后2-3天的上清液(2ml)感染M8166细胞(1×106细胞)。在37℃二氧化碳培养箱中，用加有10％胎牛血清的10ml RPMI培养基培养细胞。每3天离心分离细胞与上清液，用新的培养基继续培养。通过0.45μm滤膜过滤上清液，检测RT活性，保藏于-80℃，用作SIVagm病毒母液。
(2)洗涤细胞2次以去除病毒，将其悬浮于10ml加有10％胎牛血清的RPMI培养基中。将感染细胞(100μl)加入含有系列5倍稀释化合物(100μl)的96孔微量滴定板中，在37℃的二氧化碳培养箱中进行培养。
(3)收获感染后5天的上清液，通过RT活性检测病毒量。
制备RT检测溶液反应混合物(90μL)与样品(10μl)混合后，包含50mM Tris-HCl，pH8.3，150mM KCl，10mM MgCl2，0.1％Nonidet P-40，10mM DTT(二硫苏糖醇)，5μg/mL poly(rA)，5μg/mL(dT)12-18和1μCi[3H]dTTP(终浓度)。
RT检测步骤1.10μL样品加入96孔微量滴定板3个孔(一式三份检测)。
2.将于4℃冷却的反应混合物(90μl)加入各孔中，于37℃混合并温育3小时。
3.温育后，使板在冰上冷却，使用细胞收获器通过DEAE-Filtermat收获细胞。用4.5％Na2HPO4(20秒)和H2O(10秒)洗涤滤膜。
4.于95℃干燥滤膜15分钟。
5.加入10ml闪烁剂并密封。
6.应用LKB Beta Plate闪烁光谱仪检测放射性。
7.根据3个孔的平均值计算RT活性(cpm/ml)。
(4)没有药物的RT活性计为100％病毒复制，根据各孔的RT活性确定样品的50％抑制浓度(EC50)，见表2。
表2结果EC50单位ng/mLHIV-1 NL432HIV-2 ROD SIVmac SIVagmI-16 57 35 57 44齐多夫定 0.51 0.280.35 0.36司他夫定 6.1 4.1 3.44.5拉米夫定 8.4 22 9.122如表2所示，化合物I-16、齐多夫定、司他夫定和拉米夫定对HIV-1、HIV-2、SIVmac和SIVagm具有抗病毒活性。因此，包含式(I)化合物的抗反转录病毒组合物不仅是HIV-1感染的有效药物，而且是HIV-2和SIV感染的有效药物。
应用下述测定检测了本发明所述化合物和抗反转录病毒活性剂对FIV整合酶的抑制作用。
(1)将5倍系列稀释的样品加入24孔微量滴定板中。每孔中加入猫T细胞系(MYA-1细胞4×105细胞/孔)和猫免疫缺陷病毒(FIVTM-2病毒株3000cpm/孔)。在37℃二氧化碳培养箱中，细胞用加有10％胎牛血清，2μg/mL聚凝胺，100单位/mL人重组IL-2和50μM2-巯基乙醇的1.5ml RPMI培养基培养。
①制备FIV TM-2病毒用FIV TM-2感染MYA-1细胞(1×106细胞)。在37℃二氧化碳培养箱中，细胞用加有10％胎牛血清，2μg/mL聚凝胺，100单位/ml人重组IL-2和50μM 2-巯基乙醇的10ml RPMI培养基培养。每1-2天离心分离细胞与上清液，用新的培养基继续培养。各上清液通过0.45μm滤膜过滤，检测RT活性，保藏于-80℃，用作SIVmac病毒母液。
(2)每1-2天应用RT活性检测上清液中的病毒量(同实验实施例2)。
(3)使用感染后10天的数据，没有药物的RT活性计为100％病毒复制，根据各孔的RT活性确定样品的50％抑制浓度(EC50)，见表3。
表3结果EC50单位ng/mL
如表3所示，化合物I-16不仅对HIV-1和SIV具有抗反转录病毒活性，而且对FIV具有抗反转录病毒活性。因此，包含式(I)化合物的抗反转录病毒组合物为FIV感染的有效药物。对比实施例2应用下述MTT检测法检测了各抗人类免疫缺陷病毒活性剂对人类免疫缺陷病毒的抑制作用。
(1)持续感染HIV的人类T细胞株Molt-4克隆8(HTLV-IIIB株)在添加10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养，过滤上清液，检测RT活性，保藏于-80℃。另一方面，各抗人类免疫缺陷病毒活性剂用培养基稀释为固定浓度，将其加入96孔微量滴定板中。然后向96孔微量滴定板中加入100μl(3.5×104细胞)MT-4细胞悬浮液，之后向96孔微量滴定板中加入50μl上述包含HIV的上清液(60pfu(噬菌斑形成单位))(用培养基稀释)。
(2)在二氧化碳培养箱中于37℃培养5天后，在所有孔中加入30μl/孔3-(4，5-二甲基噻唑-3-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)(5mg/mL)和PBS，然后温育1小时。
这时，活细胞还原MTT，甲沉淀，因此从全部孔中去除150μl上清液，加入150μl裂解液(含10％triton X-100和0.4％(v/v)盐酸的异丙醇)，在平板振摇器上洗提甲。用平板读数仪检测甲OD 560nm和690nm(参比波长)，与对照比较结果。EC50为抑制50％病毒引起的细胞损伤的化合物浓度。结果见表4。
表4对人类病毒的抑制活性抗人类病毒活性剂EC50(ng/mL)齐多夫定 1.8去羟肌苷 640扎西他滨 17拉米夫定 38司他夫定 50阿巴卡韦 630卡普韦林 1.4奈韦拉平 20洛韦胺 11地拉韦啶 12乙米韦林 4.5依法韦仑 0.58沙奎那韦 3.7茚地那韦 14利托那韦 26奈非那韦 10实验实施例受试样品(药物1和药物2)用培养基(包含10％FCS的RPMI 1640培养基)稀释，从而制得合适浓度的受试样品母液。将稀释药物1(50μl)加入96孔微量滴定板中。然后用移液管向其中加入稀释药物2(50μl)，总体积为100μl。细胞对照(CC)孔中加入100μl培养基，病毒对照(VC)孔中加入50μl培养基。制备同样稀释度的3块板，目的是检测协同效应(3个试验)。
用上述培养基将MT-4细胞(50μl)稀释至合适浓度(4×105/mL)，然后将其加入至含有上述测试样品的每个96孔微量滴定板中，用平板振荡器混合平板内容物，之后在二氧化碳培养箱中温育1小时。
用上述培养基将HIV-1(50μl)稀释至合适浓度(moi＝0.01)，然后将其加入至含有上述测试样品和MT-4细胞的每个96孔微量滴定板中，用平板振荡器混合平板内容物，之后在二氧化碳培养箱中培养5天。
5天后，在每个96孔微量滴定板中加入30μl MTT溶液(MTT用PBS溶解为5mg/ml，通过0.22μm滤膜过滤并除菌)，然后在二氧化碳培养箱中温育1小时。从每个孔中去除150μl上清液，而不去除细胞。在96孔微量滴定板中加入150μl裂解液(500ml 2-丙醇、50ml Triton X和2ml HCl适当混合制得)，然后用平板振荡器适当混合，直到全部细胞溶解为止。用微量滴定板读数仪检测96孔微量滴定板中的混合物在560nm和690nm两个波长的吸光度。对两种药物采用MacSynergy II soft Synergy Volume(μM2％，99.9％可信限)，检测协同效应。采用Synergy Volume检测协同效应的方法见①AntiviralResearch，14，(1990)，181-206，②Antimicrob.Agents，Chemother，(1997)，2165-2172等。
尤其优选协同效应100μM2％以上。
表5
ND未检测。
此外，例如化合物I-16与齐多夫定的协同作用曲线见图1。
工业实用性丙烯酮衍生物与抗反转录病毒活性剂组合通过每种药物对反转录病毒的协同作用而能够有效抑制反转录病毒复制增加。本发明含丙烯酮衍生物和抗反转录病毒活性剂的药用组合物是优异的抗反转录病毒组合物。
权利要求
1.一种抗反转录病毒组合物，其包含作为活性成分的式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂。
2.权利要求1所述的抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂与式(I)化合物或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物组合具有协同作用。
3.权利要求1或2所述的抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为整合酶抑制剂以外的活性剂。
4.权利要求1-3任一项所述的抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为核苷型反转录酶抑制剂、非核苷型反转录酶抑制剂和/或蛋白酶抑制剂。
5.权利要求1-4任一项所述的抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、替诺福韦、替诺福韦disoproxil、奈韦拉平、地拉韦啶、乙米韦林、洛韦胺、依法韦仑、曲韦定、卡普韦林、TIBO、他韦林、UC781、沙奎那韦、奈非那韦、利托那韦、茚地那韦、KNI-272、洛匹那韦、VX-478、VB-19026、BILA-2011-BS、A-77003、A-80987、DMP-323和/或XM-450。
6.权利要求1-5任一项所述的抗反转录病毒组合物，其中所述抗反转录病毒活性剂为齐多夫定、拉米夫定、司他夫定、奈韦拉平、卡普韦林和/或奈非那韦。
7.权利要求1-6任一项所述的抗反转录病毒组合物，其中式(I)化合物中的A为任选取代的呋喃基、任选取代的噻吩基或任选取代的吡啶基；式(I)化合物中的B为任选取代的三唑基、任选取代的四唑基、任选取代的吡啶基或任选取代的噁唑基。
8.权利要求1-7任一项所述的抗反转录病毒组合物，其中式I(I)化合物中的A为5-(4-氟苄基)呋喃-2-基；式I(I)化合物中的B为1H-1，2，4-三唑-3-基。
9.权利要求1-8任一项所述的抗反转录病毒组合物，其中反转录病毒为人类免疫缺陷病毒。
10.一种药用组合物，其包含的化合物具有促进抗反转录病毒活性剂的抗反转录病毒活性的活性，而且它为式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物。
11.一种治疗或预防反转录病毒感染的方法，该方法包括同时或连续给予式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂。
12.式(I)化合物A-C(＝O)-CH＝C(OH)-B，其中A为任选取代的杂芳基；B为任选取代的杂芳基或任选取代的芳基；前提是排除其中A和/或B为任选取代的吲哚-3-基的情况；或其互变异构体、前体药物、药学上可接受的盐或溶剂化物，以及一种或多种不同类型抗反转录病毒活性剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和预防反转录病毒感染。
全文摘要
本发明提供整合酶抑制剂与抗病毒活性剂的联合应用以及含作为活性成分的所述组合药物的药用组合物。
文档编号A61K31/513GK1446213SQ01813805
公开日2003年10月1日 申请日期2001年6月11日 优先权日2000年6月13日
发明者佐藤彰彦 申请人:盐野义制药株式会社