专利名称：新型双环核苷类似物的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及新型双环核苷类似物，它可用于制备具有优良的反义或反基因活性，且在体内稳定的非天然型寡核苷酸类似物。
另外，本发明涉及含有1或2个以上该双环核苷结构的新型寡核苷酸类似物。
进而，本发明涉及具有抗艾滋病(AIDS)活性的新型的改性双环核苷类似物。
但是，已知天然型寡核苷酸可被血液中和细胞内存在的各种核酸酶迅速降解掉。
为了克服这些缺点，制备了种种非天然型寡核苷酸类似物，并尝试将它们作为医药而进行开发。已知这些尝试有，例如将与寡核苷酸磷酸二酯键内的磷原子结合的氧原子置换为硫原子，将该氧原子置换为甲基，将该氧原子置换为硼原子，寡核苷酸的糖部分或碱基部分进行化学改性等。
更具体地说，ISIS公司开发了硫酯(thioate)型寡核苷酸ISIS2922，并作为人细胞肥大病毒性视网膜炎的治疗药，以VitraveneTM(商标名)在美国销售。
但是，考虑到上述非天然型寡核苷酸类似物的反义或反基因活性的强度，即与mRNA或DNA形成稳定的互补链的能力，对于各种核酸酶的稳定性，与体内各种蛋白质非特异性结合导致的副作用等，还需要一种具有优良的反义或反基因活性，在体内稳定的、且副作用的表现少的非天然型寡核苷酸类似物。
与本发明化合物有关的化学结构，即具有下述的二氧杂双环[2，2，1]庚烷结构的化合物，已在WO98/39352号中报道过，但该化合物因核糖的3’位取代基而与本发明化合物不同。并且，对于该化合物是否具有抗AIDS活性还不能够确定。 上述式中，B0为嘧啶或嘌呤核酸碱基或它们的类似物，X及Y相同或不同，为氢、烷基、链烯基、炔基、环烷基、芳烷基、芳基、酰基或甲硅烷基。
本发明的课题是提供新型的双环核苷类似物，它可用于制备具有优良的反义或反基因活性，且在体内稳定的非天然型寡核苷酸类似物。
其次，本发明的课题是提供含有1或2个以上该双环核苷结构的新型寡核苷酸类似物。
再者，本发明的课题是提供具有抗AIDS活性的新型寡核苷酸类似物。
本发明的发明人为了解决上述课题悉心研究的结果，发现具有2’-O、4’-C-亚甲基的新型双环核苷类似物是制备具有优良的反义或反基因活性、且在体内稳定的非天然型寡核苷酸类似物的重要中间体；其次，发现含有1或2个以上该双环核苷结构的新型寡核苷酸类似物具有优良的反义或反基因活性、且在体内稳定；再者，发现该双环核苷类似物具有优良的抗AIDS活性，进而完成了本发明。
本发明化合物中，优选的是，2)R1为氢原子、脂肪族酰基、芳香族酰基、甲硅烷基、用1～3个芳基取代的甲基、或用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基的化合物；3)R1为氢原子、甲硅烷基、用1～3个芳基取代的甲基、或用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基的化合物；4)R1为氢原子、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、苯甲基、三苯基甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基或4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基的化合物5)R2为叠氮基、氨基、或式NH-R3表示的基团(式中，R3为脂肪族酰基、芳香族酰基、用1～3个芳基取代的甲基、低级烷基、低级烷氧基、用芳环被卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基、甲硅烷基、氨基亚磷酸酯(phosphoroamidite)基、膦酰基、磷酸基或用核酸合成保护基保护的磷酸基)的化合物；6)R2为叠氮基、氨基、或式NH-R3表示的基团(式中，R3为乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、叔丁基二苯基甲硅烷基、式-P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)表示的基团、式-P(OCH3)(NCH(CH3)2)表示的基团、膦酰基、或2-氯苯基或4-氯苯基磷酸基)的化合物；7)R2为叠氮基或氨基的化合物；8)B为6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基(即鸟嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巯基嘌呤-9-基、巯基被核酸合成保护基保护的6-巯基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氢嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-巯基-1，2-二氢嘧啶-1-基、巯基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-巯基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2，4-二羟基嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2，4-二羟基-5-甲基嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基或氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基的化合物；9)B为6-苯甲酰基氨基嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-苯甲酰基氨基-6-羟基嘌呤-9-基、鸟嘌呤基、2-氧代-4-苯甲酰基氨基-1，2-二羟基嘧啶-1-基、胞嘧啶基、尿嘧啶基、胸腺嘧啶基的化合物；也优选R1选自上述2)或4)、R2选自上述5)至7)、B选自上述8)至9)而得到的任意的组合，特别优选2)、5)及8)的组合、3)、6)及8)的组合及4)、6)及9)的组合。
本发明的新型寡核苷酸类似物为，1)含有1或2个以上通式(1a)表示的结构的寡核苷酸类似物或其可药用盐。 [式中，B为可以具有选自下述α组的取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基]但是，含有2个以上上述结构时，该结构之间的B相同或不同。(α组)羟基、用核酸合成保护基保护的羟基、碳原子数1～6个的烷氧基、巯基、用核酸合成保护基保护的巯基、碳原子数1～6个的烷基硫基、氨基、用核酸合成保护基保护的氨基、用碳原子数1～6个的烷基取代的氨基、碳原子数1～6个的烷基、及卤素原子。
在此，“寡核苷酸类似物”是指天然型的寡核苷酸中核苷单位被1或2个以上上述结构(1a)取代的非天然型的化合物，这种类似物中，例如也可以含有糖部分被改性的糖衍生物、磷酸二酯键部分被硫酯化的硫酯衍生物、末端的磷酸部分被酯化的酯化物、嘌呤碱基上的氨基被酰胺化的酰胺化物作为其他核苷或核苷酸单位。
本发明的新型寡核苷酸类似物中，优选的是，2)B为6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基(即鸟嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基、氨基及羟基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巯基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-巯基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-羟基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2-氧代-4-羟基-5-甲基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基(即5-甲基胞嘧啶基)或氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基的寡核苷酸类似物或其可药用盐；3)B为6-苯甲酰基氨基嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-异丁酰基氨基-6-羟基嘌呤-9-基、鸟嘌呤基、2-氧代-4-苯甲酰基氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、胞嘧啶基、2-氧代-5-甲基-4-苯甲酰基氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸腺嘧啶基的寡核苷酸类似物或其可药用盐。
上述R1的定义中“羟基的核酸合成保护基”只要在核酸合成时可稳定地保护羟基，就没有特殊的限定，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊醛基、三甲基乙酰基、戊酰基、异戊酰基、辛酰基、癸酰基、8-甲基壬酰基、3-乙基辛酰基、3，7-二甲基辛酰基、十一烷酰基、十三烷酰基、十六烷酰基、14-甲基十五烷酰基、13，13-二甲基十四烷酰基、1-甲基十七烷酰基、十九烷酰基、二十烷酰基及二十一烷酰基等烷基羰基，琥珀酰基、戊二酰基、己二酰基等羧基化烷基羰基，氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基等卤代低级烷基羰基，甲氧基乙酰基等低级烷氧基低级烷基羰基，(E)-2-甲基-2-丁烯酰基等不饱和烷基羰基等“脂肪族酰基”；苯甲酰基、α-萘甲酰基、β-萘甲酰基等芳基羰基，2-溴苯甲酰基、4-氯苯甲酰基等卤代芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲酰基、4-甲苯酰基等低级烷基化芳基羰基，4-茴香酰基等低级烷氧基化芳基羰基，2-羧基苯甲酰基、3-羧基苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基等羧基化芳基羰基，4-硝基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基等硝基化芳基羰基，2-(甲氧基羰基)苯甲酰基等低级烷氧基羰基化芳基羰基、4-苯基苯甲酰基等芳基化芳基羰基等“芳香族酰基”；四氢吡喃-2-基、3-溴四氢吡喃-2-基、4-甲氧基四氢吡喃-4-基、四氢噻喃-2-基、4-甲氧基四氢噻喃-4-基等“四氢吡喃基或四氢噻喃基”；四氢呋喃-2-基、四氢噻吩-2-基等“四氢呋喃基或四氢噻吩基”；三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、异丙基二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲基二异丙基甲硅烷基、甲基二叔丁基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基等三低级烷基甲硅烷基，二苯基甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、二苯基异丙基甲硅烷基、苯基二异丙基甲硅烷基等被1～2个芳基取代的三低级烷基甲硅烷基等“甲硅烷基”；甲氧基甲基、1，1-二甲基-1-甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、异丙氧基甲基、丁氧基甲基、叔丁氧基甲基等“低级烷氧基甲基”；2-甲氧基乙氧基甲基等“低级烷氧基化低级烷氧基甲基”；2，2，2-三氯乙氧基甲基、二(2-氯乙氧基)甲基等“卤代低级烷氧基甲基”；1-乙氧基乙基、1-(异丙氧基)乙基等“低级烷氧基化乙基”；2，2，2-三氯乙基等“卤化乙基”；苯甲基、α-萘基甲基、β-萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、9-蒽基甲基等“被1～3个芳基取代的甲基”；4-甲基苯甲基、2，4，6-三甲基苯甲基、3，4，5-三甲基苯甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基、2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、4-氯苯甲基、4-溴苯甲基、4-氰基苯甲基等“用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基”；甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、异丁氧基羰基等“低级烷氧基羰基”；2，2，2-三氯乙氧基羰基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基等“被卤素或三低级烷基甲硅烷基取代的低级烷氧基羰基”；乙烯氧基羰基、丙烯氧基羰基等“链烯氧基羰基”；苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、3，4-二甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、4-硝基苯甲氧基羰基等“芳环可以被1～2个低级烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”。
优选脂肪族酰基、芳香族酰基、被1～3个芳基取代的甲基、用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基、或甲硅烷基，更优选乙酰基、苯甲酰基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、二甲氧基三苯甲基、单甲氧基三苯甲基或叔丁基二苯基甲硅烷基。
上述R1及R3的定义中“用核酸合成保护基保护的磷酸基”的核酸合成保护基只要在核酸合成时可稳定地保护磷酸基，就没有特殊的限定，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正已基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基等“低级烷基”；2-氰基乙基、2-氰基-1，1-二甲基乙基等“氰基化低级烷基”；2-甲基二苯基甲硅烷基乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-三苯基甲硅烷基乙基等“被甲硅烷基取代的乙基”；2，2，2-三氯乙基、2，2，2-三溴乙基、2，2，2-三氟乙基、2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基等“卤化低级烷基”；乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-乙基-2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、1-甲基-1-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-乙基-2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-乙基-3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、2-甲基-2-戊烯基、3-戊烯基、1-甲基-3-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、2-甲基-4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基等“低级链烯基”；环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片基、金刚烷基等“环烷基”；2-氰基丁烯基等“氰基低级链烯基”；苯甲基、α-萘基甲基、β-萘基甲基、茚基甲基、菲基甲基、蒽基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、1-苯乙基、2-苯乙基、1-萘基乙基、2-萘基乙基、1-苯基丙基、2-苯基丙基、3-苯基丙基、1-萘基丙基、2-萘基丙基、3-萘基丙基、1-苯基丁基、2-苯基丁基、3-苯基丁基、4-苯基丁基、1-萘基丁基、2-萘基丁基、3-萘基丁基、4-萘基丁基、1-苯基戊基、2-苯基戊基、3-苯基戊基、4-苯基戊基、5-苯基戊基、1-萘基戊基、2-萘基戊基、3-萘基戊基、4-萘基戊基、5-萘基戊基、1-苯基己基、2-苯基己基、3-苯基己基、4-苯基己基、5-苯基己基、6-苯基己基、1-萘基己基、2-萘基己基、3-萘基己基、4-萘基己基、5-萘基己基、6-萘基己基等“芳烷基”；4-氯苯甲基、2-(4-硝基苯基)乙基、邻硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、2，4-二硝基苯甲基、4-氯-2-硝基苯甲基等“芳环被硝基、卤素原子取代的芳烷基”；苯基、茚基、萘基、菲基、蒽基等“芳基”；2-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、2，5二氯苯基、2-溴苯基、4-硝基苯基、4-氯-2-硝基苯基等“被低级烷基、卤素原子、硝基取代的芳基”。
优选“低级烷基”、“被氰基取代的低级烷基”、“芳烷基”、“芳环被硝基、卤素原子取代的芳烷基”或“被低级烷基、卤素原子、硝基取代的芳基”，更优选2-氰基乙基、2，2，2-三氯乙基、苯甲基、2-氯苯基或4-氯苯基。
上述α组的定义中“碳原子数1～6个的烷基”，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等碳原子数1～6个的直链或支链烷基，优选碳原子数1～4个的烷基，更优选碳原子数1～2个的烷基，最优选甲基。
上述R2的定义中“氨基的核酸合成保护基”只要在核酸合成时可稳定地保护氨基，就没有特殊的限定，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊醛基、三甲基乙酰基、戊酰基、异戊酰基、辛酰基、癸酰基、8-甲基壬酰基、3-乙基辛酰基、3，7-二甲基辛酰基、十一烷酰基、十三烷酰基、十六烷酰基、14-甲基十五烷酰基、13，13-二甲基十四烷酰基、1-甲基十七烷酰基、十九烷酰基、二十烷酰基及二十一烷酰基等烷基羰基，琥珀酰基、戊二酰基、己二酰基等羧基化烷基羰基，氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基等卤代低级烷基羰基，甲氧基乙酰基等低级烷氧基低级烷基羰基，(E)-2-甲基-2-丁烯酰基等不饱和烷基羰基等“脂肪族酰基”；苯甲酰基、α-萘甲酰基、β-萘甲酰基等芳基羰基，2-溴苯甲酰基、4-氯苯甲酰基等卤代芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲酰基、4-甲苯酰基等低级烷基化芳基羰基，4-茴香酰基等低级烷氧基化芳基羰基，2-羧基苯甲酰基、3-羧基苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基等羧基化芳基羰基，4-硝基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基等硝基化芳基羰基，2-(甲氧基羰基)苯甲酰基等低级烷氧基羰基化芳基羰基、4-苯基苯甲酰基等芳基化芳基羰基等“芳香族酰基”；甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、异丁氧基羰基等“低级烷氧基羰基”；2，2，2-三氯乙氧基羰基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基等“被卤素或三低级烷基甲硅烷基取代的低级烷氧基羰基”；乙烯氧基羰基、丙烯氧基羰基等“链烯氧基羰基”；苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、3，4-二甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、4-硝基苯甲氧基羰基等“芳环可以被1～2个低级烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”，优选“脂肪族酰基”、“芳香族酰基”或“芳环可以被1～2个低级烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”，更优选“脂肪族酰基”或“芳环可以被1～2个低级烷氧基或硝基取代的芳烷氧基羰基”，特别优选三氟乙酰基或苯甲氧基羰基。
上述“氨基亚磷酸酯(phosphoroamidite)基”为式-P(OR3a)(NR3b)表示的基团(式中，R3a为碳原子数1～6个的烷基或碳原子1～7个的氰基烷基，R3b为碳原子数1～6个的烷基)，优选式-P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)表示的基团或式-P(OCH3)(NCH(CH3)2)表示的基团。
上述α组的定义中“卤素原子”，例如氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，优选氟原子或氯原子。
上述R4a、R4b及α组的定义中“碳原子数1～6个的烷基”，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等碳原子数1～6个的直链或支链烷基，优选甲基或乙基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“被核酸合成保护基保护的羟基”的核酸合成保护基，例如与上述R1的定义中“羟基的核酸合成保护基”所示的基团相同的基团，优选“脂肪族酰基”或“芳香族酰基”，更优选苯甲酰基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“被核酸合成保护基保护的巯基”的核酸合成保护基，例如除了上述R1的定义中“羟基的核酸合成保护基”所示的基团，还有甲基硫基、乙基硫基、叔丁基硫基等烷基硫基，苯甲基硫基等芳基硫基等“形成二硫化物的基团”，优选“脂肪族酰基”或“芳香族酰基”，更优选苯甲酰基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“被核酸合成保护基保护的氨基”的核酸合成保护基，例如与上述R2的定义中“氨基的核酸合成保护基”所示的基团相同的基团，优选“脂肪族酰基”或“芳香族酰基”，更优选苯甲酰基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“碳原子数1～6个的烷氧基”，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等碳原子1～6个的直链或支链烷氧基，优选甲氧基或乙氧基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“碳原子数1～6个的烷基硫基”，例如甲基硫基、乙基硫基、丙基硫基、异丙基硫基、丁基硫基、异丁基硫基、仲丁基硫基、叔丁基硫基、戊基硫基、己基硫基，优选甲基硫基或乙基硫基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“被碳原子数1～6个的烷基取代的烷基氨基”，例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、丁基氨基、异丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、己基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二异丙基氨基、二丁基氨基、二异丁基氨基、二仲丁基氨基、二叔丁基氨基、二戊基氨基、二己基氨基，优选甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基或二乙基氨基。
上述R4a、R4b及α组的定义中“碳原子数1～7个的氰基烷氧基”，例如氰基甲氧基、氰基乙氧基、氰基丙氧基、氰基丁氧基、氰基戊氧基、氰基己氧基，优选2-氰基乙氧基。
本发明的核苷类似物(1)及含有上述结构(1a)的寡核苷酸类似物可形成盐，上述“其可药用盐”是指它们的盐，作为这种盐，优选钠盐、钾盐、锂盐等碱金属盐，钙盐、镁盐等碱土金属盐，铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐等金属盐，铵盐等无机盐，叔辛基胺盐、二苯甲基胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、二环己基胺盐、N，N’-二苯甲基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苯甲基-苯乙基胺盐、哌嗪盐、四甲基铵盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐等有机盐等胺盐，氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐等氢卤酸盐，硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等无机酸盐，甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐等低级烷基磺酸盐，苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等芳基磺酸盐，乙酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等有机酸盐，及甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等氨基酸盐，含有核苷结构(1a)的寡核苷酸类似物优选钠盐及三乙基胺盐，核苷类似物(1)优选游离体。
将本发明的核苷类似物(1)及含有上述结构(1a)的寡核苷酸类似物放置在大气中时，可吸收水分，附着吸附水，进而形成水合物，这种盐也包括在本发明中。
本发明的核苷类似物(1)及含有上述结构(1a)的寡核苷酸类似物也可吸收其他种类的溶剂，形成溶剂合物，这种盐也包括在本发明中。
作为本发明化合物(1)的具体例子，例如下述表1及表2所示的化合物。
表1及表2中，[Bn]表示苯甲基，[Bz]表示苯甲酰基，[Me]表示甲基，[PMBn]表示对甲氧基苯甲基，[MMTr]表示4-甲氧基三苯基甲基，[DMTr]表示4，4’-二甲氧基三苯基甲基，[TMTr]表示4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基，[TMS]表示三甲基甲硅烷基，[TBDMS]表示叔丁基二甲基甲硅烷基，[TBDPS]表示叔丁基二苯基甲硅烷基。
(表1) 示例化合物序号R1R2RaRb1-1 H NH2H H1-2 H NH2H OH1-3 H NH2H SH1-4 H NH2H NH21-5 H NH2H OMe1-6 H NH2F H1-7 H NH2F NH21-8 H NH2Cl H1-9 H NH2Cl NH21-10H NH2Cl Cl1-11H NH2Br H1-12H NH2Br NH21-13H NH2OH H1-14H NH2OH OH1-15H NH2OH NH21-16H NH2OMeOMe1-17H NH2OMeNH21-18H NH2NH2H1-19 H NH2NH2F1-20 H NH2NH2Cl1-21 H NH2NH2Br1-22 H NH2NH2OH1-23 H NH2NH2NH21-24 H NH2NH2OMe1-25 H N3HH1-26 H N3HOH1-27 H N3HSH1-28 H N3HNH21-29 H N3HOMe1-30 H N3FH1-31 H N3FNH21-32 H N3Cl H1-33 H N3Cl NH21-34 H N3Cl Cl1-35 H N3Br H1-36 H N3Br NH21-37 H N3OH H1-38 H N3OH OH1-39 H N3OH NH21-40 H N3OMe OMe1-41 H N3OMe NH21-42 H N3NH2H1-43 H N3NH2F1-44 H N3NH2Cl1-45 H N3NH2Br1-46 H N3NH2OH1-47 H N3NH2NH21-48 HN3NH2OMe1-49 HN3H NHBz1-50 HNH2H NHBz1-51 HN3ClNHBz1-52 HN3OHNHBz1-53 HN3OMe NHBz1-54 HN3NHBz H1-55 HN3NHBz Cl1-56 HN3NHBz OH1-57 HNH2NHBz OH1-58 HN3NHBz NHBz1-59 HN3NHBz OMe1-60 Bn N3H NHBz1-61 Bn N3NHCOCH(CH3)2OH1-62 PMBn N3H NHBz1-63 PMBn N3NHCOCH(CH3)2OH1-64 MMTr N3H NHBz1-65 MMTr N3NHCOCH(CH3)2OH1-66 DMTr N3H NHBz1-67 DMTr N3NHCOCH(CH3)2OH1-68 TMTr N3H NHBz1-69 TMTr N3NHCOCH(CH3)2OH1-70 TMS N3H NHBz1-71 TMS N3NHCOCH(CH3)2OH1-72 TBDMSN3H NHBz1-73 TBDMSN3NHCOCH(CH3)2OH1-74 TBDPSN3H NHBz1-75 TBDPSN3NHBz OH1-76 Bn NH2H NHBz1-77Bn NH2NHCOCH(CH3)2OH1-78PMBn NH2HNHBz1-79PMBn NH2NHCOCH(CH3)2OH1-80MMTr NH2HNHBz1-81MMTr NH2NHCOCH(CH3)2OH1-82DMTr NH2HNHBz1-83DMTr NH2NHCOCH(CH3)2OH1-84TMTr NH2HNHBz1-85TMTr NH2NHCOCH(CH3)2OH1-86TMS NH2HNHBz1-87TMS NH2NHCOCH(CH3)2OH1-88TBDMSNH2HNHBz1-89TBDMSNH2NHCOCH(CH3)2OH1-90TBDPSNH2HNHBz1-91TBDPSNH2NHCOCH(CH3)2OH(表2) 示例化合物序号 R1R2R5R62-1 HNH2H H2-2 HNH2Cl H2-3 HNH2OH H2-4 HNH2OH Me2-5 HNH2SH H2-6 HNH2NH2H2-7 HNH2NH2F2-8 HNH2NH2Cl2-9 HNH2NH2Me2-10 HNH2OMe H2-11 HN3H H2-12 HN3Cl H2-13 HN3OH H2-14 HN3OH Me2-15 HN3SH H2-16 HN3NH2H2-17 HN3NH2F2-18 HN3NH2Cl2-19 HN3NH2Me2-20 HN3OMe H2-21 HN3NHBzH2-22 HNH2NHBzH2-23 HN3NHBzF2-24 HN3NHBzCl2-25 HN3NHBzMe2-26 Bn N3OH H2-27 Bn N3OH Me2-28 Bn N3NHBzH2-29 PMBn N3OH H2-30 PMBn N3OH Me2-31 PMBn N3NHBzH2-32 MMTr N3OH H2-33 MMTr N3OH Me2-34 MMTr N3NHBzH2-35 DMTr N3OH H2-36 DMTr N3OH Me2-37 DMTr N3NHBzH2-38 TMTr N3OH H2-39 TMTr N3OH Me2-40 TMTr N3NHBzH2-41 TMSN3OH H2-42 TMSN3OH Me2-43 TMSN3NHBzH2-44 TBDMS N3OH H2-45 TBDMS N3OH Me2-46 TBDMS N3NHBzH2-47 TBDPS N3OH H2-48 TBDPS N3OH Me2-49 TBDPS N3NHBzH2-50 Bn NH2OH H2-51 Bn NH2OH Me2-52 Bn NH2NHBzH2-53 PMBn NH2OH H2-54 PMBn NH2OH Me2-55 PMBn NH2NHBzH2-56 MMTr NH2OH H2-57 MMTr NH2OH Me2-58 MMTr NH2NHBzH2-59 DMTr NH2OH H
2-60 DMTr NH2OH Me2-61 DMTr NH2NHBz H2-62 TMTr NH2OH H2-63 TMTr NH2OH Me2-64 TMTr NH2NHBz H2-65 TMS NH2OH H2-66 TMS NH2OH Me2-67 TMS NH2NHBz H2-68 TBDMS NH2OH H2-69 TBDMS NH2OH Me2-70 TBDMS NH2NHBz H2-71 TBDPS NH2OH H2-72 TBDPS NH2OH Me2-73 TBDPS NH2NHBz H上述表中，优选的化合物为化合物序号1-3、1-4、1-7、1-9、1-10、1-16、1-17、1-19、1-20、1-21、1-22、1-23、1-27、1-28、1-31、1-33、1-34、1-40、1-41、1-43、1-44、1-45、1-46、1-47、1-49、1-50、1-56、1-57、1-82、1-83、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8、2-9、2-10、2-13、2-14、2-15、2-16、2-17、2-18、2-19、2-20、2-21、2-22、2-48、2-59、2-60、及2-61的化合物，更优选的化合物为化合物序号1-4、1-22、1-28、1-46、1-49、1-50、1-56、1-57、1-82、1-83、2-3、2-4、2-6、2-13、2-14、2-16、2-21、2-22、2-48、2-59、2-60、及2-61的化合物，最优选的化合物为，化合物序号2-43’-氨基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、化合物序号2-143’-叠氮基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、
化合物序号2-363’-叠氮基-3’-脱氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、化合物序号2-483’-叠氮基-5’-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、及化合物序号2-603’-氨基-3’-脱氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷。
本发明化合物(1)可按照以下所述的A方法来制备。 上述步骤表中，R1、R2及B与上述意义相同。
R7为羟基的保护基，优选苯甲酰基、α-萘甲酰基、β-萘甲酰基等芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲酰基、4-甲苯酰基等低级烷基化芳基羰基，4-苯基苯甲酰基等芳基化芳基羰基等“芳香族酰基”，更优选苯甲酰基。
R8为羟基的保护基，优选三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、异丙基二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲基二异丙基甲硅烷基、甲基二叔丁基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基等低级烷基甲硅烷基，二苯基甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、二苯基异丙基甲硅烷基、苯基二异丙基甲硅烷基等被1～2个芳基取代的三低级烷基甲硅烷基等“甲硅烷基”；苯甲基、α-萘基甲基、β-萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、9-蒽基甲基等“被1～3个芳基取代的甲基”；4-甲基苯甲基、2，4，6-三甲基苯甲基、3，4，5-三甲基苯甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基、4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基、2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、4-氯苯甲基、4-溴苯甲基、4-氰基苯甲基等“用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素、氰基取代的1～3个芳基取代的甲基”，更优选三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、苯甲基、三苯基甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基或4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基。
R9为脱去基，优选甲磺酰基、乙磺酰基等低级烷基磺酰基，三氟甲磺酰基等卤素取代低级烷基磺酰基，对甲苯磺酰基等芳基磺酰基，更优选甲磺酰基或对甲苯磺酰基。
R10为羟基保护基，优选甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊醛基、三甲基乙酰基、戊酰基、异戊酰基、辛酰基、癸酰基、1-甲基十七烷酰基、十九烷酰基、二十烷酰基及二十一烷酰基等烷基羰基，琥珀酰基、戊二酰基、己二酰基等羧基化烷基羰基，氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基等卤代低级烷基羰基，甲氧基乙酰基等低级烷氧基低级烷基羰基，(E)-2-甲基-2-丁烯酰基等不饱和烷基羰基等“脂肪族酰基”；苯甲酰基、α-萘甲酰基、β-萘甲酰基等芳基羰基，2-溴苯甲酰基、4-氯苯甲酰基等卤代芳基羰基，2，4，6-三甲基苯甲酰基、4-甲苯酰基等低级烷基化芳基羰基，4-茴香酰基等低级烷氧基化芳基羰基，2-羧基苯甲酰基、3-羧基苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基等羧基化芳基羰基，4-硝基苯甲酰基、2-硝基苯甲酰基等硝基化芳基羰基，2-(甲氧基羰基)苯甲酰基等低级烷氧基羰基化芳基羰基、4-苯基苯甲酰基等芳基化芳基羰基等“芳香族酰基”，更优选“脂肪族酰基”，特别优选乙酰基。
B1为可以具有1个以上选自下述α1组的任一取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基。(α1组)羟基、用核酸合成保护基保护的羟基、碳原子数1～6个的烷氧基、巯基、用核酸合成保护基保护的巯基、碳原子数1～6个的烷基硫基、用核酸合成保护基保护的氨基、用碳原子数1～6个的烷基取代的氨基、碳原子数1～6个的烷基、及卤素原子。
A方法是以化合物(2)为起始原料，导入取代基B后进行环化，得到目的化合物(1a)、(1b)及(1c)的方法。
这里，原料化合物(2)可以市售的二丙酮-D-葡萄糖为起始原料，按照文献(O.T.Schmidt，Methods in Carbohydr.Chem.，4，318(1964)；J.S.Brimacombe and O.A.Ching，Ca rbhyd.Res.，8，82(1968)；T.F.Tam and B.Fraser-Reid，Can.J.Chem.，57，2818(1979)；S.A.Suzhkov，Nucleosides & Nucleotides，13，2283(1994))的方法来制备。
以下，对于A方法的各步骤进行详细说明。<A方法>(A-1步骤)本步骤是在惰性溶剂中，碱存在的条件下，脱去原料化合物(2)的一级羟基的保护基，制备化合物(3)的步骤。
使用的溶剂只要是通常水解反应中使用的溶剂，就没有特殊的限定，例如水，甲醇、乙醇、正丙醇等醇类，四氢呋喃、二噁烷等醚类等有机溶剂或水和上述有机溶剂的混合溶剂，优选醇类。
使用的碱只要不影响到化合物的其他部分，就没有特殊的限定，优选甲醇钠等金属醇化物类，碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂等碱金属碳酸盐，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钡等碱金属氢氧化物或氨水、浓氨-甲醇等氨类，优选碱金属碳酸盐。
反应温度及反应时间根据起始物质、溶剂及使用的碱而不同，没有特殊的限定，但为了抑制副反应，通常为0℃～15℃，反应1～10小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(3)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过中和反应液，浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物根据需要，可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(A-2步骤)本步骤是在惰性溶剂中，碱存在的条件下，将A-1步骤得到的化合物(3)与羟基的保护化剂反应，制备化合物(4)的步骤。
使用的溶剂只要不防碍反应，并在一定程度上溶解起始物质，就没有特殊的限定，例如己烷、庚烷等脂肪族烃类，苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯等卤代烃类，甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、碳酸二乙酯等酯类，乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚等醚类，乙腈、异丁腈等腈类，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺类，优选二氯甲烷。
使用的碱只要是通常的反应中使用的碱，就没有特殊的限定，例如N-甲基吗啉、三乙基胺、三丁基胺、二异丙基乙基胺、二环己基胺、N-甲基哌啶、吡啶、4-吡咯并吡啶、甲基吡啶、4-(N，N-二甲基氨基)吡啶、2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶、喹啉、N，N-二甲基苯胺、N，N-二乙基苯胺等有机碱类，优选三乙基胺。作为使用的保护化剂，例如叔丁基二甲基甲硅烷基氯、三甲基甲硅烷基氯、三乙基甲硅烷基氯、三乙基甲硅烷基溴、三异丙基甲硅烷基氯、二甲基异丙基甲硅烷基氯、二乙基异丙基甲硅烷基氯、叔丁基二苯基甲硅烷基氯、二苯基甲基甲硅烷基氯、三苯基甲硅烷基氯等甲硅烷基卤化物类，4-甲氧基三苯基甲基氯、4，4’-二甲氧基三苯基甲基氯、4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基氯等三苯甲基卤化物类，苯甲基氯、苯甲基溴、对甲氧基苯甲基溴等芳烷基卤化物类，优选叔丁基二苯基甲硅烷基氯。
反应温度通常为-20℃至使用溶剂的回流温度，优选0℃至使用溶剂的回流温度。
反应时间主要根据反应温度、原料化合物、使用的碱或使用的溶剂的种类而不同，通常为10分钟至3天，优选1小时至24小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(4)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过中和反应液，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时，尤其是生成所不希望的羟基上导入R8的化合物时，可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(A-3步骤)本步骤是在惰性溶剂中，碱催化剂存在的条件下，将A-2步骤得到的化合物(4)与脱去基导入试剂反应，制备化合物(5)的步骤。
作为使用的溶剂，例如己烷、庚烷、轻石油、石油醚等脂肪族烃类，苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯等卤代烃类，甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、碳酸二乙酯等酯类，乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚等醚类，丙酮、丁酮、甲基异丁基酮、异佛尔酮、环己酮等酮类，硝基乙烷、硝基苯等硝基化合物类，乙腈、异丁腈等腈类，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺类，环丁砜等亚砜类，吡啶类，优选二氯甲烷。
作为使用的碱催化剂，优选三乙基胺、吡啶、三甲基氨基吡啶等碱。
作为使用的脱去基导入试剂，例如甲磺酰氯、乙磺酰溴等烷基磺酰卤化物类，对甲苯磺酰氯等芳基磺酰卤化物类，优选甲磺酰氯及对甲苯磺酰氯。
反应温度根据使用的原料化合物、溶剂、脱去基导入试剂、碱催化剂而不同，通常为0℃～50℃，优选10℃～40℃。
反应时间根据使用的原料化合物、溶剂、脱去基导入试剂、碱催化剂、反应温度而不同，通常为10分钟至24小时，优选1小时至15小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(5)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过中和反应液，浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(A-4步骤)本步骤是在溶剂中，酸催化剂存在的条件下，将A-3步骤得到的化合物(5)与酸酐反应，制备化合物(6)的步骤。
作为使用的溶剂，例如乙醚、二噁烷、四氢呋喃等醚类，乙腈、异丁腈等腈类，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺类，乙酸等有机酸类，优选乙酸。
作为使用的酸催化剂，例如盐酸、硫酸、硝酸等无机酸，但优选硫酸(特别是浓硫酸)。
作为使用的酸酐，例如乙酸酐、丙酸酐等低级脂肪族羧酸酐，优选乙酸酐。
反应温度根据使用的原料化合物、溶剂、酸催化剂、酸酐而不同，通常为0℃～50℃，优选10℃～40℃。
反应时间根据使用的原料化合物、溶剂、酸催化剂、酸酐、反应温度而不同，通常为10分钟至12小时，优选30分钟至6小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(6)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(A-5步骤)本步骤是在惰性溶剂中，酸催化剂存在的条件下，将A-4步骤得到的化合物(6)与按文献(H.Vorbrueggen，K.Krolikiewicz andB.Bennua，Chem.Bet.，114，1234-1255(1981))配制的、对应于可以具有所希望的取代基的嘌呤或嘧啶的三甲基甲硅烷基化物反应，制备化合物(7)的步骤。
作为使用的溶剂，例如苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，2-二氯乙烷、氯苯、二氯苯等卤代烃类，乙腈、异丁腈等腈类，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺类，硫化碳等，优选1，2-二氯乙烷。
作为使用的酸催化剂，例如AlCl3、SnCl4、TiCl4、ZnCl2、BF3、三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯等路易斯酸催化剂，优选四氯化锡(SnCl4)。
反应温度根据使用的原料化合物、溶剂、酸催化剂而不同，通常为0℃～100℃，优选30℃～80℃。
反应时间根据使用的原料化合物、溶剂、酸催化剂、反应温度而不同，通常为1小时至3天，优选1小时至2天。
反应结束后，本反应的目的化合物(7)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过中和反应液，加入乙酸乙酯或二氯甲烷等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(A-6步骤)本步骤是在惰性溶剂中，碱催化剂存在的条件下，将A-5步骤得到的化合物(7)环化，制备化合物(1a)的步骤。
作为使用的溶剂只要不妨碍反应，并可在一定程度溶解起始物质，就没有特殊的限定，优选甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、异戊醇、二甘醇、甘油、辛醇、环己醇、甲基溶纤素等醇类，更优选甲醇。
作为使用的碱催化剂，例如氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物，碳酸钠、碳酸钾等碱金属碳酸盐，甲醇钠、乙醇钠等碱金属醇化物，氨水等，优选碱金属碳酸盐，更优选碳酸钾。
反应温度根据使用的原料化合物、溶剂、碱催化剂而不同，通常为0℃～50℃，优选10℃～30℃。
反应时间根据使用的原料化合物、溶剂、碱催化剂、反应温度而不同，通常为1小时至3天，优选3小时至2天。
反应结束后，本反应的目的化合物(1a)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(A-7步骤)本步骤是在惰性溶剂中，将A-6步骤得到的化合物(1a)与脱保护试剂反应，制备化合物(1b)的步骤。但是，不需要脱保护时，就无需进行本步骤而直接进行下一步骤。
脱保护的方法根据保护基的种类而不同，只要不引起其他副反应，就没有特殊的限定，例如按照“Protective Groups in OrganicSynthesis(有机合成中的保护基)”(Theodora W.Greene著，1981年、A Wiley-Interscience Publication发行)所述的方法来进行。
存在多个不同种类的保护基时，可将这些方法适宜组合，依次进行脱保护。
尤其是保护基为(1)“脂肪族酰基或芳香族酰基”、(2)“被1～3个芳基取代的甲基”或“用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素、氰基取代的1～3个芳基取代的甲基”、(3)“甲硅烷基”时，可按以下所述的方法进行。(1)保护基为脂肪族酰基或芳香族酰基时，通常在惰性溶剂中，与碱进行反应。
使用的溶剂只要是通常水解反应中使用的溶剂，就没有特殊的限定，例如水，甲醇、乙醇、正丙醇等醇类，四氢呋喃、二噁烷等醚类等有机溶剂或水与上述有机溶剂的混合溶剂，优选醇类。
使用的碱只要不影响到化合物的其他部分，就没有特殊的限定，优选甲醇钠等碱金属醇化物类，碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂等碱金属碳酸盐，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钡等碱金属氢氧化物或氨水，浓氨-甲醇等氨类，优选碱金属碳酸盐。
反应温度及反应时间根据起始物质、溶剂及使用的碱等而不同，没有特殊的限定，但为了抑制副反应，通常为0℃～150℃，反应1小时～10小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(1b)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过浓缩反应混合物，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶或硅胶柱色谱等进行纯化。(2)保护基为“被1～3个芳基取代的甲基”或“用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素、氰基取代的1～3个芳基取代的甲基”时，在惰性溶剂中，用还原剂进行反应。
作为使用的溶剂，优选甲醇、乙醇、异丙醇等醇类，乙醚、四氢呋喃、二噁烷等醚类，甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃类，己烷、环己烷等脂肪族烃类，乙酸乙酯、乙酸丙酯等酯类，乙酸等有机酸类或这些有机溶剂与水的混合溶剂。
使用的还原剂只要是通常的催化还原反应中使用的还原剂，就没有特殊的限定，优选钯碳、阮来镍、氧化铂、铂黑、铑-氧化铝、三苯基膦-氯化铑、钯-硫酸钡。
对于压力没有特殊的限定，通常在1～10个气压的条件下进行。
反应温度为0℃～60℃，优选20℃～40℃。
反应时间为10分钟至24小时，优选1小时至3小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(1b)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如从反应混合物中除去还原剂，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶或硅胶柱色谱等进行纯化。
保护基为“被3个芳基取代的甲基”、即为三苯甲基时，也可用酸来进行反应。
这时，作为使用的溶剂，例如苯、甲苯、二甲苯等芳香族烃类，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，2-二氯乙烷、氯苯、二氯苯等卤代烃类，甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等醇类，乙腈、异丁腈等腈类，甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷二酮、六甲基磷酰三胺等酰胺类，乙酸等有机酸类，优选有机酸(尤其是乙酸)或醇类(尤其是叔丁醇)。
作为使用的酸，优选乙酸或三氟乙酸。
反应温度为0℃～60℃，优选20℃～40℃。
反应时间为10分钟至24小时，优选1小时至3小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(1b)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如通过中和反应混合物，加入乙酸乙酯等不与水混合的有机溶剂，水洗后，分离含有目的化合物的有机层，用无水硫酸钠等干燥后，蒸馏除去溶剂来得到。
得到的化合物必要时可通过常规方法，例如重结晶、硅胶柱色谱等进行纯化。(3)保护基为“甲硅烷基”时，通常可用氟化四丁基铵、氢氟酸、氢氟酸-吡啶、氟化钾等可生成氟阴离子的化合物处理，或用乙酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等有机酸或盐酸等无机酸进行处理来除去保护基。
此外，用氟阴离子除去保护基时，可通过加入甲酸、乙酸、丙酸等有机酸来促进反应。
使用的溶剂只要不妨碍反应，并在一定程度上溶解起始物质，就没有特殊的限定，优选乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二甘醇二甲基醚等醚类，乙腈、异丁腈等腈类，水，乙酸等有机酸及这些溶剂的混合溶剂。
反应温度为0℃～100℃，优选20℃～70℃。
反应时间为5分钟至48小时，优选1小时至24小时。
反应结束后，本反应的目的化合物(1b)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如蒸馏除去溶剂，用硅胶柱色谱纯化来得到。(A-8步骤)本步骤是在惰性溶剂中，氢及催化剂存在的条件下，将A-7步骤得到的化合物(1b)的叠氮基还原为氨基，并且根据需要保护该氨基，制备化合物(1c)的步骤。
使用的溶剂只要不参与本反应，就没有特殊的限定，优选甲醇、乙醇、异丙醇等醇类，乙醚、四氢呋喃、二噁烷等醚类，甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃类，己烷、环己烷等脂肪族烃类，乙酸乙酯、乙酸丙酯等酯类，甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、六甲基磷酰三胺等酰胺类，甲酸、乙酸等脂肪酸类，水，或这些溶剂的混合溶剂。
使用的催化剂只要是通常的催化还原反应中使用的催化剂，就没有特殊的限定，优选钯碳、钯黑、阮来镍、氧化铂、铂黑、铑-氧化铝、三苯基膦-氯化铑、钯-硫酸钡。
对于压力没有特殊的限定，通常在1～10个气压的条件下进行。
反应温度及反应时间根据起始物质、溶剂及催化剂的种类等而不同，通常为0℃～100℃(优选20℃～40℃)，反应5分钟～48小时(优选30分钟～10小时)。
反应结束后，本反应的目的化合物(1c)可按常规方法，由反应混合物中提取。例如过滤除去催化剂，蒸馏除去溶剂来得到。
此时，根据需要可按照文献(Protective Groups in OrganicSynthesis)所述的方法，对氨基进行保护。
应用本发明的化合物(1d)，按照以下所述的B方法，可合成通过磷酸键合3’位的氮原子和5’位的氧原子的、N3’-P5’型的本发明的寡核苷酸类似物。 上述步骤表中，B1及R8与上述意义相同，式(1d)的B1和式(8)的B1可以相同或不同。
R11为琥珀酸CPG(succinyl Controlled Pore Glass)或天塔胶(Tentagel)等寡核苷酸合成中通常应用的树脂。
CEO为2-氰基乙氧基。
以下，对于B方法的各步骤进行详细说明。(B-1步骤)本步骤为将化合物(1d)与化合物(8)进行反应，制备化合物(9)的氧化性磷酸化偶合反应(oxidative phosphorylation coupling)，可按照文献(1)(Nucleic Acids Research，Vol.23，No.14，pp.2661-2668，1995)中所述的方法进行。
化合物(1d)为由A-8步骤得到的化合物(1c)中5’位的羟基被保护，且碱基B上存在氨基时，该氨基被保护的化合物。
化合物(8)为可由A-8步骤得到的化合物(1c)，按照文献(1)所述的方法进行合成的化合物。(B-2步骤)本步骤为由B-1步骤得到的化合物(9)合成寡核苷酸的步骤。
首先，用上述A-7步骤的方法脱去化合物(9)的羟基的保护基R8，随后，按照文献(1)中所述的方法进行磷酸化，进而，和上述B-1步骤同样使之与化合物(1d)进行反应，反复进行这种循环来合成寡核苷酸。
得到的寡核苷酸类似物的链长以核苷为单位，通常为2～50个，优选10～30个。
得到的寡核苷酸类似物难以被各种核酸酶降解，给药于生物体后，可在生物体内长时间存在。另外，可与mRNA形成稳定的双链而抑制作为病因的蛋白质的生物合成，或与基因组中的双链DNA形成三链而抑制mRNA的转录，并可抑制感染细胞的病毒的增殖。
因此，本发明的寡核苷酸类似物有望作为抗肿瘤剂、抗病毒剂等抑制特定基因的功能、并治疗疾病的医药品。
本发明的寡核苷酸类似物例如可与缓冲剂和/或稳定剂等惯用的辅助剂配合而制成非口服给药制剂，或制成脂质体制剂。另外，作为局部用制剂，可与惯用的医药用载体配合而配制成软膏、乳液、液剂或膏药等。
其用量根据症状、年龄、给药方法等而不同，例如以每次下限为0.001mg/kg体重(优选0.01mg/kg体重)，上限为100mg/kg体重(优选10mg/kg体重)，根据症状每天1次至数次给药。
以下，结合实施例及参考例，进一步详细说明本发明，但本发明的范围并不局限于此。
合成具有目的序列的寡核苷酸，进行至合成循环1)使5’-位的二甲氧基三苯甲基脱去后，按照常规方法，用浓氨水进行处理使寡聚物从支持物上切离的同时，脱去磷原子上的保护基氰基乙基，并进一步脱去核酸碱基上的保护基。
用反相HPLC进行纯化，得到目的寡核苷酸。
按照本合成方法，得到具有以下序列5’-ttttttttttnt-3’(序列表的序列序号1)所示的序列，碱基序号11的n为3’-氨基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷的寡核苷酸类似物(以下，略作“寡核苷酸1”)。
(收量8.5nmol，产率4.3％)
用反相HPLC(HPLCGI LSON公司Model 302柱，CHEMCOCHEMCOBOND 5-ODS-H(7.8×300nm)；0.1M乙酸三乙基胺水溶液(TEAA)，pH7；10→12.5％CH3CN/40分钟，线性梯度；50℃，2.5ml/分钟，254nm)纯化得到的改性寡核苷酸类似物，收集25.4分钟时洗脱出的组分。(实施例11)寡核苷酸类似物的合成使用5’-O-二甲氧基三苯甲基-N-4-苯甲酰基-5-甲基-2’-脱氧胞苷-3’-O-(2-氰基乙基)N，N-二异丙基phosphoroamidite(Pharmacia公司制)，与实施例11同样，得到具有以下序列5’-tttttmtntmtmtmt-3’(序列表的序列序号2)所示的序列，m为5-甲基2’-脱氧胞苷，n为3’-氨基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷的寡核苷酸类似物(以下，略作“寡核苷酸2”)。
(收量7.1nmol，产率3.5％)用反相HPLC(HPLCGILSON公司Model 302柱，CHEMCOCHEMCOBOND 5-ODS-H(7.8×300nm)；0.1M乙酸三乙基胺水溶液(TEAA)，pH7；10→12％CH3CN/40分钟，线性梯度；50℃，2.5ml/分钟，254nm)纯化得到的改性寡核苷酸类似物，收集22.5分钟时洗脱出的组分。(参考例1)3-叠氮基-3-脱氧-4-羟基甲基-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃核糖按照文献(Surzhykov S.A.，Krayevsky A.A.，NucleosidesNucleotides，13，2283-2305(1994))配制的3-叠氮基-4-苯甲酰氧基甲基-5-O-苯甲酰基-3-脱氧-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃核糖(4.13g，9.15mmol)的甲醇溶液(85ml)中，于0℃、加入碳酸钾(380mg，2.75mmol)、水(15ml)，在相同温度下搅拌4.5小时。于0℃、用10％盐酸中和，蒸馏除去甲醇。残渣中加入水，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥后，蒸馏除去溶剂，得到的白色固体用冷正己烷洗涤，得到白色粉末状的目的物(1.93g，7.87mmol，86％)。mp 113-115℃(甲苯).IRνmax(KBr)3460，3417，2989，2951，2907，2111cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.62(3H，s)，1.35(3H，s)2.65(2H，brs)，3.81，3.65(2H，AB，J＝12Hz)，3.59，4.00(2H，AB，J＝12.5Hz)，4.28(1H，d，J＝5.5Hz)，4.82(1H，dd，J＝4Hz，5.5Hz)，5.85(1H，d，J＝4Hz).13C-NMR(CDCl3)δ25.7，26.2，61.9，62.1，63.2，79.9，87.3，104.4，113.6.(参考例2)3-叠氮基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3-脱氧-4-羟基甲基-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃核糖氮气流下，在参考例1的化合物(2.56g，10.5mmol)的无水二氯甲烷溶液(73ml)中，于0℃、加入三乙基胺(3.5g，4.82ml，34.6mmol)、氯化叔丁基二苯基甲硅烷(9.75g，9.22ml，35.46mmol)，室温下搅拌24小时。反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，蒸馏除去溶剂后，用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶6)纯化，得到白色粉末状的目的物(3.13g，6.47mmol，62％)。mp 99.5-100.5℃ (正己烷).IRνmax(KBr)3504，2936，2852，2111cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.07(9H，s)，1.36(3H，s)，1.62(3H，s)，3.62，3.92(2H，AB，J＝12Hz)，4.38(1H，d，J＝6Hz)，4.84(1H，dd，J＝4Hz，5.5Hz)，3.82，3.70(2H，AB，J＝11Hz)，4.84(1H，dd，J＝4Hz，5.5Hz)，5.86(1H，d，J＝4Hz)，7.36-7.44(6H，m)，7.64-7.67(4H，m).13C-NMR(CDCl3)δ19.2，26.1，26.3，26.8，62.2，62.3，65.2，80.4，88.0，104.5，113.7，127.7，127.8，129.8，129.9，132.7，132.8，135.5.(参考例3)3-叠氮基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3-脱氧-4-(对甲苯磺酰氧基甲基)-1，2-O-异亚丙基-α-D-呋喃核糖氮气流下，在参考例2的化合物(100mg，0.21mmol)的无水二氯甲烷溶液(2ml)中，于0℃、加入三乙基胺(137mg，180μl，1.29mmol)、对甲苯磺酰氯(63.3mg，0.33mmol)、4-二甲基氨基吡啶(4mg，0.03mmol)，室温下搅拌14小时。反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，蒸馏除去溶剂后，用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶6)纯化，得到白色粉末状的目的物(130mg，0.20mmol，98％)。mp 122-124℃(乙酸乙酯-正己烷).IRνmax(KBr)3069，2935，2114，1366，1183，1109cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.03(9H，s)，1.27(3H，s)，1.31(3H，s)，2.41(3H，s)，3.60，3.72(2H，AB，J＝10.5Hz)，4.33，4.40(2H，AB，J＝10Hz)，4.55(1H，d，J＝5.5Hz)，5.00(1H，dd，J＝3.7Hz，5.5Hz)，5.82(1H，d，J＝3.7Hz)，7.23(2H，d，J＝8.5Hz)，7.36-7.45(6H，m)，7.61-7.63(4H，m)，7.72(2H，d，J＝8.5Hz).13C-NMR(CDCl3)δ19.1，21.5，25.9，26.0，26.7，63.1，64.7，68.9，80.1，85.6，104.4，113.8，127.8，128.0，129.6，129.9，132.4，132.5，135.4，144.6.(参考例4)3-叠氮基-5-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3-脱氧-4-(对甲苯磺酰氧基甲基)-1，2-二-O-乙酰基-D-呋喃核糖氮气流下，在参考例3的化合物(230mg，0.36mmol)的乙酸溶液(3.5ml)中，加入乙酸酐(406mg，375μl，3.98mmol)、浓硫酸(6.5mg，3.5μl，0.066mmol)，室温下搅拌5小时。将反应溶液加入到冰水中，搅拌30分钟，加入饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，蒸馏除去溶剂后，用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝4∶1)纯化，得到α∶β＝约3∶7的混合物状态的无色油状目的物(230mg，0.34mmol，94％)。IRνmax(KBr)3048，2935，2864，2117，1756.cm-1.1H-NMR(CDCl3)[β体]δ1.06(9H，s)，1.83(3H，s)，2.08(3H，s)，2.40(3H，s)，3.54，3.80(2H，AB，J＝11Hz)，4.12，4.26(2H，AB，J＝10Hz)，4.37(1H，d，J＝5.5Hz)，5.32(1H，d，J＝5.5Hz)，5.98(1H，s)，7.29(2H，d，J＝8Hz)，7.37-7.46(6H，m)，7.59-7.65(4H，m)，7.76(2H，d，J＝8Hz).[α体]δ1.05(9H，s)，2.02(3H，s)，2.13(3H，s)，2.39(3H，s)，3.51，3.68(2H，AB，J＝11Hz)，4.12，4.21(2H，AB，J＝10.5Hz)，4.40(1H，d，J＝7Hz)，5.32(1H，m)，6.31(1H，d，J＝4.5Hz)，7.25(2H，d，J＝8.5Hz)，7.37-7.46(6H，m)，7.59-7.65(4H，m)，7.70(2H，d，J＝8.5Hz).13C-NMR(CDCl3)δ19.0，19.1，20.0，20.6，20.9，21.1，21.5，26.6，61.0，63.2，65.1，68.4，68.8，72.2，75.5，85.4，86.5，93.6，96.0，97.3，127.8，127.9，128.0，129.6，129.9，130.0，132.0，132.3，132.4，135.4，144.7，168.5，169.2，169.3，169.4.(参考例5)2’-O-乙酰基-3’-叠氮基-5’-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3’-脱氧-4’-(对甲苯磺酰氧基甲基)-5-甲基尿苷氮气流下，在参考例4的化合物(300mg，0.44mmol)的无水1，2-二氯乙烷溶液(6ml)中，于0℃、加入O，O’-二(三甲基甲硅烷基)胸腺嘧啶(240mg，0.93mmol)、四氯化锡(253mg，114μl，0.97mmol)，室温下搅拌43小时。冰冷下，用二氯甲烷稀释后，反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用饱和食盐水洗涤后，有机层用无水硫酸钠干燥，蒸馏除去溶剂后，用硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2-1∶0)纯化，得到白色粉末状的目的物(300mg，0.4mmol，91％).mp158.5-159.5℃ (乙酸乙酯-正己烷).IRνmax(KBr)3185，3067，2956，2116，1752，1695，1369，1100cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ1.11(9H，s)，1.59(3H，s)，2.15(3H，s)，2.41(3H，s)，3.80，3.84(2H，AB，J＝11.5Hz)，4.04，4.10(2H，AB，J＝11Hz)，4.47(1H，d，J＝6Hz)，5.53(1H，t，J＝6.5Hz)，5.94(1H，d，J＝7Hz)，7.18(1H，s)，7.28(2H，d，J＝7.5Hz)，7.37-7.47(6H，m)，7.61-7.65(4H，m)，7.71(2H，d，J＝7.5Hz)，9.68(1H，br s).13C-NMR(CDCl3)δ11.8，19.2，20.9，21.5，26.9，62.3，65.9，68.3，74.2，84.8，86.1，118.9，127.9，128.0，129.7，130.1，131.5，132.2，135.2，135.3，135.5，145.0，150.4，163.6，169.9.(参考例6)3 ’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷5’-(2-氰基乙基)膦酸酯氮气流下，在3’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷(记载于K.M.Fries，C.Joswing and R.F.Borch，J.Med.Chem.，38，2672(1995))(100mg，0.34mmol)的乙腈溶液(4ml)中，用5分钟加入2-氰基乙基四异丙基二氨基亚磷酸酯(132mg，0.44mmol)，室温下搅拌2.2小时。接着，加入四唑(30.8mg，0.44mmol)的乙腈溶液(0.88ml)，室温下搅拌1小时。反应溶液中加入水后，用二氯乙烷萃取。有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇＝30∶1，正己烷∶乙酸乙酯＝1∶5→0∶1)纯化得到的粗产物，得到无色油状的标题化合物(98.4mg，0.21mmol，70％)。1H-NMR(CDCl3)δ0.10(6H，s)，0.90(9H，s)，1.96(3H，s)，2.16-2.28(2H，m)，2.77-2.82(2H，m)，4.09-4.41(6H，m)，6.28(1H，dd，J＝7Hz，11Hz)，6.98(1H，d，J＝720Hz)，7.36(1H，d，J＝8Hz)，8.20(1H，brs).31P-NMR(CDCl3)δ7.70，8.94.(参考例7)3’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷5’-甲基膦酸酯氮气流下，在3’-O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)胸苷(100mg，0.28mmol)的二氯甲烷溶液(2ml)中，用5分钟加入氯二异丙基氨基甲氧基膦(69.2mg，0.35mmol)，室温下搅拌1小时。接着，加入四唑(56.0mg，0.80mmol)的乙腈溶液(2.0ml)，室温下搅拌40分钟。反应溶液中加入水后，用二氯乙烷萃取。有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1→0∶1，正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)纯化得到的粗产物，得到无色油状的标题化合物(109mg，0.25mmol，91％)。31P-NMR(CDCl3)δ9.13，10.07.(试验例1)(测定三链形成能力的Tm测定)在含140mM KCl及10mM MgCl2的7mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)(或者未添加该MgCl2的溶液)中，溶解可形成三链的、等摩尔量的寡核苷酸2和天然型双链DNA寡核苷酸(各寡核苷酸的终浓度为1.5μM)制成样品溶液，将样品溶液在沸水浴中煮沸，用12小时缓慢地冷却至室温，再于4℃放置1小时。在分光光度计(Beckman公司制，Du650)的比色皿中，由5℃至85℃缓慢升温(0.5℃/分钟)并测定样品溶液的260nm处的紫外吸收。
天然型双链DNA寡核苷酸由以下两个序列构成。序列5’-gctaaaaagaaagagagatcg-3’(序列表的序列序号3)及其互补链序列5’-cgatctctctttctttttagc-3’(序列表的序列序号4)作为形成三链的天然型寡核苷酸为，序列5’-tttttmtttmtmtmt-3’(序列表的序列序号5)其中，m为5-甲基-2’-脱氧胞苷(以下，略作“寡核苷酸3”)。
表3中示出了寡核苷酸2及3与双链DNA之间的Tm测定结果。
(表3)Tm(℃)寡核苷酸2 寡核苷酸3实施例11添加MgCl255 44未添加MgCl244 32由上述结果可知，本发明的寡核苷酸类似物相比于天然型寡核苷酸，形成三链时，Tm值高，具有极为理想的三链形成能力。(试验例2)(核酸酶耐受性的测定)在含有各种寡核苷酸(10μg)的缓冲溶液320μl(50mM Tris(pH8.0)和10mM MgCl2)中，加入3’-核酸外切酶(磷酸二酯酶，源于Crotalus durissus(Boehringer Mannheim))0.2μg，将混合液保温在37℃并进行反应。一定时间后取出混合液的一部分，于90℃加热2分钟使酶失活并终止反应。各时间的混合液中的残量寡核苷酸用反相高速液相柱色谱进行定量，测定存在核酸酶的条件下，寡核苷酸量随时间的变化，结果如
图1所示。
纵坐标为相对于0(分钟)时的各寡核苷酸量，各寡核苷酸的残存率(％)。
横坐标为由反应开始起的经过时间(分钟)。试验中所用的寡核苷酸1.实施例10中得到的寡核苷酸12.具有下述序列所示的序列，n为2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷的寡核苷酸(以下，略作“寡核苷酸4”)5’-ttttttttttnt-3’(序列表的序列序号1)3.具有下述序列所示的序列的天然型寡核苷酸(以下，略作“寡核苷酸5”)5’-tttttttttttt-3’(序列表的序列序号6)本发明的寡核苷酸类似物相对于天然型，具有显著的核酸酶耐受性。再者，与已知的非天然型寡核苷酸类似物相比，也显示出显著的核酸酶耐受性。
本发明的寡核苷酸类似物的杂交链形成能力及抗HIV活性的测定，可按照以下方法进行测定。(试验方法1)将得到的种种寡核苷酸类似物作为反义链，通过测定上述反义链和天然型DNA或RNA构成的有义链的退火产物的熔融温度(Tm值)，测定本发明的寡核苷酸类似物对于互补DNA及RNA的杂交链形成能力。
将终浓度分别为NaCl 100mM、磷酸钠缓冲液(pH7.2)10mM、反义链4μM、有义链4μM的样品溶液(500μL)在沸水浴中煮沸，用10小时缓慢地冷却至室温。在分光光度计(例如岛津UV-2001PC)的比色皿中通入氮气流，以防止结成露水，将样品溶液缓慢冷却至5℃，再于5℃保持20分钟后，开始测定。样品以每分钟0.2℃升温至90℃，以0.1℃的间隔测定260nm处的紫外吸收。
另外，为防止升温的同时样品浓度产生变化，比色皿应使用带有盖子的比色皿，并在样品溶液表面添加1滴矿物油后进行测定。(试验方法2)抗HIV活性的测定本发明化合物的抗HIV活性测定可按照R.Pauwel等的方法(J.Virological Method 20，p.309-321(1988))进行。即，将MT-4细胞经离心(1000×g，5分钟)得到的细胞沉积物悬浮于不含血清的RPMI-1640培养基中，得到细胞悬液，将HIV接种于细胞悬液中，37℃培养1小时后，加入到添加10％胎牛血清的RPMI-1640培养基(以下，略作血清培养基)中，洗涤后进行离心(1000×g，5分钟)。由上述步骤得到的HIV感染细胞及HIV非感染细胞悬浮于血清培养基中，并使其终浓度分别为4×105/ml，并在组织培养用96孔培养板的各孔中分别加入100μl。这些孔中分别加入100μl后，在5％二氧化碳存在的条件下，于37℃静置培养5天。同样，培养未添加化合物的HIV感染细胞及HIV非感染细胞。培养结束后，用MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)测定活细胞，求得添加化合物时的细胞损伤抑制活性(抗HIV活性)。另外，确认细胞液及接种病毒液中不含支原体。
以未添加化合物的HIV非感染细胞的细胞损伤抑制活性为100％，未添加化合物的HIV感染细胞的细胞损伤活性为0％，求得对于HIV感染细胞显示50％细胞损伤抑制活性的化合物浓度(EC50)。产业上的实用性本发明的新型双环核苷类似物可用作制备具有优良的反义或反基因活性、且在体内稳定的寡核苷酸类似物的中间体。
并且，本发明的新型寡核苷酸类似物可用作在体内稳定的、反义或反基因药。
再者，本发明的新型双环核苷类似物可用作具有抗HIV活性的、ATDS的预防或治疗药。
序列表<110>三共株式会社(Sankyo Company，limited)<120>新型双环核苷类似物<130>FP-200042<140><141><150>JPHE111-207170<151>1999-07-22<160>6<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>12<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于测定核酸酶耐受性的合成寡核苷酸<220><221>改性碱基<222>(11)<223>改性尿苷<400>1tttttttttt nt12<210>2<211>15<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于测定三链形成能力的合成寡核苷酸<220><221>改性碱基<222>(6)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<220><221>改性碱基<222>(8)<223>3’-氧基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷<220><221>改性碱基<222>(10)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<220><221>改性碱基<222>(12)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<220><221>改性碱基<222>(14)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<400>2tttttntntn tntnt 15<210>3<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于测定三链形成能力的合成寡核苷酸<400>3gctaaaaaga aagagagatc g 21<210>4<211>21<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于测定三链形成能力的合成寡核苷酸<400>4cgatctctct ttctttttag c 21<210>5<211>15<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于测定三链形成能力的合成寡核苷酸<220><221>改性碱基<222>(6)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<220><221>改性碱基<222>(10)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<220><221>改性碱基<222>(12)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<220><221>改性碱基<222>(14)<223>5-甲基-2’-脱氧胞苷<400>5tttttntttn tntnt 15<210>6<211>12<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220><223>人工序列的描述用于测定核酸酶耐受性的合成寡核苷酸<400>6tttttttttt tt1权利要求
1.通式(1)表示的化合物或其可药用盐， 式中，R1相同或不同，为氢原子、羟基的核酸合成保护基、磷酸基、用核酸合成保护基保护的磷酸基或式-P(R4a)R4b表示的基团(式中，R4a及R4b相同或不同，为羟基、用核酸合成保护基保护的羟基、巯基、用核酸合成保护基保护的巯基、氨基、用核酸合成保护基保护的氨基、碳原子数1～6个的烷氧基、碳原子数1～6个的烷基硫基、碳原子数1～7个的氰基烷氧基或用碳原子数1～6个的烷基取代的氨基)；R2为叠氮基、氨基或式NH-R3表示的基团；R3相同或不同，为氨基的核酸合成保护基、磷酸基、用核酸合成保护基保护的磷酸基或式-P(R4a)R4b表示的基团(式中，R4a及R4b相同或不同，为羟基、用核酸合成保护基保护的羟基、巯基、用核酸合成保护基保护的巯基、氨基、用核酸合成保护基保护的氨基、碳原子数1～6个的烷氧基、碳原子数1～6个的烷基硫基、碳原子数1～7个的氰基烷氧基或用碳原子数1～6个的烷基取代的氨基)；B为可以具有1个以上选自下述α组的任一取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基；(α组)羟基、用核酸合成保护基保护的羟基、碳原子数1～6个的烷氧基、巯基、用核酸合成保护基保护的巯基、碳原子数1～6个的烷基硫基、氨基、用核酸合成保护基保护的氨基、用碳原子数1～6个的烷基取代的氨基、碳原子数1～6个的烷基、及卤素原子。
2.权利要求1所述的化合物，其中，R1为氢原子、脂肪族酰基、芳香族酰基、甲硅烷基、用1～3个芳基取代的甲基、或用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基。
3.权利要求1所述的化合物，其中，R1为氢原子、甲硅烷基、用1～3个芳基取代的甲基、或用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基。
4.权利要求1所述的化合物，其中，R1为氢原子、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、苯甲基、三苯基甲基、4-甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基甲基或4，4’，4”-三甲氧基三苯基甲基。
5.权利要求1所述的化合物，其中，R2为叠氮基、氨基、或式-NH-R3表示的基团；式中，R3为脂肪族酰基、芳香族酰基、用1～3个芳基取代的甲基、用芳环被低级烷基、低级烷氧基、卤素或氰基取代的1～3个芳基取代的甲基、甲硅烷基、氨基亚磷酸酯(phosphoroamidite)基、膦酰基、磷酸基或用核酸合成保护基保护的磷酸基。
6.权利要求1所述的化合物，其中，R2为叠氮基、氨基、或式-NH-R3表示的基团；式中，R3为乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、叔丁基二苯基甲硅烷基、式-P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)表示的基团、式-P(OCH3)(NCH(CH3)2)表示的基团、膦酰基、2-氯苯基或4-氯苯基磷酸基。
7.权利要求1所述的化合物，其中，R2为叠氮基、氨基。
8.权利要求1所述的化合物，其中，B为6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基(即鸟嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巯基嘌呤-9-基、巯基被核酸合成保护基保护的6-巯基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-2-氧代-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氢嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-巯基-1，2-二氢嘧啶-1-基、巯基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-巯基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2，4-二羟基嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2，4-二羟基-5-甲基嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基或氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基。
9.权利要求1所述的化合物，其中，B为6-苯甲酰基氨基嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-苯甲酰基氨基-6-羟基嘌呤-9-基、鸟嘌呤基、2-氧代-4-苯甲酰基氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸腺嘧啶基。
10.权利要求1所述的化合物，它选自下述化合物组3’-氨基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、3’-叠氮基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、3’-叠氮基-5’-O-叔丁基二苯基甲硅烷基-3’-脱氧-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、3’-叠氮基-3’-脱氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷、以及3’-氨基-3’-脱氧-5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O，4’-C-亚甲基-5-甲基尿苷。
11.含有1个或2个以上通式(1a)表示的结构的寡核苷酸类似物及其可药用盐， 式中，B为可以具有选自下述α组的取代基的嘌呤-9-基或2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基；但是含有2个以上上述结构时，该结构间的B可以相同或不同；(α组)羟基、用核酸合成保护基保护的羟基、碳原子数1～6个的烷氧基、巯基、用核酸合成保护基保护的巯基、碳原子数1～6个的烷基硫基、氨基、用核酸合成保护基保护的氨基、用碳原子数1～6个的烷基取代的氨基、碳原子数1～6个的烷基、及卤素原子。
12.权利要求11所述的寡核苷酸类似物及其可药用盐，其中，B为6-氨基嘌呤-9-基(即腺嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的6-氨基嘌呤-9-基、2，6-二氨基嘌呤-9-基、2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氯嘌呤-9-基、2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-氟嘌呤-9-基、2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-溴嘌呤-9-基、2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基(即鸟嘌呤基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基、氨基及羟基被核酸合成保护基保护的2-氨基-6-羟基嘌呤-9-基、6-氨基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-氨基-2-氯嘌呤-9-基、6-氨基-2-氟嘌呤-9-基、2，6-二甲氧基嘌呤-9-基、2，6-二氯嘌呤-9-基、6-巯基嘌呤-9-基、2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即胞嘧啶基)、氨基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、氨基被核酸合成保护基保护的2-氧代-4-氨基-5-氟-1，2-二氢嘧啶-1-基、4-氨基-2-氧代-5-氯-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-甲氧基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-巯基-1，2-二氢嘧啶-1-基、2-氧代-4-羟基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即尿嘧啶基)、2-氧代-4-羟基-5-甲基-1，2-二氢嘧啶-1-基(即胸腺嘧啶基)、4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基(即5-甲基胞嘧啶基)或氨基被核酸合成保护基保护的4-氨基-5-甲基-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-1-基。
13.权利要求11所述的寡核苷酸类似物及其可药用盐，其中，B为6-苯甲酰基氨基嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-异丁基氨基-6-羟基嘌呤-9-基、鸟嘌呤基、2-氧代-4-苯甲酰基氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、胞嘧啶基、2-氧代-5-甲基-4-苯甲酰基氨基-1，2-二氢嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸腺嘧啶基。
全文摘要
本发明提供具有抗艾滋病活性的新型双环核苷类似物,以及用于制备具有优良的反义或反基因活性、且在体内稳定的寡核苷酸类似物的中间体,尤其是结构式(1)表示的化合物或其可药用盐;式中,R
文档编号A61P31/18GK1376161SQ00813279
公开日2002年10月23日 申请日期2000年7月21日 优先权日1999年7月22日
发明者今西武, 小比贺聪 申请人:三共株式会社