专利名称：金属硫蛋白的制取方法
技术领域：
本发明涉及一种金属硫蛋白的制取方法金属硫蛋白具有结合重金属离子，解毒，拮抗电离辐射，清除自由基和过氧化物的能力，它参与微量元素的储存、运输和代谢；参与激素和发育过程的调节，增强机体对各种应激的反应，而且它分子量小、稳定性好，是一种理想的保健品和化妆品的添加剂。目前，金属硫蛋白主要是从动物内脏如肝、肾、肠中提取，成本高、工艺复杂。本发明的目地是提供一种成本低、工艺简练的金属硫蛋白的制取方法。
本发明是这样实现的，一种金属硫蛋白的制取方法，它包括液体培养基的制备，还包括以下步骤A向液体培养基中加入诱导金属硫蛋白产生的金属离子0.01-10毫摩尔；B将脉孢菌接种于液体培养基，在10℃-50℃温度条件下供氧培养5小时至7天；C将滤出的菌丝体反复冲洗后与含量为10％-100％温度为20℃-100℃的低级醇溶液混合，然后高速匀浆，超声破碎1-120分钟，然后高速离心，收集上清；D上清经超滤仪超滤，收集超滤清液；E将超滤清液真空浓缩1-50倍；F将真空浓缩液用蒸馏水或缓冲液稀释1-50倍，然后再次用超滤仪超滤，收集分子量小于50000的超滤液；G将分子量小于50000的超滤液经反渗透仪浓缩，然后将浓缩液干燥低温避光保存；本方法为金属硫蛋白的生产提供了一条有效的途径，它利用生物发酵技术产生金属硫蛋白，而且提供工艺简练，适于工业化生产。本发明在步骤C中设计了用热低级醇溶液，并设计了超声破碎，这样提取的金属硫蛋白的数量多，纯度较高；在步骤F设计了第二次超滤技术，这样能进一步提高提取的金属硫蛋白的纯度。
以下是本发是的3个实施例实施例1.
A向液体培养基中加入诱导金属硫蛋白产生的金属离子如Zn、Cd，0.01毫摩尔。
B将脉孢菌接种于液体培养基，在30℃温度条件下供氧培养7天。
C将滤出的菌丝体反复冲先后与含量为55％温度为20℃的低级醇溶液混合，然后高速匀速、超声破碎60分钟，然后高速离心，收集上清。
D上清经超滤仪超滤，收集超滤清液。
E将超滤清液真空浓缩50倍。
F将真空浓缩液用蒸馏水或缓冲液稀释25倍；然后再次用超，滤仪超滤，收集分子量小于50000的超滤液。
G将分子量小于50000的超滤液经反渗透仪浓缩，然后将浓缩液干燥，低温避光保存。
实施例2该实施例的基本步骤同实施例1不同点如下步骤A中金属离子5毫摩尔；步骤B中在50℃温度条件下供氧培养5小时；步骤C中与含量为100％温度为100℃的低给醇溶液混合，然后高速匀浆、超声破碎120分钟；步骤E中浓缩1倍；步骤F中稀释1倍。
实施例3该实施例的基本步骤同实施例1不同点如下步骤A中金属离子10毫摩尔；步骤B中在10℃温度条件下供氧培养3.5天；步骤C中与含量为100％温度为60℃的低级醇溶液混合，然后高速匀浆、超声破碎1分钟；步骤E中浓缩25倍；步骤F中稀释50倍。
权利要求
1.一种金属硫蛋白的制取方法它包括液体培养基的制备，其特征在于它包括以下步骤A向液体培养基中加入诱导金属硫蛋白产生的金属离子0.01-10毫摩尔；B将脉孢菌接种于液体培养基，在10℃-50℃温度条件下供氧培养5小时至7天；C将滤出的菌丝体反复冲洗后与含量为10％-100％温度为20℃-100℃的热低级醇溶液混合，然后高速匀浆，超声破碎1-120分钟，然后高速离心，收集上清；D上清经超滤仪超滤，收集超滤清液；E将超滤清液真空浓缩1-50倍；F将真空浓缩液用蒸馏水或缓冲液释稀1-50倍，然后再次用超滤仪超滤，收集分子量小于50000的超滤液；G将分子量小于50000的超滤液经反渗透仪浓缩，然后将浓缩液干燥，低温避光保存。
2.根据权利要求1所过的金属硫蛋白的制取方法，其特征在于所述的液体培养基为土豆培养基，或者为各种瓜果、蔬菜培养基。
3.根据权利要求1所述的金属硫蛋的制取方法，其特征在于步骤B中所述的脉孢菌为粗糙脉孢菌或者为间结脉孢菌。
4.根据权利要求1所述的金属硫蛋白的取制方法，其特征在于步骤C中所述的低级醇为甲醇、乙醇、丙醇或它们的混合物。
全文摘要
金属硫蛋白的制取方法向脉孢菌培养液中添加诱导金属硫蛋白产生的金属离子，将脉孢菌接种于液体培养基中供氧发酵，将滤出的菌丝体与热低级的醇溶液混合后高速匀浆，超声破碎，然后离心或抽滤，上清液经超滤仪二次超滤，收集分子量小于50000的超滤液，超滤液经反渗透浓缩后干燥，然后低温避光保存。
文档编号C12N1/14GK1130687SQ9510210
公开日1996年9月11日 申请日期1995年3月7日 优先权日1995年3月7日
发明者戴根春 申请人:戴根春