AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及植物基因工程【技术领域】，具体涉及 AtNF-YB-1 基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用，其特征在于：具有如SEQ.ID. NO.1所示的核苷酸序列，或至少80%同源性的序列，以及上述DNA片段编码的蛋白或经过修饰改造的具有相同功能的蛋白，将 AtNF-YB-1 基因转入植物中获得了抽穗开花明显提前的品种，且不受长日照或短日照影响，均表现稳定。为培育适应性广、生育期短的水稻提供了新的基因资源。
【专利说明】AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应 用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物基因工程【技术领域】，具体涉及基因在促进植物抽穗提 前、缩短生育期中的应用。
【背景技术】
[0002] 植物生长过程中抽穗（开花）期是植物生态适应性的重要农艺性状，决定植物品种 适应地区和季节的关键性状。植物抽穗开花的早晚直接决定了生育期的长短，一般认为在 最佳生长条件下，晚开花使得营养生长期延长，能够积累更多的干物质，产量更高；而在生 长季节较短或不可预知的环境中早开花则更有利。在水稻品种选育中，生育期的长短与品 种栽培适应范围也密切相关。因此，研究调控植物抽穗开花的基因及其作用机制对植物品 种选育具有重要的指导意义。
[0003] 其中比如水稻L.)是世界上最重要的禾谷类作物之一，全世界约 40%的人口，其主要食物来源于水稻。水稻同样也是我国最重要的粮食作物之一，水稻产量 的高低，直接影响到我国的粮食安全以至国家安全。
[0004] 目前，已有20多个控制水稻抽穗期的基因被克隆，比较经典的就是故//(Masahiro ei a乂 The Plant Cell, 2000，12: 2473-2483.)在长日照条件下，抑制水稻抽穗， 短日照条件下，促进抽穗；/-- (Shoko ei Plant Cell Physiol, 2002，43(10): 1096-1105)能促进水稻抽穗；如7) (Wei Plant Physiology, 2010， 153(4):1747-1758; Yan et al. Molecular Plant, 2011,4(2): 319-330 ；Dai et al. Journal of Integrative Plant Biology 2012, 54 (10): 790-799; Gao et al. PNAS, 2013，110 (35): 14492-14497.)在长日照条件下，延迟抽穗，短日照条件下，促进抽穗开 花。对于抽穗期基因来说，由于各地光周期的差异，不同地区就需要选择不同类型的光敏感 材料以适应当地的光照条件。在这种情况下，筛选不受光周期影响的控制抽穗期的基因就 显得尤为重要。
[0005]
【发明内容】
[0006] 为了解决以上技术问题，本发明提供一种控制植物抽穗期基因具有如 SEQ. ID. NO. 1所示的核苷酸序列，或至少80%同源性的序列，以及上述DNA片段编码的蛋 白或经过修饰改造的具有相同功能的蛋白，将基因转入植物中获得了抽穗开花 明显提前的品种，且不受长日照或短日照影响，均表现稳定。为培育适应性广、生育期短的 水稻提供了新的基因资源。
[0007] 本发明中，基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用，通过 基因，SEQ. ID. No. 1或与其功能等同的同源基因在水稻植株中超量表达，使其 蛋白基因的序列具有SEQ ID NO. 2所示氨基酸序列至少80%同源性的序列，来达到调控植 株的抽穗期从而提高农作物地区适应性、杂交亲本的花期调节和提高作物产量。
[0008] 所述AtNF-YB-I基因序列是通过植物表达载体导入植物中，所述植物表达载体为 在载体pCXUN的多点克隆位点间插入所述AtNF-YB-I基因得到的植物过表达载体。
[0009] 所述植物为水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜蓿等。
[0010] 本发明中AtNF-YB-I基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用，其特征在 于：包括以下步骤： (1) 根据AtNF-YB-I基因序列设计PCR扩增引物对，其引物序列为：002-F : 5'-GGGTTTCCATCTTCCCCAATCTAG-3'，002-R :5'-GCAACTTCTTTTACCA GCTCGGC-3，； (2) 以拟南芥cDNA为模板，利用上述引物，通过PCR扩增获得AtNF-YB-I基因全序列； (3) 将PCR产物克隆至pCXUN载体上，经测序正确，得到植物表达载体 VCWM-AtNF-YB-U (4) 采用冻融法将植物表达载体pCXUN-AtNF-YB-1导入农杆菌中成工程菌； (5) 采用根癌农杆菌介导法、直接DNA转化法将载体pCXUN- J?Λ^-7^-7导入植物中，筛 选获得转基因植物。
[0011] 步骤（5)中采用根癌农杆菌介导法为利用将带有AtNF-YB-I基因的植物表达载体 转入植物愈伤组织中，转化后的材料经过共培养、脱菌、筛选、分化、生根、壮苗和移栽，筛选 转基因植物植株。
[0012] 所述AtNF-YB-I基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中应用的工程菌，其特征 在于：所述工程菌含有植物表达载体PCXUN-AtNF-YB-I的工程菌。
[0013] 所述工程菌含有植物表达载体pCXUN-AtNF-YB-1的农杆菌LBA4404,具体为 LBA4404- pCXUN-AtNF-ΥΒ-Ι〇
[0014] 本发明的优点在于： (1) 利用本发明基因转化植物，可培育出抽穗开花早的植物品种，为调控植 物生育期提供了新的基因资源； (2) 利用基因进行转基因育种可缩短育种周期； (3) 本发明转基因植物，比如水稻，不管是在长日照地区还是短日照地区， 均能促进抽穗开花10-15天，因而利用该基因所培育的植物适应性广、生育期短，能适应不 同生态型和季节性。
[0015] 本发明将基因转入植物，比如水稻中获得了抽穗开花明显提前的品 种，且不受长日照或短日照影响，均表现稳定。为培育适应性广、生育期短的水稻提供了新 的基因资源。
[0016] 本发明利用基因在植物，比如水稻中过表达，得到了生育期明显缩短 (10-15天）的植株，且不受长日照或短日照的光周期影响。为培育短生育期、适应不同生态 型和季节型的水稻品种提供了一条新的途径。
[0017]
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1为J基因的PCR扩增产物电泳图谱，其中M为DNA marker。
[0019] 图2为重组质粒pCXUN-J ?Λ^-7Α-7检测目的基因 J 的PCR扩增产物电 泳图谱，其中M为DNA marker ;Ρ为回收产物为模板的阳性对照；N为不加模板的空白对照； 1，2分别为不同的单菌落。
[0020] 图3为重组质粒pCXUN-JiM^-7沒-7经feMl I的酶切验证电泳图，其中M为DNA marker〇
[0021] 图4为pCXUN-J质粒表达载体构建示意图。
[0022] 图5为水稻遗传转化流程图，其中A为诱导的愈伤组织；B为抗性愈伤组织筛选； C为抗性愈伤分化初期；D为抗性愈伤分化出苗；E为生根培养。
[0023] 图6为用φ?/J引物和对TO代分化植株进行PCR检测的电泳图谱， 其中A为φ? JJ PCR检测结果；B为PCR检测结果；M为DNA marker ;Ρ为质粒 pCXUN-A，H7为模板；N为非转基因水稻Kasalath总DNA为模板；1、2、3、4为4个独立 的潮霉素抗性再生植株。
[0024] 图7为转基因植株mRNA表达水平的检测，其中WT为非转基因水稻 Kasalath总RNA杂交结果；Pl、P2、P3、P4为4个独立的转基因株系。
[0025] 图8为6-BA和Hyg溶液处理叶片结果，其中A为二叶龄叶片处理结果；B为四叶 龄叶片处理结果。
[0026] 图9为T-DNA在水稻基因组的整合情况示意图，其中002A、002B、002C分别表示不 同转基因株系，A、B、C、D、E分别表示水稻基因组上的不同编码基因。
[0027] 图10为转基因水稻盆栽试验，其中WT为非转基因水稻Kasalath品种；002C为一 个转基因株系。
[0028] 图11为转基因水稻在田间表型，其中A为在成都种植；B为在海南种植；WT为非转 基因水稻Kasalath品种；002A为一个转基因株系。
[0029] 图12为转基因植株与非转基因植株抽穗时间比较，其中WT为非转基因植株； 002A、002B、002C :为不同的转化株系；A表示2013年夏季在四川省成都市取样调查结果；B 表示2012年冬季在海南省陵水县取样调查结果。
[0030]
【具体实施方式】
[0031] 实施例1 基因的克隆 按照如下步骤进行： 目的基因片段的扩增根据Genbank上基因序列，利用Primer5. 0软件分别 设计目标基因的上游和下游引物，以拟南芥cDNA为模板，进行PCR扩增，所述引物序列为： 002-F :5'-GGGTTTCCATCTTCCCCAATCTAG-3'，002-R :5'-GCAACTTCTTTTACCA GCTCGGC-3'。PCR 反应体系为：拟南芥 cDNA 2 μ L，10XPCR Buffer 5 μ L，dNTP Mixture (2.5 mM) 4 μ L，002 引物（10 μ Μ,北京华大基因）1 μ L，ExTaq (5 U/μ L) 0.5 μ L，补ddH20至50 μ L，所用PCR试剂购自TakaRa公司。PCR反应条件：94°C预变性4 min ; 94°C变性30 s，55°C退火30 s，72°C延伸30 s，30个循环；72°C总延伸8 min。电泳检测， 结果(见图1)所得PCR扩增产物大小约为500 bp，切下目的条带，用胶回收试剂盒(Axygen 公司）进行胶回收，按照试剂盒说明书进行。
[0032] 实施例2 植物表达载体pCXUN-Ji#/^-7A-7的构建 按照如下步骤进行： (1)重组质粒pCXUN-Ji#/^-7A-7的连接 用ZcM (美国NEB公司)双酶切pCXUN质粒4h将质粒上cco?因切除，并获得含T的 粘性末端，酶切反应体系：10 XNEBuffer2 5 μ L，ZcM 1 μ L, pCXUN 质粒 15 μ L，加 CldH2O 至50 μ L，电泳检测酶切后为两条带，一条大带11000 bp左右，另一条小带约700 bp，切胶 回收大条带，用胶回收试剂盒(Axygen公司）进行。将回收后的质粒大条带(含T的粘性末 端）与实施例1所得基因片段回收产物(含A尾）进行连接：质粒DNA和基因片段DNA的摩 尔数比为0. 03 pmol:0. 1~0. 3 pmol，按照测定浓度加入相应体积的回收产物混合至5 yL， 再加入5 yL等体积的SolutionI (TakaRa公司DNA Ligation试剂盒）充分混勻，16 °C 连接过夜。
[0033] (2)连接产物转化大肠杆菌 操作步骤如下： ① 取上述方法新鲜制备的感受态细胞，或从-70 °C冰箱中取出一管感受态细胞（50 μ L)，冰上自然融化； ② 将5-10 μ L DNA的连接物加入一管感受态细胞中，轻轻混匀后放置冰上30 min ; ③ 42 °C水浴中热激恰恰45 sec，迅速取出立即放于冰上2 min; ④ 室温恢复3~5 min左右，加入800 --L 37 °C预热的LB液体培养基，37 °C、180 rpm 培养1-2 h ; ⑤ 培养菌液于室温4000 rpm离心10 min，去掉800 --L上清液，将剩余的50 --L菌 液混匀，全部加入含相应抗生素的LB固体平板上； ⑥ 用无菌的涂布棒将菌液均匀涂布，晾于超净台上30 min左右至菌液完全被培养基 吸收； ⑦ 37 °C倒置暗培养12-14 h。
[0034] (3)重组质粒的鉴定 于转化次日挑取转化子于LB+Kan进行液体培养，同时进行菌落PCR检测，引物为002， PCR反应体系同实施例1中，将反应条件中预变性时间增至8 min，选取菌落PCR检测为阳 性(如图2)的克隆扩大培养，提取质粒(步骤按Axygen质粒抽提试剂盒操作)，用I进 行酶切鉴定，酶切产物与预期片段大小一致（如图3)，初步表明基因片段已经整 合进pCXUN载体，再将质粒送去测序，经测序结果验证插入的片段正确。将构建好的植物表 达载体命名为pCXUN- 沒-7 (其构建示意图见图4)。
[0035] (4)重组质粒pCXUN-JiM^-7S-7转化农杆菌 首先是制备农杆菌感受态，操作步骤如下：取本实验室-70 °C保存的农杆菌LBA4404 用YEP+40 mg.L-1 Rif+50 mg· L-1 Str固体培养基划单菌落活化第一次，再挑取单菌落 用YEP+40 mg.171 Rif+50 mg· Γ1 Str液体培养基活化至第二次0D600=0.3~0.5可用于 农杆菌感受态细胞的制备：①将菌液冰浴30 min ;②取I mL菌液于I. 5 mL EP管中，4 °C 5000 rpm离心5 min，去上清；(D用灭菌的0. I M CaCl2 (预冷）400 μ L悬浮菌体(用移液 枪轻轻打匀）;@冰上放置30 11^11，4 1：5000印111离心5 1^11，去上清；?用50~100以1^预 冷的0.1 M CaCl2悬浮菌体，4 °C保存10 h备用或者加20-30%的灭菌甘油混匀，液氮速冻 后于-70 °C保存。
[0036] 将构建好的重组质粒pCXUN-J采用冻融法导入制备好的农杆菌LBA4404 感受态细胞中：①取重组质粒10 μ L (3-5 μ g)，加入一管100 μ L的LBA4404感受态细 胞中，轻轻混匀；②立即冰上放置30 min，迅速投入液氮中2 min;③迅速放入37 °C水浴至 完全融化；?加入800 μ L无抗生素的YEP液体培养基，轻轻混匀；振荡培养活化（28 °C， 200 rpm, 3-5 h);⑤室温离心（4000 rpm, 5 min),去上清，余下100 μ L菌液重悬菌体混勻； ⑥将100 μ L重悬活化菌液均匀涂布到YEP+40 mg · Γ1 Rif+50 mg · Γ1 Str+100 mg · Γ1 Kan固体筛选培养基平板上；⑦28 °C培养箱中倒置培养2~3天至长出菌落大小适中，挑选 抗性单菌落在含YEP+40 mg *L 1 Rif+50 mg · L 1 Str+100 mg · L 1 Kan液体培养基中培养。 ③当培养菌液达到一定浓度后做目的基因(引物为002)和抗性标记基因潮霉素 Hygr的PCR检测(检测目的基因的PCR体系和条件同前，潮霉素 Hygr的PCR检测方法与目 的基因类似，引物为 HptII-F :5' -CGATTTGTGTACGCCCGACAGTC-3' ；HptII-R :5' -CGATGTAGGA GGGCGTGGATATG-3'）。将构建好的工程菌命名为 LBA4404- pCXUN-JiM^-Z沒-7。
[0037] 实施例3 遗传转化水稻 采用根癌农杆菌介导的方法，将导入水稻愈伤组织，经潮霉素 B筛选获得转 基因植株，所用基本培养基Ν6和MS salts购自PhytoTechnology Laboratories。
[0038] 转化步骤如下(转化流程见图5): ①水稻成熟胚愈伤组织的诱导培养：去壳的水稻成熟种子先用70%乙醇浸泡30秒，然 后用〇. 1%升汞浸泡8-10 min，进行表面灭菌（最好在摇床上进行），无菌水冲洗7-8次，再 将种子放在无菌滤纸上吸干水分后，放在成熟胚愈伤诱导培养基CM上，光照周期为：33°C 光照14 h，30 °C暗培养10 h。约10-15天后，剥下成熟胚盾片长出的愈伤组织，转入成熟 胚继代培养基CIM上，在相同条件下继代培养。以后每两周继代培养一次。浸染前三天，将 愈伤组织切成2-4毫米大小转至新的诱导培养基上进行预培养。
[0039] ②农杆菌的培养和准备：将农杆菌LBA4404- pCXUN-JiM^-ZS-i在LB+50 mg/L Str+100 mg/L Kan平板上划线，19°C暗培养三天。用接种环挑取少量菌悬浮于15毫升浸染 培养基頂+100 μ M AS中，调整菌体浓度0D550=0. 06-0. 08,即为转化水稻用的农杆菌悬浮 液。
[0040] ③农杆菌浸染与共培养：将预培养的水稻愈伤组织接入15毫升浸染培养基 +100 μ M乙酰丁香酮中预洗一遍倒掉液体，再将准备好的15毫升农杆菌悬浮液倒入，轻轻 摇动2分钟。倒掉菌液，将愈伤组织放在无菌滤纸上吸去多余菌液，随即转入共培养基上， 19 °C暗培养三天。
[0041] ④洗菌与抗性愈伤组织的筛选：将共培养三天后的愈伤组织，先用无菌水洗7-8 次，再用浸染培养基+250mg/L羧苄青霉素+10mg/L万古霉素洗一次，将愈伤组织放在无菌 滤纸上吸去多余的液体，转入加筛选培养基SM上（33°C光照14 h，30 °C暗培养10 h)，每14 天继代一次，筛选2次。
[0042] ⑤抗性愈伤组织的分化：从经两轮筛选后长出的抗性愈伤组织中，挑选乳黄色致 密的抗性愈伤组织转至含有分化培养基RMI上，约14-20天左右有绿点出现，30天左右进一 步分化成小苗。
[0043] ⑥转基因苗生根、壮苗、移栽：当抗性愈伤组织分化的芽长至约2-4厘米时，将小 苗移到生根培养基上，培养两周左右再转至壮苗培养基上培养2-3周。选择高约10厘米、 根系发达的小苗，用温水洗去培养基，在温室内移栽入土。水面以不淹没小苗为度，如果天 晴，需要遮荫到小苗成活（以吐水为准)。
[0044] 实施例4 TO代转基因植株的分子生物学检测 (1)转化植株的PCR检测 经实施例3 -共获得42株转化植株，用CTAB法提取DNA (操作步骤参照《分子克隆实 验指南》（第二版）（J.萨姆布鲁克等人，1992))，以潮霉素抗性基因尽J/和沒-7 的特异引物对转化植株进行常规PCR检测。分别以非转基因水稻Kasalath总DNA和质粒 pCXUN-Ji，H7为模板，在相同条件下进行PCR扩增作为阴性和阳性对照。经鉴定筛选获 得了 38株阳性植株(部分植株PCR检测结果见图6)。
[0045] (2)阳性植株的Northern检测 对PCR鉴定为阳性的部分植株，取叶片提取RNA (步骤按天根生化科技有限公司 TRNzol-A+总RNA提取试剂说明书进行)，进行Northern杂交(步骤按Roche DIG-Northern Starter试剂盒说明书进行)，检测目的基因 mRNA表达水平，以非转基因水稻 Kasalath为阴性对照(部分结果见图7)。
[0046] 实施例5转基因植株后代遗传分析及田间性状调查 (1)转基因植株后代遗传分析 对转基因植株后代进行分离比鉴定，采用6-苄氨基腺嘌呤（6-BA)和潮霉素 B (Hyg) 溶液浸泡叶片的方法，每个株系随机选取20株植株，剪取I cm左右的叶子浸泡在I. 0 mg/ L 6-BA +50 mg/L Hyg溶液中，25 °C，16h光照/8h黑暗放置4天后观察叶片状况，记录叶 片绿色和黄色的比例，转基因阳性植株的叶片仍为绿色，而非转基因植株叶片部分或全部 变黄或变褐。筛选符合3:1孟德尔遗传规律的株系(单拷贝植株)。并随机选取Hyg浸泡后 为绿色和黄色的植株提取DNA，进行PCR验证结果。对T2代植株采用同法鉴定，筛选全部为 阳性的株系，即为单拷贝的纯合株系，用于后续实验。最终筛选获得了 11个单拷贝转基因 株系，部分Hyg溶液处理叶片结果见图8。
[0047] (2) T-DNA插入转基因植株基因组位置的确定 对得到的11个单拷贝纯合转基因株系，通过Tl代和T2代田间小量种植，我们发现 这些株系相对非转基因水稻Kasalath均有不同程度提前抽穗开花的特性。选取三个表型 最明显的株系，命名为002A、002B、002C，对其进行T-DNA在基因组上的整合位置的分析。 分别提取基因组DNA，采用feoRI和历·α1ΙΙΙ双酶切DNA，再在酶切片段的两端连入接头， 通过用接头引物和T-DNA上特异引物PCR，将PCR产物测序，从而获得T-DNA在基因组上 侧翼序列信息（具体步骤参照 O'Malley RC, Alonso JM, Kim CJ, et al. An adapter ligation-mediated PCR method for high-throughput mapping of T-DNA inserts in the Arabidopsis genome. Nature protocols, 2007，2(11): 2910-2917·)。结果显不， 这三个株系T-DNA整合在水稻基因组的不同位置，插入位置示意图如9。结果证明，这三个 株系为不同的独立转化事件，并且其共有表型(抽穗提前)不是由T-DNA插入突变所致，而是 由转入的基因引起的。
[0048] (3)田间性状调查 将002A、002B、002C三个株系的T3代种子和非转基因水稻Kasalath分别种植在四川 省成都市(夏季，自然长日照）和海南省陵水县英州镇(冬季，自然短日照)，种10X10株，三 个重复。随机各取30株调查抽穗时间，结果表明，无论在成都还是海南，转基因株系都比对 照提前抽穗10-15天左右（图10)。证明基因能促进水稻抽穗提前、缩短生育期， 而且不受光周期调控，具有很好的地区适应性。
[0049] 我们还对2013年在成都种植材料进行了其他农艺性状调查，如株高、有效分蘖 数、穗长、枝梗数等(如表1)。由表1可知，转AtHAP3a基因的植株平均株高比对照矮20多 cm，呈极显著差异（P < 0. 01)，且穗长、枝梗数、穗粒数、单株谷粒重和千粒重都极显著低于 非转基因植株，但是有效穗数与对照差别不明显(除002C株系)。所有这些变化可能都是由 于抽穗期缩短，使得营养生长期缩短，从而积累的营养物质也减少所致。
[0050] 表1.转基因植株与非转基因植株农艺性状调查表
【权利要求】
1. AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用，所述AtNF-YB-1基因 的序列如SEQ. ID. NO. 1所示的核苷酸序列。
2. 根据权利要求1所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用， 其特征在于：所述AtNF-YB-1蛋白基因的序列如SEQ. ID. NO. 2所示的氨基酸序列。
3. 根据权利要求1所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用， 其特征在于：所述AtNF-YB-1基因序列是通过植物表达载体导入植物中，所述植物表达载 体为在载体PCXUN的多点克隆位点间插入所述AtNF-YB-1基因得到的植物表达载体。
4. 根据权利要求1所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用， 其特征在于：所述植物为水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜蓿。
5. 根据权利要求1-4中任一项所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育 期中的应用，其特征在于：包括以下步骤： (1) 根据AtNF-YB-1基因序列设计PCR扩增引物对，其引物序列为：002-F :5'-GGGTTTCCATCTTCCCCAATCTAG-3'，002-R :5'-GCAACTTCTTTTACCA GCTCGGC-3，； (2) 以拟南芥cDNA为模板，利用上述引物，通过PCR扩增获得AtNF-YB-1基因全序列； (3) 将PCR产物克隆至pCXUN载体上，经测序正确，得到植物表达载体 vC\\M-AtNF-YB-U (4) 采用冻融法将植物表达载体pCXUN-AtNF-YB-1导入农杆菌中成工程菌； (5) 采用根癌农杆菌介导法将载体pCXUN- 导入植物中，筛选获得转基因植 物。
6. 根据权利要求1所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中的应用， 其特征在于：步骤（5)中采用根癌农杆菌介导法为利用将带有AtNF-YB-1基因的植物表达 载体转入植物愈伤组织中，转化后的材料经过共培养、脱菌、筛选、分化、生根、壮苗和移栽， 筛选转基因植物植株。
7. 根据权利要求1所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中应用的 工程菌，其特征在于：所述工程菌含有植物表达载体pCXUN-AtNF-YB-1的工程菌。
8. 根据权利要求7所述的AtNF-YB-1基因在促进植物抽穗提前、缩短生育期中应用的 工程菌，其特征在于：所述工程菌含有植物表达载体pCXUN-AtNF-YB-1和农杆菌LBA4404， 具体为 LBA4404- pCXUN-AtNF-YB-1。
【文档编号】C12N1/21GK104498505SQ201410742140
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】陈克贵, 彭梅芳 申请人:四川省农业科学院生物技术核技术研究所