一株蜡状芽孢杆菌及其应用的利记博彩app
【专利摘要】一株蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)及其应用，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2012年12月10日，保藏登记编号为：CGMCC No.6967。所述蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)在生产普鲁兰酶中的应用。CGMCC No696720121210
【专利说明】一株蜡状芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物领域，具体涉及一种产普鲁兰酶的蜡状芽孢杆菌和利用该菌株 生产普鲁兰酶的应用。
【背景技术】
[0002] 普鲁兰酶（Pullulanase，EC. 3. 2. 1. 41)与其他淀粉酶只能水解α -1，4-糖苷键 不同，是一种能够专一性切开支链淀粉分支点中的α-1，6糖苷键，从而剪下整个侧枝，形 成直链淀粉的脱支酶。它可以将最小单位的支链分解，最大限度的利用淀粉原料，因此在淀 粉加工工业中有着重要的用途。同时随着普鲁兰酶在淀粉加工行业中的研究日益广泛和深 入，它可与α-淀粉酶，β-淀粉酶等糖化酶合用，提高葡萄糖浆，超高麦芽糖浆的产量。在 啤酒生产过程中，加入普鲁兰酶也可以提高糖利用率，缩短糖化的时间。当前普鲁兰酶是应 用于高葡萄糖浆、高麦芽糖浆和干啤酒生产以及医药等工业生产中重要的酶制剂。
[0003] 普鲁兰酶的工业化生产菌株极少，到目前为止仅有丹麦Novo公司的嗜酸普鲁兰 芽胞杆菌（Bacillus acidopullulyticus)的工业化生产工艺有报道，该菌株生产的商品名 为Pormoyzme的酶制剂是目前国际上唯一商品化的普鲁兰酶，并且市场份额约占中国乃至 世界95%以上。由于我国淀粉资源丰富，加之普鲁兰酶在食品工业、发酵、洗涤和纺织等行 业有重要的应用，而目前我国淀粉工业中使用的普鲁兰酶大多都是从国外进口，成本较高， 大大限制了普鲁兰酶的应用。
[0004] 目前，国内普鲁兰酶的研究主要从三个方面进行：一是产普鲁兰酶菌种的分离、筛 选及结合物理、化学因素的诱变；二是产碱性普鲁兰酶的研究，由于碱性普鲁兰酶可作为衣 物洗涤剂和去污剂的有效添加成分应用于洗涤剂工业中，它拓宽了普鲁兰酶在工业生产中 的应用范围；三是耐热型耐酸型普鲁兰酶基因的克隆、测序和表达。主要是在大肠杆菌或芽 孢杆菌中进行表达相关普鲁兰酶基因的表达研究。近年来，科技工作者开始从不同的来源 的基质中分离筛选各种耐酸耐热的类型的产极端耐热普鲁兰酶菌株，如嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillus stearothermophilus)，厌氧古菌（Thermococcus siculi)等。这些耐热耐酸菌 属所产的普鲁兰酶大多数都是胞内酶，而且该菌属的发酵工艺非常困难，酸热稳定性方面 都有一些欠缺，不适应现行酶法水解淀粉（PH4. 0-4. 5,65°C )的生产条件，并且这些菌株的 普鲁兰酶的活力还未得到很大提高。我国普鲁兰酶的研究至今仍限于实验室研究阶段，未 见工业化应用的报道，工业上添加的普鲁兰酶均是依赖进口，所以研究和开发出具有自主 知识产权的普鲁兰酶产品具有重要的意义和良好的市场前景。
[0005] 虽然已有蜡状芽孢杆菌普鲁兰酶基因专利的报道（中国专利申请201210008693. X)，其公开了一种蜡样芽胞杆菌普鲁兰酶基因及其应用，其分泌的普鲁兰酶最适反应PH在 6. 0?7. 5,最适反应温度为50°C。但是相比本发明得到的菌株JS194与其记载的Bacillus cereus GXBC-I菌株除分类地位相距较远外，经检测普鲁兰酶活性也有差异，本发明菌株 JS194粗酶的最适温度为55°C，最适pH为7. 5 ;在pH6. 5?7. 5、温度50?65°C之间较为 稳定。考虑到微生物的多样性以及酶学差异与其应用领域亦有不同且目前没有应用于工业 生产的报道，该菌株具有潜在的应用价值。
【发明内容】
[0006] 解决的技术问题：本发明提供一种蜡状芽孢杆菌和利用该菌株生产普鲁兰酶的应 用。
[0007] 技术方案：一株錯状芽胞杆菌（Bacillus cereus)，该菌株保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期 为2012年12月10日，保藏登记编号为：CGMCC No. 6967。
[0008] 该菌株的16SrRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示。
[0009] 所述錯状芽胞杆菌（Bacillus cereus)在生产普鲁兰酶中的应用。
[0010] 发酵条件为：温度20?30°C，pH 6.0?8,时间为24?48h，溶氧：摇瓶转速180? 250rpm，碳源选自：糯米淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、木薯淀粉或可溶性淀粉，初始浓度为 10 ?30g/L。
[0011] 所述发酵条件优选为：温度为30°C、初始pH7. 0、时间为48h。
[0012] 本发明蜡状芽孢杆菌（JS194)CGMCC No. 6967在LB琼脂平板上划线，30°C培养24h 后观察菌落直径5-7_，呈圆形或近似圆形、边缘扩展、质地软、无色素、稍有光泽的白色菌 落如图1所示。
[0013] 本发明的菌株JS194革兰氏染色为阳性，形成芽孢（见图2)。
[0014] 本发明蜡状芽孢杆菌JS194的生理生化特征见下表1 :
[0015] 表I TS194菌株的牛理牛化特件
[0016]
【权利要求】
1. 一株錯状芽胞杆菌（Bacillus cereus)，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2012年 12月10日，保藏登记编号为：CGMCC No. 6967。
2. 根据权利要求1中所述的蜡状芽孢杆菌，其特征在于该菌株的16SrRNA的核苷酸序 列如SEQ ID NO. 3所示。
3. 权利要求1所述錯状芽胞杆菌（Bacillus cereus)在生产普鲁兰酶中的应用。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于发酵条件为：温度20?30°C，pH 6. 0?8， 时间为24?48h，溶氧：摇瓶转速180?250rpm，碳源选自：糯米淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、 木薯淀粉或可溶性淀粉，初始浓度为10?30g/L。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵条件为：温度为30°C、初始 pH7. 0、时间为 48h。
【文档编号】C12R1/085GK104388357SQ201410714161
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】曹喜涛, 张建平, 张国政, 季更生, 陈欣, 沈兴家 申请人:江苏科技大学