一种用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法
【专利摘要】一种用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法，以常规方法获得的甘蔗幼叶切片作外植体，常规消毒后，以精胺作愈伤组织诱导剂；按常规配制的MS固体培养基的方法，添加Spm.1.5mg·L-1～3.0mg·L-1，调pH5.8～6.0；常规灭菌，接种；在常规的培养条件下诱导甘蔗愈伤组织，10d出愈率达29％-43％，25d出愈率达77％-85％，同样条件下收获愈伤组织鲜重是2,4-D组(CK)的1-4倍。用本发明的方法所获得愈伤组织的褐变与板结都很轻微，品质优越；出愈速度快，效率高；精胺价格便宜，且中途无需更换新培养基,节省大量劳力和培养基，可以降低生产成本，适宜在科研及规模化生产中推广应用。
【专利说明】一种用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属植物生物技术的组织培养【技术领域】，尤其是一种用精胺获得甘蔗愈伤组 织的方法。 技术背景
[0002] 甘蔗是人类最重要的甜味剂作物。甘蔗良种的快速繁育及与甘蔗相关的各种现代 生物技术体系的研究和建立，几乎都需要先通过组织培养技术诱导外植体脱分化获得愈伤 组织为基础。自甘蔗组织培养技术建立以来，业内普遍都是以2, 4-D (2, 4-二氯苯氧乙酸） 作为甘蔗愈伤组织的诱导剂【甘蔗组织培养研究综述[J]广西热作科技黄惠芳1998,（2): 33-37】，【甘蔗组织培养研究进展[J]安徽农业科学杨柳等2007. 35(12) :3490-3492】。但 是，2, 4-D属人工合成的苯衍生物，有明显的毒性和残留，极易使刚获得的愈伤组织迅速褐 变（亦称酚害或酚污染）和板结，甚至死亡，成功率甚低。为此技术人员不得不耗费很多 时间，频繁地更新培养基以淡化2, 4-D的毒性危害【浅析甘蔗组培中的酚害[J]甘蔗秦廷 豪等1997(02) :12-14】；【甘蔗组织培养中褐变的研究进展[J]福建甘蔗李海明等2003(2) 18 - 21】。近年，蓝桃菊和陈念平等用LFS(灵发素，代号PGR-08)成功建立了全新的、能 高效优质获得甘蔗愈伤组织的技术体系【一种用灵发素诱导甘蔗愈伤组织的方法中国专 利号ZL 201010216180. 9】；【灵发素（LFS)对诱导甘蔗愈伤组织的影响[J]种子陈念平 等2013, 32(11) :1-2】。然而，LFS在国内尚无生产厂家，进口制剂价格十分昂贵，难以推 广应用。所以探索优质高效廉价获得甘蔗愈伤组织的新技术一直是业内人士关心的热点。 精胺（Spermine，，Spm.)是多胺的一种，具有植物生长调节物质的生理活性，并广泛存在 于高等植物界，是纯天然物质【多胺是植物生长发育的调节物[J]植物生理学通讯潘瑞炽 1985(6) :63-68】。人们对其促进植物生长、延缓衰老、增强抗逆能力等方面的研究，已有不 少成果。但是，尚未检索到精胺用于诱导甘蔗愈伤组织这一重要生物【技术领域】的研究资料。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法。
[0004] 本发明以如下技术方案解决上述技术问题：
[0005] -种用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法，包括如下步骤：
[0006] 以常规方法获得甘蔗幼叶切片作外植体，并常规消毒，以精胺作愈伤组织诱导剂； 按常规配制的MS固体培养基，添加Spm. I. 5mg ·厂1?3. Omg · I71，调ρΗ5· 8?6. 0 ;常规 灭菌，接种；在常规培养条件下诱导甘蔗愈伤组织，IOd出愈率达29% -43%，25d出愈率达 77% -85%。
[0007] 精胺诱导甘鹿愈伤组织的最适宜浓度是2. Omg · Γ1-〗· 5mg · I71·
[0008] 本发明用于甘蔗愈伤组织的诱导，所获得愈伤组织的褐变与板结都很轻微，品质 优越；出愈速度快，效率高，IOd出愈率即达29%以上，25d出愈率可达80%以上，同一条件 下收获愈伤组织鲜重是CK组的1-4倍；精胺价格便宜（国产每克人民币约500元，不足灵 发素的1/400)，且诱导培养中途无需更换新培养基，节省大量劳力和培养基，生产成本低 廉，适宜在科研及规模化生产中推广应用。
【具体实施方式】
[0009] 以下通过实施案例对本发明的技术方案作进一步说明。若未特别指明，实施例中 所用的技术手段皆为本领域技术人员的常规手段。
[0010] 本发明所述用精胺诱导甘蔗愈伤组织的方法包括以下步骤：
[0011] 依常规方法剥取甘蔗末梢靠内部的蛋黄色幼叶，分切成大约〇. 5cmX0. 5cm的切 片，分别接种到含有Spm. I. 5mg · Γ1?3. Omg · Γ1的各组改良型MS固体培养基中，在常规 培养条件下进行甘蔗愈伤组织诱导和培养。
[0012] 在表1中，例1为对照组（CK);例2-5为添加不同剂量Spm.的处理组。各组所用 外植体材料、操作步骤及培养条件皆相同。
[0013] 表I. Spm.和2, 4-d诱导甘鹿幼叶愈伤组织效果的对比
【权利要求】
1. 一种用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法，其特征是以常规方法获得的甘蔗幼叶切片作 外植体，常规消毒后，以精胺作愈伤组织诱导剂；按常规配制的MS固体培养基的方法，添加 Spm. 1. 5mg吨4?3. Omg吨'调pH 5. 8?6. 0 ;常规灭菌，接种；在常规的培养条件下诱导 甘蔗愈伤组织，l〇d出愈率达29% -77 %，25d出愈率达77% -85%。
2. 如权利要求1所述的用精胺获得甘蔗愈伤组织的方法，其特征是精胺诱导甘蔗愈伤 组织的最适宜浓度是2. Omg ? 1^-2. 5mg ? I71。
【文档编号】C12N5/04GK104388379SQ201410679433
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月24日 优先权日:2014年11月24日
【发明者】许鸿源, 周凤珏, 蓝桃菊, 龚银花, 梁琼月, 许皓翔 申请人:广西大学