一种高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了一种高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其在白酒酿造中的应用，所述亮白曲霉已于2014年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号是CGMCC No.8900。所述菌株能够同时高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，属于微生物和发酵工程领域。经固态制曲，可以高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒酿造中淀粉和蛋白的利用率，使用该霉菌可以提高白酒的出酒率并保持较好的风味。CGMCC No. 89002014.03.07
【专利说明】一种高产糖化酶、ct -淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及 其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种亮白曲霉及其应用，特别是一种利用亮白曲霉在提高酿酒过程中 酒精产率工艺中的应用。
【背景技术】
[0002] 细菌、酵母和霉菌是中国白酒酿造过程中的三大类微生物，其中霉菌能够分泌多 种酶类并降解淀粉、蛋白质等大分子物质，为细菌和酵母的生长和发酵提供物质基础。霉菌 同时也能够分泌一些酯化酶和代谢产物，对中国白酒的风味也有一定的影响。中国白酒传 统酿造过程中是开放式生产，过程中涉及到复杂的霉菌群落；复杂的霉菌群落既能产生了 丰富的酶系，对白酒酿造有着正面贡献，但一些环境中有害的霉菌也可能被涉及，给白酒产 品的质量带来了潜在的风险。
[0003] 纯种霉菌的筛选和使用已经是行业的一种趋势，纯种霉菌麸曲能够代替部分大 曲，提高白酒生产的出酒率，控制有害微生物的潜在危险。目前白酒生产中常用的霉菌有河 内白曲霉（Aspergillus kawachii)、米曲霉（Aspergillus oryzae)等，这些筛选的霉菌具 有较高的糖化力，提高了出酒率。但是传统筛选麸曲霉菌只以糖化酶为指标，所得菌株酶系 较为单一，生产的麸曲白酒的酒质比大曲酒差，通常只能用于生产中低端白酒。
[0004] 糖化酶、α -淀粉酶都能够降解淀粉，他们的含量和比例会控制发酵进程的速度， 控制发酵温度过快上升，使得整个微生物群落正常演变，保证白酒发酵的正常进行。白酒酿 造的主要原料高粱的成分除了淀粉之外，蛋白质也是一个重要的成分（8% -10% )，是酵母 细菌生长的重要物质基础，也是形成风味物质的重要前体。同时，中国白酒发酵体系是一个 偏酸的环境，在发酵结束的时候pH最低能够达到3. 5,因此酸性蛋白酶也在白酒发酵过程 中起到了重要的作用。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种高产糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶的 亮白曲霉及其在酿造白酒中的应用，以适应白酒发酵的过程，提高酒精的产率。
[0006] 本发明所得亮白曲霉的ITS rDNA序列，在GenBank中进行Blast对比确定其种属， 与其同源序列最高的菌株分别为（Aspergillus candidus)，相似度为98%和98%。
[0007] 所述亮白曲霉在PDA培养基上生长，菌落开始为白色，圆形，向四周扩散，然后从 菌落中间开始产生白色孢子，最后整个菌落全部变成白色。菌丝白色，纤细，分生孢子；菌落 背面略带黄色。本菌株适应性很强，孢子在PDA培养及平板上30°C萌发，培养3d，菌落直径 为4.2_6.5cm。上述亮白曲霉（Aspergillus candidus)于2014年3月7日保藏至中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No. 8900,保藏地址为北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0008] 本发明菌株高产糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶，其发酵工艺为：
[0009] 种子（PDA)培养基：马铃薯先洗净去皮，再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂 (煮沸20-30min)用八层纱布过滤，加20g琼脂，葡萄糖20g，再补足水分至1000毫升，121 °C 灭菌20min冷却后贮存备用；
[0010] 发酵培养基：称取新鲜麸皮（或者其他粉碎原料）并加水，使水分含量约为50%， 121°C 灭菌 20min ;
[0011] 种子培养方法：挑取一环亮白曲霉的孢子，接种于种子培养基斜面，30°C培养 3d-7d ；
[0012] 发酵培养方法：250ml锥形瓶装培养基20g，将活化的孢子悬浮液接入灭过菌的发 酵培养基并使最终浓度为5 X 106个/g麸皮，30°C静止培养48h-72h。
[0013] 测定酶活如下：
[0014]
【权利要求】
1. 一种高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉（Aspergillus candidus), 于2014年3月7日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8900〇
2. 权利要求1所述亮白曲霉（Aspergillus candidus)在白酒酿造中的应用。
3. 权利要求2所述的应用，其特征在于所述亮白曲霉高产糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋 白酶，能增加白酒酿造中淀粉和蛋白的利用率，改善出酒率。
4. 权利要求2或3所述的应用，其特征在于可以将活化的亮白曲霉孢子悬浮液接种至 固体培养基，接种浓度为1-5 % w/w，在25-35°C环境中固态发酵32-72h，制成固态菌制剂， 再将固态菌制剂作为种子接种到曲池中进行扩大培养24-72h，二级种子按照5-20 % w/w接 种量加入白酒生产中。
5. 权利要求2所述的应用，其特征在于可以将活化的亮白曲霉孢子悬浮液接种于灭菌 的液态培养基，接种浓度为1-5% w/w，25-35°C培养24h-72h，制成液态菌制剂，再将液态菌 制剂作为种子接种到曲池中进行扩大培养24-72h，二级种子按照5-20% w/w接种量加入白 酒生产中。
6. 权利要求4所述的应用，其特征在于，固态原料培养基，原料包括高粱、麸皮、小麦、 大麦、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其组合。
7. 权利要求5所述的液体培养基，其特征在于，液态培养基为原料提取物，原料包括： 高粱、麸皮、小麦、大麦、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其组合。
8. 权利要求2所述的应用，其特征在于所述亮白曲霉以固态接种或者液态接种的形式 加入。
9. 权利要求2所述的应用，其特征在于所述亮白曲霉可以将白酒出酒率从20-28%提 高到25-33%，淀粉利用率提高3% -5%，并保持酒的风味。
【文档编号】C12N1/14GK104250618SQ201410187376
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2014年5月5日 优先权日:2014年5月5日
【发明者】徐岩, 吴群 申请人:江南大学