强力脑心康片及制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种纯中药强力脑心康片及制备方法。强力脑心康片由以下原料药制成：丹参1500g，蜜环菌提取液1500g，蜂王浆125g。所述蜜环菌提取液的制备方法为：（1）斜面菌种培养。（2）一级、二级摇瓶菌种培养。（3）一级、二级种子罐培养。（4）发酵罐培养。经镜检：1.培养菌球占80%以上。2.菌液pH：5.0-5.2。26-28℃更适宜蜜环菌的生长、更能激活蜜环菌菌丝的生长速度，获得更健壮、更有活力的优良蜜环菌，从而提高蜜环菌的质量，能缩短工时又能更好地提高强力脑心康片的药效。蜜环菌提取液发酵的时间短，缩短劳动工时，降低成本。
【专利说明】强力脑心康片及制备方法
[0001]【技术领域】
本发明涉及一种纯生物药物制剂的制备方法，即强力脑心康片及制备方法。
【背景技术】
[0002]强力脑心康片是国家食品药品监督管理局批准为通化吉通药业有限公司所有的全国独家品种，2008年国家食品药品监督管理局批准生产，药品批准文号为国药准字Z20080087 ;药品再注册批件号为:2013R00012。强力脑心康片处方:丹参1500g，蜜环菌提取液1500g，蜂王浆125g。制法:丹参、蜜环菌提取液、蜂王浆以上三味药，取丹参75g，粉碎成细粉；剩余丹参加水浸泡后煎煮三次，第一、二次各2小时，第三次3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30-1.32 (70°C)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；将蜜环菌提取液加热浓缩干燥后，粉碎成细粉；与上述细粉混匀，制成颗粒，干燥；蜂王浆冷冻干燥，粉碎成细粉，与上述颗粒混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。
[0003]含量测定
原儿茶醛，照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-甲酸(18:81.5:0.5)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于1000。
[0004]对照品溶液的制备
取原儿茶醛对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每Iml含3(^g的溶液，即得。
[0005]供试品溶液的制备
取本品20片，除去薄膜衣，研细，取lg，精密称定，精密加入水25ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加50%甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0006]测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0007]本品每片含丹参以原儿茶醛(C7H6O3)计，不得少于90μ8。
丹酚酸B
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
[0008]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-1%甲酸(28:10:62)为流动相；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于 3000。
[0009]对照品溶液的制备
取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每Iml含8(^g的溶液，即得。 [0010]供试品溶液的制备
取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理(功率300W，频率50kHz) 30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0011]测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含丹参以丹酚酸B (C36H30O16)计，不得少于3.0mg0
[0012]通常蜜环菌提取液为外购商品，没有质量指标限制，不同批次、不同厂家质量有差异，影响药品整体疗效。
【发明内容】
[0013]本发明的目的是针对上述情况而提供一种能够保证蜜环菌提取液质量的强力脑心康片及制备方法。
本发明技术解决方案是:一种强力脑心康片，由以下原料药制成:丹参1500g，蜜环菌提取液1500g，蜂王浆125g。
[0014]所述蜜环菌提取液的制备方法为:
(I)斜面菌种培养
斜面菌种培养基:麦麸粉0.5% ；葡萄糖3%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、琼脂1.0%、硫酸镁0.3%、VB10.005%、水93.945% ;在无菌条件下将保存菌种以挖块接种于制备好的斜面培养基上，接种量为1: 10，温度控制在26-28°C;培养10-15天，待斜面菌丝由白变成棕褐色，转入一级、二级摇瓶菌种培养。
[0015](2)—级、二级摇瓶菌种培养
一级、二级摇瓶菌种培养基:葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、麦麸粉1.5%、硫酸镁0.3%、VB10.005%、酵母粉0.5%、水94.445%。在旋转式摇床上(转速200转/分钟或以上)，温度:26-28°C条件下，振荡培养6-7天，待菌球浓度占培养基30%，无杂菌污染，即可做菌种备用。在菌种数量少的情况下，用一级、二级摇瓶培养最合理，同时给足培养基，在合理的环境下，有足够的培养基，促使菌种的快速生长。尤其是到二级种子摇瓶罐培养，这时给足培养基和适宜的温度(28°C)，使蜜环菌菌种的快速、迅猛扩繁。从而缩短了培养时间，降低了成本。
[0016](3)—级、二级种子罐培养
一级、二级种子罐培养基:葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、麦麸粉5%、硫酸镁 0.3%、VB%0.005% 微量、酵母粉 1%、水 90.445%
;培养温度26-28°C，罐压0.05Mpa，通气搅拌，通气比为1:0.6(V/V/分)条件下培养6_7天，待菌球体积占培养基30%以上，无杂菌污染，即可转入发酵罐。在菌种数量增多的情况下，用一级、二级种子罐培养最合理，同时给足培养基和适宜的温度(28°C)，在合理的环境下，有足够的培养基，促使蜜环菌菌种的快速生长。尤其是到二级种子罐培养，这时给足培养基和适宜的温度(28°C)，使蜜环菌菌种的快速、迅猛扩繁。从而缩短了培养时间，降低了成本。
[0017](4)发酵罐培养
发酵罐培养基:葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、麦麸粉5%、硫酸镁0.3%、VB10.005%、酵母粉1%、水90.445% ;培养温度:26-28°C，罐压0.05Mpa，通气搅拌，通气比为
1:0.6 (V/V/分)条件下培养6-7天，待发酵液变为紫褐色，由稠变稀，部分菌丝开始变溶，菌丝颗粒变碎,罐内亮度开始减弱即可出罐；将发酵液离心过滤,收集滤液至贮罐，即得蜜环菌发酵液培养液，浓缩至密度为1.030-1.035 (20°C)，即得蜜环菌提取液，即可出罐。经镜检:1、培养菌球占80%以上。2、菌丝状态:菌丝变细分枝多，无杂菌污染。3、菌液pH:
5.0-5.2。4、密度为 1.030-1.035 (20°C)。
[0018]继续减压浓缩，相对密度为1.30-1.32 (70°C )的稠膏，然后烘干，粉碎，备用。蜜环菌粉能提高人的免疫功能，对脑缺血有保护作用，有抗炎作用，有抗菌作用。
[0019]本发明的优点是:1、选用麦麸粉和茧蛹粉为斜面菌种培养基成分，这样能提高蜜环菌菌丝的生长速度并且蜜环菌菌丝生长的更健壮，有利于蜜环菌的制备。2、26-28°C更适宜蜜环菌的生长、更能激活蜜环菌菌丝的生长速度，获得更健壮、更有活力的优良蜜环菌，从而提高蜜环菌的质量，能缩短工时又能更好地提高强力脑心康片的药效。3、蜜环菌提取液发酵的时间短，缩短劳动工时，降低成本。4、蜜环菌提取液质量得以控制，培养菌球占80%以上，菌液pH:5.0-5.2即可出罐。
[0020]下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。
【具体实施方式】
[0021]实验例I
蜜环菌斜面菌种培养基的筛选。
[0022]通过4种原种培养基上蜜环菌菌丝生长长势和速度的试验对比。麦麸粉和茧蛹粉培养基最适合用来制作蜜环菌培养基，培养基为:麦麸粉0.5% ；葡萄糖3%、磷酸二氢钾
0.75%、茧蛹粉 0.5%、琼脂 1.0%、硫酸镁 0.3%、VB10.005%、水 93.945%。
[0023]表1-1不同培养基对蜜环菌菌丝生长的影响(X 土S.D n= 3)
【权利要求】
1.一种强力脑心康片，其特征在于由以下原料药制成:丹参1500g，蜜环菌提取液1500g，蜂王浆 125g ； 所述蜜环菌提取液的制备方法为: (1)斜面菌种培养 斜面菌种培养基:麦麸粉0.5% ；葡萄糖3%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、琼脂1.0%、硫酸镁0.3%、VB10.005%、水93.945% ;在无菌条件下将保存菌种以挖块接种于制备好的斜面培养基上，接种量为1: 10，培养温度控制在26-28°C;培养10-15天，待斜面菌丝由白变成棕褐色，转入一级、二级摇瓶菌种培养； (2)—级、二级摇瓶菌种培养 一级、二级摇瓶菌种培养基:葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、麦麸粉1.5%、硫酸镁0.S^kVB10.005%、酵母粉0.5%、水94.445% ;培养温度:26_28°C条件下，振荡培养6_7天，待菌球浓度占培养基30%，无杂菌污染，即可做菌种备用；转入进入一、二级种子罐培养; (3)—级、二级种子罐培养 一级、二级种子罐培养基:葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、麦麸粉5%、硫酸镁0.3%、VB%0.005%微量、酵母粉1%、水90.445% ;培养温度26-28°C，罐压0.05Mpa,通气搅拌，通气比为1:0.6 V/V/分条件下培养6-7天，待菌球体积占培养基30%以上，无杂菌污染，即可转入发酵 罐； (4)发酵罐培养 发酵罐培养基:葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.75%、茧蛹粉0.5%、麦麸粉5%、硫酸镁0.3%、酵母粉1%、VB10.005%、水90.445% ;培养温度26-28 °C，罐压0.05Mpa，通气搅拌，通气比为I:0.6 V/V/分条件下培养6-7天，即可出罐；将发酵液离心过滤，收集滤液至贮罐，即得蜜环菌发酵液培养液，在20°C浓缩至密度为1.030-1.035，即得蜜环菌提取液。
2.按照权利要求1所述的强力脑心康片，其特征在于培养温度28°C。
【文档编号】C12R1/645GK103751271SQ201410056268
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2014年2月20日 优先权日:2014年2月20日
【发明者】杨静, 李春娥, 罗晓萍 申请人:通化吉通药业有限公司