用于检测和鉴定MREJ型xxi的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的序列的利记博彩app
【专利摘要】本文提供用于检测和鉴定包含多态性SCCmec右侧末端(MREP)型xxi序列的金黄色葡萄球菌菌株的组合物和方法。
【专利说明】用于检测和鉴定MREJ型XX i的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的序列
[0001] 对序列表、表或计算机程序列表的引用
[0002] 本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表作为名称为GENOM. 114A. txt的 文件提供，2013年3月14日最后保存，大小为85. 6kb。信息以其全部通过引用被并入本文。
[0003] 发明背景
[0004] 领域
[0005] 本文公开的实施方式涉及用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)检测的分子诊断工具。
[0006] 相关技术
[0007] 凝固酶阳性的物种金黄色葡萄球菌（S. aureus)被充分纪录为人机会致 病菌（Murray et al.Eds, 1999,Manual of Clinical Microbiology,第七版，ASM Press，Washington，D. C.)。金黄色葡萄球菌引起的医院交叉感染是发病率和死亡率的主要 原因。金黄色葡萄球菌引起的最常见的感染中的一些涉及皮肤，并且它们包括疖或痂、蜂窝 织炎、脓疱病和在多种部位的手术后伤口感染。金黄色葡萄球菌引起的更严重的感染中的 一些是菌血症、肺炎、骨髓炎、急性心内膜炎、心肌炎、心包炎、脑炎、脑膜炎、烫伤样皮肤综 合征和多种脓肿。葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒是与金黄色葡萄球菌有关的另一种重要 的综合征。中毒性休克综合征，一种社区获得性疾病（community-acquired disease),也已 归于产毒的金黄色葡萄球菌的感染或定居。
[0008] 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA)作为医院中主要的临床和流行病学问题出现 于 20 世纪 80 年代（Oliveira et al·，（2002) Lancet Infect Dis. 2:180-9)。MRSA 抵抗所 有的β_内酰胺，包括青霉素、头孢菌素、碳青霉烯和单酰胺菌素，它们是治愈金黄色葡萄 球菌感染最常使用的抗生素。
[0009] MRSA感染仅可用毒性的和更昂贵的抗生素治疗，其通常用作最后的防御线。由于 MRSA可通过人员在患者之间容易地播散，世界上的医院都面对控制MRSA的问题。
[0010] 不久前，知道菌株抗性的唯一方法是进行手动抗菌敏感性试验。抗菌敏感性试验 具有许多缺点，包括获得结果之前延长的时间（至少48小时）、缺少再现性、缺少过程标准 化和使用者的错误。因此，需要发展快速和简单的MRSA检测和/或鉴定的筛选或诊断试验 以减少其传播和提商感染患者的诊断和治疗。
[0011] 对快速和灵敏检测MRSA的组合物和方法存在需求。
[0012] 概述
[0013] 本文公开的实施方式部分基于这样的发现：金黄色葡萄球菌的某些菌株，包括 包含mecA同系物基因，mecALGA251的那些菌株，共有位于MRSA核酸SCCmec区右侧末端 (right extremity)的相同序列，即，多态性右侧末端连接。本文提供可用于检测这些MRSA 菌株的方法和组合物，其是迄今通过常规的商品化基于分子的测定不可检测的。本文还提 供组合物和方法，其通常允许除MRSA菌株外的金黄色葡萄球菌的进一步（例如，同时或连 续）检测，和/或mecA和/或mecALGA251的进一步检测。
[0014] 因此，本文提供用于检测包含MREJ型XXi序列的MRSA的方法和组合物。一些实施 方式提供用于检测具有MREJ型xxi核酸的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA)的组合物。 MRSA可包括包含mecA同系物（mecALGA251或mecC)的葡萄球菌（Staphylococcal)盒染色 体mec (SCCmec)元件，其中SCCmec盒被插入金黄色葡萄球菌染色体DNA，从而产生多态性右 侧末端连接（MREJ)型xxi序列，其包括来自右侧末端的多态性序列和靠近多态性右侧末端 的染色体DNA。组合物可包括第一扩增引物，其长度在10和45个核苷酸之间，并且在标准 PCR条件下与MREJ型xxi核酸的多态性右侧末端序列特异地杂交。在一些实施方式中，第 一扩增引物在所述标准PCR条件下与SEQ ID NO: 1的核酸序列或其互补物特异地杂交。
[0015] 本文公开的组合物可进一步包括长度在10和45个核苷酸之间的第二扩增引物， 其在标准PCR条件下与位于距SCCmec元件进入染色体DNA的插入点1千碱基内的金黄色 葡萄球菌染色体序列特异地杂交。优选，第一和第二扩增引物在标准PCR条件下在存在包 括MREJ型xxi核酸的MRSA的情况下一起产生MREJ型xxi核酸右侧末端连接的扩增子。因 此，在一些实施方式中，第二扩增引物在标准PCR条件下与orfX特异地杂交。本文公开的 组合物可进一步包括探针，例如，包括荧光发射体部分和荧光猝灭剂部分的寡核苷酸探针， 其在标准PCR条件下与MREJ型xxi核酸的扩增子特异地杂交。
[0016] 本文公开的组合物可包括一种或多种长度在10和45个核苷酸之间的另外的扩增 引物，其与一种或多种来自MREJ型i至XX MRSA的多态性SCCmec右侧末端序列，S卩，与一 种或多种选自SEQ ID NOs:5至29的多态性SCCmec右侧末端序列特异地杂交。
[0017] 方法和组合物还可包括另外的寡核苷酸，即，其被配置以特异地扩增mecA和/或 mecALGA251/meCC序列，和/或其被配置以特异地扩增金黄色葡萄球菌特异性序列。
[0018] 因此，一些实施方式提供组合物，其中第一扩增引物与SEQ ID N0:2至少80%相 同。在一些实施方式中，组合物可包括第二扩增引物，其与SEQ ID N0:3至少80%相同。在 一些实施方式中，组合物可包括探针，其中探针与SEQ ID N0:4或82至少80%相同。
[0019] 在一些实施方式中，本文公开的组合物以干燥形式，例如，冻干的或类似形式提 供。
[0020] 本文还提供用于检测包括MREJ型xxi核酸的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)和用于检测MREJ型xxi核酸的方法，其中金黄色葡萄球菌包括包含mecA同系物 (mecALGA251或mecC)的葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)元件。SCCmec盒可插入金黄色葡 萄球菌染色体DNA，从而产生多态性右侧末端连接（MREJ)型xxi序列，其包括来自右侧末 端（MREP序列）的多态性序列和靠近多态性右侧末端的染色体DNA。因此，在一些实施方式 中，方法可包括以下步骤：提供测试样品；将样品与长度在10和45个核苷酸之间的第一扩 增引物接触，所述第一扩增引物在标准PCR条件下与MREJ型xxi序列的多态性右侧末端序 列特异地杂交；其中接触在这样的条件下进行，其中如果包括MREJ型xxi核酸的金黄色葡 萄球菌存在于样品中，那么MREJ型xxi核酸的mec右侧末端连接的扩增子产生。方法还可 包括测定接触步骤之后MREJ型xxi核酸扩增子是否产生的步骤。在一些实施方式中，第一 扩增引物在所述标准PCR条件下与SEQ ID NO: 1的核酸序列特异地杂交。
[0021] 在一些实施方式中，方法可包括将样品与长度在10和45个核苷酸之间的第二扩 增引物接触，所述第二扩增引物在标准PCR条件下与金黄色葡萄球菌的orfX基因杂交，其 中所述第一和第二扩增引物在标准PCR条件下在存在MREJ型xxi核酸的情况下一起产生 MRSA的SCCmec右侧末端连接的SCCmec右侧末端连接（MREJ)区序列的扩增子。
[0022] 权利要求15的方法，进一步包括将样品与探针接触，其中所述探针在标准PCR条 件下与MREJ型xxi核酸的SCCmec右侧末端连接（MREJ)区序列的扩增子特异地杂交。在 一些实施方式中，探针包括荧光发射体部分和荧光猝灭剂部分。
[0023] 在一些实施方式中，接触步骤还包括将样品与一种或多种另外的扩增引物接触， 其中所述一种或多种另外的扩增引物长度在10和45个核苷酸之间，与来自MREJ型i至XX MRSA的一个或多态性SCCmec右侧末端序列特异地杂交。在一些实施方式中，接触步骤还包 括将样品与一种或多种长度在10和45个核苷酸之间的另外的扩增引物接触，所述扩增引 物特异地杂交和被配置以产生mecA序列、mecC序列和/或金黄色葡萄球菌特异性序列的 扩增子。金黄色葡萄球菌特异性序列的非限制的实例包括但不限于，nuc序列、rRNA序列、 femB序列、Sa442序列等。然而技术人员将容易理解，对金黄色葡萄球菌独特的任何序列均 可用于本文描述的实施方式。
[0024] 因此，本文描述的方法的接触步骤可包括进行核酸扩增反应，如PCR、链置换扩增 (SDA)、例如多置换扩增（MDA)、环介导的等温扩增（LAMP)、连接酶链反应（LCR)、免疫扩增、 基于核酸序列的扩增（NASBA)、自主序列复制（3SR)或滚环扩增。在一些优选实施方式中， 方法包括进行多重PCR。在一些优选实施方式中，方法包括进行实时PCR。
[0025] 附图简述
[0026] 图1显示类型xxi MREJ区的序列。还显示本文描述的实施方式中公开的引物和 探针。
[0027] 详细描述
[0028] 应当理解，上述一般的描述和下面详细的描述都只是示例和说明的，并且不意欲 限制当前教导的范围。在该申请中，单数的使用包括复数，除非另外特别说明。同样，"包括 (comprise) "、"含有（contain) "和"包括（include) "，或那些根词的改变，例如不限于，"包 括（comprises) "、"含有（contained)"和"包括（including)"也不意欲受限。"或"的使用 指"和/或"，除非另外说明。术语"和/或"指之前和之后的术语可一起或分开采用。为了 说明目的，但不作为限制，"X和/或Y"可指"X"或"Y"或"X和Y"。
[0029] 不论何时本文提供值的范围，该范围意欲包括起始值和端值和其间的任何值 或值范围，除非另外特别说明。例如，"〇. 2至0. 5"指0. 2、0. 3、0. 4、0. 5 ;其间的范围如 0· 2-0. 3、0· 3-0. 4、0· 2-0. 4 ;其间的增量如(λ 25、0· 35、0· 225、0· 335、0· 49 ;其间的增量范 围如 0· 26-0. 39 ;等。
[0030] 本文所用的部分标题仅用于组织的目的并且不被解释为以任何方式限制描述的 主题。该申请中引用的所有文献和相似材料一包括，但不限于，专利、专利申请、文章、书、 论文和互联网网页，不管这样的文献和相似材料的格式，都以其全部通过引用被清楚地并 入，用于任何目的。在并入的文献和相似材料中的一个或多个以与该申请中术语的定义矛 盾的方式限定或使用术语的情况下，以该申请为准。虽然目前的教导与多种实施方式连起 来描述，但是不期望目前的教导受限于这样的实施方式。相反，目前的教导包括多种备选、 改变和等同物，如本领域技术人员所将理解的。
[0031] 本文提供用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA)提高的检测的组合物和方 法，特别地，检测包含mecA同系物基因的金黄色葡萄球菌，如CC130或ccl30金黄色 葡萄球菌菌株的方法。金黄色葡萄球菌中的甲氧西林抗性是由于编码青霉素结合蛋 白2a(PBP-2a)、耐β-内酰胺的转肽酶的mecA基因的基因产物。mecA不存在于甲氧西 林-敏感的金黄色葡萄球菌，但是广泛分布于葡萄球菌的其它种类，包括凝固酶阴性的 葡萄球菌、（CoNS),如表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis)、溶血性葡萄球菌 (Staphylococcus haemolyticus)、头葡萄球菌（Staphylococcus capitis)、腐生葡萄球 菌（S.saprophyticus)、缓慢葡萄球菌（S.lentus)、溶血性葡萄球菌（S.hominus)、孔氏葡 萄球菌（S. cohnii)、海豚葡萄球菌（S. delphini)、木糖葡萄球菌（S. xylosus)、蝇葡萄球菌 (S. muscae)、施氏葡萄球菌（S. schleiferi)、凝结葡萄球菌（S. coagulans)和其它的。mecA 基因高度保守（Ubukata et al·，1990，Antimicrob· Agents Chemother. 34:170-172)。在耐 甲氧西林葡萄球菌中，mecA存在于称作葡萄球菌盒染色体mec (SCCmec)的遗传元件，其插 入葡萄球菌的染色体。
[0032] SCCmec盒长度范围为20kb至超过60kb，并包括除mecA基因外的位点特异性重组 酶基因和转座因子。SCCmec盒在金黄色葡萄球菌染色体DNA内称作"attBscc"的固定位 置插入，其位于称作"orfX"的开放阅读框架的3'末端。！11116七81^6七31.(2004)]\(]1;[11· Microbiol. 42 (5) : 1875-1884。MRSA菌株已基于SCCmec盒的组构被分类（称作"SCCmec分 类）。不同的SCCmecs已根据它们的重组酶基因，和mecl和mecR基因的遗传组构--其是 mecA的调节子--分类。
[0033] 用于检测和鉴定MRSA的许多分子测定包括mecA基因的检测。然而，由于 mecA还在CoNS中发现，所以单独mecA的检测不足以确定MRSA的存在，因为耐甲氧西 林CoNS也将检测阳性。为了解决该问题，已发展了这样的测定，其中除mecA外，还检 测金黄色葡萄球菌特异性基因。参见，Schuenck et al. ,Res.Microbiol.，（2006)，in press, Shittu et al. , (2006), Diagn Microbiol Infect Dis.Jul 17、Grisold et al. , (2006), Methods Mol. Biol. 345:79~89> Costa et al. , (2005), Diag. Microbiol, and Infect. Dis, 51:13-17, Mc Donald et al. , (2005), J. Clin. Microbiol. , 43:6147-6149, Zhang et al. , (2005), J. Clin. Microbiol. 43 : 5026-5033> Hagen et al. (2005), Int J Med Microbiol. 295:77-86, Maes, et al. (2002)J. Clin. Microbiol.40:1514-1517, Saito et al., (1995)J. Clin. Microbiol. 33:2498-2500 ；Ubukata et al., (1992)J. Clin. Microbiol. 30:1728-1733 ；Murakami et al. , (1991)J. Clin. Microbiol. 29:2240-2244 ； Hiramatsu et al. , (1992) Microbiol. Immunol. 36 : 445-453) 〇 此外，Levi 和 Towner(2003)，J. Clin. Microbiol. ,41:3890-3892 和 Poulsen et al. (2003)，J Antimicrob Chemother.，51:419-421描述利用EVIGENE? MRSA检测试剂盒，检测凝固酶阴 性葡萄球菌中和金黄色葡萄球菌中甲氧西林抗性。
[0034] 然而，因为mecA基因广泛分布在金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中，上面 描述的每个方法不能在含有甲氧西林-敏感的金黄色葡萄球菌（"MSSA"）和耐甲氧西林凝 固酶阴性葡萄球菌的样品，和只含有MRSA的样品或具有甲氧西林-敏感性金黄色葡萄球菌 和MRSA的样品之间区分。
[0035] 为了解决该问题，Hiramatsu等发展了对MRSA特异的基于PCR的测定，其利用与 SCCmec型I-III的DNA的右侧末端杂交的引物结合对金黄色葡萄球菌染色体特异的引物， 其对应SCCmec整合位点右侧上的核苷酸序列。（美国专利6, 156, 507,在下文中"507专 利"）。最近，Zhang et al·，（2005)，J. Clin. Microbiol. 43:5026-5033 描述了将 SCCmec 型 I至V MRSA分成亚型的多重测定。其它葡萄球菌种类（例如，表皮葡萄球菌和溶血性葡萄 球菌）中包围SCCmec整合位点的核苷酸序列不同于金黄色葡萄球菌中发现的那些，因此利 用与SCCmec的右侧末端和金黄色葡萄球菌染色体杂交的寡核苷酸的多重PCR测定具有对 MRSA检测特异的优势。
[0036] '507专利中描述的PCR测定还引起SCCmec DNA的"MREP分型"(mec右侧末端多态 性）的发展（Ito et al·，（2001)Antimicrob. Agents Chemother. 45:1323-1336 ;Hiramatsu et al·，（1996)J. Infect. Chemother. 2:117-129)。MREP 分型方法利用这样的事实：三种 MREP类型的核苷酸序列在邻近三种类型SCCmec中整合位点的SCCmec DNA右侧末端不同。
[0037] 术语"MREJ"指mec右侧末端连接〈〈mec右侧末端连接》。MREJ区核酸序列长度为 大约1千碱基（kb)，包括SCCmec右侧末端以及细菌染色体DNA至SCCmec整合位点右侧的序 列。被分类为MREP型i-iii的菌株对应MREJ型i-iii。MREJ型iv至XX先前已被Huletsky et al.，（2004)，J. Clin. Microbiol. 42:1875-1884 ;国际专利申请PCT/CA02/00824,美国专 利申请2008/0227087表征。
[0038] 最近，Garcia-Alvarez等报道了通过核糖体RNA分析被证实是金黄色葡萄球菌的 细菌菌株，并且利用常规的抗生素敏感性试验，其显示甲氧西林抗性。Garcia-Alvarez et al. (2011) Lancet 11:595-603。然而，令人惊讶奇地，利用上面描述的测定--其依赖mecA 的检测或已知MREJ区的检测，这些菌株测试为MRSA阴性。测定特异性受限于识别MREJ区。 Garcia-Alvarez等证明菌株包含新的mecA同系物，其与已知mecA基因共有有限的同源性， 艮P，在氨基酸水平63%的同一性和在DNA水平70%的同一性，说明依赖mecA基因检测的测 定不能检测这些MRSA。mecA同系物称作mecALGA251，本文也称作mecC。因为利用MREJ扩 增的测定也不能检测mecALGA251MRSA菌株中的任何一种，所以mecALGA251MRSA菌株将被 不正确地鉴定为假阴性。诊断和鉴定MRSA中的该错误可对患者健康结果具有严重影响。
[0039] 进一步分析金黄色葡萄球菌的这样几个菌株：利用标准的抗生素敏感性试验测试 为耐甲氧西林阳性，然而利用常规的商品化分子测定检测为MRSA。菌株列在下面的表1中。
[0040] 表 1
【权利要求】
1. 检测包括MREJ型xxi核酸的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) (MRSA)的组合物，所述金黄色葡萄球菌包括包含mecA同系物（mecA^w)的葡萄球菌盒染 色体mec (SCCmec)元件，所述SCCmec盒被插入所述金黄色葡萄球菌染色体DNA，从而产生多 态性右侧末端连接（MREJ)型xxi序列，所述多态性右侧末端连接（MREJ)型xxi序列包括 来自右侧末端的多态性序列和靠近所述多态性右侧末端的染色体DNA，所述组合物包括： 第一扩增引物，所述第一扩增引物长度在10和45个核苷酸之间，其中所述第一扩增引 物在标准PCR条件下与所述MREJ型xxi核酸的多态性右侧末端序列特异地杂交。
2. 权利要求1所述的组合物，其中所述第一扩增引物与SEQ ID NO: 1的核酸序列或其 互补物在所述标准PCR条件下特异地杂交。
3. 权利要求1所述的组合物，进一步包括： 第二扩增引物，所述第二扩增引物长度在10和45个核苷酸之间，其中所述第二扩增引 物在标准PCR条件下与位于距所述SCCmec元件进入所述染色体DNA的插入点1千碱基内 的金黄色葡萄球菌染色体序列特异地杂交，并且其中所述第一和第二扩增引物一起在标准 PCR条件下在存在包括MREJ型xxi核酸的MRSA的情况下产生MREJ型xxi核酸右侧末端连 接的扩增子。
4. 权利要求3所述的组合物，其中所述第二扩增引物在标准PCR条件下与orfX特异地 杂父。
5. 权利要求3所述的组合物，进一步包括探针，其中所述探针与所述MREJ型xxi核酸 的扩增子在所述标准PCR条件下特异地杂交。
6. 权利要求1所述的组合物，进一步包括引物对，所述引物对特异地与SEQ ID NO: 156 内的mecA序列杂交，并能扩增SEQ ID NO: 156内的mecA序列。
7. 权利要求1所述的组合物，进一步包括引物对，所述引物对特异地与SEQ ID NO: 157 内的mecC序列杂交，并能扩增SEQ ID NO : 157内的mecC序列。
8. 权利要求1所述的组合物，进一步包括引物对，所述引物对特异地与SEQ ID NO :158 内的nuc序列杂交，并能扩增SEQ ID NO : 158内的nuc序列。
9. 权利要求1所述的组合物，进一步包括一种或多种另外的扩增引物，其中所述一种 或多种另外的扩增引物长度在10和45个核苷酸之间，并且其中所述一种或多种另外的扩 增引物与来自MREJ型i至XX MRSA的一种或多种多态性SCCmec右侧末端序列特异地杂交。
10. 权利要求9所述的组合物，其中所述一种或多种多态性SCCmec右侧末端序列选自 SEQ ID NOs :5 至 29。
11. 权利要求1所述的组合物，其中所述第一扩增引物与SEQ ID N0:2至少80%相同。
12. 权利要求11所述的组合物，其中所述第二扩增引物与SEQ ID N0:3至少80%相同。
13. 权利要求12所述的组合物，进一步包括探针，其中所述探针与SEQ ID N0:4或82 至少80%相同。
14. 权利要求9所述的组合物，其中所述探针包括荧光发射体部分和荧光猝灭剂部分。
15. 权利要求1所述的组合物，其中所述第一扩增引物处于冻干的形式。
16. 检测包括MREJ型xxi核酸的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA)的方法，所述金黄 色葡萄球菌包括包含mecA同系物（mecA^；^)的葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)元件，所述 SCCmec盒被插入金黄色葡萄球菌染色体DNA，从而产生多态性右侧末端连接（MREJ)型xxi 序列，所述多态性右侧末端连接（MREJ)型xxi序列包括来自所述右侧末端的多态性序列和 靠近所述多态性右侧末端的染色体DNA，所述方法包括： 提供测试样品； 将所述样品与第一扩增引物接触，所述第一扩增引物长度在10和45个核苷酸之间，其 中所述第一扩增引物在标准PCR条件下与所述MREJ型xxi序列的多态性右侧末端序列特 异地杂交； 将所述样品与长度在10和45个核苷酸之间的第二扩增引物接触，其中所述第二扩增 引物在标准PCR条件下与金黄色葡萄球菌的orfX基因杂交，并且其中所述第一和第二扩增 引物一起在所述标准PCR条件下在存在MREJ型xxi核酸的情况下产生MRSA的SCCmec右 侧末端连接的所述SCCmec右侧末端连接（MREJ)区序列的扩增子；和 测定是否所述MREJ型xxi核酸的扩增子在所述接触步骤之后产生。
17. 权利要求16所述的方法，其中所述第一扩增引物与SEQ ID NO: 1的所述MREP区在 所述标准PCR条件下特异地杂交。
18. 权利要求16所述的方法，其中所述接触步骤进一步包括将所述样品与一种或多 种另外的扩增引物接触，其中所述一种或多种另外的扩增引物长度在10和45个核苷酸之 间，并且其中所述一种或多种另外的扩增引物与一种或来自MREJ型i至xx MRSA的多态性 SCCmec右侧末端序列特异地杂交。
19. 权利要求16所述的方法，其中所述接触步骤进一步包括将所述样品与一种或多种 另外的扩增引物对接触，其中所述一种或多种另外的扩增引物对在所述标准PCR条件下与 nuc序列特异地杂交并能产生nuc序列的扩增子。
20. 权利要求16所述的方法，其中所述接触步骤包括进行多重PCR。
21. 权利要求16所述的方法，其中所述接触步骤包括进行实时PCR。
22. 权利要求16所述的方法，其中所述接触步骤进一步包括将所述样品与一种或多种 另外的扩增引物对接触，其中所述一种或多种另外的扩增引物对在所述标准PCR条件下与 mecA和/或mecC序列特异地杂交并能产生mecA和/或mecC序列的扩增子。
【文档编号】C12Q1/68GK104364395SQ201380029724
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2013年3月14日 优先权日:2012年4月6日
【发明者】C·梅纳德, C·罗杰-达勒姆波特 申请人:基因欧姆科技加拿大公司