一种酶催化法合成3-O-β-D-半乳糖基甘油酯的方法
【专利摘要】本发明公开了一种酶法制备3-O-β-D半乳糖基甘油脂肪酸酯的方法，该方法以脂肪酶为催化剂，在有机溶剂体系中进行3-O-β-D半乳糖基甘油和脂肪酸的酯化反应，经分离精制后可获得3-O-β-D半乳糖基甘油单酯和二酯。本发明具有反应条件温和、反应选择性较强、所用反应介质较安全、工艺简单、成本低等优点。
【专利说明】一种酶催化法合成3-0- β -D-半乳糖基甘油酯的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物催化【技术领域】，具体涉及酶法制备3-0-β -D半乳糖基甘油酯(单酯和二酯)的方法。
【背景技术】
[0002]半乳糖基甘油糖脂是半乳糖通过其还原末端以α -或β -糖苷键与亲脂性的长链单脂酰基或二脂酰基甘油相连接起来的一类化合物。半乳糖基甘油糖脂具有表面活性、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗氧化等作用，尤其是抗肿瘤活性引起了人们的高度关注。另外半乳糖基甘油糖脂在细菌的耐热性方面以及植物实现光合作用方面的活性也有相关的研究报道。这些研究肯定了半乳糖基甘油糖酯的潜在食药用价值和生物学研究意义。
[0003]根据制备方法的不同，甘油糖脂可以分为天然甘油糖脂和合成甘油糖脂。天然甘油糖脂是从植物或藻类中经过分离提取获得的。由于天然植物或藻类中甘油糖脂的含量很低，且多以混合物的形式存在，分离纯化困难，因此天然甘油糖脂生产成本高，不能满足市场需求。Sigma商品目录中显示纯度95%单半乳糖甘油二酯(提取自面粉)，Img的售价为3580.2元。因此，人工合成甘油糖脂是最有效的解决办法。根据文献报道，半乳糖基甘油酯的制备方法有很多，如:
[0004]Morinoto et al., Tetrahedron 1995，51 (23):6443-6450
[0005]
【权利要求】
1.一种酶催化法合成3-0-β -D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是，包括以下步骤: 酶促酯化反应:脂肪酶加入到含有3-0-β -D半乳糖基甘油和脂肪酸的有机溶剂中，进行酶促水解反应，然后加入分子筛继续反应； 过滤去除脂肪酶； 对3-0-β -D半乳糖基甘油酯进行分离纯化，即得。
2.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:所述的脂肪酸是己酸、癸酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸或亚麻酸中的一种。
3.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:所述的有机溶剂是丙酮、叔丁醇、乙腈、叔戊醇或二氯甲烷中的一种。
4.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:所述的脂肪酶是Novozyme 435脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶或Lipozyme RMIM脂肪酶中的一种。
5.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:3-0-β-D半乳糖基甘油和脂肪酸的摩尔浓度比为1:8~1:20，脂肪酶的加入量为10~30mg/ml,分子筛的加入量为70~80mg/ml。
6.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步骤(1)所述的分子筛为4Α分子筛，在酶促水解反应后的第三小时加入。
7.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步骤(1)的酶促酯化反应在水浴摇床中进行，摇床转速为15(Tl70rpm，反应时间为5~15h，反应温度为40~55°C。
8.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步骤(2)中分离脂肪酶采用过滤的方式。
9.根据权利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步骤(3)的分离纯化依次为真空旋转和硅胶柱层析。
10.根据权利要求9所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步骤(3)在真空旋转之后、硅胶柱层析之前用氯仿-水萃取。
【文档编号】C12P19/44GK103667397SQ201310537737
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】赵海珍, 陆兆新, 魏微, 齐丹萍, 张充, 吕凤霞, 别小妹 申请人:南京农业大学