一种提高阿尼芬净前体化合物Echinocandin B产量的方法
【专利摘要】本发明提供了一种提高阿尼芬净前体化合物Echinocandin?B（ECB）产量的方法，所述方法为：配制用于培养构巢曲霉（Aspergillus?nidulans）合成ECB的发酵培养基，接入构巢曲霉，在28～37℃下培养3天后，继续在25℃下培养直至发酵结束。本发明方法与恒温培养相比，采用前三天37℃培养，后9天25℃培养的策略使ECB产量由728mg/L提高至1237mg/L；除此之外，第6天添加2g/L脯氨酸可以使ECB的产量由540mg/L提高至850mg/L；在培养基中添加2g/L苏氨酸或2g/L鸟氨酸可使ECB产量分别提高21.9%和55.2%。
【专利说明】一种提高阿尼芬净前体化合物Echinocandin B产量的方法
(-)【技术领域】
[0001]本发明涉及一种提高阿尼芬净前体化合物Echinocandin B产量的培养方法。
(二)【背景技术】
[0002]近年来，器官移植手术导致免疫抑制剂的大量使用，化疗和更具有侵袭性的医疗方法的应用等多种原因造成免疫低下患者增多，真菌感染发病率显著升高，尤其是深部真菌感染的发病率和病死率逐年增加。据世界卫生组织(WHO) 2004年的统计估计，全球每年的系统性真菌感染人数为33.5万。其中最常见的是系统性念珠菌病，约占所有此类感染的70%左右，而其引起的死亡率又闻达40%左右。随着医学的不断进步，20世纪90年代后，各种抗真菌药物不断问世，为治疗各类真菌疾病带来革命性的进步。由于对抗真菌药物的需求逐年攀升，使得其市场规模越加旺盛。
[0003]棘白菌素(Echinocandin)类抗生素是20世纪70年代发现的一组天然产物，具有类似的环状多肽核心和不同的脂肪酸侧链的结构特征，能够非竞争性地抑制真菌细胞壁β -1, 3-葡聚糖合成酶的活性,从而达到抗真菌的目的。其中阿尼芬净(Anidulafungin)是继卡泊芬净(Caspofungin)、米卡芬净(Micafungin)之后的第三代全身抗真菌类棘白菌素衍生物药物，2006年2月21日，由辉瑞公司生产的阿尼芬净通过了美国FDA认证，主要治疗念珠菌血症和其他 形式的念珠菌感染(腹腔脓肿、腹膜炎)和食管念珠菌等。阿尼芬净是由前体化合物Echinocandin B (ECB)经犹他游动放线菌产生的酰化酶作用脱去侧链亚油酰基，然后在DMF中与活性中间体4〃-戊氧基-[1，1’，4’，1〃]三苯基-4-甲酸-2，4，5-三氯-苯基酯反应制得。阿尼芬净与ECB的化学结构式如式1、2所示。
[0004]
【权利要求】
1.一种提高阿尼芬净前体化合物Echinocandin B (ECB)产量的方法,所述方法为:配制用于培养构巢曲霉(Aspergillus nidulans)合成ECB的发酵培养基,接入构巢曲霉,在28~37°C下培养3天后，继续在25°C下培养直至发酵结束。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述培养在第O~9天时添加前体氨基酸，所述前体氨基酸为下列之一或其中两种以上的混合物:脯氨酸、鸟氨酸、苏氨酸、亚油酸，添加量为2~8g/L发酵培养基。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述发酵培养基组成如下:花生油20g/L,甘油 10g/L，蛋白胨 10g/L，L-脯氨酸 2g/L，甘露醇 90g/L，豆粉 40g/L，K2HPO4.3H208g/L,MgSO4.7Η200.5g/L，MnSO4.H2O0.lg/L, FeSO4.7Η200.05g/L, CaCl20.3g/L，溶剂为水，pH7.0。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下: (1)构巢曲霉接种至种子培养基，培养温度25V，摇床转速220r/min，培养2天，获得种子液；所述种子培养基组成如下:葡萄糖10g/L，甘油10g/L，棉籽粉25g/L，溶剂为水，ρΗ6.8 ~7.0，115°C灭菌 30min ； (2)种子液以10%体积比接种量接种至发酵培养基，在28~37°C、摇床转速220r/min条件下培养3天后，继续在25°C、摇床转速220r/min条件下培养直至总发酵时间为12天，并在发酵第6天时添加2g/L的脯氨酸，或者在发酵第O天添加2g/L的苏氨酸或鸟氨酸；所述发酵培养基组成如下:花生油20g/L，甘油10g/L，蛋白胨10g/L，L-脯氨酸2g/L，甘露醇 90g/L,豆粉 40g/L, K2HPO4.3H208g/L, MgSO4.7Η200.5g/L, MnSO4.H2O0.lg/L,FeSO4.7H200.05g/L, CaCl20.3g/L，溶剂为水，ρΗ7.0 ； (3)发酵产物经分离`纯化获得所述阿尼芬净前体化合物EchinocandinB。
【文档编号】C12R1/66GK103509840SQ201310478251
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年10月12日 优先权日:2013年10月12日
【发明者】郑裕国, 牛坤, 邹树平, 毛健, 钟伟, 沈寅初 申请人:浙江工业大学