米或米制品中是否含转基因水稻llrice62检测法
【专利摘要】本发明公开了一种米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，以米或米制品为待测样品，以转基因稻米LLRICE62为阳性对照，以非转基因稻米或者非LLRICE62的转基因稻米为阴性对照；包括以下步骤：1）、设计耐除草剂转基因水稻LLRICE62的对应引物组；?2）、提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA；3）、将步骤2）所得的待测样品的DNA、阳性对照的DNA、阴性对照的DNA分别利用步骤1）所得的引物组设置PCR反应体系进行扩增；4）、利用步骤3）所得的待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液进行比对，从而判定米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62。
【专利说明】米或米制品中是否含转基因水稻LLRICE62检测法
【技术领域】
[0001]本发明属于耐除草剂转基因水稻LLRICE62的检测技术，尤其涉及耐除草剂转基因水稻LLRICE62的现场定性检测技术，具体为米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法。
【背景技术】
[0002]近年来，世界上转基因生物研发工作进展非常迅速，2012年全球转基因作物种植面积达到1.703亿公顷，比2011年的1.6亿公顷增长了 6%，较1996年增长了 100倍。随着转基因作物已被快速、持续地用于商业化生产，无论在发达国家还是发展中国家都产生了巨大的经济、能源、卫生及社会效益。但同时，转基因作物及其产品可能带来的环境、健康等问题也已引起世界性的所谓“生物安全”的论战。为此，许多国家相继制定了对转基因生物的管理法规，对进口转基因食品进行严格管理，要求出具转基因成分的检测报告，对转基因食品采用标识制度。挪威是第一个要求对转基因产品进行含量标识的国家，他的标识低限为2%;欧盟的限量标识低限为1%。我国于2001年5月23日颁布了《农业转基因生物安全管理条例》，2001年9月5日开始实施《出入境转基因产品检验检疫管理办法》，2002年3月20日开始贯彻实行《农业转基因生物标识管理办法》。
[0003]随着各个国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度管理的加强，转基因检测的对象已经从原来的大豆、小麦、大米、土豆等农产品扩展到许多深加工的产品，如食用油脂、米制品、酱油、豆奶、酒、饲料等等，而这其中米制品一直是欧盟和其他一些国家关注的重点。2006年9月以来，已有法国、德国、意大利、奥地利和日本等7个国家因为转基因大米污染对我国出口米制品采取了拒绝入境或撤架、召回等措施。欧盟在2008年4月15日起对中国出口的大米及其米制品采取保障性措施，要求由中方认可的实验室对出口产品实施检测，并出具统一的卫生证书才能出口。而另一方面，我国对转基因作物培育的投入也逐年增加，近年来具有良好生长性能的转基因新品种不断涌现，2009年农业部审放了转基因耐除草剂水稻“Bt汕优63”等三个转基因农作物的生产应用安全证书，这标志着我国极有可能成为世界上第一个商业化种植转基因水稻的国家。如何快速便捷的检测转基因大米成分已成为了当前热门的研究课题之一。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种便捷的米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，采用该方法无需复杂的仪器，甚至用肉眼即可辨识检测结果，从而准确判断待测样品是否被转基因水稻LLRICE62污染。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明提供一种米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，以米或米制品为待测样品，以转基因稻米LLRICE62为阳性对照，以非转基因稻米(较佳)或者非LLRICE62的转基因稻米为阴性对照；包括以下步骤:
[0006]I)、设计引物:[0007]设计耐除草剂转基因水稻LLRICE62的对应引物组；每套引物组中由4条引物组成；4条引物中2条为内引物，另2条为外引物；
[0008]2 )、提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA:
[0009]3)、核酸的恒温扩增:
[0010]将步骤2)所得的待测样品的DNA、阳性对照的DNA、阴性对照的DNA分别利用步骤
I)所得的每套引物组进行以下操作:
[0011]①、步骤I)所得的每套引物组中的4条引物用DEPC处理水进行溶解稀释；然后用于下述的PCR反应体系；
[0012]
【权利要求】
1.米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是:以米或米制品为待测样品，以转基因稻米LLRICE62为阳性对照，以非转基因稻米或者非LLRICE62的转基因稻米为阴性对照；包括以下步骤: .1)、设计引物: 设计耐除草剂转基因水稻LLRICE62的对应引物组；每套引物组由4条引物组成；4条引物中2条为内引物，另2条为外引物； .2 )、提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA ； .3)、核酸的恒温扩增: 将步骤2)所得的待测样品的DNA、阳性对照的DNA、阴性对照的DNA分别利用步骤I)所得的每套引物组进行以下操作: ①、步骤I)所得的每套引物组中的4条引物用DEPC处理水进行溶解稀释； ②、设置扩增反应体系: PCR反应体系
2.根据权利要求1所述的米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是: 耐除草剂转基因水稻LLRICE62引物组中的4条引物为:
LLRICE62- FIP:AGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGGGTGCATCGTCTATCAAT
LLRICE62- BIP:GGATGTGCTGCAAGGCGATTTACAACGTCGTGACTGG
LLRICE62-F3: TGTAACACGCACACTCAC
LLRICE62-B3:CTCCATGGGAATTCACTGG ； 所述 LLRICE62- FIP、LLRICE62- BIP 为内引物，所述 LLRICE62-F3、LLRICE62-B3 为外引物。
3.根据权利要求2所述的米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是: 所述步骤3)的①中:所述4条引物用DEPC处理水进行溶解稀释至浓度为20 μ mol/L~200 μ mol/L。
4.根据权利要求2或3所述的米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是: 所述步骤3)的②中: 引物LLRICE62- FIP、LLRICE62- BIP在PCR反应体系中的浓度均为8 μ mol/L ； 引物LLRICE62-F3、LLRICE62-B3在PCR反应体系中的浓度成均为I μ mol/L。
5.根据权利要求4所述的米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是:所述步骤3)的③中:于62°C扩增反应30min。
6. 根据权利要求1-5中任一所述的米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是: 所述步骤2)中选用CTAB分步离心法或者DNA提取试剂盒进行DNA的提取。
【文档编号】C12Q1/68GK103468804SQ201310409728
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月10日 优先权日:2013年9月10日
【发明者】张明哲, 陈曦, 张晓峰, 陈笑梅, 陈吴健 申请人:浙江省检验检疫科学技术研究院