一种花药培养液的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种花药培养液的制备方法，包括如下步骤：配置各种营养物质的母液，根据所需花药培养液的剂量，将各种营养物质的母液加入蒸馏水中，搅拌均匀，采用稀硫酸或稀盐酸和稀氢氧化钠来调节溶液的pH值，并定容，将配置好的培养液进行灭菌后保存。本发明花药培养液的制备方法工艺简单、操作便捷，得到的花药培养液含有大量的营养元素和微量元素，尤其是还添加了生长调节物质和酵母提取物，能满足花药培养过程中各个阶段的营养需要，有效加快了花药分裂成细胞团，进而分化成胚状体，形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株，由本发明方法得到的花药培养液中无机养分的数量和比例合适，足以满足植物细胞在各个阶段营养上和生理上的需要。
【专利说明】一种花药培养液的制备方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及一种花药培养液的制备方法,属于植物离体培养技术。
【背景技术】
[0003]培养液好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。现有花药培养液不能满足花药培养过程中各个阶段的营养需要，尤其是其中的无机养分的数量和比例不合适，难以满足植物细胞在各个阶段营养上和生理上的需要。
【发明内容】
[0004]发明目的:本发明所要解决的技术问题是提供一种花药离体培养培养液的制备方法，该方法工艺简单、操作便捷、成本低。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为:
一种花药培养液的制备方法，包括如下步骤:
步骤1，配置100L花药培养液，称取75?100g KNO3溶于5L蒸馏水中得到母液a ;称取25?5 Og NH4 NO3溶于5L蒸馏水中得到母液b ;称取175?250g KH2PO4溶于5L蒸馏水中得到母液c ;称取50?75g K2SO4溶于5L蒸馏水中得到母液d ;称取250?325g CaCl2溶于5L蒸馏水中得到母液e ;称取25?40g NaCl溶于5L蒸馏水中得到母液f ;分别称取0.25、.5gZnCl2、0.025?0.04g CuSO4.H2O,0.4?0.75gMnS04.H2O 溶于 5L 蒸馏水中得到母液 g ;称取FeSO4.7H205-7.5g和乙二胺四乙酸二钠7.45g溶于5L蒸馏水中得到母液h ；
步骤2，按要求浓度称好蔗糖、氨基酸、维生素B1、维生素B6、维生素H、生长调节物质以及酵母提取物，分别置于各自的烧杯中，再往各个烧杯中加入I?2ml0.1N (当量浓度)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度；
步骤3，向培养液器皿中倒入50L蒸馏水，将母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，搅拌均匀后，将步骤2中配置好的各物质加入培养液器皿中，搅拌均匀，继续加入蒸馏水；
步骤4，调节溶液的PH值为5.8-6.0后定容，得到所需的培养液；
步骤5，将配置好的培养液进行灭菌后保存。
[0006]其中，步骤2中，分别称取蔗糖100-200g、氨基酸1.3?2.2g、维生素B10.3?0.6g、维生素B60.7?0.8g、维生素H0.5?0.7g、生长调节物质0.06?0.07g以及酵母提取物2?3g。
[0007]其中，所述氨基酸由0.2-0.5gL_天冬酰胺、0.5-0.8gL_胱氨酸和0.6-0.9gL_丙氨酸组成。
[0008]其中，所述生长调节物质由0.01-0.02玉米素和0.05g 6_苄基腺嘌呤组成。
[0009]其中，步骤4中，采用稀硫酸或稀盐酸和稀氢氧化钠来调节溶液的PH值。
[0010]其中，步骤5中，所述培养液的灭菌为在高压蒸汽灭菌锅内，汽相150°C下，灭菌1h0
[0011]其中，步骤5中，将灭菌后的培养液置于0-3°C保存。
[0012]有益效果:本发明花药培养液的制备方法工艺简单、操作便捷，得到的花药培养液含有大量的营养元素和微量元素，尤其是还添加了生长调节物质和酵母提取物，能满足花药培养过程中各个阶段的营养需要，有效加快了花药分裂成细胞团，进而分化成胚状体，形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株，由本发明方法得到的花药培养液中无机养分的数量和比例合适，足以满足植物细胞在各个阶段营养上和生理上的需要。
【具体实施方式】
[0013]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0014]实施例1
一种花药培养液，该培养液由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物五类物质组成，载体为水，
其中，无机营养物按以下配比制成=KNO3:150?200mg/L，NH4 NO3:50?100mg/L，KH2PO4:350-500mg/L，K2SO4:100-l50mg/L，CaCl2:500-650mg/L，NaCl:50-80mg/L，ZnCl2:0.5?1.0mg/L, CuSO4.H2O:0.05?0.08mg/L, MnSO4.H2O:0.8?1.5mg/L, FeSO4:1.(l.5mg/L ；其中，所述碳源为蔗糖或葡萄糖；
其中，所述维生素为维生素B1、维生素B6和维生素H ;
其中，所述生长调节物质由以下配比制成:广2 mg/L玉米素和疒3 mg/L 6-苄基腺嘌
吟；
其中，所述有机附加物为酵母提取物以及氨基酸。
[0015]其中，所述培养液的PH值为5.5?6.5。
[0016]其中，所述培养液的EC值为1.0-l.5ms/cm。
[0017]其中，所述蔗糖或葡萄糖在培养液中的摩尔浓度为0.1-0.2mol/L。
[0018]其中，所述氨基酸为L-天冬酰胺、L-胱氨酸以及L-丙氨酸，其中，L-天冬酰胺、L-胱氨酸和L-丙氨酸在培养液中的摩尔浓度均为5?7mmol/L。
[0019]其中，所述维生素BI在培养液中的摩尔浓度为f 2mmol/L，维生素B6在培养液中的摩尔浓度为1.5-2mmol/L和维生素H在培养液中的摩尔浓度为f 1.5mmol/L。
[0020]其中，所述酵母提取物在培养液中的摩尔浓度为2?3mmol/L。
[0021]上述花药培养液的制备方法包括如下步骤:
步骤1，配置IOOL花药培养液，称取IOOg KNO3溶于5L蒸馏水中得到母液a;称取5Og NH4 NO3溶于5L蒸馏水中得到母液b ;称取250g KH2PO4溶于5L蒸馏水中得到母液c ；称取75g K2SO4溶于5L蒸馏水中得到母液d;称取325g CaCl2溶于5L蒸馏水中得到母液e ;称取40g NaCl溶于5L蒸馏水中得到母液f ;分别称取0.5g ZnCl2、0.04g CuSO4.H2O,0.75gMnS04.H2O溶于5L蒸馏水中得到母液g ;称取FeSO4.7H207.5g和乙二胺四乙酸二钠
7.45g溶于5L蒸馏水中得到母液h ；
步骤2,分别称取200g鹿糖、0.5gL-天冬酰胺、0.8gL-胱氨酸、0.9gL_丙氨酸、0.6g维生素B1、0.8g维生素B6、0.7g维生素H、0.02玉米素、0.05g 6-苄基腺嘌呤以及2g酵母提取物，分别置于各自的烧杯中，再往各个烧杯中加入I?2ml0.1N (当量浓度的)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度；
步骤3，向培养液器皿中倒入50L蒸馏水，将母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，搅拌均匀后，将步骤2中配置好的各物质加入培养液器皿中，搅拌均匀，继续加入蒸馏水；
步骤4，用稀硫酸和稀氢氧化钠调节溶液的PH值为6.0后定容；
步骤5，将配置好的培养液置于高压蒸汽灭菌锅内，汽相150°C下，灭菌lh，将灭菌后的培养液置于(T3°C保存。
[0022]实施例2
上述花药培养液的制备方法包括如下步骤:
步骤1，配置100L花药培养液，称取75g KNO3溶于5L蒸馏水中得到母液a ;称取25 gNH4 NO3溶于5L蒸馏水中得到母液b ;称取175g KH2PO4溶于5L蒸馏水中得到母液c ;称取50g K2SO4溶于5L蒸馏水中得到母液d ;称取250g CaCl2溶于5L蒸馏水中得到母液e ;称取2 5g NaCl溶于5L蒸馏水中得到母液f;分别称取0.2 5g ZnCl2、0.025g CuSO4.H2O、
0.4gMnS04.Η20溶于5L蒸馏水中得到母液g ;称取FeSO4 WH2OSg和乙二胺四乙酸二钠7.45g溶于5L蒸馏水中得到母液h;
步骤2,分别称取IOOg鹿糖、0.2gL-天冬酰胺、0.5gL-胱氨酸、0.6gL_丙氨酸、0.3g维生素B1、0.7g维生素B6、0.5g.维生素H、0.01玉米素、0.05g 6-苄基腺嘌呤以及3g酵母提取物；
步骤3，向培养液器皿中倒入50L蒸馏水，将母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，搅拌均匀后，将步骤2中配置好的各物质加入培养液器皿中，搅拌均匀，继续加入蒸馏水；
步骤4，用稀硫酸和稀氢氧化钠调节溶液的PH值为5.8后定容；
步骤5，将配置好的培养液置于高压蒸汽灭菌锅内，汽相150°C下，灭菌lh，将灭菌后的培养液置于(T3°C保存。
【权利要求】
1.一种花药培养液的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: 步骤1，配置IOOL花药培养液，称取75?100g KNO3溶于5L蒸馏水中得到母液a ;称取25?5 Og NH4 NO3溶于5L蒸馏水中得到母液b ;称取175?250g KH2PO4溶于5L蒸馏水中得到母液c ;称取50?75g K2SO4溶于5L蒸馏水中得到母液d ;称取250?325g CaCl2溶于5L蒸馏水中得到母液e ;称取25?40g NaCl溶于5L蒸馏水中得到母液f ;分别称取0.25、.5gZnCl2、0.025?0.04g CuSO4.H2O,0.4?0.75gMnS04.H2O 溶于 5L 蒸馏水中得到母液 g ;称取FeSO4.7H205-0.5g和乙二胺四乙酸二钠7.45g溶于5L蒸馏水中得到母液h ； 步骤2，按要求浓度称好蔗糖、氨基酸、维生素B1、维生素B6、维生素H、生长调节物质以及酵母提取物，分别置于各自的烧杯中，再往各个烧杯中加入I?2ml0.1N氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度； 步骤3，向培养液器皿中倒入50L蒸馏水，将母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，搅拌均匀后，将步骤2中配置好的各物质加入培养液器皿中，搅拌均匀，继续加入蒸馏水； 步骤4，调节溶液的PH值为5.0-6.0后定容，得到所需的培养液； 步骤5，将配置好的培养液进行灭菌后保存。
2.(克当量浓度) 根据权利要求1所述花药培养液的制备方法，其特征在于:步骤2中，分别称取蔗糖10(T200g、氨基酸1.3?2.2g、维生素B10.3?0.6g、维生素B60.7?0.8g、维生素H0.5?0.7g、生长调节物质0.06、.07g以及酵母提取物2?3g。
3.根据权利要求2所述花药培养液的制备方法，其特征在于:所述氨基酸由0.2-0.5gL-天冬酰胺、0.5-0.8gL-胱氨酸和0.6-0.9gL_丙氨酸组成。
4.根据权利要求2所述花药培养液的制备方法，其特征在于:所述生长调节物质由0.0 0.02玉米素和0.05g 6-苄基腺嘌呤组成。
5.根据权利要求1所述花药培养液的制备方法，其特征在于:步骤4中，采用稀硫酸或稀盐酸和稀氢氧化钠来调节溶液的PH值。
6.根据权利要求1所述花药培养液的制备方法，其特征在于:步骤5中，所述培养液的灭菌为在高压蒸汽灭菌锅内，汽相150°C下，灭菌lh。
7.根据权利要求1所述花药培养液的制备方法，其特征在于:步骤5中，将灭菌后的培养液置于(T3°C保存。
【文档编号】C12N5/04GK103436482SQ201310330909
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月1日 优先权日:2013年8月1日
【发明者】谭美兰 申请人:南京年吉冷冻食品有限公司