植物细胞分化促进剂的利记博彩app
【专利摘要】本发明的课题是提供植物细胞分化促进剂，该植物细胞分化促进剂促进由愈伤组织向正常的不定胚的分化，或促进由植物切片向不定根或不定芽的分化，作为结果可以稳定地获得再生植物体，本发明提供含有本发明的特定的酮醇脂肪酸、或其衍生物作为有效成分的植物分化促进剂。
【专利说明】植物细胞分化促进剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物细胞分化促进剂，其包含碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸，所述碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸(以下称为特定的酮醇脂肪酸)中，构成羰基的碳原子与结合有羟基的碳原子处于α位的位置。本发明进一步涉及由愈伤组织或植物切片制成再生植物体的制成方法，其包含添加特定的酮醇脂肪酸的步骤。
【背景技术】
[0002]利用了植物体所具有的分化全能性的组织培养技术在以均质的优良克隆的增产、脱毒植物的再生、新品种制成为目的的育种中已经变得不可或缺。通过使用植物体的组织培养技术，使愈伤组织增殖，接着对增殖组织改变培养基中的生长素(auxin)和细胞因子的浓度比，从而可以使其向不定芽或不定根进行器官分化，或经由不定胚而得到再生植物体。然而，已知这些组织培养技术受到所用的基本培养基和/或碳源、植物激素、盐类的种类、浓度或者培养温度等的影响，稳定地由愈伤组织诱导不定胚、不定芽、和/或不定根经常是困难。
[0003]通过应用组织培养技术，可以进行向高等植物导入外来基因的转化和/或细胞融合。例如，农杆菌转化法中，进行以下过程:使植物片或愈伤组织感染农杆菌后，移至包含筛选用抗生素的再分化培养基进行培养，在筛选导入了外来基因的细胞的同时使其再分化。此时，根据植物种类不同，有时虽然植物细胞内导入了外来基因，但由于再分化能力低而得不到转化体。另外，在利用远缘的组合的细胞融合杂种的制成中，还存在即使得到了融合细胞，也由于再分化能力低而在中途阶段一方的染色体脱落，不能再分化成完全的植物体这样的问题。因此，转化和/或细胞融合的技术中，由愈伤组织向植物体的再分化效率是重要的。
[0004]到目前为止，为了高效且短时间地使其再分化，提出了数个方案。例如，日本特开平5-219851号公报中报告了将用添加了马铃薯提取物的愈伤组织增殖培养基培养而得的不定胚样的愈伤组织移植到降低了主要无机盐类浓度的再分化培养基中的禾本科植物的再生方法；日本特开平6-153730号公报中报告了使增殖了的愈伤组织某种程度干燥然后移植到再分化培养基，进行静置培养的灯芯草的愈伤组织再分化法；日本特开2000-217457号公报中报告了置床于含有细胞分裂素系的植物激素的进行了 pH值调整的合成培养基进行培养的洋麻的愈伤组织再分化方法；日本特开2000-270854号公报中报告了将补血草的植物体的一部分用含有毒莠定的培养基进行培养，诱导愈伤组织，进行培养增殖，然后将其愈伤组织用含有细胞分裂素的培养基进行培养的制作再分化植物体的方法。进而，日本特开平5-49470号公报、日本特开平10-191966号公报、及日本特开平10-229875号公报中公开了培养属于肠杆菌属、芽孢杆菌属或者绿脓杆菌属的微生物，从该培养液提取的植物愈伤组织细胞分化剂。
[0005]然而，这些方法均限定了品种和/或生理的要素，并且其效果难以说是充分的。
[0006]另一方面，本申请发 明者们发现，作为碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸的、构成羰基的碳原子与结合有羟基的碳原子处于α位的位置的、碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸，特别是9-羟基-10-氧代-12 (Ζ)，15 (Ζ)-十八碳二烯酸具有花芽形成促进作用、进而具有植物赋活作用(日本特开平11-29410号公报及日本特开2001-131006号公报)。
【发明内容】
[0007]发明要解决的课题
[0008]本发明的课题是提供植物细胞分化促进剂，该植物细胞分化促进剂促进由愈伤组织向正常的不定胚、不定根、或不定芽的分化，或促进由植物切片向不定根或不定芽的分化，作为结果可以稳定地获得再生植物体。另外，本发明的课题是提供促进由从植物体的一部分诱导而得的愈伤组织向不定胚、不定根、或不定芽的分化，或由植物切片向不定根或不定芽的分化，高效地获得再生植物体的方法。
[0009]用于解决课题的方法
[0010]对于作为植物激素的一种的特定的酮醇脂肪酸，本
【发明者】对于其效果进行了深入研究，结果令人惊讶地发现，在由愈伤组织向不定胚的诱导工序中，特定的酮醇脂肪酸促进由愈伤组织向正常的不定胚的诱导，从而完成了本发明。
[0011]本发明还涉及以含有该特定的酮醇脂肪酸、或其衍生物作为有效成分为特征的植物细胞分化促进剂，以及通过使用该特定的酮醇脂肪酸或其衍生物的再生植物体的制成方法。
[0012]更具体地，本申请包含以下发明。
[0013][1]植物细胞分化促进剂，其包含碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸，所述碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸中，构成羰基的碳原子与结合有羟基的碳原子处于α位的位置。
[0014][2]根据[1]所述的植物细胞分化促进剂，所述酮醇脂肪酸中，碳之间的双键存在1~6处，但是，该双键数不超过酮醇脂肪酸的碳键数。
[0015][3]根据[1]或[2]所述的植物细胞分化促进剂，所述酮醇脂肪酸的碳原子数为18，且碳之间的双键存在2处。
[0016][4]根据[1]~[3]的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述酮醇脂肪酸是9-羟基-10-氧代-12 (Ζ), 15 (Ζ)-十八碳二烯酸(以下，称为K0DA)。
[0017][5]根据[1]~[4]的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述植物细胞分化促进剂促进由植物的愈伤组织向不定胚、不定根、或不定芽的分化。
[0018][6]根据[1]~[4]的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述植物细胞分化促进剂促进由植物切片向不定芽或不定根的分化。
[0019][7]根据[1]~[4]的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述植物细胞分化促进剂促进经由不定胚、不定根、或不定芽向再生植物体的分化。
[0020][8]再生植物体的制成方法，是由愈伤组织制成再生植物体的制成方法，其中，包括以下工序:在将传代培养基中维持的愈伤组织移植到再分化培养基的3周前至移植后2周的期间，对愈伤组织施用[1]~[4]的任一项所述的植物细胞分化促进剂。
[0021][9]根据[8]的再生植物体的制成方法，所述期间是移植到再分化培养基的2周前至移植到再分化培养基后1周的期间。
[0022][10]使用[9]所述的再生植物体的制成方法制成的再生植物体。[0023][11]植物培养用培养基，其包含[1]~[4]的任一项所述的植物细胞分化促进剂。
[0024]发明的效果
[0025]通过将本发明的植物细胞分化促进剂施用(滴加)于作为脱分化了的细胞的块的愈伤组织，从而发挥向正常的不定胚的诱导能力。用于诱导不定胚分化的通用条件尚未确立，多数情况下，通过将愈伤组织用包含生长素的培养基进行培养后，移至不含生长素或生长素浓度低的培养基中来诱导不定胚分化，但即使是由同一个体、同一组织获得的愈伤组织，根据愈伤组织的状态不同，不定胚诱导能力、诱导效率也有较大差异，不稳定。因此，通过使用本发明的植物细胞分化促进剂，可以提高并稳定不定胚分化的效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0026]图1是显示诱导由荀叶芋属(Spathiphyllum)的愈伤组织向不定胚的分化时K0DA的效果的图。与对照区相比，在2周后施用了 K0DA的处理区回收了较多的不定胚。
[0027]图2是显示诱导由苞叶芋属的愈伤组织向不定胚的分化时K0DA的效果的坐标图。显示K0DA的施用时期影响不定胚分化的诱导。
[0028]图3是显示诱导由苞叶芋属的愈伤组织向不定胚的分化时K0DA的浓度对再分化效率的影响的图。
[0029]图4是将作为图3的结果的再分化了的植物体数作为坐标图表示而得的图。显示在各浓度，与对照相比，再分化了的植物体数增加。
[0030]图5是显示在K0DA处理区地上部及地下部的生长变好的图。
[0031]图6是将作为图5的结果的再分化的植物体分为地上部和地下部，使将其干燥后测定的重量的比较作为坐标图表示而得的图。显示与对照相比，通过K0DA处理而重量增加。
【具体实施方式】
[0032] 本发明涉及植物细胞分化促进剂，其特征在于，包含特定的酮醇脂肪酸、或其衍生物作为有效成分。优选本发明的植物细胞分化促进剂促进由愈伤组织向不定胚的正常分化。愈伤组织分化成不定胚后，进一步分化成再生植物体。因此，通过促进由愈伤组织向正常的不定胚的分化，最终可以高效地获得再生植物体。
[0033]在其他方式中，本发明的植物细胞分化促进剂促进器官分化。作为器官分化的例子，可列举向不定器官、例如不定芽和/或不定根的分化。本发明的植物细胞分化促进剂促进由愈伤组织向不定器官的正常分化、或者由植物体的一部分向不定器官、例如不定根和/或不定芽的正常分化。在由愈伤组织分化成不定器官、例如不定芽和/或不定根的情况下，愈伤组织经由不定芽或不定根进一步分化成再生植物体。在由植物体的一部分分化不定芽或不定根的情况下，通过从植物体的一部分出现不定芽或不定根来获得再生植物体。
[0034]进一步在其他方式中，本发明涉及由愈伤组织或植物体的一部分制成再生植物体的制成方法，其包括将含有上述细胞分化促进剂的溶液施用于愈伤组织或植物体的一部分进行培养的步骤。优选在由愈伤组织制成再生植物体的制成方法中，上述细胞分化促进剂如下施用:在从移至再分化培养基的3周前到移植后2周的期间，对愈伤组织滴加1次或多次。更优选在向再分化培养基移植的2周前到移植后1周的期间对愈伤组织施用1次或多次。在由植物体的一部分制成再生植物体的制成方法中，可以通过将植物体的一部分切下后立即将切口浸泡于包含上述细胞分化促进剂的溶液中来施用。还可以取代对愈伤组织和/或植物体直接施用包含细胞分化促进剂的溶液，而在添加了该细胞分化促进剂的培养基中培养愈伤组织或植物的一部分。
[0035]本发明的植物细胞分化促进剂所含的特定的酮醇脂肪酸是碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸，是在同一分子内具有醇的羟基和酮的羰基的脂肪酸。
[0036]特定的酮醇脂肪酸优选构成羰基的碳原子与结合有羟基的碳原子处于α位或、位的位置，特别优选为α位。另外，特定的酮醇脂肪酸优选碳之间的双键存在0~6处(但是，该双键数不超过酮醇脂肪酸的碳键数)。
[0037]另外，优选特定的酮醇脂肪酸的碳原子数为18，且碳之间的双键存在1~2处。
[0038]作为特定的酮醇脂肪酸的具体例，可列举例如，9-羟基-10-氧代-12(Ζ)，15(Ζ)_十八碳二烯酸[以下，有时也称为特定的酮醇脂肪酸(I)或K0DA]、13-羟基-12-氧代-9(Ζ)，15(Ζ)_十八碳二烯酸[以下，有时也称为特定的酮醇脂肪酸
(II)]、13-羟基-10-氧代-11 (Ε)，15 (Ζ)-十八碳二烯酸[以下，有时也称为特定的酮醇脂肪酸(ΙΙΙ)]、9-羟基-12-氧代-10(Ε)，15(Ζ)_十八碳二烯酸[以下，有时也称为特定的酮醇脂肪酸(IV)]、9，15，16-羟基-10-氧代-12⑵-十八碳单烯酸、9，15-羟基-10-氧代-16-氯-十八碳单烯酸、9，16-羟基-10-氧代-15-氯-十八碳单烯酸等。
[0039]以下，记载特定的酮醇脂肪酸⑴~(IV)的化学结构式。
[0040]
【权利要求】
1.植物细胞分化促进剂，其包含碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸，所述碳原子数为4~24的酮醇脂肪酸中，构成羰基的碳原子与结合有羟基的碳原子处于α位的位置。
2.根据权利要求1所述的植物细胞分化促进剂，所述酮醇脂肪酸中，碳之间的双键存在1~6处，但是，该双键数不超过酮醇脂肪酸的碳键数。
3.根据权利要求1或2所述的植物细胞分化促进剂，所述酮醇脂肪酸的碳原子数为18，且碳之间的双键存在2处。
4.根据权利要求1~3的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述酮醇脂肪酸是9-羟基-10-氧代-12 (Ζ)，15 (Ζ)-十八碳二烯酸。
5.根据权利要求1~4的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述植物细胞分化促进剂促进由植物的愈伤组织向不定胚、不定根、或不定芽的分化。
6.根据权利要求1~4的任一项所述的植物细胞分化促进剂，所述植物细胞分化促进剂促进由植物切片向不定芽或不定根的分化。
7.再生植物体 的制成方法，是由愈伤组织制成再生植物体的制成方法，其中，包括以下工序:在将传代培养基中维持的愈伤组织移植到再分化培养基的3周前至移植后2周的期间，对愈伤组织施用权利要求1~4的任一项所述的植物细胞分化促进剂。
8.植物培养用培养基，其包含权利要求1~4的任一项所述的植物细胞分化促进剂。
【文档编号】C12N5/04GK103635572SQ201280032438
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年6月29日 优先权日:2011年7月1日
【发明者】横山峰幸, 高木一辉, 大西升, 绳田由纪子 申请人:株式会社资生堂