专利名称：一株人参病害生物防治菌株的获得及应用的利记博彩app
技术领域：
本发明属于植物生物防治技术领域，具体涉及防治植物，特别是一株人参病害生物防治菌株的甲基营养型芽孢杆菌iBaciIlusmethyIotrophicus')及应用。
背景技术：
人参是一种名贵的中药材，在我国具有悠久的药用历史，近些年由于市场需求的增长，人工栽培人参规模也随之增加。在人参种植过程中，病害的发生和发展将会对产量和品质造成严重的影响，有效控制病害是人参生产中的重要环节。目前，防治病害的主要方法
是利用化学农药在病害发生期进行控制，但长期使用化学农药或不合理使用会导致人参中农药残留超标、品质下降、污染环境和病原菌产生抗药性等不良后果的出现。自2007年以来，我国人参产品出口数量呈下降趋势，出口的人参常因农药残留超标不时有被退回的现象发生，国际市场信誉不良。因此开展人参病害生物防治研究，获得生防菌株和有效产品，减少或替代化学农药的使用，对于保障我国人参生产安全，加快人参产业可持续发展进程，提高我省人参产品的质量及国际市场竞争力具有重要意义。植物内生菌是一类定殖在植物体内与植物建立和谐关系的一类微生物，有些菌株具有拮抗、促生等生物学功能，可产生多种生物活性物质，特别是在新的抗植物病虫害物质方面，为我们提供了一类新的微生物资源，目前已有多种植物的功能内生菌报道。因此，从人参植株体内获得具有较好抗菌和生防作用的新型细菌菌株，进而生产出高效的生物菌齐U，将有利于人参病害的防治，减少化学农药的污染。
发明内容
本发明的目的是植物，特别是人参病害防治生物农药，克服农药残留超标问题，而提供一种人参内生拮抗细菌，甲基营养型芽孢杆菌菌株。甲基营养型芽孢杆菌iBac i 11 u sme thylotrophicu，它的保藏编号为CGMCCNo.6679 ；
甲基营养型芽孢杆菌NJ13的种子培养基，它包括胰蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl5g/L，pH 为 7.0;
甲基营养型芽孢杆菌NJ13的发酵培养基，它包括葡萄糖30 g/L、淀粉15 g/L、酵母浸粉 15 g/L、NaCl 5 g/L、K2HPO4 I g/L , pH 8. O ；
甲基营养型芽孢杆菌NJ13在防治植物病害方面的应用，所述的植物病害是由人参锈腐病菌、人参灰霉病菌、人参菌核病菌、人参疫病病菌、人参黑斑病菌、人参根腐病菌、人参立枯病菌、大豆根腐病镰刀菌、玉米茎基腐病镰刀菌、玉米大斑病菌、水稻纹枯病菌、烟草赤星病菌、烟草炭疽病菌、番茄叶霉病菌、甜瓜细菌性果斑病菌、烟草野火病菌、番茄细菌性斑点病菌、白菜软腐病菌、黄瓜细菌性斑点病菌和\或水稻白叶枯病菌引起的；
植物病害防治的生物农药，它是甲基营养型芽孢杆菌NJ13的发酵菌液 植物病害防治的生物农药，它是发酵菌液滤出菌体后的滤液。
植物病害防治的生物农药是由下述方法制得，它包括
1)种子培养液制备，甲基营养型芽孢杆菌NJ13在种子培基中，即胰蛋白胨10g/L、酵母膏 10 g/L、NaCl 5g/L、pH 7. 0，培养 IOh ;
2)种子培养液接种于发酵培养基中，即葡萄糖30g/L、淀粉15 g/L、酵母浸粉15 g/L、NaCl 5 g/L、K2HPO4 I g/L, pH 8.0，28°C恒温摇床培养96 h，制得的发酵液;
将所述的发酵液稀释5倍。本发明提供了人参内生拮抗细菌NJ13，是一种甲基营养型芽孢杆菌，是从人参茎部分离、筛选得到的；其发酵菌液及其滤液能拮抗人参常见7种病害及其它常见植物病害，特别是对人参灰霉病和人参黑斑病防治效果更佳；它来源于人参植株，对人参安全；发酵过程中所用原料成本较低；抗菌活性物质制备简单，操作方便，防治效果好；能有效的解决人参农药防治残留严重的问题，是一种可产业化生产的、广谱、高效的绿色生物农药。
图1为NJ13菌株菌体对3种人参病原菌的抑制作用图，A :人参菌核病菌；B :人参立枯病菌；C :人参黑斑病菌；
图2为NJ13菌株的抗菌谱的测定，A :人参灰霉病菌；B :人参立枯病菌；C :人参锈腐病菌；D :人参根腐病菌；
图3为NJ13菌株菌落形态和染色观察，A :菌落形态；B :革兰氏染色形态；
图4为NJ13菌株的细胞形态；
图5为NJ13菌株的发酵稀释液对人参灰霉病菌的田间防治作用图，A :清水对照；B 发病后喷施NJ13菌株5倍稀释液的防治效果；
图6为NJ13菌株的发酵稀释液对人参黑斑病菌的田间防治作用图，A :清水对照；B 发病后喷施NJ13菌株5倍稀释液的防治效果。
具体实施例方式实施例1人参内生拮抗细菌株NJ13的筛选
2010年6 9月，在吉林省5个地区分别采集新鲜人参(/ :炉'/ ·^/ ^)样品，采集部位为整个植株，生长期为4年。在人参根、茎、叶不同器官中共分离获得了 152株内生细菌。进行人参拮抗内生菌的筛选分为初筛和复筛。其中人参植物茎部分离的NJ13菌株；于2012年10月18日，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏中心登记入册编号为CGMCC No. 6679，保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路中国科学院微生物研究所，邮政编码100101 ;分类命名甲基营养型芽孢杆菌{Bad llusme thylo trophi cus )。实施例2人参内生拮抗细菌株NJ13的抗菌性测定
釆用对峙法对分离得到的人参内生拮抗细菌NJ13进行菌体抑菌活性的实验。将7种人参病害IE标菌(人参锈腐病菌iCylindrocarpon人参灰霉病菌iBotrytis
cinerea)Λ 人参菌核病 HSclerotinia schinseng、、人参疫霉鬼 iPhytophthora 人参黑斑病菌(Alternaria人参根腐菌iFusarium solani)、人参立枯
病菌挪i))菌饼接入TOA培养皿中央，同时将内生细菌NJ13划线接入靶标菌两侧，25 0C培养2 4d，人参内生拮抗细菌NJ13菌体对上述病害均有抑菌作用(图1)。采用杯碟法对人参内生拮抗细菌株NJ13，进行无菌发酵液抗菌谱测定。①将菌株NJ13接种于装有50mL NB液体培养基的250 mL三角瓶中，28°C振荡培养IOh (150 r/min)制成种子液；②按3%的接种量，将种子液接入50ml细菌液体培养基中(葡萄糖20 g/L,胰蛋白胨 5 g/L，酵母粉 5 g/L，牛肉膏 3. 8 g/L, NaCl 5 g/L，CaCO3 I g/L, pH 7.0)，于 28°C振荡培养(150 r/min)3d ;③收集培养液离心(12000 r/min, 4°C) 15 min后得清液，取上清液用O. 22 Mffl的无菌滤膜过滤除菌后备用，得无菌发酵液。④将Iml无菌水加入靶标菌的培养试管中，用接种针将菌丝和孢子刮下制成菌悬液与PDA培养基10 mL混合后到入9 cm的培养皿中制成混菌平板。⑤将灭菌牛津杯放入混好靶标菌的PDA平板中央，杯中加入200·KL无菌发酵滤液，分别置25°C培养3 d 5 d (真菌)、28°C培养I d (细菌)后测定抑菌圈直径。结果发现菌株NJ13的发酵液对7种常见人参病菌及其它病原真菌都有不同程度的抑制作用(图2)，而发酵液对8种病原细菌的抑菌效果明显小于表I中真菌的抑菌效果，其中对大豆细菌性斑点病菌没有抑制效果(表I)。证明菌株NJ13所产生的活性物质的抑菌谱较广，且对不同种类病原菌具有选择性。表I菌株NJ13发酵滤液对22种植物病原菌的抑菌效果
权利要求
1.甲基营养型芽孢杆菌，它的保藏编号为CGMCCNo. 6679。
2.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌NJ13的种子培养基，它包括胰蛋白胨10g/L、酵母膏 10 g/L, NaCl 5 g/L，pHS7.0。
3.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌NJ13的发酵培养基，它包括葡萄糖30g/L、淀粉 15 g/L、酵母浸粉 15 g/L、NaCl 5 g/L、K2HPO4 I g/L，pH 为 8. O。
4.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌NJ13在防治植物病害方面的应用，所述的植物病害是由人参锈腐病菌、人参灰霉病菌、人参菌核病菌、人参疫病病菌、人参黑斑病菌、人参根腐病菌、人参立枯病菌、大豆根腐病镰刀菌、玉米茎基腐病镰刀菌、玉米大斑病菌、水稻纹枯病菌、烟草赤星病菌、烟草炭疽病菌、番茄叶霉病菌、甜瓜细菌性果斑病菌、烟草野火病菌、番茄细菌性斑点病菌、白菜软腐病菌、黄瓜细菌性斑点病菌和/或水稻白叶枯病菌引起的。
5.植物病害防治的生物农药，它是权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌NJl3发酵菌液。
6.植物病害防治的生物农药，它是权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌NJl3发酵菌液滤出菌体后的滤液。
7.植物病害防治的生物农药，是由下述方法制得，它包括 1)种子培养液制备，权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌NJ13在权利要求2所述的种子培基中，培养10 h ； 2)种子培养液接种于权利要求3所述的发酵培养基中，28°C恒温摇床培养96h，制得发酵液。
8.根据权利要求7所述的植物病害防治的生物农药，其特征在于，将所述的发酵液稀释5倍。
全文摘要
本发明公开了一株人参病害生物防治菌株的获得及应用，它是人参内生拮抗细菌NJ13，一种甲基营养型芽孢杆菌，是从人参茎部分离、筛选得到的；其发酵菌液及其滤液能拮抗人参常见7种病害及其它常见植物病害，特别是对人参灰霉病和人参黑斑病防治效果更佳；它来源于人参植株，对人参安全；发酵过程中所用原料成本较低；抗菌活性物质制备简单，操作方便，防治效果好；能有效的解决人参农药防治残留严重的问题，是一种可产业化生产的、广谱、高效的绿色生物农药。
文档编号C12N1/20GK103013860SQ201210498378
公开日2013年4月3日 申请日期2012年11月29日 优先权日2012年11月29日
发明者陈长卿, 姜云, 尹望 申请人:吉林农业大学