专利名称：一种嗜热链球菌复合抗冻因子的利记博彩app
一种嗜热链球菌复合抗冻因子技术领域
本发明属于嗜热链球菌抗冻技术领域，涉及一种嗜热链球菌复合抗冻因子。
背景技术：
嗜热链球菌通常被用来制作乳酸菌种，它是酸奶生产中制备发酵剂的常用乳酸菌种之一，酸奶的产品质量与发酵剂质量的优劣密切相关。作为一种对人体有明显食疗作用的有益菌，它的开发利用一直得到国内外乳品界的高度重视。
目前嗜热链球菌菌粉的制备主要采用真空冷冻干燥技术。真空冷冻干燥是生产商品化乳酸菌发酵剂的一项关键技术。但嗜热链球菌如果直接进行冷冻干燥，不可避免地会造成部分细胞的死亡或损伤，对生产十分不利，从而造成发酵剂的活力明显下降。影响乳酸菌冻干效果的因素有很多，如菌株、细胞大小及形状、初始菌悬液浓度、培养基组成、培养条件、保护剂、预冻条件、冻干条件等，其中培养基组成是一个关键因素。发明内容
本发明解决的问题在于提供一种嗜热链球菌复合抗冻因子，将该复合抗冻因子添加到培养基中培养嗜热链球菌之后，可提高菌体的抗冷冻能力，可以提高嗜热链球菌的冻干存活率。
本发明是通过以下技术方案来实现
一种嗜热链球菌复合抗冻因子，以质量份数计，包括以下组分
甜菜碱O. I O. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份。
进一步的，以质量份数计，包括以下组分
甜菜碱O. 2 O. 4份、氯化钠3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸I丐O. 3 O. 35 份。
所述嗜热链球菌复合抗冻因子加入到嗜热链球菌培养基之后，各组分的浓度分别为甜菜碱O. I O. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和CaCO3O. I O. 4g/L。
一种嗜热链球菌的冷冻保存方法，包括以下步骤
I)以质量份数计，按照以下组分配制成复合抗冻因子
甜菜碱O. I O. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份；
2)将复合抗冻因子配制成溶液，微孔滤膜除菌后添加至无菌的M17培养基中， 使得各组份的浓度分别为甜菜碱O. I O. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和 CaCO3O. I O. 4g/L ；
然后接种嗜热链球菌，培养18h后，离心收集菌体；
3)用生理盐水清洗菌体，离心，再无菌生理盐水重悬菌体配制成菌悬液，将菌悬液与保护剂按照I :0. 8 I. 2的体积比均匀混合，静置20 30min后装于冻干管中， 在-35 _40°C下预冻至少12h后，于温度为-50 _56°C、真空度为4 6Pa的条件下冻干 24h;
4)最后，用生理盐水将嗜热链球菌复溶。
所述的保护剂以水为溶剂，包括脱脂奶粉150 180g/L、海藻糖10 20g/L、甘油 O. 2 I. Og/L和抗坏血酸O. 2 I. Og/Lo
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果
本发明提供的嗜热链球菌复合抗冻因子，从培养基的角度，在培养基中添加抗冻因子，以促进冻干保护物质的形成和积累或转化为其他物质，抑制冻干过程中共晶现象的发生，这类保护性物质的积累，可以改变嗜热链球菌的细胞膜脂肪酸的组成，甚至诱导抗冻蛋白的产生，从而提高菌体在冻干及贮存过程中的抗冷冻能力及菌体存活率。
在培养基中添加本发明的复合抗冻因子后，可以使嗜热链球菌的冻干存活率最高达73. 5%，而如果没有添加该复合抗冷冻因子，则菌体在冷冻干燥过程中的存活率最高仅 49.5%。与不添加复合抗冻因子相比，存活率提高了 1.4倍多，具有显著的效果。
具体实施方式
本发明提供一种嗜热链球菌复合抗冻因子，将该复合抗冻因子添加到培养基中培养嗜热链球菌之后，可提高菌体的抗冷冻能力，可以提高嗜热链球菌的冻干存活率。下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
一种嗜热链球菌复合抗冻因子，以质量份数计，包括以下组分
甜菜碱O. I O. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖O. 5 3份和碳酸I丐O. I O. 4份。
进一步，以质量份数计，包括以下组分
甜菜碱O. 2 O. 4份、氯化钠3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸I丐O. 3 O. 35 份。
嗜热链球菌复合抗冻因子加入到嗜热链球菌培养基之后，各组分的浓度分别为 甜菜碱O. I O. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖O. 5 3g/L和CaCO3O. I O. 4g/L。
实施例I :
按质量配比将复合抗冻因子配制成溶液，将微孔滤膜除菌的复合抗冷冻因子添加至无菌的M17培养基中，然后接种嗜热链球菌，培养18h，然后以转速为5000r/min离心 IOmin,收集菌体；
用生理盐水清洗菌体2次，离心弃去上清液；用无菌生理盐水将菌体配制成 6±0. 5X101(lCfu/mL菌悬液后，按照体积比为I : I将菌悬液与保护剂(脱脂奶粉150g/L+海藻糖10g/L+甘油+抗坏血酸O. 2g/L)均匀混合，然后，静置20-30min后装于冻干管中，装样高度 O. 3-0. 5cm ；
接着放入-35 _40°C的冰箱中预冻24h后，移转入真空冷冻干燥机中，于温度为_56°C，真空度为4-6Pa的条件下冻干24h ;最后，用生理盐水复溶，M17固体培养基计数， 测定菌粉活性和菌体存活率。
添加不同配比的复合抗冻因子，发酵得到的菌体进行冻干活菌率的验证结果如表 I所示
表I添加不同配比的复合抗冷冻因子及对应的存活率
权利要求
1.一种嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，以质量份数计，包括以下组分 甜菜碱0. I 0. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖0. 5 3份和碳酸I丐0. I 0. 4份。
2.如权利要求I所述的嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，以质量份数计，包括以下组分 甜菜碱0. 2 0. 4份、氯化钠3 4. 5份、甘露糖I. 5 2. 5份和碳酸钙0. 3 0. 35份。
3.如权利要求I所述的嗜热链球菌复合抗冻因子，其特征在于，嗜热链球菌复合抗冻因子加入到嗜热链球菌培养基之后，各组分的浓度分别为甜菜碱0. I 0. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖 0. 5 3g/L 和 CaCO3O. I 0. 4g/L。
4.一种嗜热链球菌的冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤 1)以质量份数计，按照以下组分配制成复合抗冻因子 甜菜碱0. I 0. 4份、氯化钠3 5份、甘露糖0. 5 3份和碳酸I丐0. I 0. 4份； 2)将复合抗冻因子配制成溶液，微孔滤膜除菌后添加至无菌的M17培养基中，使得各组份的浓度分别为甜菜碱0. I 0. 4g/L、氯化钠3 5g/L、甘露糖0. 5 3g/L和CaCO3O. I 0. 4g/L ； 然后接种嗜热链球菌，培养18h后，离心收集菌体； 3)用生理盐水清洗菌体，离心，再无菌生理盐水重悬菌体配制成菌悬液，将菌悬液与保护剂按照I :0. 5 2的体积比均匀混合，静置20 30min后装于冻干管中，在_35 _40°C下预冻至少12h后，于温度为-50 _56°C、真空度为4 6Pa的条件下冻干24h ； 4)最后，用生理盐水将嗜热链球菌复溶。
5.如权利要求4所述的嗜热链球菌的冷冻保存方法，其特征在于，所述的保护剂以水为溶剂，包括脱脂奶粉150 180g/L、海藻糖10 20g/L、甘油0. 2 I. Og/L和抗坏血酸·0.2 I. Og/L。
全文摘要
本发明公开了一种嗜热链球菌复合抗冻因子，以质量份数计，包括以下组分甜菜碱0.1～0.4份、氯化钠3～5份、甘露糖0.5～3份和碳酸钙0.1～0.4份。本发明从培养基的角度，在培养基中添加抗冻因子，以促进冻干保护物质的形成和积累或转化为其他物质，抑制冻干过程中共晶现象的发生，这类保护性物质的积累，可以改变嗜热链球菌的细胞膜脂肪酸的组成，甚至诱导抗冻蛋白的产生，从而提高菌体在冻干及贮存过程中的抗冷冻能力及菌体存活率。
文档编号C12N1/38GK102978150SQ20121047049
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者陈合, 李串娜, 舒国伟, 王勇 申请人:陕西科技大学