专利名称：一种霉菌数量检验用培养基及其制备与应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及生物分析技术领域，具体涉及一种霉菌数量检验用培养基及其制备与应用。
背景技术：
现有技术中，常用于烟草及烟草制品中霉菌数量检验用培养基有如下4种孟加拉红琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、察氏琼脂和含20%蔗糖的高渗察氏琼脂培养基。孟加拉红琼脂培养基的配方为蛋白胨5.0g，葡萄糖10. 0g，磷酸二氢钾I. Ogjt 酸镁(无水)O. 5g，琼脂20. Og,孟加拉红O. 033g,氯霉素O. Ig,蒸馏水1000mL。该培养基能满足环境中一般霉菌的生长，也能满足部分具嗜干性特点霉菌的生长。但烟草及烟草制品中常见的具嗜干性特点的污染霉菌——局限曲霉，则不能在其上生长，从而可影响待检样品中霉菌数量检验结果的准确性。马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配方为马铃薯(去皮切块)300g (按GB4789. 15-2010食品微生物学检验霉菌和酵母计数)(也有200g (按中国科学院微生物研究所《常见与常用真菌》编写组.常见与常用真菌，北京科学出版社，1973))，葡萄糖20. Og,琼脂20. Og,氯霉素O. Ig(有的加入此化合物，有的未加入)，蒸馏水1000mL。该培养基能满足环境中一般霉菌的生长，也能满足部分具嗜干性特点霉菌的生长。但烟草及烟草制品中常见的具嗜干性特点的污染霉菌——局限曲霉，则不能在其上生长，从而可影响待检样品中霉菌数量检验结果的准确性。察氏琼脂培养基的配方为=NaNO33. 0g, K2HPO4 I. 0g, KC10. 5g，MgSO4 · 7H20 0. 5g，FeSO4 0. Olg,蔗糖20. Og,琼脂20. Og,蒸馏水1000mL。该培养基能满足环境中一般霉菌的生长。但烟草及烟草制品中常见的具嗜干性特点的污染霉菌，如局限曲霉则不能在其上生长。另外烟草及烟草制品中常见的污染霉菌，如匍枝根霉在其上生长极弱甚至不生长。(原因是其不能利用该培养基中的NaNO3作为生长用的N源营养物(中国科学院微生物研究所《常见与常用真菌》编写组.常见与常用真菌，北京科学出版社，1973.))。因而可影响待检样品中霉菌数量检验结果的准确性。含20%蔗糖的高渗察氏琼脂培养基的配方为=NaNO3 3. Og7K2HPO4 I. 0g,KC10. 5g，MgSO4 ·7Η20 O. 5g，FeSO4 O. 01g，蔗糖200g，琼脂20. 0g，蒸馏水IOOOmL0该培养基能满足环境中具嗜干性特点的霉菌生长，也能满足环境中一般霉菌的生长。但烟草及烟草制品中常见的污染霉菌，如匍枝根霉在其上生长极弱，甚至可不生长(原因同察氏琼脂)。因而可影响待检样品中霉菌数量检验结果的准确性。
发明内容
本发明目的是针对当前国内外暂未建立烟草及烟草制品中霉菌数量检验用的统一标准方法，更无适用于烟草及烟草制品中霉菌数量检验用的标准培养基的现状，研制一种新的、完全能适用于烟草及烟草制品中霉菌数量检验用的培养基，从而解决了这一检验领域的技术难题，为建立我国烟草行业的烟草及烟草制品中霉菌数量检验的标准方法奠定基础。本发明首先提供了一种适用于烟草及烟草制品中霉菌数量检验用的培养基，为NaCl (氯化钠)添加浓度为10-50g/1000ml的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。较佳的，所述霉菌数量检验用培养基中，NaCl添加浓度为25-35g/1000ml培养基，最佳为30g/1000ml培养基。进一步的，除NaCl外，每IOOOmL本发明的培养基还含有下列组分马铃薯200_300g，葡萄糖15_25g, 琼脂15_25g，氯霉素0-0. lg，蒸懼水补足培养基总体积至1000mL。最佳的，本发明的霉菌数量检验用培养基中，每IOOOmL培养基含有下列组分马铃薯200g葡萄糖20. OgNaC130. Og琼脂16. Og氯霉素O. Ig蒸馏水补足培养基总体积至1000mL。本发明的霉菌数量检验用培养基的制备方法如下将马铃薯去皮切块，加蒸馏水IOOOmL,煮沸lOmin，后用纱布过滤，按配比加入葡萄糖、NaCl和琼脂，补加蒸馏水至IOOOmL,加热溶化，分装后灭菌，倒平板前，按配比将氯霉素加入培养基中。氯霉素加入培养基的方法可先用少量乙醇溶解氯霉素后加入培养基。本发明的培养基特别适用于烟草及烟草制品中霉菌数量的检验。本发明针对现有技术中的霉菌培养基，有的虽能满足烟草及烟草制品中一般霉菌的生长，但却不能满足烟草及烟草制品中某些具嗜干性特点霉菌的生长(如马铃薯葡萄糖琼脂、孟加拉红琼脂、察氏琼脂培养基上局限曲霉不能生长);有的培养基，如含20%蔗糖的高渗察氏琼脂培养基，虽能满足烟草及烟草制品中具嗜干性特点霉菌的生长，也能满足大多普通霉菌的生长，但烟草及烟草制品中常见的污染霉菌——匍枝根霉在其上生长极弱，甚至不生长(该菌在察氏琼脂上生长情况也是如此，见下实施例子和文献)。对此，本发明根据烟草及烟草制品中常见污染霉菌的营养需求及生理特点，选用马铃薯葡萄糖琼脂培养基作为基础培养基(其营养成分能满足一般霉菌生长需求)，同时在其中加入一定量的NaCl，以适当提高培养基的渗透压(即达到既不影响烟草及烟草制品中一般霉菌生长，又能满足具嗜干性特点霉菌生长所需的渗透压)，这样的尝试，取得了理想的试验结果，从而解决了烟草及烟草制品中霉菌数量检验领域的一个技术难题。与以往常用的霉菌培养基相比，采用本发明的培养基不仅具有检验霉菌菌相更全面、而且具有获得霉菌数量结果更准确等优点。
图I局限曲霉、产黄青霉和总状毛霉在孟加拉红琼脂培养基上的生长情况图2局限曲霉、产黄青霉和总状毛霉在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的生长情况图3局限曲霉、产黄青霉和总状毛霉在本发明培养基上的生长情况附图标记I :总状毛霉2 :产黄青霉·3:局限曲霉
具体实施例方式以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式
加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。实施例I按下列配方配制培养基马铃薯200g葡萄糖20. OgNaC130. Og琼脂16. Og氯霉素O. Ig蒸馏水补足1000mL。培养基配制方法将马铃薯去皮切块，加IOOOmL蒸馏水，煮沸lOmin。用纱布过滤，加入葡萄糖、NaCl和琼脂，补加蒸馏水至IOOOmL,加热溶化，分装后，121°C灭菌20min。倒平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。实施例2按下列配方配制培养基马铃薯300g葡萄糖15. OgNaC125. Og琼脂25. Og蒸馏水补足lOOOmL。培养基配制方法将马铃薯去皮切块，加IOOOmL蒸懼水,煮沸lOmin。用纱布过滤，加入葡萄糖、NaCl和琼脂，补加蒸馏水至IOOOmL,加热溶化，分装后，121°C灭菌20min，倒平板。实施例3按下列配方配制培养基马铃薯200g葡萄糖25. Og
NaC135. Og琼脂15. Og氯霉素O. Ig蒸馏水补足lOOOmL。培养基配制方法同实施例I。实施例48种试验霉囷在6种霉囷培养基上生长情况以烟草及烟草制品中常见的8种污染霉菌作为试验菌，并选择6种常用的霉菌培 养基作为试验用的候选培养基(包括实施例I制备的培养基(以下称为I号琼脂培养基))，采用霉菌三点接种法接种，经28°C培养6-9d后，观察各试验菌在上述6种培养基上的生长情况，试验结果见下表I表I. 8种试验霉菌在6种常用霉菌培养基上的生长情况
权利要求
1.一种霉菌数量检验用的培养基，为NaCl添加浓度为10-50g/1000ml的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
2.如权利要求I所述霉菌数量检验用的培养基，其特征在于，所述NaCl添加浓度为25-35g/1000ml 培养基。
3.如权利要求I所述霉菌数量检验用的培养基，其特征在于，除NaCl外，每IOOOmL所述培养基还含有下列组分 马铃薯200-300g， 葡萄糖15-25g， 琼脂 15-25g， 氯霉素0-0. Ig, 蒸馏水补足培养基总体积至1000mL。
4.如权利要求I所述霉菌数量检验用的培养基，其特征在于，每IOOOmL所述培养基中含有下列组分 马铃薯200g 葡萄糖20. Og NaC130. Og 琼脂16. Og 氯霉素O. Ig 蒸馏水补足培养基总体积至1000mL。
5.如权利要求1-3任一权利要求所述培养基用于烟草及烟草制品中霉菌数量检验的用途。
全文摘要
本发明公开了一种霉菌数量检验用的培养基及其应用。本发明的霉菌数量检验用的培养基，为NaCl添加浓度为10-50g/1000ml的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。本发明的霉菌数量检验用的培养基既不影响烟草及烟草制品中一般霉菌生长，又能满足具嗜干性特点霉菌生长的需求，特别适合烟草及烟草制品中霉菌数量检验。
文档编号C12Q1/04GK102943105SQ20121038240
公开日2013年2月27日 申请日期2012年10月10日 优先权日2012年10月10日
发明者林华清, 沙云菲, 戚大伟, 吴达 申请人:上海烟草集团有限责任公司