专利名称：一种培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种饲料使用的芽孢杆菌培养基。
背景技术：
枯草芽孢杆菌LB-8引自中国微生物保藏中心，保藏编号为=CGMCC No. I. 210，是可用于饲料的芽孢杆菌，其合成a-淀粉酶的能力强，将其用于畜牧、家禽、水产、特种动物及宠物养殖，能防止动物消化不良，提高了饲料的利用率；还能预防动物腹泻、下痢等肠胃道疾病等功能；枯草芽孢杆菌LB-8以内生的芽孢形式存在，是ー种健壮而处于休眠状态的活细胞，抗逆性強，储藏时间长，它无论在颗粒饲料还是在粉状饲料中，都比较稳定，能顺利进入动物肠道成活并大量増殖。饲料行业已推广应用多年，效果非常好。目前使用的培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基，其各组分及重量百分比如下葡萄糖1%，蛋白胨1.5%，氯化钠
·0.5%，牛肉膏0. 05%，磷酸ニ氢钾0. 3%，硫酸镁0. 15%，余下量为水。它的不足之处是生产成本尚。
发明内容
本发明的目的在于提供一种产芽孢率高且成本低的一种培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基。本发明主要是以鱼粉废水浓缩液作为主要营养物质来培养饲料用枯草芽孢杆菌LB-8。本发明各组分及重量百分比如下鱼粉废水浓缩液2-5%，葡萄糖1%，氯化钠0. 5%，磷酸ニ氢钾0. 3%，硫酸镁0. 15%，余下量为水。其中，鱼粉废水浓缩液为鱼粉生产中，其鲜鱼经蒸煮后压榨出的液体经浓缩使含水在60%的浅棕色液体，除具有鱼腥味外，无其它异味，蛋白质含量25-30% (重量)，PH值5. 0-7. O。本发明培养基的制备方法按本发明培养基配方的比例称取葡萄糖、氯化钠、磷酸ニ氢钾及硫酸镁，放入烧杯中，再按配方的比例取鱼粉废水浓缩液，然后向烧杯内加入少于规定数量的水，搅拌均匀，加热，待上述各组分完全溶解后，用l-5mol/LNa0H调pH至7. 0，补充水至规定的数量。将配制好的培养基根据需要分装，然后用透气封ロ膜封ロ，121. 3°C高压蒸汽灭菌30分钟。本发明与现有技术相比具有如下优点
1)以往发酵生产芽孢杆菌多以豆柏、淀粉为生产原料,生产成本高,本发明将鱼粉废水浓缩液作为ー种新的原料生产枯草芽孢杆菌BL-8,可大大降低枯草芽孢杆菌培养成本；
2)提高芽孢杆菌发酵菌数，提高枯草芽孢杆菌的产芽孢率；
3)为鱼粉废水的利用开辟新途径，解决鱼粉生产的副产品鱼粉废水污染环境、难处理的问题。
图I是对照组发酵24小时活菌数检测情况图。图2是本发明发酵24小时活菌数检测情况图。图3是对照组芽孢杆菌发酵24小时的生长情况显微成像图(1000X )。图4是本发明芽孢杆菌发酵24小时的生长情况显微成像图(1000X )。
图5是对照组发酵44小时芽孢杆菌生长情况显微成像图(1000X )。图6是本发明发酵44小时芽孢杆菌生长情况显微成像图(1000X )。图7是对照组发酵48小时芽孢杆菌生长情况显微成像图(1000X )。图8是本发明发酵48小时芽孢杆菌生长情况显微成像图(1000X )。图9是对照组发酵60小时芽孢杆菌生长情况显微成像图(1000X )。图10是本发明发酵60小时芽孢杆菌生长情况显微成像图(1000X )。
具体实施方式
例I· 准确称取葡萄糖10克、氯化钠5克、磷酸ニ氢钾3及硫酸镁I. 5克，放入烧杯中，再称取鱼粉废水浓缩液20克，然后向烧杯内加入800克水，搅拌均匀，加热，待上述各组分完全溶解后，用5mol/LNa0H调pH至7. 0，补充水至1000毫升。将配制好的培养基分装至250毫升的三角瓶，每瓶装量60毫升，用透气封ロ膜封ロ，121. 3 °C高压蒸汽灭菌30分钟。例2
准确称取葡萄糖10克、氯化钠5克、磷酸ニ氢钾3及硫酸镁I. 5克，放入烧杯中，再称取鱼粉废水浓缩液50克，然后向烧杯内加入800克水，搅拌均匀，加热，待上述各组分完全溶解后，用Imol/LNaOH调pH至7. 0，补充水至1000毫升。将配制好的培养基分装至250毫升的三角瓶，每瓶装量60毫升，用透气封ロ膜封ロ，121. 3 °C高压蒸汽灭菌30分钟。试验结果
I、产芽孢率对比试验
将相同条件的枯草芽孢杆菌LB-8分别转接于现有技术培养基和本发明培养基中，37°C摇瓶发酵液培养。其中，现有技术培养基培养24h的活菌数量为4. 41 X IO9Cfu / mL,发酵48小吋，产芽孢率85% ;本发明培养基培养24h的活菌数量为I. 77 X IO11Cfu / mL，发酵48小吋，产芽孢率94%，培养效果明显优于现有技术牛肉膏蛋白胨培养基。2、发酵试验
①液体种子制备制备牛肉膏蛋白胨液体培养基(pH值7. 2-7. 5)，分装于18_X180_玻璃试管中，每管装量10ml，121. 3°C高压蒸汽灭菌20分钟，冷却备用。取一(接种)环已纯化好的斜面保存的枯草芽孢杆菌，接种于液体培养基中，于37°C，200r/min摇床振荡培养12h即为种子液。②液体发酵培养将对照组(现有技术)培养基和本发明培养基分别按1%的接种量接入已制备好的种子液，37°C，200r/min摇床培养，在培养24h吋，检测发酵活菌数。 @枯草芽孢杆菌活菌数检测
从上述对照组和本发明组分别取I mL培养液至9ml的无菌水中，按1:10系列进行稀释，得 I =IXlO1,! 1X102,1 1X103,1 1X104,1 1X105,1 1X106,1 1X107,1 1X108,
I:1 X IO9用无菌水稀释液，取I :1X108，1 :1 X IO9稀释液各0. I mL，涂布于菌数检测培养基平板上，37°C培养并观察生长出的菌落数。图I是对照组发酵24小时菌落数检测情况图(I =IXlO8稀释液)，图2是本发明发酵24小时菌落数检测情况图(I :1 X IO8稀释液)，从两幅图对比可以看出相同条件下，本发明的培养基培养的菌落数明显多于对照组。并经检测、计算出对照组枯草芽孢杆菌活菌数为4. 41 X IO9Cfu / mL，本发明组枯草芽孢杆菌活菌数量为1.77X10ncfu / mL，远远高于对照组。 枯草芽孢杆菌产芽孢情况检测
对上述对照组和本发明组内的枯草芽孢杆菌活菌继续培养，并分别在24h、44h、48h及60h显微成像，即图3和图4、图5和图6、图7和图8、图9和图10.观察对照组和本发明组枯草芽孢杆菌芽孢产生情况，对照组枯草芽孢杆菌产芽孢率明显低于本发明组枯草芽孢杆菌产芽孢率，并且经检测，发酵培养48h，对照组枯草芽孢杆菌产芽孢率为85%，本发明组的产芽孢率94%，高于对照组。·
权利要求
1.一种培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基，其特征在于其各组分及重量百分比如下鱼粉废水浓缩液2-5%，葡萄糖1%，氯化钠0. 5%，磷酸二氢钾0. 3%，硫酸镁0. 15%，余下量为水。
2.根据权利要求I所述的培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基，其特征在于鱼粉废水浓缩液为鱼粉生产中，其鲜鱼经蒸煮后压榨出的液体经浓缩使含水重量比在60%的浅棕色液体。
3.权利要求I的培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基的制备方法，其特征在于按本发明培养基配方的比例称取葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾及硫酸镁，放入烧杯中，再按配方的比例取鱼粉废水浓缩液，然后向烧杯内加入少于规定数量的水，搅拌均匀，加热，待上述各组分完全溶解后，用l-5mol/LNaOH调pH至7. 0，补充水至规定的数量，将配制好的培养基根据需要分装，然后用透气封口膜封口，121. 3°C高压蒸汽灭菌30分钟。
全文摘要
一种培养饲料用枯草芽孢杆菌的培养基，其各组分及重量百分比如下鱼粉废水浓缩液2-5%，葡萄糖1%，氯化钠0.5%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，余下量为水。本发明将鱼粉废水浓缩液作为一种新的原料生产枯草芽孢杆菌BL-8，可大大降低枯草芽孢杆菌培养成本；提高芽孢杆菌发酵菌数，提高枯草芽孢杆菌的产芽孢率；为鱼粉废水的利用开辟新途径，解决鱼粉生产的副产品鱼粉废水污染环境、难处理的问题。
文档编号C12R1/125GK102787086SQ20121026319
公开日2012年11月21日 申请日期2012年7月27日 优先权日2012年7月27日
发明者冯源, 刘君, 杨建国 申请人:龙源海洋生物股份有限公司