专利名称：甜叶菊酶vi及莱鲍迪苷a转化为莱鲍迪苷d的方法
技术领域：
本发明涉及属食品化工领域，具体涉及以莱鲍迪苷A为原料，由莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其关键在于催化剂甜叶菊酶VI及其制备方法。
背景技术：
甜菊糖苷是对甜叶菊提取物的一个总称，其甜味成分包括甜菊苷(Stevioside)，莱鲍迪苷 A、B、C、D、E (ebaudioside A/B/C/D/E),甜菊双糖苷(Steviolbioside),杜克苷A(DulcosideA)等。甜叶菊源产于南美洲，已经有几百年的使用历史。甜菊糖苷甜度高,热量低的特点正好符合了现代人生活的需要。我国卫生部1985年6月5日(85)卫防字第37号文，批准甜菊糖苷列为新增食品添加剂品种。世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会(Joint FAO/WHO Expert Committee on Food AdditVIes,JECFA)也已经确认了其安全性。但传统甜菊糖苷由于成分复杂，杂质多，使其具有后苦味，这影响了它的广泛使用和市场空间。研究表明，甜菊糖苷中不同糖苷成分的口感存在较为明显的差异，表I中列举了其不同糖苷的相对甜度及相对甜质值。(Pure&Appl. Chem.，Vol. 69，No. 4，pp. 675-683，1997.)表I甜菊糖苷成分相对甜度及相对甜质
权利要求
1.甜叶菊酶VI，其特征在于它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下 (1)将甜叶菊叶片与PH值为7.0-9. O磷酸盐缓冲液按1: 2-1 4m/v的重量体积比混合，于30-50°C浸泡O. 5-lh后进行细胞壁破碎l_2h，得细胞浆； (2)离心步骤(I)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为8-12kD，跨膜压力控制在1.0-1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即为甜叶菊酶VI。
2.根据权利要求1所述的甜叶菊酶VI，其特征在于它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下 (1)将甜叶菊叶片与PH值为8.O磷酸盐缓冲液按1: 3m/v的重量体积比混合，于40°C浸泡O. 5h后进行细胞壁破碎lh，得细胞浆； (2)离心步骤(I)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为10kD，跨膜压力控制在1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即为甜叶菊酶VI。
3.甜叶菊酶VI的制备方法，其特征在于它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下 (1)将甜叶菊叶片与PH值为7.0-9. O磷酸盐缓冲液按1:2-1: 4m/v的重量体积比混合，于30-50°C浸泡O. 5-lh后进行细胞壁破碎l_2h，得细胞浆； (2)离心步骤(I)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为8-12kD，跨膜压力控制在1.0-1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即为甜叶菊酶VI。
4.根据权利要求3所述的甜叶菊酶VI的制备方法，其特征在于它是从甜叶菊的叶中提取得到，制备方法如下 (1)将甜叶菊叶片与pH值为8.O磷酸盐缓冲液按1: 3m/v的重量体积比混合，于40°C浸泡O. 5h后进行细胞壁破碎lh，得细胞浆； (2)离心步骤(I)所得细胞浆，取上清液过超滤膜，超滤膜规格为10kD，跨膜压力控制在1.5MPa，收集截留液； (3)使用葡聚糖凝胶按分子量对步骤(2)所得截留液分段，其中分子量在50 56kD的酶即为甜叶菊酶VI。
5.莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于其步骤如下 A、将纯度为>90%的莱鲍迪苷A按1: 6 1: lOm/v的重量体积比加水溶解； B、按下述重量配比加入尿嘧啶二磷酸葡萄糖，莱鲍迪苷A尿嘧啶二磷酸葡萄糖=15 5 15 9 ； C、按下述重量配比加入权利要求1或2所述的甜叶菊酶V1:莱鲍迪苷A 800-1200份、甜叶菊酶VI I份，然后在40 60°C、pH 6 8下反应3 7h;优选，莱鲍迪苷A 1000份、甜叶菊酶VI I份； D、过滤反应液，干燥即得含有莱鲍迪苷D的固形物。
6.根据权利要求5所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于步骤A中莱鲍迪苷A加水溶解时，水温控制在30 40°C。
7.根据权利要求5所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于步骤A中莱鲍迪苷A加水溶解后，以60 120rpm的速度搅拌30 60min。
8.根据权利要求5所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于步骤D过滤反应液时采用8-12kD超滤膜过滤；过滤时优选跨膜压力控制在O. 5 1. 5MPa。
9.根据权利要求8所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于步骤D过滤反应液后，浓缩处理。
10.根据权利要求9所述的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷D的方法，其特征在于所述浓缩条件为在60-80°C浓缩反应液。
全文摘要
本发明涉及属食品化工领域，具体涉及以RA为原料，由RA转化为RD的方法，其关键在于催化剂甜叶菊酶VI及其制备方法。本发明转化方法为A、将纯度为＞90％的RA按1∶6～1∶10m/v的重量体积比加水溶解；B、按下述重量配比加入UDP-Glu，RA∶UDP-Glu＝15∶5～15∶9；C、按下述重量配比加入甜叶菊酶VI，RA∶甜叶菊酶VI＝800-1200∶1(优选1000∶1)，然后在40～60℃、pH 6～8下反应3～7h；D、过滤反应液，干燥即得含有RD的固形物。RA转化为RD的转化率≥70％，固形物中RD含量为60％-70％，进一步分离纯化后可达80％，甚至可大于90％。
文档编号C12N9/10GK103031283SQ20111029961
公开日2013年4月10日 申请日期2011年10月8日 优先权日2011年10月8日
发明者李沁桐, 华君, 欧阳劲, 秦岭 申请人:成都华高瑞甜科技有限公司