专利名称：一种大豆遗传转化方法
技术领域：
本发明涉及一种大豆遗传转化方法，具体指对大豆子叶节进行遗传转化并高效再 生的方法。
背景技术：
大豆(Glycine max(L. )Merri 11.)属于豆科、蝶形花亚科、大豆属的二倍体(2 = 40)植物，在世界各国广泛种植，是世界上重要的粮食作物和经济作物，也是食用油和植物 蛋白的主要来源。由于受到各种病害、虫害以及各种非生物逆境的影响，大豆的品质和产量 难以满足人们的需求，通过基因工程手段改良大豆作物具有重要的意义。虽然目前转基因 大豆已在全球大规模种植，但大豆遗传转化一直是限制大豆转基因研究的主要障碍，大豆 再生体系的建立与遗传转化目前仍然很不完善，而植物基因转化的成功，有赖于建立良好 的转基因体系。大豆再生体系的研究是大豆遗传转化研究的一个重要组成部分，为提高转 化效率、缩短实验周期、解决大豆遗传转化中的嵌合体问题，国内外研究者对不同途径的大 豆再生体系进行了研究和优化。大豆组织培养自上世纪50年代开始，其再生和遗传转化虽 然已有很多年，并且建立起几种转化途径，可是都没有获得实质性的突破。在这些研究工作 中，子叶节已经被国内外学者公认是大豆遗传转化的首选外植体。子叶节作为外植体虽有 许多优点，但也存在着外植体较大、不同大豆基因型再生频率差异较大、再生时间长、筛选 难度较大等缺点。因此，建立一套高效的子叶节再生体系及遗传转化方法有重要意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种大豆遗传转化方法，它属于高效大豆再生体 系及遗传转化方法，这种方法包括大豆种子灭菌及萌发；农杆菌接种物制备；外植体的制 备、侵染与共培养；丛生芽的诱导；丛生芽的伸长及幼芽生根。本发明要解决的技术问题由如下方案来实现一种大豆遗传转化方法，本方法利 用大豆子叶节为外植体进行农杆菌介导的再生及遗传转化培养，其特征在于步骤(1)、将大豆种子在附加TDZ的萌发培养基上培养，获得子叶节外植体；步骤(2)、利用农杆菌介导对子叶节外植体进行遗传转化；步骤(3)、通过特殊再生体系获得再生转基因植株。上述步骤(1)和步骤(3)中融 合过程为(1)、将大豆种子灭菌，在附加TDZO. 15mg/L的萌发培养基上萌发5天获得无菌苗， 切取子叶节外植体；(2)、用附加0. 4mg/L 6_BA的培养基进行丛生芽诱导及芽伸长，后在附加0. 4mg/L IBA的生根培养基上培养获得再生植株。本发明具有如下优点采用萌发培养基附加TDZ，后期外植体培养只附加特定浓 度6-BA的方法实现大豆的再生与遗传转化，其培养过程简单、再生时间较短，是一种新的、 快速高效的大豆组织再生及遗传转化方法。
图a种子萌发5天的生长情况图b丛生芽诱导10天时的生长情况图c芽伸长20天时的生长情况图d再生植株
具体实施例方式以下结合具体实施方式
对本发明的实验步骤进行详细说明一、实验材料1.植物材料大豆品种，黑农372.菌株与质粒EHA105-pZY101二、基本培养基的组成及不同阶段的培养基成分表IMS培养基成分
成分(mg/L)
MS大量元素NH4NO31650KNO31900KH2PO1170CaCL2 · 2H20440MgSO4 · 7H20370MS铁盐FeSO4 · 7H2027. 85Na2-EDTA37. 25MS微量元素MnSO4 · 4H2022.3ZnSO4 · TUO8.6H3BO36.2KI0. 83Na2MoO4 · 2H200. 25CuSO4 · 5H200. 025CoCL2 · 6H200. 025&有机元素肌醇100盐酸硫胺素(VB1)10盐酸吡哆醇(VBe)1.0烟酸1.0 ·表2大豆组织培养不同阶段培养基的配方
权利要求
1.一种大豆遗传转化方法，本方法利用大豆子叶节为外植体进行农杆菌介导的再生及 遗传转化培养，其特征在于步骤(1)、将大豆种子在附加TDZ的萌发培养基上培养，获得子叶节外植体； 步骤O)、利用农杆菌介导对子叶节外植体进行遗传转化； 步骤(3)、通过特殊再生体系获得再生转基因植株。
2.根据权利要求1所述的一种大豆遗传转化方法，其特征在于所述步骤(1)和步骤 (3)中融合过程为(1)、将大豆种子灭菌，在附加TDZO.15mg/L的萌发培养基上萌发5天获得无菌苗，切取 子叶节外植体；(2)、用附加0.4mg/L6-BA的培养基进行丛生芽诱导及芽伸长，后在附加0. 4mg/L IBA 的生根培养基上培养获得再生植株。
全文摘要
本发明公开了一种大豆遗传转化方法，本方法利用大豆子叶节为外植体进行农杆菌介导的再生及遗传转化培养，主要步骤为1、将大豆种子在附加TDZ的萌发培养基上培养，获得子叶节外植体；2、利用农杆菌介导对子叶节外植体进行遗传转化；3、通过特殊再生体系获得再生转基因植株。本发明培养过程简单、再生时间较短，是一种新的、快速高效的大豆组织再生及遗传转化方法。
文档编号C12N15/82GK102127565SQ201010590528
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月9日 优先权日2010年12月9日
发明者万永青, 李国婧, 王光霞, 王瑞刚 申请人:内蒙古农业大学