专利名称：一种蚕豆根尖微核试验检测水质遗传毒性的方法
技术领域：
本发明涉及一种水质毒性的检测方法，具体涉及一种蚕豆根尖微核试验检测水质 遗传毒性的方法。
背景技术：
为了保障饮水安全，降低环境恶化给饮用水水质带来的威胁，人们常采用各种方 法对水质进行评价，以有效的掌握饮用水引起的健康风险。微核试验是检测染色体畸变的重要方法之一，自1982年由Degressi等建立以来， 以其简便、快速、结果可靠等优点，广泛用于对水源、土壤、大气等环境中化学有毒物质和环 境污染物的致突变性检测。早在1986年国家环境保护局就将蚕豆根尖微核试验检测技术 列入了《环境检测技术规范》用于水环境检测技术。研究表明微核实验结果与Ames试验有 一定的相关性，且所诱发的微核率在一定范围内存在着剂量-效应关系，适于定量化评价 水质毒性。现有评价技术的缺点但大多数微核试验只是采用污染指数定量评价水质毒性， 毒性反应不够直观，毒性等级划分有一定的主观性。
发明内容
本发明针对现有水质遗传毒性检测方法的不足，提供了一种蚕豆根尖微核试验检 测水质遗传毒性的方法，该方法将Cr6+作为标准毒性物质，在评价水质遗传毒性时以Cr6+的 浓度表示水质的遗传毒性，实现了水质毒性的定量化，而且检测结果更加直观、明确，易于 统一，为水质毒性定量化评价提供了有力的支持。本发明是通过以下措施实现的
本发明选择Cr6+作为标准毒性物质，六价铬离子是世界卫生组织致癌物名单中的一 种，在生活饮用水卫生标准中属于毒理指标，限值为0. 05mg/L，在地表水环境质量标准中也 有不同等级的限值，因此用Cr6+浓度表示水质毒性结果易于统一，其操作为首先，选择铬 离子浓度范围，选择原则为能够引起不同数量的微核数量，然后用不同浓度的铬离子溶液 对蚕豆根尖进行处理，再通过微核试验得到铬离子对蚕豆根尖细胞微核率的标准曲线。然 后用同样的方法对待测水样进行蚕豆根尖微核试验，将所得的微核率代入标准曲线即可得 到用铬离子浓度表示的水样毒性，这种方法避免了其他实验因素所产生的影响，使水质毒 性更加准确，检测结果更易于统一。为了解决上述技术问题，本发明采用如下步骤
一种蚕豆根尖微核试验检测水质遗传毒性的方法，其特征是至少包括以下步骤
(1)以松滋青皮豆为指示生物，通过浸种、催芽，得初生根为1. 5cm 2cm长的松滋 青皮豆种子；
(2)用不同浓度的Cr6+溶液分别对松滋青皮豆种子的根尖进行处理，然后经根尖细 胞修复、固定、染色步骤后，对根尖进行镜检，计算不同浓度Cr6+溶液处理的细胞微核千分 率；(3)以Cr6+浓度为横坐标，细胞微核千分率为纵坐标，绘制Cr6+浓度对细胞微核千分 率的标准曲线；
(4)采用同样的方法对经待测水样处理过的松滋青皮豆进行微核试验，计算细胞微 核千分率，将待测水样所得的细胞微核千分率代入标准曲线，即可得到Cr6+浓度表示的待 测水样的水质毒性。上述方法中，步骤(2)的具体操作为用不同浓度的Cr6+溶液分别对松滋青皮豆种 子的根尖处理5-7h，处理后将松滋青皮豆种子分别用去离子水浸洗干净，对根尖细胞修复 22h 24h，然后从根尖顶端切下Icm的幼根，加入卡诺氏固定液固定24_48h，最后用孚尔根 染色法染色5-6h，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，计算不同浓度Cr6+溶液处理的细 胞微核千分率。上述步骤(2)中，优选的，对根尖处理6h，对根尖细胞修复24h，根尖加卡诺氏固定 液固定24h、染色5h。上述步骤(1)中，浸种时间为24h 36h，催芽时间为48_72h。上述步骤(1)中，优选的，浸种时间为24h，催芽时间为60h，松滋青皮豆种子的初 生根为1. 5cm。
本发明的有益效果是选择Cr6+为标准毒性物质，通过Cr6+对微核率的标准曲线实现 对水质毒性的定量化评价，本发明的方法能更加直观、准确的检测水质的遗传毒性，结果易 于统一，重现性好，能够对水质污染状况做出判断，为突发性水质污染和水厂的水处理技术 提供支持，降低由于饮用水暴露导致的人类致癌风险。
图1为实施例1中Cr6+浓度对细胞微核千分率的标准曲线。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明进行进一步阐述，应该明白的是，下述说明仅是为 了解释本发明，并不对其内容进行限定。本发明所用的铬离子溶液均是采用重铬酸钾配制而成的。实施例1
本具体实施例采用如下步骤
(1)选择松滋青皮豆作为指示生物；
(2)通过浸种24h，催芽60h,种子的初生根长至1.5cm后，在Cr6+浓度0-0. 015mg/L 的范围内取5个浓度点分别对根尖进行处理6h，这5个浓度点的Cr6+浓度分别为Omg/L、 0. 025mg/L、0. 05mg/L、0. Img/L、0. 15mg/L ；将处理后的种子用去离子水浸洗净后对根尖细 胞修复24h，之后从根尖顶端切下Icm的幼根，加卡诺氏固定液固定24h，最后经孚尔根染色 法染色5h后，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，Cr6+浓度从小到大所得的细胞微核千 分率分别是 0. 25%，4. 25%，7. 75%，10. 33%，12. 67% ；
(3)以Cr6+浓度为横坐标，微核千分率为纵坐标，绘制Cr6+浓度对细胞微核千分率的标 准曲线，如图1所示；
(4)取日常城市自来水进行对蚕豆根尖实验，所得水样产生的细胞微核千分率是 2. 33%。，该水样对蚕豆的毒性作用大小相当于0. 014mg/L的Cr6+的作用效果。实施例2本具体实施例采用如下步骤
(1)选择松滋青皮豆作为指示生物；
(2)通过浸种36h，催芽48h，种子的初生根长至2cm后，在Cr6+浓度0-0.015mg/L的范围 内取5个浓度点分别对根尖进行处理5h，这5个浓度点的Cr6+浓度分别为0mg/L、0. 025mg/ L、0. 05mg/L、0. Img/L、0. 15mg/L ；将处理后的种子用去离子水浸洗净后对根尖细胞修复 22h，之后从根尖顶端切下Icm的幼根，加卡诺氏固定液固定48h，最后经孚尔根染色法染色 6h后，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，Cr6+浓度从小到大所得的细胞微核千分率分 别是 0. 25%，4. 26%，7. 78%，10. 38%，12. 70% ；
(3)以Cr6+浓度为横坐标，微核千分率为纵坐标，绘制Cr6+浓度对细胞微核千分率的标 准曲线；
(4)取日常城市水厂的进厂水进行对蚕豆根尖实验，所得水样产生的细胞微核千分率 是3%。，该水样对蚕豆的毒性作用大小相当于0. 015mg/L的Cr6+的作用效果。 实施例3
本具体实施例采用如下步骤
(1)选择松滋青皮豆作为指示生物；
(2)通过浸种24h，催芽50-72h，种子的初生根长至1.5cm后，在Cr6+浓度0-0. 015mg/ L的范围内取5个浓度点分别对根尖进行处理6h，这5个浓度点的Cr6+浓度分别为Omg/L、 0. 025mg/L、0. 05mg/L、0. Img/L、0. 15mg/L ；将处理后的种子用去离子水浸洗净后对根尖细 胞修复24h，之后从根尖顶端切下Icm的幼根，加卡诺氏固定液固定24h，最后经孚尔根染色 法染色5h后，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，Cr6+浓度从小到大所得的细胞微核千 分率分别是 0. 25%，4. 26%，7. 77%，10. 35%，12. 69% ；
(3)以Cr6+浓度为横坐标，微核千分率为纵坐标，绘制Cr6+浓度对细胞微核千分率的标 准曲线；
(4)取日常城市水厂的工艺出水进行对蚕豆根尖实验，所得水样产生的细胞微核千分 率是3. 75%。，该水样对蚕豆的毒性作用大小相当于0. 022mg/L的Cr6+的作用效果。
权利要求
1.一种蚕豆根尖微核试验检测水质遗传毒性的方法，其特征是至少包括以下步骤(1)以松滋青皮豆为指示生物，通过浸种、催芽，得初生根为1.5cm 2cm长的松滋青皮 豆种子；(2)用不同浓度的Cr6+溶液分别对松滋青皮豆种子的根尖进行处理，然后经根尖细胞 修复、固定、染色步骤后，对根尖进行镜检，计算不同浓度Cr6+溶液处理的细胞微核千分率；(3)以Cr6+浓度为横坐标，细胞微核千分率为纵坐标，绘制Cr6+浓度对细胞微核千分率 的标准曲线；(4)采用同样的方法对经待测水样处理过的松滋青皮豆进行微核试验，计算细胞微核 千分率，将待测水样所得的细胞微核千分率代入标准曲线，即可得到Cr6+浓度表示的待测 水样的水质毒性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤(2)的具体操作为用不同浓度的Cr6+溶 液分别对松滋青皮豆种子的根尖处理5-7h，处理后将松滋青皮豆种子分别用去离子水浸洗 干净，对根尖细胞修复2 Mh，然后从根尖顶端切下Icm的幼根，加入卡诺氏固定液固定 24-48h,最后用孚尔根染色法染色5-6h，在生物显微镜下对根尖细胞进行镜检，计算不同浓 度Cr6+溶液处理的细胞微核千分率。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中，对根尖处理他，对根尖细胞修 复Mh，根尖加卡诺氏固定液固定Mh、染色证。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征是步骤(1)中，浸种时间为24h 36h，催芽时间为48-7 。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征是步骤(1)中，浸种时间为Mh，催芽时间为 60h，松滋青皮豆种子的初生根为1. 5cm。
全文摘要
本发明公开了一种蚕豆根尖微核试验检测水质遗传毒性的方法，包括将松滋青皮豆浸种、催芽，得初生根为1.5cm～2cm长的种子；用不同浓度的Cr6+溶液分别对种子根尖进行处理，然后经根尖细胞修复、固定、染色步骤后，对根尖进行镜检，计算不同浓度Cr6+溶液处理的细胞微核千分率；绘制Cr6+浓度对细胞微核千分率的标准曲线，然后采用同样的方法得待测水样的细胞微核千分率，代入标准曲线得到Cr6+浓度表示的待测水样的水质毒性。本发明选择Cr6+为标准毒性物质，通过Cr6+对微核率的标准曲线实现对水质毒性的定量化评价，本发明的方法能更加直观、准确的检测水质的遗传毒性，结果易于统一，重现性好。
文档编号C12Q1/02GK102094063SQ20101058078
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月9日 优先权日2010年12月9日
发明者孙韶华, 宋艳, 张诺, 贾瑞宝 申请人:济南市供排水监测中心