专利名称：一种快速检测固体食品中细菌总数的方法
技术领域：
本发明涉及一种快速检测方法，确切的说是一种快速检测固体食品中细菌总数的方法。
背景技术：
食品是人类生命活动赖以生存的物质基础，是人类生命的能源。由于食品中含有丰富的营养，细菌在食品环境中易于生长，使食品发生了改变。虽然正常植物和动物内部组织是无菌的，但由于获取和操作处理等过程中的污染，食品表面上常会被污染并滋生多种细菌。食品微生物污染包括细菌性污染、病毒和真菌及其毒素的污染。食品中的细菌存在状态是评价食品质量及安全性的一项重要指标。细菌污染程度直接影响着食品安全，对人体健康和人身安全的危害(危胁)主要表现在两个方面。一是致病菌的食品污染-细菌性食物中毒，二是非致病菌的食品污染-食品的腐败变质。据估计，在全世界每年数以亿计的食源性疾病患者中，70%是由于食用了各种微生物污染的食品和饮水造成的。细菌总数是指在被检样品单位重量(g)，容积(mL)，或表面积(cm2)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌菌落的总数。细菌总数主要作为判定食品被细菌污染程度的标志，具有重要的卫生学意义。细菌总数的检测国内外普遍采用需氧平板计数法(Aerobicplatecount，APC)适用于嗜中温的需氧和兼性厌氧的活菌菌落总数。传统检测食品中细菌总数的方法是采用 《食品卫生微生物检验》的国家标准，既平板菌落计数法。该是将待测样品经适当稀释之后， 其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。平板菌落计数法操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，且获得的数据不能代表食品中存在的全部活细菌，而仅仅代表在特殊物理环境和供给各种营养物时有生长能力的细菌，同时连成块状的或链状的多个细胞或仅仅一个单细胞均将产生一个菌落，影响计数的准确性。本发明的目的是为了解决现存的食品微生物快速检测方法均存在这样或那样的问题，没有一种方法能够真正达到检测速度快、检测成本低、检测的准确率高并且检测限低的问题而提出的一种检测速度快、检测成本低、检测准确度高的固体食品中细菌总数的检测方法。本发明的技术方案是一、无菌条件下称取20_30g固体样品溶于50_60ml的蛋白胨水溶液中后震荡混勻；二、吸取Iml样品离心；三、取0. 8ml上清再次离心；四、弃掉0. 3ml 上清后混勻；五、取5ul菌液滴到载玻片上，干燥后用染色液染色l-3min ；六、蒸馏水冲洗后用擦镜纸擦干；七、用显微镜观察后通过细菌总数快速检测系统计算，即可得到细菌总数。本发明具有检测速度快、检测成本低的优点；本发明采用次甲基蓝作为染液，可以精确地分辨细菌与非细菌成分，使得本发明还具有检测准确度高的优点。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式快速检测固体食品中细菌总数的方法按以下步骤实现一、无菌条件下称取20-30g固体样品溶于50-60ml的蛋白胨水溶液中后震荡混勻；二、 吸取Iml样品离心；三、取0. 8ml上清再次离心；四、弃掉0. 3ml上清后混勻；五、取5ul菌液滴到载玻片上，干燥后用染色液染色Hmin ；六、蒸馏水冲洗后用擦镜纸擦干；七、用显微镜观察后通过细菌总数快速检测系统计算，即可得到细菌总数。本实施方式中蛋白胨、染色液均为市售的常规试剂。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中采用0. 5%浓度的蛋白胨水溶液。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是骤一中在无菌条件下准确称取25g固体样品，放入55ml的蛋白胨水溶液中，并在摇床上以160r/min震荡^iin混勻。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤二中离心条件为 1000r/min,Smin0其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤三中离心条件为 11000r/min, 12min。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤四中弃掉0. 3ml上清后在摇床上以120r/min震荡^iin混勻。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤五中染色液为次甲基蓝。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤五中取5ul菌液滴到载玻片上，干燥后用染色液染色anin。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
九本实施方式一种快速检测固体食品中细菌总数的方法按以下步骤实现一、在无菌条件下准确称取25g固体样品，放入55ml浓度为0. 5%的蛋白胨水溶液中，并在摇床上以160r/min震荡aiiin混勻；二、吸取Iml样品在lOOOr/min的条件下离心 8min ；三、取0. 8ml上清在11000r/min的条件下再次离心12min ；四、弃掉0. 3ml上清后在摇床上以120r/min震荡^iin混勻；五、取5ul菌液滴到载玻片上，干燥后用次甲基蓝染色液染色anin ；六、蒸馏水冲洗后用擦镜纸擦干；七、用显微镜观察后通过细菌总数快速检测系统计算，即可得到细菌总数。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
权利要求
1.一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于快速检测固体食品中细菌总数的方法按以下步骤实现一、无菌条件下称取20-30g固体样品溶于50-60ml的蛋白胨水溶液中后震荡混勻；二、吸取Iml样品离心；三、取0. 8ml上清再次离心；四、弃掉0. 3ml上清后混勻；五、取5ul菌液滴到载玻片上，干燥后用染色液染色Hmin ；六、蒸馏水冲洗后用擦镜纸擦干；七、用显微镜观察后通过细菌总数快速检测系统计算，即可得到细菌总数。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤一中采用0. 5%浓度的蛋白胨水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤一中在无菌条件下准确称取25g固体样品，放入55ml的蛋白胨水溶液中，并在摇床上以 160r/min 震荡 2min 混勻。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤二中离心条件为1000r/min，8min。
5.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤三中离心条件为11000r/min，12min。
6.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤四中弃掉0. 3ml上清后在摇床上以120r/min震荡aiiin混勻。
7.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤五中染色液为次甲基蓝。
8.根据权利要求1所述的一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，其特征在于步骤五中取5ul菌液滴到载玻片上，干燥后用染色液染色aiiin。
全文摘要
一种快速检测固体食品中细菌总数的方法，涉及一种快速检测固体食品中细菌总数的方法。本发明了解决现存的食品微生物快速检测方法不能够真正达到检测速度快、检测成本低、检测的准确率高并且检测限低的问题。检测方法1.称固体样品与蛋白胨水溶液震荡混匀；2.吸取1ml样品离心；3.取0.8ml上清再次离心；4.弃掉0.3ml上清后混匀；5.取5ul菌液滴到载玻片上干燥后染色；6.蒸馏水冲洗后擦干；7.用显微镜观察后通过细菌总数快速检测系统计算，即可得到细菌总数。本发明具有检测速度快、检测成本低、检测准确度高的优点。
文档编号C12Q1/06GK102453745SQ201010527560
公开日2012年5月16日 申请日期2010年11月2日 优先权日2010年11月2日
发明者张文龙 申请人:张文龙