专利名称：一种鉴定微生物肥料中侧孢短芽孢杆菌的方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及利用适当的引物通过PCR反应，检测微 生物肥料中侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)的方法，以及在该方法中所用 的引物。
背景技术：
侧孢短芽孢杆菌是自然界中广泛分布的细菌，土壤、海洋、动物、昆虫中均有存在。 随着对短芽孢杆菌研究的深入，已发现其能产生多种有应用潜力的代谢产物，如杀虫蛋白、 抑菌物质、抗癌免疫调节物质。另外，侧孢短芽孢杆菌在溶解无机磷、降解有机磷、防治害 虫、提高作物防御能力等多种功能也逐渐被发现、研究并开发利用。鉴于侧孢短芽孢杆菌的多功能性，已有很多企业将其用于微生物肥料生产，并取 得了很好的效果。为确保含侧孢短芽孢杆菌的微生物肥料产品的使用效果，需要保证产品 的质量，尤其是产品中侧孢短芽孢杆菌的数量。常用的平板计数检测法关键在于准确识别 有效菌，目前使用的传统菌种识别是以形态特征和各项生理生化方法为主，操作步骤烦琐， 检测时间长，并且特异性差。因此，迫切需要研究建立快速、准确、灵敏的检测新方法，以满 足侧孢短芽孢杆菌产品的质量检测的准确性和时效性。PCR方法有着快速、准确和灵敏的特点，已经在微生物肥料领域得到了应用，关大 伟等人曾建立了的特异PCR法用于沼泽红假单胞菌的鉴定和检测，并取得了良好的应用效 果。为将PCR技术更广泛应用于微生物肥料检测领域，本发明人通过反复摸索实践建立了 一种基于PCR技术的、快速、准确、灵敏地检测微生物肥料中侧孢短芽孢杆菌的方法。该方 法适用于侧孢短芽孢杆菌的鉴定和检测。本发明是通过下述的技术方案实现的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种应用特异引物PCR技术对微生物肥料中侧孢短芽孢 杆菌进行鉴定的方法。在本发明的一个优选的实施方案中提供了通过特异引物PCR技术鉴 定侧孢短芽孢杆菌的鉴定方法。在进一步优选的实施方案中，所述的侧孢短芽孢杆菌是纯 菌种。本发明的另一目的在于提供上述鉴定方法中所用的特异引物。具体而言，本发明基于已知的侧孢短芽孢杆菌16S rDNA核酸序列，设计了相应于 上述菌种的特异引物。通过优化PCR反应中的镁离子浓度和退火温度等条件来提高PCR方 法的特异性，并根据优化结果建立了侧孢短芽孢杆菌的PCR鉴定方法，用于微生物肥料产 品中侧孢短芽孢杆菌的鉴定。本专利发明的鉴定侧孢短芽孢杆菌的PCR方法为上游引物L25 :5，-TGAAGCGAAACGGAAAG-3，；下游引物R322 :5，-CGTCAAGGTGCTACCTTATT-3，。PCR 反应体系10 X buffer 2. 0 μ LMg2+(25mmol/L)0. 8 μ L
权利要求
一种侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)的特异性引物对，其特征在于所述的引物对由上游引物和下游引物组成，上游引物L25 5′ TGAAGCGAAACGGAAAG 3′；下游引物R3225′ CGTCAAGGTGCTACCTTATT 3′。
全文摘要
本发明提供了一种简单、快速检测和鉴定微生物肥料中侧孢短芽孢杆菌的技术。本技术设计了侧孢短芽孢杆菌的特异引物，建立了这种芽孢菌的PCR鉴定方法，可以根据样品基因组DNA的PCR扩增结果，对微生物肥料中的侧孢短芽孢杆菌进行检测和鉴定。
文档编号C12N15/11GK101956018SQ20101052266
公开日2011年1月26日 申请日期2010年10月28日 优先权日2010年10月28日
发明者关大伟, 姜昕, 曹凤明, 李俊, 李力, 杨小红, 沈德龙, 葛一凡, 陈慧君 申请人:中国农业科学院农业资源与农业区划研究所