专利名称：用于荧光定量pcr定量检测的质粒标准品的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及质粒。具体地说，本发明涉及用于荧光定量PCR定量检测的质粒标准
背景技术：
荧光定量PCR最早是在1992年由日本科学家Higuchi报告提出的。是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，它在光刺激下释放的荧光能量的变化直接反映出PCR扩增产物的变化，荧光信号变量和扩增产物变量成正比，并用足够灵敏的自动化仪器实现对荧光的采集和分析，最后通过标准曲线对未知模板进行分析，以达到对原始模板量定量的目的。在实时荧光PCR中，模板的定量有两种方法绝对定量和相对定量两大种类 [Walker NJ, J Biochem Mol Toxicol, 2001，15 (3) :121-127]。绝对定量是对未知样品的绝对量(拷贝数)进行测定的方法；而相对定量，并不是测定基因的绝对量，而是分别测定目的基因和内参基因的量，再根据内参的量对目的基因量进行归一化处理，最后再进行样品间相对量的比较。绝对定量解析方法是使用已知浓度的标准品制作标准曲线，对未知浓度的样品进行绝对量(拷贝数)测定的方法。所以，绝对量(拷贝数)已知并含有未知样品序列的标准品是必要的。为了保持与实际检测样品间的扩增效率的一致性，标准品应尽量选择与实际检测样品结构近似的样品。经验证质粒标准分子在GMO鉴定检测中是很好的标准阳性物质替代物。质粒分子的优点主要是可以通过微生物进行大量培养，DNA易于扩增，所以可提供无限稳定量的标准物质，并且纯度较高；且操作容易，稳定性高，同一个标准分子可以同时包含多个外源目的基因，经济又高效。甚至有学者将质粒标准分子称为“金标准物质”。制作标准曲线首先必须准备4-6个梯度稀释的标准品，然后将这些标准品作为模板进行Real Time PCR反应，得到各自的Ct值，通过Ct值与起始模板浓度的对数值之间存在的线性关系，就能够制作出标准曲线。尽管肿瘤发病的分子机制尚未完全阐明，但相关基因的遗传学改变的积累是致癌性转变的根本原因，这一点已得到普遍承认。癌基因的表达增加和突变在许多肿瘤早期和良性阶段就可出现。荧光定量PCR不但能有效地检测基因的突变，而且能准确测定表达量， 据此进行肿瘤早期诊断，治疗和预后判断。对某些癌基因的遗传学变化的检测几乎达到了确诊肿瘤的程度。本试验所用荧光定量PCR质粒载体具有以下优点1.制作处理过程简便，实验周期短，实验操作易于标准化。2.价格适中，易于推广。3.定量准确，这是本试剂方法最独特的优点。通过实时荧光PCR扩增曲线参数，定量测定样本中基因拷贝数。4.减少人为实验误差。
发明内容
本发明要解决的问题是提供可供基因突变检测、表达量检测及基因扩增检测的阳性标准品。本发明的目的通过以下技术方案得以实现(1)构建一种质粒载体，其特征在于包括被检测的基因序列。(2)上述(1)所述的质粒载体，其选自TA克隆载体，优选为pMDIS-T。(3)上述(1)所述的质粒载体，被检测的目的基因被整合到载体中。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。图1是本发明实施例2所用质粒对照品构建方法示意图。图2是本发明实施例2质粒图谱，箭头所指即为载体中插入基因PCR产物序列的位置。图3是本发明实施例2的野生型质粒标准品测序结果图，其中图A是EGFR 18外显子2155G野生型质粒测序图，图B是EGFR19外显子22；35_2249位、2236-2250位、2254-2277 位野生型质粒测序图，图C是EGFR 21外显子2573位T野生型质粒测序图。图4是本发明实施例2的突变型质粒标准品测序结果图，箭头所指为碱基突变位点。其中图A是EGFR 18外显子2155G —A突变质粒测序图，图B是EGFR 19外显子 2235-2249位缺失突变质粒测序图，图C是EGFR 19外显子2236-2250位缺失突变质粒测序图，图D是EGFR 19外显子22M-2277位缺失突变质粒测序图，图E是EGFR 21外显子第 21外显子2573位T — G突变质粒测序图。图5是本发明实施例IRAS野生型质粒测序图。图6是本发明实施例3突变型质粒标准品测序结果图，箭头所指为碱基突变位点。 其中图A是KRAS 12密码子GGT —GTT突变质粒测序图，图B是KRAS 12密码子GGT —AGT 突变质粒测序图，图C是KRAS12密码子GGT — GAT突变质粒测序图，图D是KRAS 12密码子GGT — TGT突变质粒测序图，图E是KRAS 13密码子GGC — GAC突变质粒测序图。图7是本发明实施例4BCRP野生型质粒测序图。图8是本发明实施例4突变型质粒标准品测序结果图，箭头所指为碱基突变位点。 其中图A是BCRP 482密码子AGG —GGG突变质粒测序图，图B是BCRP 482密码子AGG — ACG 突变质粒测序图。图9是本发明实施例5BRAF野生型质粒测序图。图10是本发明实施例5突变型质粒标准品测序结果图，箭头所指为碱基突变位
点ο图11是本发明实施例6ERCC1表达量检测质粒测序图。图12是本发明实施例7RRM1表达量检测质粒测序图。图13是本发明实施例8BRCA1表达量检测质粒测序图。图14是本发明实施例9TUBB3表达量检测质粒测序图。图15是本发明实施例10ERBB3表达量检测质粒测序图。图16是本发明实施例11T0P2A表达量检测质粒测序图。
图17是本发明实施例12TYMS表达量检测质粒测序图。图18是本发明实施例13RAP-80表达量检测质粒测序图。图19是本发明实施例14VEGFR1表达量检测质粒测序图。图20是本发明实施例15VEGFR2表达量检测质粒测序图。图21是本发明实施例16HER2表达量检测质粒测序图。图22是本发明实施例17EGFR表达量检测质粒测序图。图23是本发明实施例18VEGF表达量检测质粒测序图。图M是本发明实施例19PPN表达量检测质粒测序图。图25是本发明实施例20CCNB2表达量检测质粒测序图。图沈是本发明实施例2IACTB表达量检测质粒测序图。图27是本发明实施例2218S rRNA表达量检测质粒测序图。图28是本发明实施例23HER2基因扩增检测质粒测序图。图四是本发明实施例24ACTB基因扩增检测质粒测序图。图30是本发明实施例25的质粒标准品扩增曲线图其中图Al是EGFR 18外显子 2155G野生型质粒标准品扩增曲线，图A2是EGFR 19外显子2235-2249位、2236-2250位、 2254-2277位野生型质粒标准品扩增曲线，图A3是EGFR 21外显子2573位T野生型质粒标准品扩增曲线，图A4是EGFR 18外显子2155G — A突变质粒标准品扩增曲线，图A5是EGFR 19外显子2235-2249位缺失突变质粒标准品扩增曲线，图A6是EGFR 19外显子2236-2250 位缺失突变质粒标准品扩增曲线，图A7是EGFR 19外显子22M-2277位缺失突变质粒标准品扩增曲线，图A8是EGFR 21外显子2573位T — G突变质粒标准品扩增曲线；图Bl是 KRAS野生型质粒标准品扩增曲线，图B2是KRAS 12密码子GGT — GTT突变质粒标准品扩增曲线，图B3是KRAS 12密码子GGT —AGT突变质粒标准品扩增曲线，图B4是KRAS 12密码子GGT — GAT突变质粒标准品扩增曲线，图B5是KRAS 12密码子GGT — TGT突变质粒标准品扩增曲线，图B6是KRAS 13密码子GGC — GAC突变质粒标准品扩增曲线；图Cl是BCRP 野生型质粒标准品扩增曲线，图C2是BCRP482密码子AGG — GGG突变质粒标准品扩增曲线， 图C3是BCRP 482密码子AGG — ACG突变质粒标准品扩增曲线；图Dl是BRAF野生型质粒标准品扩增曲线，图D2是BRAF 600密码子GTG — GAG突变质粒标准品扩增曲线。图31是根据图30绘制的标准曲线图其中图Al是EGFR 18外显子2155G野生型质粒标准品标准曲线，图A2是EGFR 19外显子2235-2249位、2236-2250位、2254-2277位野生型质粒标准品标准曲线，图A3是EGFR 21外显子2573位T野生型质粒标准品标准曲线，图A4是EGFR 18外显子2155G — A突变质粒标准品标准曲线，图A5是EGFR19外显子 2235-2249位缺失突变质粒标准品标准曲线，图A6是EGFR 19外显子2236-2250位缺失突变质粒标准品标准曲线，图A7是EGFR 19外显子22M-2277位缺失突变质粒标准品标准曲线，图A8是EGFR 21外显子2573位T — G突变质粒标准品标准曲线；图Bl是KRAS野生型质粒标准品标准曲线，图B2是KRAS 12密码子GGT — GTT突变质粒标准品标准曲线，图B3 是KRAS 12密码子GGT —AGT突变质粒标准品标准曲线，图B4是KRAS 12密码子GGT —GAT 突变质粒标准品标准曲线，图B5是KRAS 12密码子GGT — TGT突变质粒标准品标准曲线， 图B6是KRAS 13密码子GGC — GAC突变质粒标准品标准曲线；图Cl是BCRP野生型质粒标准品标准曲线，图C2是BCRP 482密码子AGG — GGG突变质粒标准品标准曲线，图C3是BCRP 482密码子AGG — ACG突变质粒标准品标准曲线；图Dl是BRAF野生型质粒标准品标准曲线，图D2是BRAF 600密码子GTG — GAG突变质粒标准品标准曲线。图32是本发明实施例25检测的组织样本EGFR 21外显子2573位野生型(图Al) 与T —G置换突变型(图A2)荧光定量PCR扩增曲线图，组织样本EGFR 19外显子野生型 (图A3)与2235-2M9位缺失突变型(图A4)荧光定量PCR扩增曲线图，全血样本EGFR 19外显子2236-2250位缺失突变型(图似)荧光定量PCR扩增曲线图，全血样本EGFR 2254-2277 位缺失突变型(图A6)荧光定量PCR扩增曲线图，细胞系样本EGFR 18外显子2155位野生型(图A7)与G —A置换突变型(图A8)荧光定量PCR扩增曲线图；石蜡包埋组织样本 KRAS 12密码子野生型(图Bi)与GGT —TGT突变型(图B2)荧光定量PCR扩增曲线图，新鲜组织样本KRAS 12密码子野生型(图似)与GGT — GTT突变型(图B4)荧光定量PCR扩增曲线图，全血样本13密码子野生型(图B5)与GGC — GAC突变型(图B6)荧光定量PCR 扩增曲线图，细胞系样本KRAS 12密码子野生型(图B7)与GGT — AGT突变型(图B8)荧光定量PCR扩增曲线图；石蜡包埋组织样本BCRP 482密码子野生型(图Cl)与AGG — GGG 突变型(图以)荧光定量PCR扩增曲线图，新鲜组织样本BCRP 482密码子野生型(图C3) 与AGG — ACG突变型(图C4)荧光定量PCR扩增曲线图，全血样本BCRP 482密码子野生型 (图C5)与AGG —ACG突变型(图C6)荧光定量PCR扩增曲线图，细胞系样本BCRP 482密码子野生型(图C7)与AGG —GGG突变型(图C8)荧光定量PCR扩增曲线图；石蜡包埋组织样本BRAF 600密码子野生型(图Dl)与GTG — GAG突变型(图D2)荧光定量PCR扩增曲线图，新鲜组织样本BRAF 600密码子野生型(图D3)与GTG — GAG突变型(图D4)荧光定量PCR扩增曲线图，全血样本BRAF 600密码子野生型(图D5)与GTG — GAG突变型(图 D6)荧光定量PCR扩增曲线图，细胞系样本BRAF 600密码子野生型(图D7)与GTG — GAG 突变型(图D8)荧光定量PCR扩增曲线图。图33是本发明实施例沈的质粒标准品扩增曲线图其中图Al是ERCCl质粒标准品扩增曲线，图A2是RRMl质粒标准品扩增曲线，图A3是BRCAl质粒标准品扩增曲线，图A4 是TUBB3质粒标准品扩增曲线，图A5是ERBB3质粒标准品扩增曲线，图A6是T0P2A质粒标准品扩增曲线，图A7是TYMS质粒标准品扩增曲线，图Al是ERCCl质粒标准品扩增曲线，图 A8是RAP-80质粒标准品扩增曲线，图A9是VEGFRl质粒标准品扩增曲线，图AlO是VEGFR2 质粒标准品扩增曲线，图All是HER2质粒标准品扩增曲线，图A12是EGFR质粒标准品扩增曲线，图A13是VEGF质粒标准品扩增曲线，图A14是PPN质粒标准品扩增曲线，图A15是 CCNB2质粒标准品扩增曲线，图A16是ACTB质粒标准品扩增曲线，图A17是18S rRNA质粒标准品扩增曲线。图34是根据图33绘制的标准曲线图其中图Al是ERCCl质粒标准品标准曲线， 图A2是RRMl质粒标准品标准曲线，图A3是BRCAl质粒标准品标准曲线，图A4是TUBB3质粒标准品标准曲线，图A5是ERBB3质粒标准品标准曲线，图A6是T0P2A质粒标准品标准曲线，图A7是TYMS质粒标准品标准曲线，图Al是ERCCl质粒标准品标准曲线，图A8是RAP-80 质粒标准品标准曲线，图A9是VEGFRl质粒标准品标准曲线，图AlO是VEGFR2质粒标准品标准曲线，图All是HER2质粒标准品标准曲线，图A12是EGFR质粒标准品标准曲线，图A13 是VEGF质粒标准品标准曲线，图A14是PPN质粒标准品标准曲线，图A15是CCNB2质粒标准品标准曲线，图A16是ACTB质粒标准品标准曲线，图A17是18S rRNA质粒标准品标准曲线。图35是本发明实施例沈检测的样本基因扩增曲线图，从左到右依次是18S rRNA、 ACTB, ERCCl、TYMS, RRMl、BRCAl、TUBB3、T0P2A、PPN、VEGF, EGFR、CCNB2、VEGFRl、RAP-80、 HER2、ERBB3、VEGFR2基因的扩增曲线。图36是本发明实施例27的标准品扩增曲线图，其中图A是HER2质粒标准品扩增曲线，图B是ACTB质粒标准品扩增曲线。图37是根据图36绘制的标准曲线图，其中图A是HER2质粒标准曲线，图B是ACTB 质粒标准曲线，图38是本发明实施例27的样本基因扩增曲线图，其中图A是石蜡包埋组织HER2 扩增曲线图，图B是新鲜组织HER2扩增曲线图；图C是石蜡包埋组织ACTB扩增曲线图，图 D是新鲜组织ACTB扩增曲线图。
实施例以下的实施例用于为本领域中的普通技术人员提供有关如何实施和使用本发明的完整披露和描述，并且这些例子并非意在对发明人所认为的发明范围进行限制，亦非意指下文的实验是被实施的全部实验而且是仅可实施的实验。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南第三版(SambrookJ.)，或按照厂商所建议的条件。糕· 1胞鋼中_织、、外胤血、€__龍_耳沾准
备IDNA 或 RNA 提取可以使用Qiagen公司、Promega公司、Roche公司的核酸提取试剂盒提取样本核酸，使用Gene公司Nanodrop ND1000型核酸微量测量仪检测所提核酸浓度与纯度DNA :0D260/0D280 = 1. 8士0. 1，0D260/0D230 = 2. 0士0. 1 ；RNA :0D260/0D280 = 2. 0士0. 1，0D260/0D230 = 2. 0士0. 1。2cDNA 合成逆转录采用M-MLV逆转录酶进行，步骤和反应体系如表1 表1 逆转录体系(10 μ 1)与步骤
权利要求
1.一种荧光定量PCR检测用的质粒标准品，其特征在于，质粒的载体为pMDIS-T，并且质粒的插入片段，为以下(1)-(4)中任一种待检测的基因序列，分别用来检测对应基因的突变情况(1)EGFR18、19、21 外显子；(2)KRAS 12、13 密码子；(3)BCRP 482位氨基酸；(4)BRAF 600位氨基酸。
2.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，质粒的插入片段为(1)SEQID NO :209,SEQ ID NO :210、SEQ ID NO :211、SEQ ID NO :212,SEQ ID NO :213, SEQ ID NO :214, SEQ ID NO :215, SEQ ID NO :216 ;(2)SEQID NO :217,SEQ ID NO :218,SEQ ID NO :219,SEQ ID NO :220、SEQ ID NO :221, SEQ ID NO 222 ；(3)SEQID NO :223,SEQ ID NO :224,SEQ ID NO :225 ;(4)SEQID NO :226,SEQ ID NO :227。
3.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，制备与检测质粒的引物为(1)SEQID NO 2,SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ IDNO : 11、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15、SEQID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19, SEQ ID NO :20, SEQ ID N0:21、SEQ ID NO :22, SEQ ID NO :23 ;(2)SEQ ID NO :25, SEQ ID NO :26, SEQ ID NO :27, SEQ ID NO :28, SEQ ID NO :29, SEQ ID NO :30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、 SEQ ID NO :36, SEQ ID NO :37, SEQ ID NO :38 ；(3)SEQID NO :40,SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42,SEQ ID NO :43,SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45, SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49 ；(4)SEQID NO :51、SEQ ID NO :52,SEQ ID NO :53,SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :55,SEQ ID NO :56。
4.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，检测质粒的探针为(1)SEQID NO :133,SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135,SEQ ID NO 136,SEQ ID N0:137、 SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 140、SEQ IDNO : 141、SEQ ID NO: 142、SEQ ID NO :143, SEQ ID NO :144, SEQ ID NO :145, SEQ ID NO :146, SEQ ID NO :147, SEQ ID NO 148 ；(2)SEQID NO :149,SEQ ID NO :150,SEQ ID NO :151,SEQ ID NO :152,SEQ ID NO :153, SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 156、SEQ IDNO : 157、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO : 159、SEQ ID NO :160 ；(3)SEQID N0:161、SEQ ID NO : 162、SEQ ID NO :163,SEQ ID NO :164,SEQ ID NO :165, SEQ ID NO 166 ；(4)SEQID NO :167,SEQ ID NO :168,SEQ ID NO :169,SEQ ID N0:170。
5.一种荧光定量PCR检测用的质粒标准品，其特征在于，质粒的载体为pMD18-T，并且质粒的插入片段，为以下(1)-(17)中任一种待检测的基因序列，分别用来检测对应基因的表达量情况(1)ERCClmRNA ；(2)RRMlmRNA ；(3)BRCAlmRNA ；(4)TUBB3mRNA ；(5)ERBB3mRNA ；(6)T0P2AmRNA ；(7)TYMSmRNA ；(8)RAP-80mRNA ；(9)VEGFRlmRNA ；(10)VEGFR2mRNA ；(11)HER2mRNA ；(12)EGFRmRNA ；(13)VEGFmRNA ；(14)PPNmRNA (15)CCNB2mRNA ；(16)ACTBmRNA ；(17)18SrRNA。
6.如权利要求3所述的质粒标准品，其特征在于，质粒的插入片段为(1)SEQID NO 228 ；(2)SEQID NO 229 ；(3)SEQID NO 230 ；(4)SEQID NO 231 ；(5)SEQID NO 232 ；(6)SEQID NO 233 ；(7)SEQID NO 234 ；(8)SEQID NO 235 ；(9)SEQID NO 236 ；(10)SEQID NO 237 ；(11)SEQID NO 238 ；(12)SEQID NO :239 ；(13)SEQID NO :240 ；(14)SEQID NO :241 ；(15)SEQID NO :242 ；(16)SEQID NO :243 ；(17)SEQID NO :244。
7.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，制备与检测质粒的引物为(1)SEQID NO 57,SEQ ID NO58,SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 60 ；(2)SEQID NO61,SEQ ID NO62,SEQ ID NO63,SEQ ID NO 64 ；(3)SEQID NO :65,SEQ ID NO66,SEQ ID NO67,SEQ ID NO 68 ；(4)SEQ ID NO 69, SEQ ID NO 70, SEQ ID N0:71、SEQ ID NO :72 ；(5)SEQID NO73,SEQ ID NO74,SEQ ID NO75,SEQIDNO 76 ；(6)SEQID NO77,SEQ ID NO 78,SEQ ID NO79,SEQIDNO 80 ；(7)SEQID NO81,SEQ ID NO 82,SEQ ID NO83,SEQIDNO 84 ；(8)SEQID NO85,SEQ ID NO86,SEQ ID NO 87,SEQIDNO 88 ；(9)SEQ ID NO 89, SEQ ID NO 90, SEQ ID N0:91、SEQ ID NO :92 ；(10)SEQID NO93,SEQ ID NO94、SEQ ID NO95,SEQ ID NO 96 ；(11)SEQID NO97,SEQ ID NO98,SEQ ID NO 99,SEQ ID NO :100 ；(12)SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO :104 ;(13)SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO :108 ;(14)SEQ ID NO :109, SEQ ID NO :110, SEQ ID NO =IlUSEQ ID NO :112 ;(15)SEQID NO :112、SEQ ID NO :114、SEQ ID NO :115、SEQ ID NO :116 ;(16)SEQ ID NO :117、SEQ ID NO :118、SEQ ID NO :119、SEQ ID NO :120 ;(17)SEQ ID NO :121, SEQ ID NO :122, SEQ ID NO :123, SEQ ID NO :124。
8.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，检测质粒的探针为(1)SEQID NO :171, SEQ ID NO :172;(2)SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO :174;(3)SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO :176;(4)SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO :178;(5)SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO :180;(6)SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO :182;(7)SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO :184;(8)SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO :186;(9)SEQ ID NO: 187、SEQ ID NO :188;(10)SEQID NO: 189、SEQ ID NO :190;(11)SEQID NO: 191、SEQ ID NO :192;(12)SEQID NO: 193、SEQ ID NO :194;(13)SEQID NO: 195、SEQ ID NO :196;(14)SEQID NO: 197、SEQ ID NO :198;(15)SEQID NO: 199、SEQ ID NO :200 ;(16)SEQID NO :201、SEQ ID NO :202 ;(17)SEQID NO :203,SEQ ID NO :204。
9.一种荧光定量PCR检测用的质粒标准品，其特征在于，质粒的载体为pMDIS-T，并且质粒的插入片段，为以下(1)-(17)中任一种待检测的基因序列，分别用来检测对应基因的表达量情况分别用来检测对应基因的基因扩增情况(1)HER2基因组 DNA (2)ACTB基因组 DNA。
10.如权利要求5所述的质粒标准品，其特征在于，质粒的插入片段为(1)SEQID NO 245 ；(2)SEQID NO :246ο
11.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，制备与检测质粒的引物为(1)SEQID NO: 125、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO :128 ;(2)SEQID NO :129,SEQ ID NO :130,SEQ ID NO :131,SEQ ID NO :132。
12.如权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，检测质粒的探针为(1)SEQID NO :205,SEQ ID NO :206 ；(2)SEQID NO :207,SEQ ID NO :208。
全文摘要
本发明涉及用于荧光定量PCR定量检测的质粒标准品。具体地说，本发明涉及与基因突变、表达量及扩增检测相关的荧光定量PCR检测方法中定量检测需要的质粒标准品。
文档编号C12N15/11GK102453748SQ20101050952
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月18日 优先权日2010年10月18日
发明者李隽 , 莫敏俐, 许军普, 陈钊 申请人:北京雅康博生物科技有限公司