专利名称：漆酶活性相关基因序列的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及分子生物学中的基因领域，特别是一种漆酶活性相关基因序列。
背景技术：
漆酶(laccase，EC 1. 10. 3. 2)广泛地存在于自然界中，因最初发现于漆树的树脂 而得名。漆酶存在于一些植物和微生物中。漆酶有多种工业用途。漆酶能除去酚类物质而 应用于污水处理和作为食品添加剂等；漆酶具有分解木质素的作用而应于纸浆、造纸工业 和纤维素乙醇工业。漆酶有着重要的工业用途以及广泛的需求。克隆与表达基因是当前研 J Li ^^ ； ^^ °
发明内容
本发明的目的是提供一种漆酶(laccase，简称Lac)的基因序列，是参考已知的漆 酶基因的N端和C端序列设计引物，以产漆酶的枯草杆菌基因组为模板，用PCR法扩增得到 全长的漆酶的基因序列。其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 1所述；它的氨基酸序列如 序列表中SEQ ID NO. 2所述。本发明的目的通过以下技术措施实现1、枯草杆菌菌种购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。采用常规方法提取枯草 杆菌基因组DNA。2、引物设计与引物合成从 http//www. ncbi. nlm. nih. gov/ _ M 白勺 Nucleotide 巾 T" i牛古 Hffiff (Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168)的 cotA 基因序列(该基因编码酮依赖的 漆酶)，根据该基因的N端和C端序列设计PCR引物，引物由北京六合华大科技股份有限公 司合成。其引物序列为引物1 5， ATGACACTTGAAAAATTTGTGGATGCTCTCCC3，引物2:5 ’ CTATTTATGGGGATCAGTTATATCCATCGG3’3、漆酶基因序列的克隆用以上合成的两条引物，以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168)的基因组DNA作为模板进行PCR扩增，用0. 8%的琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进 行检测，从凝胶中纯化回收目的产物。然后将纯化的PCR产物克隆到PUCM-T载体中，转化 大肠杆菌DH5 a感受态细胞，挑取阳性克隆，送上海生工生物工程技术服务有限公司进行 全序列测序和拼接。4、对漆酶基因的测定4. 1将基因全序列测序和拼接结果用BLAST软件进行同源性测定，比对结果
权利要求
一种漆酶相关蛋白的基因序列，其特征在于其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所述。
2.一种漆酶相关蛋白的基因序列，其特征在于其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 2 所述。
全文摘要
本发明公开了一种漆酶活性相关基因序列，是参考已知的漆酶基因的N端和C端序列设计引物，以产漆酶的枯草杆菌基因组为模板，用PCR法扩增得到全长的漆酶的基因序列，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所述；它的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所述。本发明可以通过将这一基因进行重组表达生产漆酶，而应用于纤维素乙醇的生产、纸浆和造纸工业以及污水处理和美食等行业。
文档编号C12N9/02GK101979588SQ201010508100
公开日2011年2月23日 申请日期2010年9月30日 优先权日2010年9月30日
发明者张爱联, 杨穗珊 申请人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所