专利名称：Hpv6型l2n120e7e6融合蛋白基因、表达载体、方法、菌株和用途的利记博彩app
技术领域：
本发明属于医学生物技术领域。具体地，本发明涉及一种表达人乳头瘤病毒 (HPV)6型L2W20E7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法和免疫治疗及预防用途。
背景技术：
生殖器疣(Genital Wart,Gff)是目前世界上发病率很高的性传播疾病之一。虽然 GW—般不会导致死亡，但是会使患者产生心理阴影，并带来昂贵的治疗费用。目前治疗GW 的方法主要有抗增殖药物、冷冻疗法、损毁性疗法、免疫调节剂等，这些方法引起的不适应症和疣复发很常见，没有从根本上使疾病治愈，这就需要寻找更为有效的免疫预防和治疗 Gff的方法。GW与人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染的密切关系早已明确，HPV 感染是其主要的致病因子。HPV是一组嗜上皮组织的小双链DNA病毒，目前已发现100多个型别，其中50种与生殖器感染有关，可通过性接触传播。HPV具有严格的种属特异性和组织特异性，仅感染人的皮肤和粘膜上皮，引起上皮的增生性改变。临床上根据其致病性分为高危型和低危型，前者能诱发宫颈上皮组织的不良性增生甚至宫颈癌变，后者可引起生殖器周尖锐湿疣和喉部的乳头瘤，其中引起生殖器疣的以HPV-6、HPV-11型为主。有证据表明，宿主的免疫应答，尤其是细胞免疫应答水平，是影响HPV相关疾病形成的主要因素。体液免疫应答产生的中和抗体能够抑制HPV的感染和进一步扩散，细胞免疫应答能够清除HPV感染的细胞以及相关的肿瘤细胞。HPV的生活周期决定其最小程度将病毒抗原暴露于免疫系统的特性，故与其他病毒相比，HPV感染激发的人体免疫应答很弱。在GW治疗中发现，在大多数免疫功能健全的患者中，自然或医源性因素导致病灶免疫原暴露于免疫系统后，邻近的疣体能够消退。这提示能够利用疫苗来激发机体的免疫系统，以达到预防和治疗GW的目的。HPV预防性和治疗性疫苗早在九十年代初就已经在开始研制。目前预防性疫苗已取得了重要进展，其免疫策略主要集中在如何诱发出针对HPV相关表位的高滴度中和抗体来预防感染。在这方面，以HPV衣壳蛋白Li，L2为靶抗原的病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs)，在动物实验和临床试验中均表现出良好的预防HPV感染的效果。其中较为成功的有Merck公司的HPV16/18/6/11四价疫苗Gardasil和GSK公司的HPV16/18 二价疫苗Cervarix.，二者已分别于2006年和2008年被美国FDA批准进入市场。治疗性疫苗，特别是低危型治疗性疫苗的研究较少，进展也相对缓慢，治疗性疫苗主要通过诱发机体产生针对病毒抗原的细胞免疫，从而清除被病毒感染的细胞及相关病灶。由于HPV早期蛋白E6，E7在病毒生活周期及相关肿瘤组织中持续存在，已经成为了多数治疗性疫苗选择的靶抗原。各种以E6、E7蛋白为靶抗原的治疗性疫苗在动物实验上均表现出良好的细胞免疫反应。GSK研制的HPV6型L2E7治疗性疫苗在II期临床中证实对感染HPV6型的生殖器疣(GW)有一定的治疗效果。该HPV6型L2E7蛋白为HPV6型L2全长基因与E7基因融合， L2全长蛋白只能诱导较弱的体液免疫和细胞免疫反应，全长的L2蛋白059个氨基酸)与 E7蛋白融合形成的结构可能影响了 E7蛋白(98个氨基酸)在细胞内的水解，从而影响到 E7蛋白的T细胞表位的有效呈递。因此，还需要开发新的有强的免疫效果的治疗及预防生殖器疣的疫苗。
发明内容
下面详细讨论本发明各种技术方案的制备和使用，但应该理解，本发明提供了许多适用的发明构思，其可以体现在各种各样的具体方面上。为有助于理解本发明，下面定义了一些术语。本文定义的术语具有本发明相关领域的普通技术人员通常理解的含义。术语可用于说明的具体实例的一般类别，但它们的使用不限制本发明，权利要求中所概括的除外。除非另外指出，本文所述的“HPV”是指人乳头瘤病毒(Human papillomavirus)；除非另外指出，本文所述的“bp”是指碱基对(base pair)；除非另外指出，本文所述的“ELISP0T”是指酶联免疫斑点(Enzyme-linked immunospot)；除非另外指出，本文所述的“ICS”是指胞内细胞因子染色(Intracellular Cytokine Staining)；除非另外指出，本文所述的“IPTG”是指异丙基硫代-β -D半乳糖苷(Isopropylt hio-β -D-galactoside)；除非另外指出，本文所述的“SDS-PAGE”是指十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)；除非另外指出，本文所述的“HRP”是指辣根过氧化物酶 (Horseradishperoxidase)；除非另外指出，本文所述的“ IFN-γ ”是指Y-干扰素(Interferon gamma)；除非另外指出，本文所述的“PBS”是指磷酸盐缓冲液(Phosphatebuffered saline)；近期发表的临床研究资料表明人体内E6蛋白的T细胞免疫原性强于E7蛋白。对 HPV6型而言，由于其转化活性较低，病毒基因不会发生整合，其L1、L2在肿瘤(疣)形成期亦能持续表达；且L2与Ll相比，前者诱发中和抗体的空间结构依赖性较小，因而其作为前导蛋白具有更大的基因容量。另外，对多种其他型别HPV的研究发现，L2的线性中和表位主要集中在前120个氨基酸区段。故在本发明中，为了获得高的蛋白表达量及强的免疫原性，选择将HPV6型的L2N(l-360bp)、E7、E6三个基因片段融合并在原核表达系统中进行表达，纯化后的融合蛋白能诱发强的体液免疫反应和E7与E6特异性T细胞免疫反应，并且在 C57BL/6小鼠动物试验中观察到了融合蛋白对肿瘤生长的抑制作用。预期在未来用于人体临床试验中亦能表现出强的免疫原性。本发明旨在提供一种能简单、经济、有效的制备人乳头瘤病毒HPV6L2m20E7E6融合蛋白的基因核苷酸序列，该基因能在大肠杆菌中获得高效表达，表达蛋白能用于HPV6型感染和相关疾病(如生殖器疣)的预防和治疗。
具体而言，本发明的一个目的在于，提供一种人乳头瘤病毒(HPV) 6型L2W20E7E6 融合蛋白。本发明的另一个目的在于，提供一种用于编码前述的人乳头瘤病毒(HPV)6 型L2W20E7E6融合蛋白的DNA序列。本发明的再一个目的在于，提供一种大肠杆菌表达质粒载体。本发明的又一个目的在于，提供一种用于生产前述的人乳头瘤病毒(HPV)6型 L2N120E7E6融合蛋白的大肠杆菌菌株。本发明的还一个目的在于，提供一种制备前述的人乳头瘤病毒(HPV) 6型L2W20E7E6融合蛋白的方法。针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案一方面，本发明提供一种人乳头瘤病毒(HPV)6型L2N端120个氨基酸、E7 蛋白、E6蛋白的融合蛋白，其氨基酸序列为SQE. ID. NO. 1所示的序列。本申请中，以 "HPV6L2m20E7E6” 或 “L2m20E7E6” 表示该融合蛋白。另一方面，本发明提供一种用于前述的人乳头瘤病毒(HPV)6型L2W20E7E6融合蛋白的DNA序列，所述DNA序列的核苷酸序列为SQE. ID. NO. 2所示的序列。再一方面，本发明提供一种用于表达前述融合蛋白的表达载体，所述表达载体包含前述的DNA序列；优选地，所述表达载体为原核或真核表达载体；更优选地，所述表达载体为大肠杆菌质粒载体。优选地，所述大肠杆菌质粒载体是由前述HPV6型的L2W20E7E6融合蛋白基因DNA 序列插入至质粒PQE30的BamH I位点间来构建的。优选地，所述大肠杆菌表达质粒载体中，所述的大肠杆菌选自JM109和M15等适宜表达pQE30的菌株。又一方面，本发明提供一种用于生产前述的人乳头瘤病毒(HPV)6型的 L2N120E7E6融合蛋白的菌株，所述菌株含有前述的表达载体；优选地，所述菌株为大肠杆菌；更优选地，所述大肠杆菌选自JM109和M15等适宜表达pQE30的菌株。还一方面，本发明提供一种制备前述的人乳头瘤病毒(HPV)6型L2W20E7E6融合蛋白的方法，所述方法包括以下步骤1)将前述的HPV6L2m20E7E6融合蛋白基因DNA序列插入大肠杆菌表达载体 PQE30的BamH I位点，构建出重组表达载体pQE30_HPV6L2m20E7E6 ；2)用步骤1)所构建的重组表达载体转化大肠杆菌，获得含有该重组表达载体的菌株，接种培养，IPTG诱导表达；3)将步骤2~)所得到的大肠杆菌离心裂解后，收获包涵体，用8M尿素悬起，离心， 取上清用镍离子亲和层析柱纯化表达蛋白。优选地，在本发明制备前述的人乳头瘤病毒(HPV)6型L2W20E7E6融合蛋白的方法中，所述的大肠杆菌选自JM109和M15等适宜表达pQE30的菌株。另一方面，本发明提供一种制备用于治疗及预防人乳头瘤病毒6型感染及其相关疾病(如生殖器疣)药物的方法。此外，本发明还提供了前述的人乳头瘤病毒(HPV) 6型L2W20E7E6融合蛋白、前述的人乳头瘤病毒(HPV)6型L2W20E7E6融合蛋白的DNA序列、前述的原核表达载体或前述的大肠杆菌菌株在制备用于预防和治疗人乳头瘤病毒6型感染及其相关疾病(如生殖器疣)的药物中的应用；优选地，所述的药物为疫苗。本发明还提供了一种用于预防和治疗生殖器疣的疫苗，所述疫苗包括前述的人乳头瘤病毒(HPV) 6型L2m20E7E6融合蛋白、前述的人乳头瘤病毒(HPV) 6型L2m20E7E6融合蛋白的DNA序列、前述的原核表达载体或前述的大肠杆菌菌株。下面根据本发明的一个优选的实施方式，结合说明书附图对本发明的技术方案进行进一步的详细说明本实验采用基因工程技术，首先以提取的HPV6型基因阳性的尖锐湿疣组织DNA为模板，分别PCR扩增出HPV6 L2(l-360bp)、E7、E6基因，再以重叠PCR方法扩增出含1107bp 的HPV6L2m20E7E6融合蛋白基因。将目的片段插入原核表达载体pQE30，经限制性内切酶酶切鉴定正确后，送北京擎科生物科技有限公司测序。获得了与设计基因序列相符的 PQE30-HPV6L2N120E7E6重组表达质粒。融合蛋白基因在原核表达系统获得高效表达，表达水平约占全菌的40 %，表达蛋白经纯化后免疫C57BL/6小鼠，用动物免疫实验评价目的蛋白的免疫原性。本发明生产人乳头瘤病毒6型L2W20E7E6融合蛋白的方法包括以下步骤将设计的HPV6L2m20E7E6融合蛋白基因片段插入大肠杆菌表达载体pQE30的 BamH I位点，将该质粒转化大肠杆菌获得含有pQE30_HPV6L2m20E7E6的菌株，接种培养， IPTG诱导表达；表达菌体经离心裂解后，收获包涵体，用8M尿素悬起，离心，取上清用镍离子亲和层析柱纯化表达蛋白。优选地，在本发明生产HPV6L2m20E7E6融合蛋白的方法中，所述的大肠杆菌是 JM109(JM109是常用的大肠杆菌表达菌株，一般配合以强表达载体来进行目的基因的强表达)。本发明的含有重组质粒pQE30-HPV6L2m20E7E6的大肠杆菌菌株能用于研制治疗及预防人乳头瘤病毒6型感染和与此感染相关疾病(如生殖器疣)的药物。由此可见，本发明人从增强疫苗的免疫原性，并能在大肠杆菌中高表达两方面，进行设计研制HPV6L2m20E7E6融合蛋白疫苗。考虑到L2的主要目的是诱导体液免疫即中和抗体，同时作为前导蛋白提高E7蛋白的表达，因此将L2蛋白截短仅保留含有中和抗体表位的N端120个氨基酸，以便于在E7蛋白后再融合加入在人体中免疫原性强于E7蛋白的E6 蛋白，使三个靶抗原融合后能得以高效表达(一般分子量太大，表达水平会低)，此外L2的截短会改变融合蛋白的结构也有可能提高融合蛋白的免疫原性。加入E6抗原后融合蛋白疫苗囊括了更多的T细胞表位，更能满足于治疗性疫苗受HLA多态性影响的需要，从而达到增强疫苗免疫效果的作用。在我们的实验中已证实全长L2基因与E7、E6基因融合的蛋白表达水平很低(SDS-PAGE胶上无明显表达带)，而截短的L2与E7、E6基因融合的蛋白表达水平明显提高，经扫描分析，目的蛋白表达量占全菌的约40%。综上所述，本发明人选择将HPV6型早期蛋白E7和E6白与晚期蛋白L2N端的120 个氨基酸多肽序列融合形成相应的HPV6L2m20E7E6融合蛋白的核苷酸序列，利用PCR获得三个蛋白的基因，应用重叠PCR方法将3个基因片段融合，构建出HPV6L2m20E7E6融合基因，将其插入原核表达载体PQE30，融合基因获得较高表达，表达水平约占全菌的40 %，并进行了该蛋白的纯化，免疫C57BL/6小鼠后，经ELISA抗体检测，表明诱发了强的体液免疫反应(包括高的中和抗体和交叉中和抗体滴度)。ELISP0T检测免疫后的小鼠可产生针对 HPV6型E7肽库和E6肽库强的特异性T细胞免疫反应。在肿瘤动物模型中可观察到一定的肿瘤生长抑制效果。本发明可用于研发预防和治疗性生殖器疣疫苗。 与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点本发明中含有可诱发产生中和抗体和交叉中和抗体的HPV6型L2N端120个氨基酸，且同时含有能够引起细胞免疫反应的E7和E6蛋白，使用本发明的基因能够获得高的表达，表达水平约占全菌的40%，表达蛋白经纯化免疫C57BL/6小鼠，表明该蛋白具有很好的免疫原性，可产生强的针对HPV6型E7和E6蛋白特异性T细胞免疫反应，肿瘤生长动物实验表明蛋白免疫对肿瘤的生长具有一定的抑制作用。由此可见，该融合基因建立的 HPV6L2N120E7E6融合蛋白原核表达系统能用于HPV6型感染和相关疾病，尤其是生殖器疣的预防和治疗性疫苗的新药研发。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图1为本发明实施例3中所使用的pQE30质粒载体结构图谱；图2为根据本发明实施例3的方法构建的重组原核表达质粒 PQE30-HPV6L2N120E7E6 的结构简图；图3为HPV6L2m20E7E6融合蛋白原核表达高SDS-PAGE，电泳结果具体为根据本发明实施例4进行的在大肠杆菌中表达的SDS-PAGE凝胶分析的结果；其中，M为低分子量蛋白质Marker，1为空载体对照，2为诱导后基因表达产物；图4为HPV6L2m20E7E6融合蛋白的Western blot鉴定结果，具体为根据本发明实施例5进行的在大肠杆菌中表达蛋白的Western-blot鉴定结果；其中，M为低分子量蛋白质Marker，1为空载体对照，2为诱导后基因表达产物；图5为纯化后的HPV6L2m20E7E6融合蛋白SDS-PAGE纯度分析，具体为根据本发明实施例6进行的在原核系统表达经镍离子亲和层析纯化后的SDS-PAGE凝胶分析的结果， 其中，M为低分子量蛋白质Marker，1为纯化后的HPV6L2m20E7E6蛋白；图6为HPV6L2m20E7E6融合蛋白在C57BL/6小鼠体内诱发的体液免疫反应，具体为根据本发明实施例7进行的表达蛋白经纯化，免疫小鼠后的总抗体滴度检测的结果；图7为HPV6L2m20E7E6融合蛋白在C57BL/6小鼠体内诱发的体液免疫反应，具体为根据本发明实施例7进行的表达蛋白经纯化，免疫小鼠后的中和抗体及交叉中和抗体滴度检测的结果；图8为HPV6L2m20E7E6融合蛋白在C57BL/6小鼠体内诱发的细胞免疫反应，具体为根据本发明实施例7进行的表达蛋白经纯化，免疫小鼠后的酶联免疫斑点(ELISP0T)检测结果；图9为HPV6L2m20E7E6融合蛋白在C57BL/6小鼠体内诱发的效应T细胞CD4+/ CD8+亚型的确定，具体为根据本发明实施例7进行的表达蛋白经纯化，免疫小鼠后取脾细胞经过胞内细胞因子染色(ICS)的方法，使用流式细胞术检测分析确定；图10为HPV6L2m20E7E6融合蛋白在C57BL/6小鼠体内诱发的肿瘤生长抑制反应，具体为根据本发明实施例7进行的表达蛋白经纯化，对免疫后第二天移植肿瘤细胞的小鼠观察肿瘤生长情况。
具体实施例方式以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例1 设计表达HPV6L2m20E7E6融合蛋白的基因序列根据NCBI GenBank HPV6基因序列(序列号NC 00135 对应的氨基酸序列，将 HPV6型病毒的次要衣壳蛋白序列L2N端120个氨基酸与早期蛋白E7和E6蛋白全长氨基酸序列融合，设计得到具体如SEQ ID NO :1所示的融合蛋白(融合蛋白从N —C端依次为 L2N120, Ε7、E6，共 368 个氨基酸)。为了防止同源序列基因重组的可能，将E7蛋白基因中与E6蛋白基因重叠部分的核苷酸序列改造，根据基因简并性，在其编码的产物蛋白氨基酸序列保持不变的前提下将E7基因5，端25bp序列(此E7蛋白基因5，端25bp基因与E6蛋白基因3，端重叠) ATGCATGGAAGACATGTTACCCTAA 替换为 ATGCACGGTCGTCACGTGACACTGA，以扩大这部分重叠序列的差异，同时去除E7基因的终止密码子，发明人将该序列命名为HPV6L2m20E7E6，其序列具体如下SEQ ID N0:2所示。实施例2 =PCR扩增制备L2m20E7E6目的基因片段本实施例为PCR扩增制备L2m20E7E6目的基因片段，具体过程详述如下。根据所设计的融合蛋白对应的相关核苷酸序列设计PCR及重叠PCR所需引物Pl/ P2(L2N120)、P3/P4(E7)和P5/P6 (E6)，以供扩增L2m20E7E6融合基因使用。设计的引物详细如表1所示。引物合成由北京擎科生物技术有限公司完成。HPV6型基因阳性的尖锐性湿疣组织DNA的筛选方法如下将取自医院妇科患者的尖锐湿疣组织依据DNA提取试剂盒(购自北京诺克奥基因工程技术有限公司)说明书操作提取总DNA。依据HPV PCR检测试剂盒(购自北京基因工程技术有限诺克奥公司)说明书，以提取的尖锐湿疣组织DNA为模板，PCR扩增HPV DNA片段。将HPV DNA片段克隆至PMD18-T载体，将质粒DNA用Sma I酶切鉴定，阳性克隆送大连宝生物公司测序，序列与 NCBI GenBank HPV6基因序列(序列号NC_00135Q比对，有相同序列者，对应的尖锐湿疣组织DNA提取物为HPV6阳性DNA。以该含有HPV6型基因的尖锐性湿疣组织DNA为模板， 分另U 以 PCR 引物 P1/P2 (L2N120)、P3/P4 (E7)和 P5/P6 (E6)，扩增出含 HPV6L2N120 (360bp)、 HPV6E7 (294bp)和HPV6E6 (45!3bp)三个目的基因片段，扩增条件如下94°C 5分钟预变性， 循环体为94°C 30秒，58°C 30秒，72°C 1分钟，30个循环，然后72°C 10分钟。将L2W20、E7和E6基因PCR扩增片段进行凝胶回收；以回收后的E7和E6基因 PCR产物混合后为模板，E7的正向克隆引物(P3)和E6反向克隆引物(P6)进行重叠PCR扩增，扩增条件如下94°C 5分钟预变性，循环体为94°C 30秒，58°C 30秒，72°C 1分钟，30个循环，然后72°C 10分钟。扩增出含E7E6目的基因的片段，将E7E6基因重叠PCR扩增片段进行凝胶回收；再以回收后的L2W20基因PCR产物和E7E6基因重叠PCR产物混合后为模板，L2N120的正向克隆引物(Pl)和E6反向克隆引物(P6)进行二次重叠PCR扩增，扩增条件如下94°C 5分钟预变性，循环体为94°C 30秒，580C 30秒，72V 1分钟，30个循环，然后72°C 10分钟，扩增出含1107bp的L2m20E7E6目的基因片段。表1 PCR扩增融和L2m20E7E6目的基因的引物序列
权利要求
1.一种人乳头瘤病毒(HPV)6型L2m20E7E6融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列为SQE. ID. NO. 1所示的序列。
2.一种用于编码权利要求1所述融合蛋白的DNA序列，其特征在于，所述DNA序列的核苷酸序列为SQE. ID. NO. 2所示的序列。
3.一种用于表达权利要求1所述融合蛋白的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的DNA序列；优选地，所述表达载体为原核或真核表达载体；更优选地，所述表达载体为大肠杆菌质粒载体。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌质粒载体是由权利要求2所述的DNA序列插入至质粒PQE30的BamH I位点间来构建的；优选地，所述大肠杆菌选自JM109和M15。
5.一种用于生产权利要求1所述融合蛋白的菌株，其特征在于，所述菌株含有权利要求3或4所述的表达载体；优选地，所述菌株为大肠杆菌；更优选地，所述大肠杆菌选自JM109和M15。
6.一种制备权利要求1所述融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括构建含有权利要求2所述DNA序列的表达载体，并使该表达载体得到表达；优选地，所述表达载体为大肠杆菌质粒载体；更优选地，所述大肠杆菌选自JM109和M15。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤1)将权利要求2所述的DNA序列插入至质粒PQE30的BamHI位点，构建出重组表达质粒 pQE30-HPV6L2N120E7E6 ；2)用步骤1)所构建的重组表达质粒转化大肠杆菌，获得含有该重组表达质粒的菌株， 接种培养，IPTG诱导表达；3)将步骤2)所得到的大肠杆菌离心裂解后，收获包涵体，用8M尿素悬起，离心，取上清用镍离子亲和层析柱纯化表达蛋白。
8.一种制备用于预防和治疗人乳头瘤病毒(HPV) 6型感染及相关疾病(如生殖器疣) 药物的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求2所述的DNA序列、权利要求3或4所述的表达载体、权利要求5所述的菌株用于表达权利要求1所述的人乳头瘤病毒(HPV)6型 L2N120E7E6融合蛋白。
9.权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所述的DNA序列、权利要求3或4所述的表达载体、权利要求5所述的菌株在制备用于预防和治疗人乳头瘤病毒(HPV) 6型感染及相关疾病(如生殖器疣)药物中的应用；优选地，所述药物为疫苗。
10.一种用于预防和治疗生殖器疣的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求1所述的融合蛋白、权利要求2所述的DNA序列、权利要求3或4所述的表达载体、或权利要求5 所述的菌株。
全文摘要
本发明提供一种编码HPV 6型L2N120E7E6融合蛋白的基因、表达载体、方法、菌株和用途。本发明利用原核表达载体，将人乳头瘤病毒(HPV)6型L2N端120个氨基酸、E7蛋白、E6蛋白融合，并根据融合蛋白的氨基酸序列构建出其编码基因。本发明成功设计了HPV6型L2N120E7E6融合蛋白编码基因，并成功构建了高表达HPV6型L2N120E7E6融合蛋白的表达载体和转化菌株，该融合蛋白具有强的免疫源性，可诱发特异性T细胞免疫反应，能明显推迟小鼠成瘤时间，并有20％的小鼠肿瘤生长受到完全抑制。本发明可用于预防和治疗HPV6型感染及相关疾病，如生殖器疣。
文档编号C12N1/21GK102286104SQ20101021217
公开日2011年12月21日 申请日期2010年6月21日 优先权日2010年6月21日
发明者任皎, 冯靖, 庞正, 张忠献, 田厚文, 谭文杰, 赵莉, 阮力 申请人:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所