专利名称：化学法-酶法制备1-脱氧-d-木酮糖的方法
技术领域：
本发明属于萜类化合物生物合成领域，具体涉及一种以价廉、易得且稳定的原料 为底物，以化学法-酶法相结合的过程来制备萜类化合物生物合成的MEP途径中的潜在中 间体1-脱氧-D-木酮糖(DX)的方法。
背景技术：
萜类化合物在自然界分布广泛，种类繁多，存在于几乎所有的生命形式中。科学工 作者们已从动物、植物及微生物中分离鉴定了近四万个萜类化合物，这构成了最大的一个 天然产物家族，而且这个大家族中的许多化合物还显示出重要的生理活性。如长醇焦磷酸 酯(dolichol diphosphates)对细胞壁及糖蛋白生物合成的调节作用；醌类化合物(如质 体醌和辅酶Q)可作为电子转移及氧化还原反应的载体；类胡萝卜素及叶绿素的侧链参与 光合作用；类胡萝卜素、叶黄素和番茄红素已经被确认为一类抗肿瘤物质；一些参与细胞 周期调控的特定蛋白质通过与萜类化合物来源的亲脂性侧链共价修饰，从而穿透血浆细胞 膜，而参与这一蛋白质翻译后修饰的酶可以作为肿瘤治疗的潜在目标；再如甾体可帮助构 成细胞膜(如胆固醇)；雌激素参与细胞间信号传递过程并可控制个体的生长发育；甜椒醇 (capsidiol)等可作为抗菌素及植物抗毒素用于物种间相互防御；赤霉素、脱落酸可作为 植物激素；脂溶性的维生素A、D、E和K也是萜类大家族中的重要成员。在动物体内维生素 A作为光感受器，它的存在可促进视网膜的正常功能，缺乏则导致夜盲症；维生素D能促进 钙磷在肠内的吸收，维持血钙血磷的平衡，促进骨质的钙化等等，虽然挂一漏万，但已足以 说明它们在生命过程中的极端重要性。 同时，植物中所含的萜类化合物通常作为植保素，虽然它们不是植物生长发育所 必须的物质，但在调节植物与环境的关系上发挥重要的生态功能。许多萜类化合物还具有 很好的药理活性，是中药和天然植物药的主要有效成分，如目前广泛使用的抗心血管疾病 的银杏内酯及具有很强抗癌活性的化合物紫杉醇等。因此，对萜类化合物的各个方面，如它 们在生物体内的合成过程，生理功能，代谢过程及代谢产物的结构等，进行深入的研究仍有 极其重要的意义。 生物体内的萜类化合物主要是通过两条生物途径合成的，其中一条是甲羟戊酸 (Mevalonate，MVA)途径。长期以来，生物体内的萜类化合物被认为是由乙酰辅酶A经甲羟 戊酸而合成，并认为甲羟戊酸是萜类化合物生物合成的唯一前体，故该生物合成途径被称 为甲羟戊酸途径。该途径首先由三分子乙酰辅酶八縮合成3-羟基-3_甲基戊二酰辅酶A (3-hydroxy-3-methylglutatryl-CoA， HMG-CoA)，随后在供氢体NADPH存在下，HMG-CoA还 原酶(HMG-CoAreductase， HMGR)催化HMG-CoA不可逆地形成重要中间体甲羟戊酸。紧接 着在ATP和二价金属离子的参与下，甲羟戊酸激酶(mevalonate kinase, MK)将MVA磷酸 化形成MVAP，再在磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase, MPK)催化下，MVAP被 继续磷酸化形成MVAPP。最后，MVAPP在焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶(pyrophosphomevalonate decarboxylase,MDC)的作用下脱羧形成异戊烯基焦磷酸酯(IPP) 。 IPP在IPP异构酶的催化下转化成其异构3，3-二甲基烯丙基焦磷酸酯(DMAPP)， IPP和DMAPP进一步衍生形成倍半萜、三萜化合物。该途径广泛存在于动物(包括人类)、真菌、一些细菌及高等植物中。
另一条萜类化合物生物合成途径是近二十年发现并建立起来的非甲羟戊酸(non-mevalonate)途径，也称2_甲基_D_赤藻糖醇4-磷酸(MEP)途径，这是因为MEP是该途径中第一个关键中间体。MEP途径的基本路线为首先丙酮酸和D-甘油醛3-磷酸(D-GAP)在硫胺素焦磷酸ThPP存在下被DXP合成酶DXS催化生成重要中间体DXP。继而在NADra存在下，MEP合成酶DXR催化DXP发生分子内重排反应，转化为另一个重要中间体MEP。在接下来连续的三步酶反应中，中间体MEP分别在辅酶CTP、ATP及4- 二磷酸胞苷基-2-甲基-D-赤藻糖醇合成酶(ispD) 、4- 二磷酸胞苷基_2-甲基-D-赤藻糖醇-2-磷酸酯合成酶(ispE)、2-甲基-D-赤藻糖醇-2，4-环二磷酸酯合成酶(ispF)的作用下被转化为另一个重要环状中间体2-甲基-D-赤藻糖醇-2，4-环二磷酸酯(cMEPP)。该环状二磷酸酯在酶(幻-4-羟基-3-甲基-2-丁烯基二磷酸酯合成酶(ispG)的作用下发生开环反应，同时失去两个羟基而形成中间体(E)-4-羟基-3-甲基-2-丁烯基二磷酸酯(HDMAPP)。最后，在IPP/DMAPP合成酶(ispH)催化脱HDMAPP脱羟基同时生成IPP和DMAPP，进一步衍生形成单萜、二萜化合物。研究表明，MEP途径比经典的MVA途径更加广泛地存在于自然界中，如大多数细菌(包括人类的致病菌)、藻类、地衣及高等植物等。 DXP除了是萜类化合物生物合成的MEP途径中的重要中间体外，早期的研究还证明它是另外两条主要代谢途径的中间体即它还参与细菌中维生素B工及维生素Be的生物合成过程。在MEP途径中，DXP是1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸酯还原酶(DXR)的天然底物，而该酶是MEP途径中一个重要的限速酶，它催化DXP异构化为分支结构的MEP，它也是新型抗菌药物筛选的目标分子。l-脱氧-D-木酮糖(DX)是DXP的脱磷酸类似物，由于它在植物及微生物体内可被D-戊糖激酶(D-xylulokinsae)磷酸化形成DXP，进而被生物体有效利用，因此它被看作是MEP途径中的一个潜在中间体。因此大量合成成本低廉，纯度较高的DX，对于研究DXR酶的作用机理以及抗菌素的筛选等方面的研究具有重要的意义。
正是由于化合物DX在生物学上的重要性，这些年，尤其是近十年来，人们建立了很多化学方法来制备它，这其中包括以稳定同位素，如氖(D或211)及碳-13(130标记的化合物。 化学法合成DX的方法主要有两种以易得手性化合物为原料的策略及以非手性化合物为原料，先构建a ， P _不饱和醛或酮，再通过Sharpless不对称双羟基化(asymmetric dihydroxylation， Sharpless AD)或不对称环氧化(asymmetric印oxidation， Sharpless AE)引入手性中心的策略。通常，这些多步的制备反应(少则3步，多则十步)耗时较长且大部分总产率都较低，在5% 25%之间，仅其中少数可达到50%以上！因此都不适合用于此化合物的大量制备。 与传统的化学合成方法相对照，酶催化合成法有很多优点，如这类制备方法通常是"one-pot"过程， 一步反应即可立体选择性地实现目标分子的合成，省时省力且环境友好。Sasajima等人(Agric. Biol. Chem. ， 1986， 50， 2517-2524)报道了丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase)催化甘油醛与丙酮酸的反应形成DX的过程；Poulter等人(J. Bacteriol. ，2001， 183， 1-11)报道了重组的DXP合成酶DXS催化甘油醛与丙酮酸的反应形成DX的过程。但目前尚无以化学法_酶法相结合的方法或酶法来制备DX的报道。
综上所述，发展以稳定、廉价且易得的化合物为原料来制备DX的简单方法仍然具有重要的意义。酶法制备DX的关键是如何以稳定、廉价且易得的化合物为原料来制备1，3-二羟基丙酮l-磷酸(DHAP)。 Hecquet等人(TetrahedronLett. 2006， 47， 3261-3263)建立了以縮水甘油为原料，以无机磷酸盐为磷酸化试剂的化学法_酶法制备DHAP的简单方法。在此方法的基础上，本发明建立了简单易行的DX合成方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效、简单、低成本的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖(DX)的方法，解决了背景技术中制备DX的方法中反应原料昂贵且不稳定，反应步骤繁琐，耗时较长且总产率较低的技术问题。
本发明的技术解决方案是 化学法-酶法制备l-脱氧-D-木酮糖(DX)的方法，其特殊之处在于该方法包括以下步骤 (1)以縮水甘油为底物，以无机磷酸盐为磷酸化试剂，水为溶剂，用化学法合成D，L-甘油3-磷酸或L-甘油3-磷酸； (2)向步骤(1)的反应产物中加入过氧化氢酶(Catalase)和(L)-甘油磷酸氧化酶(L-glycerophosphate oxidase, GP0)，再加入丙酮酸钠、二价金属离子、辅羧酶(ThPP)、磷酸三糖异构化酶(TIM)、l-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(DXS)及酶保护剂；该反应体系的pH值为7. 0-8. O，该反应体系在25 4(TC下反应6-14h ;反应过程中，色谱法检测反应进行的程度； (3)向步骤2)的反应产物中加入磷酸酶，25 4(TC反应2_8小时； (4)将步骤(3)的反应产物减压蒸馏除去水分，残留物以少量有机溶剂提取，得到
含l-脱氧-D-木酮糖的有机溶剂提取液。所用有机溶剂为甲醇或95%乙醇。 (5)在含l-脱氧-D-木酮糖的有机溶剂提取液中加入硅胶，室温挥发除去溶剂，用
柱层析法纯化得到1-脱氧-D-木酮糖。 上述步骤(1)縮水甘油是D， L-縮水甘油或L-縮水甘油；无机磷酸盐是磷酸氢二钠；縮水甘油与无机磷酸盐的浓度比为1 : 1 1 : 5，反应体积为l-20mL，反应温度为50 IO(TC，反应时间为1-5小时。 上述步骤(2)加入过氧化氢酶100-200units ; (L)-甘油磷酸氧化酶l_20units ;丙酮酸钠30-60mg、二价金属离子2-10mM、辅羧酶l-5mM、磷酸三糖异构化酶10-30units、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶200-800 ii g ;酶保护剂l-5mM。
上述磷酸酶为酸性磷酸酶或碱性磷酸酶，用量为1-20单位。
上述步骤(5)柱层析法纯化的具体实现步骤是 (5. 1)用硅胶柱层析纯化DX，所用硅胶为100-300目层析硅胶，流动相为丙酮氯
仿=i : 3 5 : i(v/v)或氯仿甲醇水=8 : i : o. i 2 : i : o. i(v/v/v);硅胶薄层层析检测洗脱液，展开剂为丙酮氯仿=3 : 1(v/v)或氯仿、甲醇水=3 : i : o. i(v/
v/v)，显色剂为5%硫酸乙醇溶液，显色方法为喷洒显色剂后95-105t:加热10-20分钟；
(5. 2)合并含有DX的洗脱液，减压浓縮得到淡黄色粘稠油状物即为l-脱氧-D-木酮糖，置低温保存。
5
上述l-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶是微生物来源的、含有6XHistag标签的重 组酶；二价金属离子是Mg"、M^+或C^+，浓度为1 lOmM ;酶保护剂为P -巯基乙醇或二硫 苏糖醇，浓度为2 5mM。 上述所用色谱检测方法为纸色谱法，介质为普通层析滤纸，展开剂为1M乙酸 铵99%乙醇EDTA-Na2 = 70 : 30 : 1 (v/v/v)，显色剂为1-10%的硫酸乙二胺盐水溶 液；显色方法为喷洒显色剂后95-105 t:加热10-20分钟。
该方法的原理是 在一定温度的水相体系中，縮水甘油可被无机磷酸盐开环形成甘油3-磷酸(当原 料为D， L-縮水甘油时产物为D， L-甘油3-磷酸，当原料为L-縮水甘油时产物为L-甘油 3_磷酸)。然后所生成的L-甘油3-磷酸在catalase的存在下被L-GP0氧化形成DHAP。 紧接着，在丙酮酸、TIM酶及DXS的存在下DHAP就被转化为DXP，再以磷酸酶水解该化合物 即可得到目标分子DX。反应式如下 本发明的优点是 1、本发明把以稳定、廉价且易得的化合物为原料来制备DHAP的简单方法与酶法 制备DX的方法有机的偶联在一起，仅经过一步反应就得到目标分子DX，且由于在DX的生成 过程中体系要释放出C02，使得整个反应平衡向形成DX的方向移动，这就在很大程度上提高 了原料的转化率，保证了制备目标化合物的高产率。 2、本发明中DX的纯化步骤简单易行，且效率高，可以高纯度(95%以上)得到DX。
3、在本方法中采用(D， L)-縮水甘油或(L)-縮水甘油为原料，以磷酸氢二钠为磷 酸化试剂，这些商品化试剂价格低廉，性质稳定。
图1是目标分子DX的^-NMR光谱图。
具体实施例方式
下面举例说明本发明制备1-脱氧-D-木酮糖的方法。 取70-150mg Na2HP04于15ml离心管中，加入500-1000 ii 1超纯水使之溶解，再加 入O. 25-lmmol縮水甘油或(R)-縮水甘油，50-10(TC水浴反应2_5h ;待离心管冷却至室温 后，调pH至7. 0-8. 0，加入catalase 100-200units， L-GP02-6units，丙酮酸钠30_60mg， TIM 10-30units， ThPP l_5mM， 二价金属离子2-10mM， P -巯基乙醇l_5mM， DXS 200-800 ii g，反 应总体积为l-2ml，30-4(TC反应一定时间。反应过程中，色谱法检测反应进行的程度。反应 完成后，反应混合物中加入2-40单位磷酸酶(phosphatase)， 一定温度下孵育2_8小时；减压蒸馏除去水分，以少量有机溶剂提取其中产物。所得有机溶剂中加入硅胶，室温挥发除去 溶剂，柱层析法纯化DX。 MS及NMR鉴定所得化合物结构。图1为目标分子DX的力-NMR光 谱图。 实施例1 取148mg Na2HP04于15mL离心管中，加入800 yl超纯水使之溶解，再加入0. 5mmo1 縮水甘油或0. 25mmo1 (R)-縮水甘油，IO(TC水浴反应3h ;待离心管冷却至室温后，调pH至 7. 5，加入catalase 180units， L-GP0 3units，丙酮酸钠55mg， T頂25单位，ThPP 2mM， MgCl210mM， P-巯基乙醇5mM， DXS 500 y g，总反应体积为lmL，37。C反应12时间；反应过 程中，用纸色谱法检测反应进行的程度，介质为实验室常用定性滤纸，展开剂为1M乙酸 铵99%乙醇EDTA-Na2 = 70 : 30 : 1 (v/v/v)，显色剂为10%的硫酸乙二胺盐水溶液。 反应完成后，反应混合物中加入碱性磷酸酶20units，37t:孵育4h ;真空旋转蒸发除去反应 混合物中的水分，加入(500iUX2)甲醇提取可溶物，甲醇提取液中加入lg硅胶并拌匀，
室温挥发除去溶剂，硅胶柱层析法纯化DX。流动相为丙酮氯仿=1 : 2 5 : i(v/v) 或氯仿甲醇水=8 : i : o. i 2 : i : o. i(v/v/v)。硅胶薄层层析检测洗脱液，展 开剂为丙酮氯仿=3 : 1(v/v)或氯仿甲醇水=3 : i : o. 1(v/v/v)，5^硫酸乙醇
溶液为显色剂。合并含DX的洗脱液，真空旋转蒸发除去溶剂得到油状物质。MS及^-NMR 鉴定所得化合物结构，结果如下ESI-MS m/z :135[M+H] (100% ) ,H NMR(400MHz， CD3OD): S 4. 10-3. 49(mm，4H) ，2. 15， 1. 33及1. 25(3s，比例1 : 1 : 1，3H)。。 'H-NMR鉴定表明得到 产物DX的纯度95%以上，反应产率大于60%。
实施例2 取100mg Na2HP04于15mL离心管中，加入500 iU超纯水使之溶解，再加入 0. 25mmo1 (rac)-縮水甘油或0. 125mmo1 (R)-縮水甘油，5(TC水浴，反应2h ;反应结束后， 待离心管冷却至室温后，调pH至7. O，加入Catalase 100units， L-GP0 lunits，丙酮酸钠 30mg， T頂10units， ThPP lmM， MgCl22mM， P-巯基乙醇lmM， DXS 200 ii g，总反应体积为 600iiL，3(TC反应6小时；反应过程中，用纸色谱法检测反应进行的程度，介质为实验室常 用定性滤纸，展开剂为1M乙酸铵99%乙醇EDTA-Na2 = 70 : 30 : 1 (v/v/v)，显色剂为 10 %的硫酸乙二胺盐水溶液。反应完成后，反应混合物中加入碱性磷酸酶5皿its， 30°C孵育 2h;真空旋转蒸发除去反应混合物中的水分，加入(500iUX2)甲醇提取可溶物，甲醇提取 液中加入lg硅胶并拌匀，室温挥发除去溶剂，硅胶柱层析法纯化DX。流动相为丙酮氯仿
=i : 2 5 : i (v/v)或氯仿甲醇水=8 : i : o. i 2 : i : o. i (v/v/v)。硅胶薄层 层析检测洗脱液，展开剂为丙酮氯仿=3 : 1(v/v)或氯仿甲醇水=3 : i : o. i(v/ v/v)，5X硫酸乙醇溶液为显色剂。合并含dx的洗脱液，真空旋转蒸发除去溶剂得到油状 物质。MS及力-NMR鉴定所得化合物结构，结果如下ESI-MS m/z : 135 [M+H] (100 % ) ,H NMR(400MHz， CD3OD) : S 4. 17-3. 45(mm，4H) ，2. 10， 1. 36及1. 25(3s，比例l : 1 : 1，3H)。 力-NMR鉴定表明得到产物DX的纯度95%以上，反应产率大于25% 。
实施例3 取200mg Na2HP04于15mL离心管中，加入1000 yl超纯水使之溶解，再加入 lmmol (rac)-縮水甘油或0. 5mmo1 (R)-縮水甘油，IO(TC水浴，反应5h ;反应结束后，待离心 管冷却至室温后，调pH至8. 0，加入Catalase 200units， L-GP020units，丙酮酸钠60mg， TIM30units，ThPP 5mM，MgCl210mM， P-巯基乙醇5mM， DXS 800 ii g，总反应体积为1. 5mL， 40。C反
应14小时；反应过程中，用纸色谱法检测反应进行的程度，介质为实验室常用定性滤纸，展
开剂为1M乙酸铵99%乙醇EDTA-Na2 = 70 : 30 : 1 (v/v/v)，显色剂为10%的硫酸乙 二胺盐水溶液。反应完成后，反应混合物中加入碱性磷酸酶30units， 3(TC孵育4h ;真空旋 转蒸发除去反应混合物中的水分，加入(500iUX2)甲醇提取可溶物，甲醇提取液中加入
lg硅胶并拌匀，室温挥发除去溶剂，硅胶柱层析法纯化DX。流动相为丙酮氯仿=1 : 2 5 : 1(v/v)或氯仿甲醇水=8 : i : o. i 2 : i : o. i(v/v/v)。硅胶薄层层析检 测洗脱液，展开剂为丙酮氯仿=3 : 1(v/v)或氯仿甲醇水=3 : i : o. i(v/v/v)，
5X硫酸乙醇溶液为显色剂。合并含DX的洗脱液，真空旋转蒸发除去溶剂得到油状物质。MS 及^-NMR鉴定所得化合物结构，结果如下ESI-MS m/z :135[M+H] (100%) NMR(400MHz， CD3OD) : S4. 16-3.41(mm，4H)，2. 15，1.34及1.29(3s，比例1 : 1 : 1，3H)。力-NMR鉴定表 明得到产物DX的纯度95%以上，反应产率大于43% 。 上述实施例中实施例1为优选方案，力-NMR鉴定表明得到产物DX的纯度95%以 上，反应产率大于60%。
权利要求
化学法-酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)以缩水甘油为底物，以无机磷酸盐为磷酸化试剂，水为溶剂，用化学法合成D，L-甘油3-磷酸或L-甘油3-磷酸；(2)向步骤(1)的反应产物中加入过氧化氢酶和(L)-甘油磷酸氧化酶，再加入丙酮酸钠、二价金属离子、辅羧酶、磷酸三糖异构化酶、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶及酶保护剂；该反应体系的pH值为7.0-8.0，该反应体系在25～40℃下反应6-14h；反应过程中，色谱法检测反应进行的程度；(3)向步骤2)的反应产物中加入磷酸酶，25～40℃反应2-8小时；(4)将步骤(3)的反应产物减压蒸馏除去水分，残留物以少量有机溶剂提取，得到含1-脱氧-D-木酮糖的有机溶剂提取液；(5)在含1-脱氧-D-木酮糖的有机溶剂提取液中加入硅胶，室温挥发除去溶剂，用柱层析法纯化得到1-脱氧-D-木酮糖。
2. 根据权利要求1所述的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于步骤(1)縮水甘油是D， L-縮水甘油或L-縮水甘油；无机磷酸盐是磷酸氢二钠；縮水甘油与无机磷酸盐的浓度比为1 : 1 1 : 5，反应体积为l-20mL，反应温度为50 IO(TC，反应时间为1-5小时。
3. 根据权利要求1所述的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于步骤(2)加入过氧化氢酶100-200units ;(L)-甘油磷酸氧化酶l-20units ;丙酮酸钠30-60mg、二价金属离子2-10mM、辅羧酶l_5mM、磷酸三糖异构化酶10-30units、 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶200-800 ii g ;酶保护剂l-5mM。
4. 根据权利要求1所述的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于所述磷酸酶为酸性磷酸酶或碱性磷酸酶，用量为1-20单位。
5. 根据权利要求1所述的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于步骤(5)柱层析法纯化的具体实现步骤是(5. i)用硅胶柱层析纯化DX，所用硅胶为100-300目层析硅胶，流动相为丙酮氯仿=i : 3 5 : i (v/v)或氯仿甲醇水=8 : i : o. i 2 : i : o. i (v/v/v);硅胶薄层层析检测洗脱液，展开剂为丙酮氯仿=3 : 1(v/v)或氯仿、甲醇水=3 : i : o. i(v/v/v)，显色剂为5%硫酸乙醇溶液，显色方法为喷洒显色剂后95-105t:加热10-20分钟；(5. 2)合并含有DX的洗脱液，减压浓縮得到淡黄色粘稠油状物即为l-脱氧-D-木酮糖，置低温保存。
6. 根据权利要求1或3所述的化学法-酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于l-脱氧-D-木酮糖_5-磷酸合酶是微生物来源的、含有6乂附"恥标签的重组酶；二价金属离子是Mg2+、 Mn2+或Co2+ ;酶保护剂为13 -巯基乙醇或二硫苏糖醇。
7. 根据权利要求1所述的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于所用色谱检测方法为纸色谱法，介质为普通层析滤纸，展开剂为1M乙酸铵99%乙醇EDTA-Na2 = 70 : 30 : 1 (v/v/v)，显色剂为1-10%的硫酸乙二胺盐水溶液；显色方法为喷洒显色剂后95-105 。C加热10-20分钟。
8. 根据权利要求1所述的化学法_酶法制备1-脱氧-D-木酮糖的方法，其特征在于所述有机溶剂为甲醇或95 %乙醇。
全文摘要
本发明涉及一种以化学法-酶法相结合来制备1-脱氧-D-木酮糖的方法。具体是在一定温度的水相体系中，缩水甘油可被无机磷酸盐开环形成甘油3-磷酸，然后所生成的L-甘油3-磷酸在catalase的存在下被L-GPO氧化形成DHAP，再在丙酮酸、TIM酶及DXS的存在下DHAP就被转化为DXP，再以磷酸酶水解该化合物即可得到目标分子DX。该方法把以稳定、廉价且易得的化合物为原料来制备DHAP的简单方法与酶法制备DX的方法有机的偶联在一起，仅经过一步反应就得到目标分子DX，产率高；纯化步骤简单易行，可以高纯度(95％以上)得到DX；所用原料价格低廉，性质稳定，解决了背景技术中制备DX的方法中反应原料昂贵且不稳定，反应步骤繁琐，耗时较长且总产率较低的技术问题。
文档编号C12P19/00GK101748170SQ20101010021
公开日2010年6月23日 申请日期2010年1月22日 优先权日2010年1月22日
发明者廖娟, 李恒, 杨少青, 王辉, 王雪娇, 田洁, 高文运 申请人:西北大学