专利名称：用作味道调节剂的环脂肽的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及属于环脂肽组的分子作为味道调节剂的用途，优选用于含有至少一种 甜味剂的可食组合物。在优选的实施方案中，将枯草菌表面活素(SUrfactin)用于本发明 的目的。此外，本发明涉及调节所述可食组合物的味道和/或回味的方法以及这些含有至 少一种环脂肽作为味道调节剂的组合物。
背景技术：
由于其两性特性，枯草菌表面活素是作为生物表面活性剂的微生物来源的环脂 肽。对于化学分类，它们可以被命名为环脂缩酚酸肽，这是缩酚酸肽的特别形式。常常 通过真菌(例如，Metarhizium sp.或Cladobotryum sp.)和细菌(例如，丁香假单胞 菌(Pseudomonas syringae) (US 5，830，855)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) (EP 0761682 Bl))以环状形式(环缩酚酸肽)来合成缩酚酸肽，并且其呈现出抗生素和致植物 病的特性。在缩酚酸肽中，通过肽-以及酯-键合来连接氨基酸和羟基酸。因此，缩酚酸肽 属于heterodet肽，其特征在于该分子的凝聚中涉及肽键以及非肽键。EP 0761682B1描述 了从枯草芽孢杆菌制备环缩酚酸肽，并且其具有用于高脂血症的治疗用途。枯草菌表面活 素和其他环脂肽是可购得的。枯草菌表面活素由七个氨基酸的肽环和疏水性脂肪酸链组成，这使得该分子能 透过细胞膜。其具有特征性的“马鞍”构象，其脂质尾使得可以透过膜。迄今为止已经知 道了多种变体分子分别为枯草菌表面活素Ap A2, A3、B1, B2, C1, C2和D。变体形式在脂质 尾的长度和分支因子上有所不同，而环肽保持基本不变，包括L-谷氨酸、L-亮氨酸、D-亮 氨酸、L-缬氨酸、L-天冬酰胺、D-亮氨酸和L-亮氨酸(枯草菌表面活素A)。仅仅对于后 一个氨基酸位置(L-Ieu)，描述了一些变化L-val (枯草菌表面活素B)或L-Ile (枯草菌 表舌素 C) (Stein, Τ.，Bacillus subtilis antibiotics !structures, syntheses and specific functions (枯草芽孢杆菌抗生素结构、合成和特定功能)，Mol. Microbiol. (2005),56(4) :845-857)。枯草芽孢杆菌产生枯草菌表面活素A、B和C，枯草菌表面活素 C是得到最彻底研究的变体。已知枯草菌表面活素具有对抗细菌、真菌和病毒的抗微生物 活性，并且还呈现出抗肿瘤和抗血栓形成(溶血纤维蛋白和抗凝血)活性。对于枯草菌表 面活素潜在治疗应用的概述，参见Seydlov(5，G.和Svobodovci，J.，Review of surfactin chemical properties and the potential biomedical applications ( tt1 M7 素化学特性和潜在生化应用的概述)，Cent Eur. J. Med. (2008),3(2) : 123-133。其抗炎 特性是由于其对LPS-诱发的信号传导的抑制作用引起的(Takahashi等，hhibition of lipopolysaccharide activity by a bacterial cyclic lipopeptide surfactin( 细 菌环脂肽枯草菌表面活素抑制脂多糖活性)，J. Antibiot. (2006),59(1) :35-43)。由于其 稳定性，将枯草菌表面活素钠用于化妆品工业中Woneda等，Surfactin sodium salt :an excellent biosurfactant for cosmetics (枯草菌表面活素钠盐极好的用于化妆品的生 物表面活性剂)，Cosmet. ki. (2001) ,52(2) :153-4)。根据例如US 7，011，969或US 5，227，294中所述的方法，可以从枯草芽孢杆菌获得枯草菌表面活素。对于枯草菌表面活素C，由于其溶血作用引起的枯草菌表面活素的毒性得到了 最彻底的研究。仅仅在40至60 μ M的高浓度下才看到了溶血活性(Dehghan-Noudeh， G.等，Isolation, characterization and investigation of surface and haemolytic antivities of a lipopeptide biosurfactant produced by Bacillus subtilis ATCC6633(由枯草芽孢杆菌ATCC 6633产生的脂肽生物表面活性剂的分离、表征以及表面 和溶血活性的研究)，J. Microbiol. (2005)，43 :272-276)。只在每天 i. v.超过 100mg/kg 的高浓度的小鼠中才观察到毒性(LD5tl)。口服摄入至多IOmg的枯草菌表面活素没有显示出 7SrfSJ"^3111 '(Hwang^,Lipopolysaccharide-binding and neutralizing activities of surfactin C in experimental models of septic shock(枯草菌表面活素在胺毒性休 克的实验模型中的脂多糖结合和中和活性)，Eur. J. Pharmacol. (2007),556 :166-171)。枯草菌表面活素作为可食组合物中的成分，尤其是作为调味剂或味道调节剂的用 途迄今为止还没有描述或提出过。在鉴定有用的天然调味剂衍生物(如，例如，是天然糖类甜味剂衍生物的甜味剂， 如，例如，赤藓糖醇、异麦芽糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇)方面，最近已有重 大进展。在鉴定作为潜在甜味剂的天然萜类、类黄酮或蛋白质方面，最近也有进展。参见， 例如，Kinghorn等的题为“非致癌天然强甜味剂”的论文(Med. Res Rev (1998), 18 (5) 347-360)，讨论了最近公开的天然材料比通常的天然甜味剂(如蔗糖、果糖、葡萄糖等)更 甜。相似地，在鉴定和商业化新人造甜味剂(如阿斯巴甜、糖精、安赛蜜-K、环氨酸盐、三 氯蔗糖和阿力甜等)方面，最近也有进展；对于综述，参见Ager等的论文，Commerical, Synthetic Nonnutritive Sweeteners (|§ ^lkSf 1 ) (Angew. Chem. Int. IS 辑，(1998) ,37(12) :1802-1817)。近些年来，在普通生物技术和更好地理解味道感知的基础生物和生化现象方 面已经获得了实质性的进展。例如，最近已经在哺乳动物中鉴定出参与味道感知的味 觉感受器蛋白。特别地，已经鉴定出被认为参与味道感知的两个不同家族的G蛋白偶 联感受器，T2R 和 T1R(参见，例如，Nelson 等，Cell (2001), 106 (3) :381-390 ；Adler 等， Cell (2000)，100(6) :693-702 ；Chandrashekar 等，Cell (2000)，100 :703-711 ；Matsunami 等，Nature (2000), 404 :552-553 ；Li 等，Proc Natl Acad Sci USA (2002) ,99 :4962-4966 ； Montmayeur 等，Nature Neuroscience (2001), 4 (S) :492-498 ；美国专利 6，462，148 ；和 PCT 公开 WO 02/06254，WO 00/63166, WO 02/064631 和 WO 03/001876，以及美国专利公开 US 2003-0232407 Al)。尽管T2R家族包括超过25个参与苦味感知的基因，但负责甜味感知的TlR家族 只包括三个成员，TlRl、T1R2 和 T1R3(参见 Li 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2002), 99, 4962-4966)。最近，在WO 02/064631和WO 03/001876中公开了特定的TlR成员，在合适的 哺乳动物细胞系中共同表达时，装配形成功能性味觉感受器。发现了 T1R2和T1R3在合适 的宿主细胞中的共同表达形成了功能性T1R2/T1R3 “甜”味感受器，其应答不同的味道刺激 物，包括天然产生和人造的甜味剂(参见，Li等，上文中所引用的)。提议将甜味剂感受器 T1R2和T1R3作为同型或异型寡聚物在人肠内分泌细胞中的表达作为用于味道感知调节剂 鉴定的模型测试系统(W0 08/014450 A2)。
食品、饮料、令人愉快的产品、甜食、宠物食品、药品或化妆品通常具有高含量的甜 味剂，就甜味剂相关疾病的发展而言，通常认为这是不利的。在此尤其是如肥胖症、糖尿病、 心血管疾病等这些疾病主要是由于高热量甜味剂引起的。存在很好的证据证明高热量甜味 剂(例如，单糖、双糖和寡糖，尤其是蔗糖)与较高水平的血浆三酰甘油相关，这是公认的心 血管疾病的风险因素。同样，提高的糖摄入与促进糖尿病、肥胖症或其他疾病的身体状况相 关。在食品和饮料工业中，现有技术是用果糖替代那些引起麻烦的糖，如葡萄糖、蔗糖、海藻 糖等。在2005年，全球甜味剂市场正处于每年170百万吨糖当量(为比较不同甜味剂量 的测量单位，考虑了它们的不同的甜味效能)的规模。该市场包括热量甜味剂、高强度甜味 剂和多元醇。最重要的热量甜味剂是精制糖或蔗糖；其他热量甜味剂是高果糖玉米糖浆、葡 萄糖和右旋糖。高强度甜味剂是提供与糖相同的甜度但物质较少并因此热量较低的产品。 它们提供35至10，000倍糖的甜度。也将它们称为低热量或节食甜味剂，或，如果它们不包 括任何热量，也称为非热量甜味剂。除了安赛蜜-κ以外，其他重要的高强度甜味剂是糖精、 阿斯巴甜、环氨酸盐、甜菊苷和三氯蔗糖。最后，多元醇是糖醇，其提供糖的主要部分和结 构，但可以标记为具有低于糖的热量。例如，通常公认高果糖玉米糖浆(HFCQ作为甜味剂在焙烤制品(HFCS 90)、软饮 料(HFCS 55)、运动饮料(HFCS 42)或在面包、谷类食品、调味品等中的使用。HFCS指的是 一组通过酶加工以提高它们的果糖含量并随后与纯玉米糖浆(100%葡萄糖)混合来达到 其最终形式的玉米糖浆。最常见类型的HFCS是HFCS 90(大约90%果糖和10%葡萄糖)； HFCS 55 (大约55%果糖和45%葡萄糖)；和HFCS 42 (大约42%果糖和58%葡萄糖)。然而，从最近的研究可以得出的结论是对血糖、胰岛素、瘦素和饥饿素的作用，果 糖与蔗糖相比较，没有呈现出差异。总之，对于以下的假设，几乎不存在证据其对食欲或参 与脂肪贮存的代谢过程的作用，HFCS不同于蔗糖。减少例如包装食品中的热量甜味剂的另一种策略是使用无-或低-热量人造甜味 剂，如安赛蜜-K、糖精、环氨酸盐、阿斯巴甜、索马甜或新橙皮苷DC、三氯蔗糖、纽甜或甜菊 糖苷。在此两个方面有着主要影响。首先，这些化合物与糖类相比，具有截然不同的余味， 其次，长期讨论这些甜味剂是否致癌。因此，理想的，并且本发明的目的是寻找具有如下特性的化合物能调节甜味，或 通过自身的甜味或基于其自身具有增强一种或多种本领域已知甜味剂的属性调节弱甜味 剂或最可能是自身不具有甜味属性但具有能增强可食组合物中所用的一种或多种本领域 已知甜味剂能力的增强剂来增强由本领域已知甜味剂产生的甜味。在本领域中，对于显示出味道调节活性的化合物，已经制订了几个提案。WO 2006/138512公开了二 -芳族酰胺及其作为甜味调节剂、促味剂和味道增强剂的用途。US 7，175，872涉及用作味道调节剂的吡啶盐-甜菜碱化合物。WO 2007/014879提出了用于增 强甜味的橙皮素。不过，本领域中仍然需要新的和改良的味道调节剂，作为调味剂，尤其是需要对于 以上列出的原因没有或只有非常低的甜味剂潜能的化合物。本发明打算通过提供具有味道 调节特性的化合物来解决这些问题。发明概述
本发明涉及枯草菌表面活素和相关的环脂肽，优选来自微生物来源，令人惊讶地 发现其具有味道调节特性。本发明的一个方面是一种或多种上述脂肽的用途，优选枯草菌 表面活素C或不同枯草菌表面活素的混合物的用途，作为含有一种或多种天然或人造甜味 剂的可食组合物中的味道调节剂，甜味剂实例如上所述。本发明的另一个方面是调节上述 可食组合物的味道(包括余味)的方法，其包括将该组合物与味道调节量的一种或多种上 述脂肽混合，脂肽优选枯草菌表面活素C或枯草菌表面活素的混合物。本发明的再另一个 方面涉及含有一种或多种天然和/或人造甜味剂和一种或多种所述脂肽的可食组合物，脂 肽优选枯草菌表面活素C或枯草菌表面活素的混合物。在本说明书中，引用了许多文献，在此将这些参考文献(包括其中的科学论文、专 利和专利申请)的全部公开内容引入作为参考，出于至少部分地描述本领域普通技术人员 的知识的目的和出于公开例如化合物、结构(如T2R和TlR哺乳动物味觉感受器蛋白)和 一些方法的目的，这些方法例如是在细胞系中表达这些感受器的方法和使用所得到的细胞 系就味道调节活性来筛选化合物的方法。发明详述就本发明的目的而言，以下术语应当具有以下所述的意思“可食组合物”以其最广义来理解，包括但不限于食品、饮料、软饮料、令人愉快的 产品、甜食、甜味剂、化妆品(如，例如，漱口水)、动物食品(如，宠物食品)和药物或药品。“味道调节剂”或“味道调节”指的是调节含有一种或多种天然和/或人造甜味剂 的可食组合物的味道(包括余味)的化合物/活性。味道调节剂可以在动物或人体内调节、 增强、促进、形成或诱发味道印象，并且优选增强的甜味感。“天然”和“人造甜味剂”是对于可食组合物本领域已知和/或使用的那些甜味剂； 在之前的段落中已经给出其实例。“味道调节量”指的是能够调节含有甜味剂的可食组合物味道的一种或多种化合 物的量。调节或提高可食组合物味道需要的味道调节剂的浓度当然取决于许多变量，包括 特定类型的可食组合物及其各种其他成分，尤其是其他天然和/或人造甜味剂的存在及其 浓度，品尝组合物的人天然的遗传变异性和个人偏好和健康状况，特定化合物对这种甜味 化合物味道的主观作用。因此，不可能明确说明确切的“有效量”。然而，可以通过本领域普通技术人员只使 用常规实验来确定合适的有效量(参见，例如，US 7，175，872的实施例9和WO 2006/138512 A2的实施例53)。可以用于本发明中的环脂肽是式⑴的那些
权利要求
1.一种或多种根据式(I)的环脂肽作为甜味增强剂的用途，
2.如权利要求1中所要求的用途，其中在式(I)中，氨基酸是D-和L-氨基酸，特别地， 在序列LLDLLDL中(从位置1至7)。
3.如权利要求1或2中所要求的用途，其中使用至少一种另外的环脂肽，其不同于根据 式(1)的脂肽。
4.如权利要求1至3的一项或多项权利要求中所要求的用途，其中在式(I)中，位置7 的氨基酸由Val或Ile替换。
5.如权利要求1至4的一项或多项权利要求中所要求的用途，其中在式(I)中，位置 2、3、4、6和7的一个或多个氨基酸由来自包括Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Phe、Trp和Pro 的组的疏水性氨基酸替换和/或位置1和5的一个或多个氨基酸由来自包括Asp和Glu的 组的带负电氨基酸替换。
6.如权利要求1至5的一项或多项权利要求中所要求的用途，用于可食组合物中。
7.如权利要求6中所要求的用途，其中可食组合物含有至少一种天然或人造甜味剂。
8.如权利要求6或7中所要求的用途，其中以0.Olmg至IOg环脂肽/kg可食组合物的 量来使用一种或多种环脂肽。
9.如权利要求6至8的一项或多项权利要求中所要求的用途，其中可食组合物进一步 包含单糖、双糖或寡糖作为甜味剂。
10.如权利要求6至9的一项或多项权利要求中所要求的用途，其中可食组合物含有高 果糖玉米糖浆(HFCS)作为甜味剂。
11.如权利要求6至10的一项或多项权利要求中所要求的用途，其中可食组合物选自 冰淇淋、饮料、酸奶、甜点、涂抹酱和药物组合物，优选碳酸化醇和非醇饮料。
12.调节味道的方法，包括将权利要求1中所要求的环脂肽加入到可食组合物中的步马聚ο
13.降低热量甜味剂浓度的方法，包括将权利要求1中所要求的环脂肽加入到可食组 合物中的步骤。
14.包含权利要求1中所要求的环脂肽的可食组合物。
全文摘要
本发明涉及一种或多种环脂肽(如枯草菌表面活素A、B1和C及其衍生物和混合物)作为味道调节剂和/或甜味增强剂用于含有至少一种天然或人造甜味剂的可食组合物的用途。可食组合物包括食品、饮料、药品和化妆品，并且优选含有单糖、双糖或寡糖作为甜味剂。本发明进一步涉及所述含有环脂肽作为味道调节剂的可食组合物。
文档编号A23L1/236GK102105070SQ200980129424
公开日2011年6月22日 申请日期2009年6月23日 优先权日2008年6月24日
发明者H·津克, M·克罗恩 申请人:鹿特诺瓦营养品和食品有限公司