专利名称：：一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质的利记博彩app
技术领域：
：本发明公开了--种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质，属于基因工程领域，具体地涉及植物中油脂合成的关键酶及其编码基因。
背景技术：
：油料作物种子含油量的提高对于提高其产油量具有至关重要的作用，对于提高油料作物的经济效益具有重要的意义。分离和克隆油脂合成积累的关键基因，通过生物工程的方法提高油料作物的含油量成为科学家追求的目标。植物油脂合成经过脂肪酸合成和脂肪酸组装2个主要阶段。油脂(TAG)组装过程是通过Kennedy途径完成的，参与该途径主要包括4个酶,其中二脂酰甘油酰基转移酶是催化三脂酰甘油生物合成最后一步，该步骤的酶具有限速作用。二脂酰甘油酰基转移酶活性高，则脂肪酸能够迅速与甘油结合,形成贮藏脂，从而提高油脂积累速率,进一步提高含油量。目前，已经从拟南芥、油菜(Gen:Bankaccessio翻.AF251794)、烟草(PierretteBouvier-Navelet.al.2000)、大豆(GenBankaccessionno.AAS78662)、水稻(GenBankaccessionno.BAD53762)等物种中分离出来了二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)。我们首次报道了双子叶植物播娘蒿的二酰甘油酰基转移酶基因。
发明内容技术问题本发明的目的在于公开一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质,该基因来自播娘蒿，可作为目的基因导入植物，提高植物种子含油量和产量，进行植物品种改良。技术方案本发明二酰甘油酰基转移酶基因(DsDGAT),其核苷酸序列SEQIDNO.1为ATTGATGTTGTAGTGGTC。上述的二酰甘油酰基转移酶基因(DsDGAT)基因来自播娘蒿，其编码的蛋白质，来自播娘蒿(Descurainiasophia)，它具有如下所示的氨基酸序列SEQIDNO.2:MAILDSGDVTLTTTTENVAGEFMDLDRLRRRKSRSDSNGLLSDSSSGIDNSPSDDVGAPTDVRRDRIDSVVNEGTANLAGDNVGAAEIRENDGGRDGGGERRVNTEATFTYRPSVPAHRRVRESPLSSMIFKQSHAGLFNLCVVVLVAVNSRLIIENLMKYGWEVLYPVYVTLRCDSAFLSGVTLMLLTCIVWLKLVSYAHTSYDIRSLANSADKANPFGDREFYKDWWNAKSVGI)YW:RMW雨:PVHKWMV:R:HIYFPCL:RSKI:PKTAA]:11:AFLVSAVFHELCIAVPCRLFKLWAFMG頂FQVPLVFITNYLQERFGSMVG雨IFWFIFCIFGQPMCTLLYYHDLMNRKGSMS。有益效果1、本发明公开了一种二酰甘油酰基转移酶基因(DsDGAT基因)及其所编码的蛋白质。二酰甘油酰基转移酶基因是双子叶植物播娘蒿中的首次报道，可应用于双子叶植物的遗传改良。该基因来自播娘蒿(Descurainiasophia)，可作为目的基因导入植物，提高植物种子含油量和产量，以进行植物品种改良。所编码的蛋白质具有二酰甘油酰基转移酶功能。2、本发明人提供的DsDGAT基因功能是参与Ke皿edy途径的脂肪酸组装。mRNA表达分析表明DsDGAT基因属于组成型表达，但是在播娘蒿角果上的表达量大。3、本发明的DsDGAT基因来自播娘蒿，具有适合于播娘蒿等双子叶植物表达的优化密码子，其基因工程受体植物除了单子叶植物，如小麦、玉米、水稻等之外更加适合于拟南芥、油菜、烟草、棉花等双子叶植物。4、利用本发明DsDGAT基因作为目的基因构建植物表达载体，以种子特异性启动子，遗传转化油菜等双子叶植物,使种子变大，含油量显著提高。转化可经农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。具体实施例方式实施例1根据GenBank中拟南芥和其它物种DGAT序列设计了播娘蒿中DsDGAT弓|物I)GAT:P1和DGATP2。以播娘蒿角果总RNA为起始材料，经反转录得到的cDNA作为PCR扩增的模板，运用引物组合DGATP1和DGATP2，进行PCR扩增，得到一条明亮的条带，测序。利用RACE试剂盒的反转录体系，将播娘蒿角果总RNA反转录为cDNA作为模板，运用基因特异性引物GST和锚定引物，进行PCR扩增，DsDGAT的特异性引物为5'DGATGST和3'DGATGST,分别得到--条明亮的条带。测序后序列比对显示，它们都含有引物设计时保守区域重复的一段序列，Blast搜索显示这些序列都很可能是这些基因所缺少的那一部分。根据....匕面的信息在DsDGAT非编码区设计了它的全长引物DsDGAT.1和DsDGAT.2，上述所用引物如下DGATP1:5'-AGTTGGTTTCTTACGCTCATA-3'DGATP2:5'-CAATAATCTCCCACGCTTT-3'5'DGATGST:5'-ATTGACGAGCCACCCAACCCTTC-3'3'DGATGST:5'-CTGCATGTTCTACTGCTTCTTCCAC-3'DsDGAT.1:5'-GATTCTGATTCTCTTTTCGGC-3'DsDGAT.2:5'-TATCAGGACCACTACAACATC-3'并以全长引物DsDGAT.1、DsDGAT.2进行PCR扩增得到特异性条带，获得播娘蒿二酰甘油酰基转移酶基因的全长序列。以总RNA为模板,经反转录合成cDNA第一条链后，用高保真Taq酶(购自大连宝生物工程有限公司)进行:PCR扩增。PCR程序如下94。C预变性3min，94。C变性60s,55。C复性90s，72。C延伸2min，32个循环后，72。C再延伸10min，最后(C保存。PCR回收产物连接到pMD19-T克隆载体....匕(购自大连宝生物工程有限公司)，转化到大肠杆菌T0P10(北京天为时代生物工程有限公司)，以来自目的片段上的引物序列为引物，进行:PCR扩增，鉴定阳性克隆；序列的测定委托上海]:rwitrogen生物技术有限公司完成。(见SEQIDNO.1)。BLAST的结果及分子建模结果证明从播娘蒿中新得到的基因确为一个编码二酰甘油酰基转移酶基因(DiacylglycerolAcyltransferase,DGAT,EC2.3.1.20)，该基因编码产物为油脂合成关键酶，具有催化合成三酰甘油(TAG,triacylglycerol)的功能。实施例2上述获得播娘蒿二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT的cDNA序列SEQIDNO.1，其编码的蛋白质，来自播娘蒿(Descurainiasophia)，它的氨基酸序列为SEQIDNO.2，DsDGATcDNA全长1792bp，0RF1575bp编码524个氨基酸，根据软件预测它编码蛋白的分子量为60.03KD，等电点PI为8.78。根据氨基酸序列比对的结果显示，DsDGAT与其他作物中DGAT的一致性为80%-43%,其中它和拟南芥的相似性最高为80%，与油菜、芥菜、白菜、埃色俄比亚芥和甘蓝的相似性都在70%及以上。进一步序列分析显示DsDGAT氨基酸序列N端存在带有正电荷的氨基酸(RRRR)/(RRRK)，序列中有一个高保守的丝氨酸残基，它被认为参与植物碳代谢的整个调控过程。和在油菜中DGAT一样，DsDGAT基因中存在5个亮氨酸，它们都是有规律的被6个可变的氨基酸隔开，形成一典型的亮氨酸链。这个序列拥有一个典型的组氨酸残基中心，在C端拥有高保守的自由脂肪酸结合位点(FGDREFYRPDWWNA)，这个酶展示了一个完整膜蛋白的特性。根据生物信息学软件分析，预测到9个跨膜区，在N端预测到一个细胞质内膜信号。DsDGAT也像其它物种中DGAT一样没有发现内质网信号肽。这些区域将促进DGAT和那些可能的亚单位相互结合，起到调节蛋白的结合位点或在TAG生物合成途径中促进DGAT和其它酶相互作用。实施例3用DsDGAT转基因引物P1、P2进行半定量RT-PCR分析播娘蒿根、茎、叶、花蕾、花和角果的表达，结果表明，播娘蒿DsDGAT在伤害和冷胁迫下是上调的。基因引物如下PI:5'-GCGGATCCTTCTGATTCTCTTTTCGGC-3'P2:5'-GCCCGGGTTCAGGACCACTACAACATC-3'实施例4利用全长引物进行PCR扩增，将PCR所得产物用BamHI和Smal进行双酶切，回收酶切产物并将其插入植物转化载体PBI121,构建重组转基因载体PBI121-DsDGAT,将转基因载体PBI121-DsDGAT转化大肠杆菌JM109,提PCR阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。双酶切载体PBim-DsDGAT，酶切后分别得到了预期大小目的片段，对克隆到载体PBI121的DsDGAT进行测序,测序结果与基因的序列进行比对分析,发现DM序列完全相同。将验证正确的转基因载体PBI121-DsDGAT转化农杆菌LBA44(M，对转化后的抗性单菌落进行PCR检测挑选阳性单克隆测序,将测序结果与DsDGAT基因序列比对，序列比对结果表明序列完全相同，表明转基因载体已经转入农杆菌LBA4404。采用根癌农杆菌介导法，将播娘蒿二酰甘油酰基转移酶基因转化甘蓝型油菜NJ6292。对获得的转基因植株进行PCR，RT-PCR及Southern杂交验证。对转基因后代种子的脂肪酸含量进行测定，DsDGAT转基因油菜种子含油量从40.6%提高到49.0%，平均提高了8.4%;千粒重从4.Og提高到5.lg，平均提高了27.5%;说明转基因DsDGAT种子在含油量、粒重有很大的提高，DsDGAT基因的导入提高了含油量，同时也提高了油菜的产量。上述实施例1、2表明本发明中来源于播娘蒿的二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT。实施例3、4表明该基因有提高种子含油量的功能。此类基因由于来源于双子叶植物，具有双子叶植物优化的密码子，与单子叶植物来源的二酰甘油酰基转移酶基因相比，更加适合于拟南芥、油菜、烟草、棉花等双子叶作物的抗逆性遗传改良。本发明人从双子叶植物播娘蒿(Descurainiasophia)中克隆了一个cDNA，编码二酰甘油酰基转移酶基因，命名为DsDGAT。经在数据库中比较发现，DsDGAT与其他作物中DGAT的一致性为80X-43%，其中它和拟南芥的相似性最高为80%,与油菜、芥菜、白菜、埃塞俄比亚芥和甘蓝的相似性都在70%及以上。DsDGATcDNA全长1792bp，0RF1575bp编码524个氨基酸，根据软件预测它编码蛋白的分子量为60.03KD，等电点PI为8.78。进一步序列分析显示DsDGAT氨基酸序列N端存在带有正电荷的氨基酸(RRRR)/(RRRK),序列中有一个高保守的丝氨酸残基，它被认为参与植物碳代谢的整个调控过程。和在油菜中DGAT—样，DsDGAT基因中存在5个亮氨酸，它们都是有规律的被6个可变的氨基酸隔开，形成一典型的亮氨酸链。这个序列拥有一个典型的组氨酸残基中心，在C端拥有高保守的自由脂肪酸结合位点(FGDREFYRPDWWNA),这个酶展示了一个完整膜蛋白的特性。根据生物信息学软件分析，预测到9个跨膜区，在N端预测到一个细胞质内膜信号。DsDGAT也像其它物种中DGAT—样没有发现内质网信号肽。mRNA表达分析表明播娘蒿DsDGAT在伤害和冷胁迫下呈现上调表达。转基因研究表明，将DsDGAT基因转入甘蓝型油菜,发现转基因DsDGAT种子在含油量、粒重上有很大提高，说明DsDGAT基因的导入提高了含油量，同时也提高了油菜的产量。综上所述，本发明人提供的DsDGAT基因是首次在双子叶植物中分离的新基因，其能催化三酰甘油的生物合成。本发明所述的一种植物二酰基甘油酰基转移酶基因已经在很多植物中发现。可利用本发明DsDGAT基因作为目的基因构建植物表达载体，使用种子特异性的MPIN启动子，使该基因特异的在种子中表达。所用的表达载体可为Ti质粒,:Ri质粒，植物病毒载体等。转化方法可用农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。本发明的DsDGAT基因来自播娘蒿，具有适合于播娘蒿等双子叶植物表达的优化密码子，其基因工程受体植物除了单子叶植物，如小麦、玉米、水稻等之外更加适合于拟南芥、油菜、烟草、棉花等双子叶植物。本发明涉及的序列及记号分列如下(l)SEQIDNO.1的信息(i)序列特征(A)长度:1792bp(B)类型核苷酸(C)链性单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型核苷酸(iii)序列描述SEQIDNO.1(2)SEQIDNO.2的信息(i)序列特征(A)长度:524a.a(B)类型氨基酸(C)链性单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型蛋白质(iii)序列描述SEQIDNO.2(3)SEQIDNO.3的信息(i)序列特征(A)长度:21b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构:线性(ii)分子类型核苷酸(iii)序列描述SEQIDNO.3(4)SEQIDNO.4的信息(i)序列特征(A)长度19b(B)类型核苷酸(C)链性单链(D)拓扑结构:线性(ii)分子类型核苷酸(iii)序列描述SEQIDNO.4(5)SEQIDNO.5的信息(i)序列特征:(A)长度23b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构:线性(ii)分子类型核苷酸(iii)序列描述SEQIDNO.5(6)SEQIDNO.6的信息(i)序列特征(A)长度:25b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构:线性(ii)分子类型核苷酸(iii)序列描述SEQIDNO.6(7)SEQIDNO.7的信息(i)序列特征(A)长度:21b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构:线性(ii)分子类型核苷酸(iii)序列描述SEQIDNO.7(8)SEQIDNO.8的信息(i)序列特征(A)长度21b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型核苷酸序列描述SEQIDNO.8(9)SEQIDNO.9的信息(i)序列特征(A)长度:27b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型核苷酸序列描述SEQIDNO.9(10)SEQIDNO.10的信息(i)序列特征(A)长度:27b(B)类型核苷酸(C)链性:单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型核苷酸序列描述SEQIDNO.10SEQUENCELISTING〈110〉南京农业大学〈120〉一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质〈130〉Ds:[)GAT〈140>2009-10-26〈141>2009-10-26〈150>2009-10-20〈151)2009-10-20〈160>10〈170>PatentInversion3.5〈210〉1〈211>1792〈212>薩〈213>Descurainiasophia〈400>1<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>SerArgSerAspSerAsnGlyLeuLeuSerAspSerSerSerGlylie354045AspAsnSerProSerAspAspValGlyAlaProThrAspValArgArg505560AspArglieAspSerValValAsnGluGlyThrAlaAsnLeuAlaGly65707580AspAsnValGlyAlaAlaGlulieArgGluAsnAspGlyGlyArgAsp859095GlyGlyGlyGluArgArgValAsnThrGluAlaThrPheThrTyrArg100105110ProSerValProAlaHisArgArgValArgGluSerProLeuSerSer115120125AspAlaliePheLysGinSerHisAlaGlyLeuPheAsnLeuCysVal130135140ValValLeuValAlaValAsnSerArgLeulielieGluAsnLeuMet145150155160LysTyrGlyTrpLeulieArgThrAspPheTrpPheSerSerArgSer165170175LeuArgAspTrpProLeuPheMetCysCysLeuSerLeuSerliePhe180185190ProLeuAlaAlaPheThrValGluLysLeuValLeuGinArgTyrlie195200205SerGluProValVallielieLeuIiislielielieSerThrThrGlu210215220ValLeuTyrProValTyrValThrLeuArgCysAspSerAlaPheLeu225230235240SerGlyValThrLeuMetLeuLeuThrCyslieValTrpLeuLysLeu245250255ValSerTyrAlaHisThrSerTyrAsplieArgSerLeuAlaAsnSer260265270AlaAspLysAlaAsnProGluValSerTyrTyrValSerPheLysSer275280285LeuAlaTyrPheMetValAlaProThrLeuCysTyrGinProSerTyr290295300ProArgSerProCyslieArgLysGlyTrpValAlaArgGinPheAla305310315320LysLeuValliePheThrGlyPheMet.GlyPhelielieGluGinTyr325330335lieAsnProlieValArgAsnSerLysIiisProLeuLysGlyAspLeu340345350Leu丁yrAlalieGluArgValLeuLysLeuSerValProAsnLeu丁yr355360365ValTrpLeuCysMetPheTyrCysPhePheHisLeuTrpLeuAsnlie370375380LeuAlaGluLeuLeuCysPheGlyAspArgGluPheTyrLysAspTrp385390395400TrpAsnAlaL.ysSerValGlyAspTyrTrpArgMetTrpAsnMetPro405410415ValHisLysTrpMetValArgHislie丁yrPheProCysLeuArgSer420425430lieProLysThrAlaAlalie:[le]::[eAlaPheLeuValSerAla435440445ValPheHisGluLeuCyslieAlaValProCysArgLeuPheLysLeu450455460TrpAlaPheMetG:lylieMetPheGinVa:[ProLeuVa:[PhelieThr465470475480Asn丁yrLeuGinGluArgPheGlySerMetValGlyAsnMetliePhe485490495TrpPheliePheCysliePheGlyGinProMetCysThrLeuLeuTyr500505510TyrHisAspLeuMetAsnArgLysGlySerMetSer515520〈21()>3〈211>21〈212>DNA〈213〉Descu:rainiEisophia〈4()()>3agt.tggt.ttc^ttacgctcata21〈210M〈211>19〈212>DNA〈213>Descurainiasophia〈400>4c股itaatctc(:cacgcttt19〈21()>5〈211>23〈212>DNA〈213>Descurainiasophia〈400>5attgacgagccacccaacccttc23〈210〉6〈211>25〈212>DNA<213〉Descuraini￡isophia〈400>6ctgcatgttctactgcttcttccac25〈210>7<211>21〈212〉DNA〈213〉Descurainiasophia〈400>7gattct.gattctcttttcggc21〈210>8〈211)2]〈212>DNA〈213>Descurainiasophia〈400〉8tatcaggaccactac朋cfitc21〈210>9〈211>27〈212>DNA<213>Descurainiasophia〈400>9gcggatccttctgat.tctcttttcggc27〈210〉10〈211〉27〈212>DNA〈213>Descur￡iiniasophia〈400〉10gcccgggttcaggaccactacaacatc2权利要求一种双子叶植物二酰基甘油酰基转移酶基因(DsDGAT)，来自播娘蒿(Descurainiasophia)，命名为DsDGAT基因，其核苷酸序列SEQIDNO.1为GCGGATCCTTCTGATTCTCTTTTCGGCATCTTTTTCTTCTTGAAACCTTTTTCCAAATTCAATTTTTCTTCTGCATGTGTCCGTGACGCTTTTCCTTCTGACGTTCTGAAGGACTCTTTGAAGCTGTTTCGTTGAACGCTTCGAAATGGCGATTTTGGATTCTGGAGACGTTACTTTGACCACCACGACGGAGAACGTTGCCGGAGAGTTTATGGATCTCGATAGGCTTCGTCGACGGAAATCTAGATCGGATTCTAATGGACTTCTTTCTGATTCTTCATCCGGTATCGATAATTCACCGTCGGATGATGTTGGAGCTCCGACCGACGTGAGGAGGGATCGGATTGATTCCGTTGTCAACGAGGGAACAGCCAATTTGGCCGGAGATAACGTCGGTGCTGCTGAAATTAGGGAAAACGATGGAGGAAGAGACGGCGGCGGAGAAAGAAGAGTTAACACCGAGGCTACGTTTACGTATCGACCGTCGGTTCCAGCTCATCGGAGGGTGAGGGAGAGTCCACTCAGCTCTGACGCAATCTTCAAACAGAGCCATGCCGGATTATTTAACCTCTGTGTAGTAGTTCTTGTTGCTGTGAACAGTAGACTCATCATTGAAAATCTCATGAAGTACGGTTGGTTGATCAGAACGGATTTCTGGTTTAGTTCAAGATCTCTGCGAGATTGGCCGCTTTTCATGTGTTGTCTTTCCCTTTCGATCTTTCCTTTGGCTGCCTTTACTGTAGAGAAATTGGTACTTCAGAGATACAIATCTGAACCTGTTGTCATCATTCTTCATATTATTATCTCTACGACAGAGGTTTTGTATCCAGTTTATGTCACACTGAGGTGTGATTCCGCCTTCTTATCAGGTGTCACATTGATGCTCCTCACTTGCATTGTGTGGCTAAAGTTGGTTTCTTACGCTCAIACTAGCTACGACATAAGATCTCTAGCCAATTCAGCTGATAAGGCCAATCCTGAAGTCTCTTACTACGTTAGCTTTAAGAGCTTGGCAIATTTCATGGTTGCTCCCACATTGTGTTATCAGCCGAGCTATCCACGTTCTCCATGTATCCGGAAGGGTTGGGTGGCTCGTCAATTTGCAAAACTGGTCAIATTCACTGGATTCATGGGATTTATCATAGAACAATATATAAATCCTATTGTTAGGAACTCAAAGCATCCTTTGAAAGGGGACCTTCTATACGCTATTGAAAGAGTGTTGAAACTTTCTGTTCCAAATTTATACGTGTGGCTCTGCATGTTCTACTGCTTCTTCCACCTTTGGTTAAACATATTGGCCGAGCTCCTCTGTTTCGGGGATCGTGAATTCTACAAAGATTGGTGGAATGCAAAAAGTGTGGGAGATTATTGGAGAATGTGGAATATGCCTGTCCATAAATGGATGGTTCGACATATATACTTCCCATGCCTACGCAGCAAGATACCGAAGACCGCCGCCATTATCATTGCTTTCTTAGTCTCTGCAGTCTTTCATGAGCTATGCATCGCAGTCCCTTGTCGTCTCTTCAAGCTATGGGCTTTTATGGGGATTATGTTTCAGGTGCCTTTGGTTTTTATCACAAACTATCTACAAGAAAGGTTTGGCTCAATGGTGGGGAACATGATCTTCTGGTTCATCTTCTGCATTTTCGGACAACCGATGTGTACACTTCTTTATTACCACGACCTGATGAACCGCAAAGGATCGATGTCATGAAACAACTGTTCGAAATCGACGTTCTTCAGACATCTATGACCTTGTTGGATCTCCATTGATGTTGTAGTGGTC2.权利要求1所述的一种双子叶植物二酰基甘油酰基转移酶基因所编码的蛋白质，来自播娘蒿(Descurainiasophia)，命名为DsDGAT蛋白质，它具有如下所示的氨基酸序列SEQIDNO.2:MAILDSGDVTLTTTTENVAGEFMDLDRLRRRKSRSDSNGLLSDSSSGIDNSPSDDVGAPTDVRRDRIDSWNESMIFKQSHAGLFNLCVVVLVAWLNILAELLCFGDREFYKD丽NAKSVGDYWRMW雨PV服丽VRHIYFPCLRSKIPKTAAIIIAFLVSAVFHELCIAVPCRLFKLWAFMGIMFQVPLVFITNYLQERFGSMVG雨IFWFIFCIFGQPMCTLLYYIiDLMNRKGSMS。全文摘要本发明公开了一种二酰基甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质，属于基因工程领域。播娘蒿二酰基甘油酰基转移酶基因DsDGAT的cDNA序列SEQIDNO.1及其编码的氨基酸序列SEQIDNO.2。本发明基因为双子叶植物播娘蒿的首次报道，参与播娘蒿种子贮藏油脂的生物合成，mRNA表达分析表明该基因受伤害和低温诱导。转基因实验证明该基因的超量表达能够显著提高油菜籽的含油量和粒重。DsDGAT可作为目的基因导入植物，提高植物种子产量和产油量。文档编号C12N9/10GK101698851SQ200910233688公开日2010年4月28日申请日期2009年10月28日优先权日2009年10月28日发明者唐三元,张红生,田琳琳,管荣展,郑秀,陈健美申请人:南京农业大学