专利名称：来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列的利记博彩app
技术领域：
本发明属于植物基因工程技术领域，特别涉及一种来源于玉米自交系18-599编 码多药物及毒素外排蛋白的基因序列。
背景技术：
酸性土壤是指pH值小于5. 5，矿质营养元素失衡的一类土壤，主要分布在热带、亚 热带以及温带地区的发展中国家。据统计，酸性土壤大约占全世界陆地总面积的30% ，占耕 种总面积的50%。在我国，砖红壤、红壤、赤红壤这些典型的酸性土壤广泛分布在南方十四 个省区，总面积达203万平方公里，约占全国耕地面积的21 % 。并且随着工业的快速发展和 人类活动的加剧，土壤酸化程度还在加剧，酸化面积还在增加。在酸性土壤上，作物的生长 发育受到抑制，导致产量降低，经济效益下降。酸性土壤影响作物生长发育的土壤因素主要 为Al3+毒、Mn2+毒、H+毒害及矿质营养的匮乏。土壤中的铝有多种存在形式，其中无机离子 态铝如Al3+、 Al (0H)2+对植物根系的毒害作物最大，而其他形态的铝则毒性较小。正常土壤 中的铝大多呈非水溶态，通常以硅酸盐态或氧化态存在，对植物没有毒害作用，但在pH小 于5的酸性条件下，铝主要以Al3+形式存在。由于Al3+的交换量占土壤阳离子交换总量的 20% -80%，酸性土壤中其他阳离子易于淋失，导致钾、钙、镁、硼等营养元素的缺失及磷的 固定。因此，酸性土壤中作物生长障碍直接与Al3+升高有关，酸铝毒害是酸性土壤上作物产 量提高的最主要限制因子，可导致作物减产40%。由于酸性耕地的生产潜力还有很大的上 升空间，因此提高酸性土壤上的农作物产量引起了广泛的关注，成为全球上除作物抗干旱 胁迫外的第二大研究热点。撒施石灰在一定程度上可以降低土壤的酸性，从而降低酸铝毒 害，但这种物理措施很难在各地广泛的普遍实施并且效果不理想。为了保障作物粮食供给， 提高单位面积的产量，充分发挥现有耕地的生产潜力，克隆新的抗酸铝基因，培育新的作物 转基因抗酸铝自交系和进行遗传改良已成为农作物育种的重中之重，也是开发利用酸性土 壤的最有希望的办法。 作物抗酸铝毒害的机制主要有两种促进根系Al3+的外排或忍耐Al3+在根系和植 株地上部位的积累。但迄今为止，大多数的实验证据表明Al3+的外排与Al3+激活的有机酸 (organic acid，0A)从植物根际细胞壁和共质体的外排有关。并且有证据表明共质体内铝 毒解除机制也与Al3+和OA螯合形成复合体有关。经遗传学和生理学研究发现，许多作物基 因型差异所导致的抗酸铝能力差异的机制之一是由于抗酸铝能力强的品系根系顶端能外 排一种或多种有机阴离子(通常为苹果酸或柠檬酸的阴离子)，而这些有机阴离子能迅速 螯合根系附近的Al3+或者根系质外体的Al3+。不同植物种类分泌不同的0A，玉米主要分泌 柠檬酸和苹果酸，豆科植物主要分泌柠檬酸，小麦主要分泌苹果酸、烟草和番木瓜分泌柠檬 酸，荞麦和芋头主要分泌草酸。不同种类的有机酸解除Al3+毒害的能力也不同，柠檬酸的能 力最强，其螯合Al3+的能力是苹果酸的6-8倍，其次为草酸和苹果酸。 目前发现的抗酸铝基因主要有两类，Al3+激活的苹果酸转运子(Al3+ -activatedmalate transportor, ALMT)家族禾口多禾中毒素及药物夕卜排(multi—drug and toxin extrusion,MATE)家族的膜蛋白。尽管这些蛋白家族的成员存在核苷酸序列和蛋白结构的 差异，但都是通过改善有机离子外排的方式提高对酸铝毒害的抗性。 ALMT蛋白具有一个功能未知的蛋白家族5结构域(uncharacterisedprotein family five domain, UPF0005)，并且所有成员具有极度保守的19个氨基酸。这些蛋白的 氨基末端比较保守，但羧基末端分化比较大。虽然在多种植物(包括小麦、玉米、水稻、大 麦、黑麦、荞麦、黑小麦、油菜、拟南芥、苜蓿)中都展开了抗酸铝胁迫研究，并首先克隆了小 麦的TaALMTl(4i3+ -activated迈alate transporter)基因，随后通过同源序列比对等方 法，在玉米、水稻、油菜、拟南芥、黑麦等植物中陆续发现了 TaALMTl基因的直向同源物。
MATE基因编码有机离子转运蛋白，MATE蛋白在拟南芥中属于一个具有58成员的 家族，最先发现这种蛋白能通过向外运输毒素而起到抗菌作用。高粱的SbMATE是经图位克 隆的一个MATE家族的抗铝毒基因，在拟南芥中过量表达时能引起A1"激活的柠檬酸外排和 抗铝毒能力的增加。此外，还通过同源克隆方法克隆了大麦的HvAACTl基因，并在小麦分离 群体中，通过定位发现一个新的抗铝毒位点4BL Xce。与柠檬酸分泌有关。
由此可见，分泌苹果酸和柠檬酸是植物拮抗酸铝胁迫的两种重要手段，ALMT和 MATE这两个蛋白家族部分成员作为A1"诱导的离子通道蛋白能特异性地或选择性地排出 苹果酸和柠檬酸等有机酸离子到质外体或共质体，而另外一些成员则能促进有机酸离子到 根际的运输，进而螯合根际Al3+或通过离子平衡而起到拮抗铝毒作用。由于这些抗酸铝基 因的表达水平与有机酸的分泌及抗酸铝能力呈正相关，因此可通过基因工程的手段把这些 候选基因用于提高酸性土壤农作物的抗酸铝能力。由于柠檬酸螯合Al3+的能力比苹果酸 强，因此利用MATE类的基因可能培育出很强的抗铝毒品种。 目前，编码多药物及毒素外排蛋白抗酸铝基因只从高粱和大麦中克隆得到，因而 在用于基因工程转化时存在抗酸铝遗传基础狭窄，抗性较差，并且由于这些基因都已申请 专利，使用时具有很大的局限性，难以在我国推广使用。18-599是四川农业大学玉米研究所 自主选育的产量高、配合力高、抗逆性较强的骨干自交系，在西南地区的杂交制种中得到了 广泛应用。
发明内容
本发明的主要目的就是根据上述编码多药物及毒素外排蛋白抗酸铝基因来源有 限、存在抗酸铝遗传基础狭窄、抗性较差、推广使用具有很大局限性等问题，提供一种从粮 食作物玉米自交系18-599中得到的编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列，以克服多药 物及毒素外排蛋白的基因的物种局限性和在我国推广使用的局限性，并且具有相对良好的 安全性，推广使用时更容易被人们接受。 为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下 来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列，该序列具有
如SEQ ID NO. 1所述的cDNA序列。 其所对应的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所述。 上述来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列，可通过 包括下述主要步骤的方法克隆得到
(1)、提取总RNA:取玉米自交系18-599的发芽7天的水培幼苗，用pH 4. 0的A1K (S04) 2. 2H20处理 24小时，然后取根尖部位，用Trizol (Takara公司)提取得到总RNA ;
(2)、合成cDNA第一链 以步骤(1)提取得到的总RNA为模板，使用引物为oligo(dT)10和六聚体随机引 物，利用Takara公司的PrimeScriptTM RT reagent Kit反转录试剂盒进行反转录合成得到 cDNA第一链； 反应体系及反应条件为5Xbuffer 2ul;RT enzyme mix 0. 5 u 1 ;oligodt 0. 5 ii 1 ;random60. 5 ii 1 ;总RNA 500ng ;H20定容到10 ii 1 ;37。C反应15min，80。C处理5min 灭活反转录酶的活性；
(3) 、 PCR扩增得到cDNA全长 以步骤(2)得到的cDNA为模板，利用下述基因特异性引物ZmMATE OX F和引物 ZmMATE OX R : ZmMATE OX F:GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAATGGCAGAATGCGTG，
ZmMATE OX R:GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTATCAGTTCCGGAGAAAC ;
通过PCR扩增得到目的cDNA片段； PCR的反应体系为IOXKOD buffer 5 ii 1 ;25mM MgS04 3 ii 1 ;dNTP (各2mM) 5 ii 1 ; cDNA模板2 ii 1 (40ng);引物ZmMATE OX F (10 ii M)和ZmMATE OXR (10 ii M)各1. 5 ii 1 ;KOD DNA聚合酶1 ii 1 (Toyobo公司)；H20 31 ii 1 ; PCR反应程序95。C预变性2分钟；95。C变性30秒；56。C退火30秒；70。C延伸50 秒；共35个循环。 将得到的目的cDNA片段回收、克隆入pD0NR207 (invotrgen公司)，即可测序得到 该片段的序列。 与现有技术相比，本发明的有益效果是 本发明克服了多药物及毒素外排蛋白的基因的物种局限性和在我国推广使用的 局限性。同时由于这个基因来源于人们的主要作物——玉米，具有相对良好的安全性，因此 转基因作物推广使用时更容易被人们接受。
图1为玉米根尖中提取得到的总RNA琼脂糖凝胶电泳检测结果； 图2为根据玉米根尖总RNA合成、并进一步扩增得到ZmMATE基因的cDNA琼脂糖
凝胶电泳检测结果； 图3为铝离子诱导ZmMATE基因的表达琼脂糖凝胶电泳检测结果；
图4为植物表达载体pMDC32-MATE的结构示意图； 图5为酸铝毒害条件下野生型和转ZmMATE基因的拟南芥根系生长发育情况(T23 为转ZmMATE基因株系，Col-O为野生型株系)； 图6为酸铝毒害条件下野生型和转ZmMATE基因的拟南芥根系长度变化； 图7为酸铝毒害条件下野生型和转ZmMATE基因的拟南芥根系拧檬酸的分泌情况。
具体实施例方式
下面结合具体实施方式
对本发明的上述发明内容作进一步的详细描述。 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。在不脱离本发明上
述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括
在本发明的范围内。 实施例1 本实施例为玉米幼苗总RNA的提取
1. RNA的提取，方法如下 (1)取玉米自交系18-599的发芽7天的水培幼苗，用pH 4. 0的 30 ii MA1K(S04)2. 21120处理24h后取根尖1cm部位共lOOmg，加液氮研磨后用Trizol (Takara 公司)提取总RNA ; (2)加入1ml Trizol提取液，充分混匀后，加入200 yl氯仿，混匀后静置5分钟， 4°C ， 12000rpm离心10分钟； (3)取上清液，加入等体积的异丙醇，颠倒混匀后，4°C ， 12000rpm离心10分钟； (4)弃上清液，沉淀用70%的无水乙醇洗，4°C ， 12000rpm离心5分钟； (5)重复步骤3和4，所得沉淀即为RNA ; (6)将RNA干燥后，用50 的DEPC处理水溶解。 2.基因组DNA的去除 (1)将20-50iig RNA溶于水中，力口入lOXDnase buffer 5iil，5u/iil RNAfree DNase 2iil，40u/iil RNase Inhibi tor 0.5iil，力QRNA free H20至50 ii 1， 37 °C处理 25min，去除基因组DNA的污染； (2)酚氯仿异戊醇(25 : 24 : 1)抽提一次，取上清液，加入1/10V的3丽aAc， 用两倍体积无水乙醇沉淀RNA，70X乙醇洗一次，自然干燥后溶于20iU水中即得到总RNA 产物； (3) RNA质量检测用分光光度计测定RNA含量和质量质量好的RNA其OD26。/OD28。比值在2. 0左右， 按照RNA含量调整为500ng进行反转录。
3.试验结果 采用琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA产物的结果见图1，图中可见明显的RNA条带。
实施例2 本实施例为本发明ZmMATE基因cDNA的克隆 1.试验方法 (l)cDNA第一条链的合成 以实施例l得到的RNA为模板，使用引物为oligo(dT)lO和六聚体随机引物，利用
Takara公司的PrimeScript RT reagent Kit反转录试剂盒合成cDNA第一条链； 反应体系及反应条件为5Xbuffer 2ul;RT enzyme mix 0. 5 u 1 ;oligodt
0. 5 ii 1 ;random60. 5 ii 1 ;总RNA 500ng ;H20定容到10 ii 1 ; 37"反应15min，8(TC处理5min灭活反转录酶的活性。 (2)双链cDNA的合成
6
利用同源比对得到的序列信息设计ZmMATE基因特异性引物如下
ZmMATE OX F :GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAATGGCAGAATGCGTG，
ZmMATE OX R :GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGG GTATCAGTTCCGGAGAA AC);
通过PCR扩增得到目的cDNA片段； PCR的反应体系为IOXKOD buffer 5 ii 1 ;25mM MgS04 3 ii 1 ;dNTP (各2mM) 5 ii 1 ; cDNA模板2 ii 1 (40ng);引物ZmMATE OX F (10 ii M)和ZmMATE OXR (10 ii M)各1. 5 ii 1 ;KOD DNA聚合酶1 ii 1 (Toyobo公司)；H20 31 ii 1 ; PCR反应程序95。C预变性2分钟；95。C变性30秒；56。C退火30秒；70。C延伸50
秒；共35个循环。 2.试验结果 采用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物为一条约2000bp的片段(见图2);将该片段回收后克隆入pD0NR207 (invitrogen公司)，测序得到该片段的cDNA序
列，如SEQ ID NO. 1所述。 实施例3 本实施例为用酸性溶液中Al3+的处理玉米18-599幼苗后检测编码多药物及毒素
外排蛋白基因ZmMATE的表达情况( — )试验方法 1.植物样品的处理和RNA提取取玉米自交系18-599的发芽7天的水培幼苗，用pH 4. 0的30 y MA1K (S04) 2. 2H20 分别处理0、12、24小时后取根尖部位，用Trizol (Takara公司)提取总RNA。
2. cDNA的合成及转录 以实施例1得到的RNA为模板，使用引物oligo(dT) 10和六聚体随即引物，利用
Takara公司的反转录试剂盒PrimeScriptTM RT reagent Kit进行反转录合成cDNA第一链。 再利用ZmMATE基因特异性引物ZmMATE rt F(gacaggcggtgcttgcaagc)和引物
ZmMATE rt R(gcgcagaaaggtacagcagg)(扩增本发明基因的部分片段)， 以及作为内参的ACTIN基因的特异引物ACT rt F(GCATCACACCTTCTACAACGA)和
ACT rt R(CAGCCTGGATAGCAACATACAT); 通过PCR扩增分别得到大约400bp的cDNA片段。 PCR的反应体系为10XrTaq buffer 5 ii 1 ;dNTP (各2mM) 5 ii 1 ;玉米cDNA模板 2iil(40ng);引物ZmMATE rt F(或ACT rt F) (10 ii M) 、 ZmMATErt R(或ACT rt R) (lOMm) 各1. 5ii 1 ;rTaq DNA聚合酶1 ii 1 ;H20 31 ii 1。 PCR反应程序94。C预变性5分钟；94。C变性30秒；56。C退火30秒；72。C延伸30 秒；共35个循环。 在以ACTIN作内参基因的情况下，获得ZmMATE基因受铝离子诱导表达及表达强度
与诱导时间的关系。
( 二 )试验结果 采用琼脂糖凝胶电泳检测用铝离子诱导Oh时ZmMATE基因不表达；诱导12h和24h 后，ZmMATE基因被诱导表达，且表达强度在处理24h时达到最高，得到ZmMATE基因约400bp 的扩增产物和ACTIN基因片段。而在没有铝离子诱导时，ZmMATE基因不表达，说明ZmMATE基因表达受铝离子的诱导，且表达强度在一定范围内随着铝离子处理时间的延长而增加(见 图3)。 实施例4 本实施例为植物表达载体pMDC32-MATE的构建及在拟南芥中的转化
( — )试验方法 1.植物表达载体pMDC32-MATE的构建
利用下述基因特异性引物ZmMATE 0X F:GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTAAAT GGCAGAATGCGTG，ZmMATE OX R:GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTATCAGTTCCGGAGAAAC ; 进行PCR扩增，得到ZmMATE DNA片段，通过BP反应连接到Gateway系统的
pD0NR207上，构建成入门载体pD0NR207-MATE-0X。BP反应体系为ZmMATE PCR产物3 ii 1 ， pD0NR207 (150ng/ ii 1) 0. 5 ii 1 ， TE 0. 5 ii 1 ，
BP Clonase II enzyme mix 1 ii 1， 25。C连接2小时。 转化挑单菌落测序分析无突变，然后将入门载体pD0NR207-MATE-0X与目标载体 pMDC32通过LR反应，生成植物表达载体pMDC32-MATE。LR反应体系为pD0NR207-MATE-0X(150ng/ii 1， pMDC32(150 iig/
ii 1)0. 5ii 1， TE 2. 5ii 1， LR Clonase II enzyme mix 1 ii 1，25。C连接2小时。
2. pMDC32-MATE载体通过花序浸泡法转化拟南芥 将pMDC32-MATE载体转入农杆菌菌株GV3101，检测正确后用于拟南芥的花序浸泡 转化。拟南芥Col-0种植在1/2MS培养基上，16h光照/8小时黑暗，23°C的条件下培养30d， 将携带pMDC32-MATE载体的农杆菌(0D6。。 = 0. 8) 150ml离心后用含有0. 1 % Silwet L-77 的5%蔗糖悬浮，浸泡拟南芥花茎lmin，然后将其用塑料薄膜覆盖24h，随后去掉薄膜在正 常条件培养30d左右，收取T。代种子。用20mg/l的潮霉素筛选T。代，抗性植株结实得到L 代种子，进一步筛选鉴定得到纯合的T2代转基因种子用于根系抗酸铝的敏感性检测。
( 二 )试验结果 通过Gateway系统的BP和LR反应，将ZmMATE基因的cDNA片段连接到植物表达 载体pMDC32上(见图4)。通过花序浸泡法得到过量表达ZmMATE基因的拟南芥转基因植 株，并通过潮霉素筛选得到纯合的T2代种子。
实施例5 本实施例为检测过量表达ZmMATE基因的拟南芥转基因株系的根系发育状况，确 定ZmMATE基因的抗酸铝功能。
( — )实验方法 纯合的拟南芥T2代种子在培养皿中培养10天后，将拟南芥幼苗转移至pH值为4. 7 的MS培养基，并分别添加2iiM和6.0iiM A1C13。每个培养皿10棵拟南芥，每2天更换一 次培养基，共处理7天。根系长度用扫描仪扫描后，用ImageJ软件进行测量，检测ZmMATE 基因在拟南芥根系生长发育过程中对酸铝毒害反应的关系。
(二)实验结果 用2iiM和4. OiiM A1C13处理3个转基因株系T5、T12和T237d后，发现野生型拟 南芥的根系生长明显受到抑制(约50% )(见图6)，而转基因株系T5和T23的根系发育受
8抑制较小，根系较长；尤其在用2 M铝离子处理时，T23根系长度与野生型Col-0对比明显 (见图5)。说明转化ZmMATE基因的拟南芥根系对酸铝的反应敏感性降低，抗酸铝毒害的能 力增强，能保持正常的生长发育。
实施例6 本实施例为收集转基因拟南芥株系T23根系分泌物，通过酶法检测柠檬酸的含
( — )试验方法 生长10d的拟南芥根系浸在0. 5mM CaCl2(pH4. 5)溶液中处理过夜，随后取出将其 根系浸在含有50mM AICIJ勺O. 5mM CaCl2(pH4. 5)中处理24h。最后收集的根系处理液先 后用阳离子交换树脂(16X14mm) (5g酸性AmberlitelR-120B resin填充)和阳离子交换 树脂(16X 14mm) (2g AG 138resin(100 200目；甲酸形式)填充)收集。阳离子交换树脂 用2N HC1洗脱，然后离心干燥(4(TC干燥)。收集物用lmL超纯水溶解，然后用酶法检测根 系分泌物中柠檬酸的含量(Delhaize et al. ，1993)。
(二)试验结果 用铝离子处理根系24h后收集转基因拟南芥的根系分泌物，然后将根系分泌物分 别用酸性和甲酸形式阳离子交换柱回收，随后洗脱溶解于水中用酶法检测。转基因株系T23 的柠檬酸分泌量明显高于野生型拟南芥，说明ZmMATE基因能通过促进柠檬酸的分泌提高 转基因的抗酸铝毒害能力(见图7)。 试验结论实施例3中ZmMATE基因受铝离子诱导表达；实施例4、5和6中构建 ZmMATE基因的过量表达载体将其在拟南芥中过量表达后，转基因拟南芥根系的发育受到的
抑制较小，根系长度随铝离子浓度的升高而减少；转基因拟南芥根系柠檬酸的分泌量也比
野生型Col-0有所增加，这些实验结果说明ZmMATE基因的表达受铝离子诱导；ZmMATE基因
在拟南芥中过量表达时能部分拮抗酸铝毒害对拟南芥根系发育的抑制，并且ZmMATE基因
这种拮抗酸铝毒害的作用很可能是通过促进根系柠檬酸的分泌而实现。 序列表 〈110〉四川农业大学 〈120〉来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列
〈160>2
〈210>1
〈211>1662
〈212>DNA 〈213〉来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因cDNA序列
〈400〉 1 atggaggaca acggtgccgc cgccgccgcc gccgctcccg cgacgagcat gcctgccgag 60
aagcgtgtgg cggtcatcca gggggacgcg ccgccggagc cggcggcggg gctectgccc 120
tgcgggccga ggaagacggg gctccacctc ttcgtcatga acatcaggag cgtcttcaag 180
ctggacgggc ttgggtcgga ggtgctgcgc atcgcggtgc ccgcgtcgct tgcgttggcg 240
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9
cctctcgttagcgtcacaacgtcgttcgtcgcgg郷皿gacgcgatcatcagteaggcc420gtccgaggaa3C3gC3gCC3gtggag腿gcctcccacgtgggctttgat■CCgg3g3CC3gcaatctgcatgcatctggccctgcaggtetggc卿atgcgtgaactcg540tgtetccctecggagtgcgcagcagatccctctggcaggc皿gggcggtgcg卿卿gg600tecgtgccgtcggtcacgtcggcgcteategtcggttccattctcggcctgcttcaggcc660gtcttcctggtcctttcggccagattcgtgctcaacatcatgggtgtt皿gtccggatcc720ccgatgc朋gggcctgcggtgcgcteccteacgateaggtcccttggtgcccccgctgtg780ctgctgtctctggccatgcaaggggttttccgggggttca3gg3C3CC皿gacaccgtte840tecgctectgtggttggcgacgcggcg皿catcatectggacccgattttgatgtttgtt■tgccatetgggcgtcactggtgcggctettgctcatgttgtttctcagtecatgateacg960ttgatectgctgtgccggctcgtccagcgagttcacgttetcccacccagcatteaatct1020ctgaaatttgggaggtttcttggatgtggattcctgctgctcg咖gggttgtcgcggtg1080acgttctgcgtcacgctggcggcgtccctggccgctcgccatggacccaccgtcatggca1140ggcttccagatctgctgccagctctggctggccacgtctcttctcgccgatggattggcc1200gtggcaggacaggcggtgcttgc皿gcgcgttcgccaaga3cg3C3gteag皿ggtcgct1260gccgcgacatcccgtgtgttgcagctgagcattgtcctgggcatgggtctcaccgtcgtg1320ctgggacttgctetgaggttcggggctggcattttcacaagcgacgtgcccgtgatccaa1380gtcattcacagaggcatcccgtttgtcgccgggacgc卿ccatcaattccctggccttc1440gtgtttgatggcatcaactttggagcgtragactecagatactctgcttectccatggtt1500gctgttgcgtctgtgtcgataccatgcctgctgtecctttctgcgcateacggattcatc1560ggtetetgg3tcgcattgacgatctecatgccategctegcacctggagg16203tgggggC3gcgaggggaccatggacgtttctccggaact1662〈210>2〈211>553〈212>PRT〈213〉来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因氨基酸序列
〈400>2Met Glu Asp Asp Gly Ala Ala AlaAla Ala Ala Ala ProAla Thr Ser151015Met Pro Ala Glu Lys Arg Val AlaVal lie Gin Gly AspAla Pro Pro202530Glu Pro Ala Ala Gly Leu Leu ProCys Gly Pro Arg LysThr Gly Leu354045His Leu Phe Val Met Asp lie ArgSer Val Phe Lys LeuAsp Gly Leu505560Gly Ser Glu Val Leu Arg lie AlaVal Pro Ala Ser LeuAla Leu Ala65707580Ala Asp Pro Leu Ala Ser Leu ValAsp Thr Ala Phe lieGly Arg Leu859095
10
GlySerValGlulieAlaAlaValGlyValSerlieAlaliePheAsp100105110GinValSerLysValCyslieTyrProLeuValSerValThrThrSer115120125PheValAlaGluGluAspAlalielieSerLysAlaValArgGlyAsp130135140SerSerGinGluGluAspValGluLysAlaSerHisValGlyPheAsp145150155160ProGluThrSerAspLeuHisAlaSerGlyProAlaGlyMetAlaGlu165170175CysValAspSerCyslieProThrGluCysAlaAlaAspProSerGly180185190ArgGinGlyArgCysGluLysArgTyrValProSerValThrSerAla195200205LeulieValGlySerlieLeuGlyLeuLeuGinAlaValPheLeuVal210215220LeuSerAlaArgPheValLeuAsplieMetGlyValLysSerGlySer225230235240ProMetGinGlyProAlaValArgTyrLeuThrlieArgSerLeuGly245250255AlaProAlaValLeuLeuSerLeuAlaMetGinGlyValPheArgGly260265270PheLysAspThrLysThrProLeuTyrAlaThrValValGlyAspAla275280285AlaAsplielieLeuAspProlieLeuMetPheValCysHisMetGly290295300ValThrGlyAlaAlalieAlaHisValValSerGinTyrMetlieThr305310315320LeulieLeuLeuCysArgLeuValGinArgValHisVallieProPro325330335SerlieLysSerLeuLysPheGlyArgPheLeuGlyCysGlyPheLeu340345350LeuLeuAlaArgValValAlaValThrPheCysValThrLeuAlaAla355360365SerLeuAlaAlaArgHisGlyProThrValMetAlaGlyPheGinlie370375380CysCysGinLeuTrpLeuAlaThrSerLeuLeuAlaAspGlyLeuAla385390395400ValAlaGlyGinAlaValLeuAlaSerAlaPheAlaLysAspAspSer
405410415LysLysValAlaAlaAlaThrSerArgValLeuGinLeuSerlieVal420425430LeuGlyMetGlyLeuThrValValLeuGlyLeuAlaMetArgPheGly435440445AlaGlyliePheThrSerAspValProVallieGinVallieHisArg450455460GlylieProPheValAlaGlyThrGinThrlieAspSerLeuAlaPhe465470475■ValPheAspGlylieAspPheGlyAlaSerAspTyrArgTyrSerAla485490495TyrSerMetValAlaValAlaSerValSerlieProCysLeuLeuTyr500505510LeuSerAlaHisAspGlyPhelieGlylieTrplieAlaLeuThrlie515520525TyrMetSerLeuArgThrlieAlaSerThrTrpArgMetGlyAlaAla530535540ArgGlyProTrpThrPheLeuArgAsp545550
1权利要求
来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列，该序列具有如SEQ ID NO.1所述的cDNA序列。
2. 根据权利要求1所述的序列，其特征在于所述的cDNA序列对应的氨基酸序列如 SEQ ID NO. 2所述。
全文摘要
本发明公开了一种来源于玉米自交系18-599编码多药物及毒素外排蛋白的基因序列，该序列具有如SEQ ID NO.1所述的cDNA序列。该序列克服了多药物及毒素外排蛋白的基因的物种局限性和在我国推广使用的局限性；同时由于这个基因来源于人们的主要作物——玉米，具有相对良好的安全性，因此转基因作物推广使用时更容易被人们接受。
文档编号C12N15/10GK101760465SQ20091021628
公开日2010年6月30日 申请日期2009年11月23日 优先权日2009年11月23日
发明者张素芝, 荣廷昭 申请人:四川农业大学