一种复合菌的利记博彩app

专利名称：：一种复合菌的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及纤维素降解及能源化利用
技术领域：
，特别涉及一种降解纤维素产甲烷的复合菌的利记博彩app。
背景技术：
：天然纤维类物质是地球上最丰富的生物质，除少部分被利用外，绝大多数以废弃物的形式存在于自然环境中。为了充分开发利用这类丰富的可再生资源，早在1883年和1886年就有学者开始研究纤维素的生物降解，特别是由于近年来石油、煤等化石能源价格不断攀升，纤维素生物转化为新能源的问题更是得到国内外学者的广泛关注。自然状态下，纤维素的彻底降解是在微生物体系中多种微生物长时间相互作用的结果，这一过程仅靠一种微生物是无法实现的。因为纯培养物具有以下缺点即产酶单一，纤维素的分解产物纤维二糖与葡萄糖能够抑制纤维素酶的活性以及阻遏纤维素酶的合成；挥发酸的积累会使培养液pH容易下降到很低而无法恢复到适合培养物生长的条件，从而使纤维类物质的转化效率低。而且在不经过预处理和/或灭菌的情况下，利用纯培养物和纯酶降解木质纤维素具有一定的难度。因此，在进行纤维素大分子降解的研究过程中要考虑到微生物之间的协同作用。多菌林混合培养，不仅产酶具有多样性，同时可以解除产物的反馈抑制，调节培养液的pH，从而提高纤维素的转化率。与纯培养物相比，混合菌群中微生物之间稳定的协同关系，对分解像纤维素这样的生物大分子的具有不可比拟的优势。多菌林混合培养，多种酶协同作用，可较快和较彻底地解除产物的反馈抑制，调节培养液的pH,提高纤维素的转化率。中国专利说明书CN1335288A公开了一种有机物快速腐熟菌剂，该发明制作的有机物快速腐熟菌剂有较好的降解纤维素的能力，其制作所用的培养基为蛋白胨纤维培养基，培养基的组成为CaC03、NaCl、纤维素、蛋白胨和酵母粉，其所用的氮源为有机氮源，培养方法为静止培养或者震荡培养。2008年，农业部沼气科学研究所罗辉的硕士论文《高效厌氧纤维素降解菌的筛选，复合菌系的制作及应用研究》中公开了具有降解纤维素产曱烷能力的两个天然复合菌系，这两个天然复合菌系均由好氧菌和厌氧菌组成，包含沼气发酵中的三大主要功能菌群，即纤维素降解菌群、产氢产乙酸菌群和曱烷菌群，是典型以纤维素降解为主，具有较为完整的沼气各功能微生物的天然复合菌系。这两个天然复合菌系虽然都具有较强的纤维素降解能力和产曱烷能力，但是这种自然发酵物菌剂中所含的菌种是在自然的被动发酵过程中无序的集合而成的多菌联合体，无法掌握其菌种组成，使用效果难以控制；而且这种天然复合菌系被动的遵循自然循环规律，其分解效率不高，效果也不稳定。筛选和驯化上述复合菌系的培养基含O.5%蛋白胨，0.1%酵母粉，0.2%CaC03,0.5%NaCl，碳源为O.5%的秸秆，所用的氮源为有机氮源。
发明内容本发明所要解决的问题是提供一种能高效厌氧转化纤维素为曱烷且效果稳定，分解效率高的复合菌利记博彩app。为了解决上述问题，本发明的复合菌利记博彩app为将分属兼性厌氧和严桔-厌氧的发酵性细菌、产氢产乙酸细菌和产曱烷菌的微生物所组成的菌群混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为30-50°C，pH为3-10。在含有纤维素的培养基中，上述复合菌协同作用，在降解纤维素的同时，生成甲烷。具体说就是厌氧纤维素分解菌和兼性厌氧纤维素分解菌分解培养基中的纤维素，得到葡萄糖和有机酸类物质，葡萄糖和有机酸等被产氢产酸细菌进一步降解为H2、C02和乙酸等，培养基中的蛋白质及其他大分子底物被Z^〃AToiz/^r/0R7/^3r/s和力c"。^s"eW咖分角罕为氨基酸及其他有机酸，氨基酸作为复合菌生长的氮源进一步被分解，其他有机酸被产氢产酸细菌进一步降解为H2、C02和乙酸等。上述不产曱烷的细菌可把各种复杂的有机物，如碳水化合物、蛋白质等分解生成H2、C02、NH3、甲醇、乙酸、丙酸、丁酸等，丙酸、丁酸还可被氢细菌和乙酸细菌分解转化成H2、C02和乙酸，为曱烷细菌提供了合成细胞质和形成曱烷的前体，电子供体——氢供体和氮源，使曱烷细菌利用这些物质最终形成曱烷。上述几种菌抹协同作用，经过一段时间的增殖，形成一种组成和性能稳定的复合菌体系。应用本发明的方法可以制作具有较强纤维素降解能力的复合菌，在兼性厌氧和严格厌氧条件下其对稻草类纤维素的降解率达到80%以上，在降解纤维素的同时，该复合菌还可以将纤维素的降解产物代谢得到甲烷，该复合菌经过64代传代，性能基本保持不变，对纤维素的降解能力和产曱烷的能力没有明显改变，足以说明其具有较好的稳定性和实用价值。本发明的制作复合菌方法所用含纤维素的培养液含CaC03，3-7%。NaCl,5-10%。纤维素，尿素1-4%。，蛋白胨l-3%。，酵母粉O.5-1.5%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。上述培养基中，CaC03的作用是与反应过程中可能积累的有机酸反应，将培养基的pH稳定在pH3以上。尿素和蛋白胨为复合菌生长所需的氮源，现在的研究认为对促进微生物生长和增殖而言，有机氮源优于无机氮源，而本发明的复合菌利用用尿素作氮源时，不仅可以稳定生长，快速降解纤维素材料，而且与有机氮源相比，极大地降低了生产成本。本发明的方法制作的复合菌分属兼性厌氧和严格厌氧的发酵性细菌、产氢产乙酸细菌和产曱烷菌四类微生物，组成该复合菌的菌林具体可以是以下菌林C/^/7力5^3/er/z/e刀"/^发酵噬纤维菌，细胞呈可弯曲杆状，兼性厌氧，有氧条件下分解纤维素产生乙酸、丙酸、琥珀酸、H2和C02等，同时可产生黄色素，菌抹保藏编号ATCC19072,DSM9555;」cefo&c化r/鹏柳o&7伍氏醋酸杆菌，细胞椭圓或短杆，单生、成对偶尔成短链，严格厌氧，氧化氢、还原C02生成乙酸，也发酵果糖和其他底物产生乙酸，菌林保藏编号ATCC29683，DSM1030;"e犯/Zbw'6"'oF〃7g"/S普通脱硫弧菌，弧状，以硫酸盐作为电子受体，还可以代谢碳水化合物、蛋白胨及其代谢中间产物，产生挥发酸，菌抹保藏编号ATCC29579,DSM644;Ce/7"A卿/^y/7肝/^ia产黄纤维单胞菌，细长杆状，能分解纤维素，还可以利用葡萄糖和其他碳水化合物在好氧和厌氧条件下产酸，菌抹保藏编号ATCC482,DSM20109;5"0^>/&/0/7^r/^/p^^溶纤维丁酸弧菌，弧状，严4各厌氧，分解纤维素产生有机酸，同时可产生降解半纤维素的半纤维素酶，菌抹保藏编号ATCC19171,讓3071;"w"/o7咖/^//r^o/7e/w溶纸梭菌，直杆，严4各厌氧，水解纤维素产生乙酸、乙醇和H2等，菌株保藏编号ATCC35413，DSM2782;C/oWr/fl7咖ce//M/o;7arM7产纤维二糖4菱菌，弯曲或直杆状，水解纤维素产生纤维二糖等，菌抹保藏编ATCC15832，固1351;/^i7z;/"^^弯曲或直杆状，水解纤维素产生乙酸、乙醇和112等，菌抹保藏编号ATCC51846，DSM5398;5y""o;力咖o""/^//e/沃尔夫伴生单胞菌，轻微螺杆状，不产芽孢，分解丁酸产生乙酸和H"与产曱烷菌互营，菌株保藏编号DSM4212;^s/^eW巴氏曱烷八叠球菌不对称球形，能够不规则聚集成团，利用甲醇、三曱胺、乙酸和H2/C02生长产曱烷，菌抹保藏编号ATCC43241，顧1538;J/e^a刀o6reK/'^3Cerar^ryp^7yc〃s嗜扭于木甲;^克^ii干菌，4豆^干菌，单生、成对或成串，只利用H2/C02生长产曱烷，菌株保藏编号ATCC33747,DSM1125;y^/^a/70^7/ae^WaW鹏/7/"斯氏曱烷球形菌不规则球状，单生或成对，极端严格厌氧，利用H2/C02和曱酸盐生长产曱烷，要求乙酸等作为有机生长因子，菌林保藏编号ATCC43021，DSM3091;yl/e^a/20cocc〃sra/M/e///万氏甲烷3求菌，规则或不一见则5求形，极端严格厌氧，利用&/0)2和曱酸盐生长产曱烷，菌林保藏编号ATCC35089，DSM1224。7以上菌抹均可通过德国微生物菌种保藏中心(DSMZ)或美国典型培养物中心(ATCC)获得。组成本发明的方法制作的复合菌的菌株有13林，各菌株的细胞数占复合菌总细月包婆t的百分比为0^op力a^3尸er/ffe/"/7i1占5—10%,C/^^r2V/y迈paArroso/Faos占25—35%,"esi///"ciz/6r/oyw7ga了/s占1一3°/。,"wfjT2V/6r/0/76r/so/Ke/7s2.5-5%,Jc"o6r2"er/咖,o力7占5-10%,^W/w/咖aL3S/7aF/ge/a占1-5%,C/o"r油.咖feiTH/〃d.51占1-5%,C7c^"i^'i;/ffce//o6/o/7sr〃/z占2.5-5%，尔"ro/7力。/z70加s,//"e/5-10%,船f力a加5^"/加6a/^er/占10—20%，#e^<2/2C^rei^^2cferar6on》力27/c^Ay占10—15%,#e^/a/7057^aera5^at/,/ffs/n.ae5—8%,#e^<2/7ccoccwi"ra/M/e/i/占2.5—5%。具体实施例方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。实施例中"曱烷产率(mV天.kg*TS)"指每kg含纤维素的固形物经复合菌处理后，每天产生的含曱烷气体在一个大气压下，25。C时的体积(m3),"曱烷含量(％)"是指曱烷气体的体积占含纤维素的固形物经复合菌处理后产生的含甲烷气体总体积的百分比，二氧化碳含量U)是指二氧化碳气体的体积占含纤维素的固形物经复合菌处理后产生的含曱烷气体总体积的百分比，降解率是指含纤维素的固形物经复合菌处理后所减少的重量占其初始重量的百分比。实施例1:将以下13株菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为4(TC，pH为6.5，13抹菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另ll为0^op/aga/e/7e/2^/5"占10%,6Vos/r/(37〃/Z7/^p/r(^o/Fe/75"占25%,"ei"〃7/b7/6r/0ra/gar/s占1%,^/0^丫"々"'o/V^r2W「e/Ly5%，Jcefo6s"er/〃/ff,c^/2'占5%,Ce/Zy/o/wo/^/7aF/ge朋占1%,6Vc^r/V/鹏fer/"/〃d/51占1%，^Voi1"/^'"//ce/Zc^/o/^iT/zs占2.5%,5y/2,ro/)力oyzo/2as,/尸e/5%,vf/"A3/705^rci/L36ari^".占19%,#e^<3/2C^reK/^3"er8ar^zr//^///cz/i"占15%,〃ef力a"c^/7力aeras/^fl7/z7a/7/ae8%,yl/e,力a/7oc0cciAyra"/7/e///占2.5%。上述含纤维素的培养液配方如下NaCl3%。，纤维素(稻草)5%。，尿素1%。，蛋白胨1%。，酵母粉O.5%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表^\项目*数"\曱烷含量(°/0二氧化碳含量(%)降解率(％)甲烷产率(m3/天*kg'TS)1558.841.276.20.383061.438.684.10.40实施例2:将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为40°C，pH为6.5，13抹菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为O^op/zaw尸er/ffe;2&i^占7.5%,67<w/7a//rc^o/Ke/75"占35%,"<5卯/尸。1//^"/0n;/^3/7s占3%，^^/"'"6"'o/76"WFe/w4%,Jce^6acfer/〃/w『oto7/占5%,^bZ/iz/o/z/o/^s/7s7/ge"a占5%，67c^"/d/〃/z7fer肌7iV/s占3%,67<xs^r/<37"yz7ce//o6/opar〃/Z7占5%，iy/7frop力o/z70/Lgs化/尸e2'50/o,yl/et/^/^i^rc/wa6arler/占10%,#e/^a/7C>6reK/々a"era/6cLr/p力i7/cw51占10%,船,A2/c^/7力aer3i"fW鹏/"'ae5%,#e*/76>co"iAyra朋/e///占2.5%。上述含纤维素的培养液配方如下NaCl5%。，纤维素(稻草)8%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表^\项目甲烷含量(°/。)二氧化碳含量(%)降解率(％)曱烷产率(m3/天*kg'TS)9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例3:将以下13林菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为40°C，pH为6.5，13株菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为0^0/A3ga/"er瓜e/7/^/75"占5%,C/<9i^r/fl7i//z7/^/7jroi"OiVe/LS"占30%,"esw/尸op^r/(9Kw/^sr/i1占l°/o，^/y"'"6"'o/76r/WFe/L95%,^cefo^"er/〃/z7traofl7/占5%,Ce/Yw/o/z/c^as/7<3f2.ge/a占5%,"c^f"V/〃/ff/ery77/〃o7s占2%,^Vc^fr/c7"/ffce//c^/<9/7<3/7//占3%，i)77/ro/7力6wo/ai",//e/6%,y^^"力a/705"arc/i2a6arle"'占20%,J/e/7a/7c^rei^/'(^"er占10%,Wsfl7/z;a/7/ae5%,yl/et/^/^coccwi"ra/7/7/e//7占3%。上述含纤维素的培养液配方如下NaCl7%。，纤维素(稻草)10%。，尿素4%。，蛋白胨3%。，酵母粉1.5%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例4:将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为2(TC，pH为6.5，13林菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为C/fo;力a^3尸er迈ei^s刀51占8°/o,67oi^r/o7i;/bpa/7/roi"o/Fe/75"占30%,/^w/ZoF/^r/oP7/7^3r/i"占1%，f/^t/o/7^rjWFeyw5%,Jce/o&"er/〃z;frao^'/占5%，Ce/Zz/ioyz^/^s/7sF/ge刀a占5%，C7os"/o7〃/fffe/vz//〃^^占2%,6Vc^Wd'鹏ce"c^/，r咖占3%,分/^r。/7力咖。/^W尸e2'6%,yJ/ef力s/2(9i^rc/;7a^rireri占17%,#e^<2/7c^re(^/6a"ei*占10%,yl/e^w/(9577力aersi^ac^yz^/7/ae5%，J/e/力a/70coccw51ra/M/e///占3%。上述含纤维素的培养液配方如下NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表^\项白天目A数甲烷含量(％)二氧化碳含量(%)降解率(％)曱烷产率(m3/天'kg'TS)1549.650.465.70.313055.444.676.10.36实施例5:将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为50°C,pH为6.5,13抹菌中各菌林的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为Q^o/力aga/^r/z7ei^a/2i"占7.5%，C/oi""/fl7ws;^;/roi10/1^/251占35%,Fi7/^2r7i1占3%,^/^Fr2>/^r/<9/76r/sc^p^/i14%，prac^///占5%,^5//〃/0/z70/7as/7<37/ge/7a占5%,"c^"/d/"/fffer/3/〃o7i1占3%，C/c^"/d/"/ffce//c0/o/7ar〃/ff占5%，5y/2/^c^力OM/as5%,J/e^^3/7osarc/iL36arAei7占10°/o，yl/ef力a/2c16re7/6acfera/^ar/pA/Z/cf/s占10%,yt/ef力a/7(957/aerai^sfl^/ffa/2/se5%，#e^^/20coccwi"ra///e///占2.5%。上述含纤维素的培养液配方如下NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表ii<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例6:将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为4(TC，pH为3.Q，13林菌中各菌林的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为0^0/7力a^"a/"e/7tfe/&/25占10%,C7os/r/〃i"/z/a//ro5^iVe刀s占25%，"esiz/ZbW6r/0ra7gar/s占1%,》i;f/r/F/6T/0/7办"、o/Fe/LS15%,JceM&3"er/咖,o力7占5%，Ce/7w/。咖加5"/7a「/ge朋占1%,C7(^"V/咖/"ei"/z;/〃fl7s占1%，67(9"r/fl7〃历ce/7c^/o;wr,占2.5%,5y"/i77/7力o卿加s^b/Z"e/5%,yl/efAs/JOS^rc/ws63_rle_r/占19%,#e,//ai2C^_rei//6a"erar6or/'/)力27/ciAS1占15%,#etA2/wi77i^e_r<3</afl^/7A2/7/<3<58%，#efAs"ococcwsra朋/e//7占2.5%。上述含纤维素的培养液配方如下NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例7将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为4(TC,pH为7.0,13株菌中各菌林的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另U为0^<9/力<3^3尸e/7ffe/2^/w占5%,C/os,r/o7〃/z/s;/r6^o/7e/75"占30%,"e卯/ZbK/々r/0ra/弱r/s占1%，》〃0^'"6"'o/76r/5"ci/moi"5%,爿c"c^"e"'鹏占5%，Ce//w/。/z7a7as/7<3Kige/L3占5%,C/o"rW〃巡/^i7ff/〃o7i1占2%,67o<s^r/^/〃/ce/7o6/o/^r〃/ff占3%，iy""。P力o历o刀a516%，#<5/"力3/76>5"3/*(7//7<36ari^er/占20%,#e,j^/c^reF/6<3"erar^r/pA/Z/ci/s占10%,/^^/^/7c^;7A3ei^s&t/^z7a/22'ae5%,#e/力a/ococcwi"ra/"/e7/7'占3%。上述含纤维素的培养液配方如下NaC15%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例8将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为40°C，pH为10.0,13抹菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为O^o/^aga尸er/se/^a/w占5%,t7c^"/d/〃/z7/^//rc^o/7e/75"占30%,"e卯7/bK/6Wora/wr/s占1%,t9〃0^'".々"'o/VbWKe/w5%,爿ce/^&c,e/v'〃/z7,0odi7占5%,Ce7/〃/ciyz7朋a5"/7ar/ge/7a占5%，6Voi""/o7y加/er/ff/〃d/i1占2%，C/oWr/fi^'i/yzce//o6/o;sr〃/ff占3%,5y/^ro/7力cwo/7a51^b/尸e/6%,#"力<3/205"<3/*"'加/^rler/占20%,y[/ef力a刀o6reK/^2"er<3r6cr//////cw5r占10%,yJ/e,A3/c^;力aerai^ac^/z7a/7/ae5%,#"/a"c>cocc〃sFa/2/2/e///占3%;含纤维素的培养液按以下方法配制NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%0,CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例9将以下13抹菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为40°C，pH为6,5，13林菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另寸为C/fc^A3^3/er;z7e/7^/LS"占5%，jOa/7/rc^(9/i/e"51占30%,"ei"Z7/尸07/^r/(9Kw/gar/s占1%，j9wO^"'"6"'o/V6r/s(9/Fe/7515%,ie"c^a"er/鹏,c^//占5%，tW/w/c^ooai1/7<3"^2<2占5%，C/o"r/V/鹏fer/ff/nV/s占2%,6Vc^"/力'〃/z7占3%,5)7^ro/7力ozffo加516%，yj/ef力ai20sarc//2(96arirer/占20%，#ef/a/o6rey/6a"erar6oWp力/7/cw51占10%,yf/e/力a/7C^/力aerss^c^/saT^ae5%，#e^7a刀ococciAS1ra/M/e///占3%。含纤维素的培养液按以下方法配制NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。将上述培养物以每隔7天转至配方相同的含纤维素的新鲜培养液中，在相同的条件下培养，不断传代，每一代培养物取部分于4。C保存。取于4。C保存的第64代复合菌培养物接种于配方相同的含纤维素的培养液中培养复活，密封静置培养，培养温度4(TC,pH7。第26代培养物在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实施例10将以下13林菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为40°C，pH为6.5，13林菌中各菌^f朱的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另ll为0^o;力a^3/"eryze/7^i^占5%,C/oW/"/o7y/z/5jO/rc^o/Ke/Ly占300/o,Ky7gaWs占1%,j9i/f7"."'6r/o/76"WFe/1515%，Jce&fec/"eriwz7fraoo7i占5%，Ce/7i/7cwo/3a51/7aK7》e/a占5%,fer辺/〃力'5"占2%,C/c^^t/o7m7ce//o6/o/><3_r"/占3%，iy/^roi力o/z/(/3a51^/尸e/6%，^^A3刀os^rc//^^sri-er/占20%，yt/e/^a/3o6reK/力acferai"6or/;力/7/cfAS占10%,/)/e/"Aa/2c^/7力aersi^afl^/ffs/2/ae5%，#e^s/7ciccicc〃5"ra"//e///占3%;含纤维素的培养液按以下方法配制NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。将上述培养物以每隔7天转至配方相同的含纤维素的新鲜培养液中，在相同的条件下培养，不断传代，每一代培养物取部分于4'C保存。取于4'C保存的第64代复合菌培养物接种于配方相同的含纤维素的培养液中培养复活，密封静置培养，培养温度^。C,pH7。第46代培养物在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>将以下13林菌混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为40°C，pH为6.5，13林菌中各菌抹的细胞数占复合菌总细胞数的比例分另'J为0^0/力<3^3尸e/7ze/2z^"i"占5%,C/oi^r/^/z/zzz;a/7/rc^(/Ke/7i"占30%,"es"//*^/^^^「w/gar/51占1%,j〃^yn'7/^T2'(9/76r/5^7p^/7S5%,Jce&6acfe/7〃/ff占5%，Ce/Yw/o/soMS/7a「/》e/7a占5%,6Vo5^n'o7〃/ff/"eiv^7i(//51占2%,6Vc^"/d/"/"ce//o6/o/7ari//占3%,5^"ro/"力omo"a51^b/尸e/6%，y1/e^a/705^rc2'/7a力ari:er/占20%,yl/ef力s/7C^rep^'^3"erar6or/;^///cw<s>占10%,yJ/e/"力5i2057力aersi^afi^/z/a/2/ae5%,yt/i^力a/2ococc〃51ra/M/e//7占3%;含纤维素的培养液按以下方法配制NaCl5%。，纤维素(稻草)5%。，尿素2%。，蛋白胨2%。，酵母粉1%。，CaC032%。，以水为溶剂，上述含量是指CaC03、NaCl、纤维素、尿素、蛋白胨、酵母粉的质量占培养基总质量的比例。将上述培养物以每隔7天转至配方相同的含纤维素的新鲜培养液中，在相同的条件下培养，不断传代，每一代培养物取部分于4。C保存。取于4。C保存的第64代复合菌培养物接种于配方相同的含纤维素的培养液中培养复活，密封静置培养，培养温度4(TC,pH7。第64代培养物在上述培养条件下复合菌的气体产量及纤维素降解率见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>权利要求1.一种复合菌的利记博彩app，其步骤为将分属兼性厌氧和严格厌氧的发酵性细菌、产氢产乙酸细菌和产甲烷菌的微生物以一定比例混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为30-50℃，pH为3-10。2.根据权利要求1所述的复合菌的制备方法，其特征在于所述含纤维素的培养液含CaC03、3-7%。NaCl,5-10%。纤维素，尿素1-4%。，蛋白胨1-3%。，酵母粉0.5-1.5%。，以水为溶剂。3.根据权利要求1或2所述的复合菌的制备方法，其特征在于所述由分属兼性厌氧和严格厌氧的发酵性细菌、产氢产乙酸细菌和产甲烷菌微生物所组成的菌群由下列菌林组成0^M力a卵/e，e刀"/^发酵噬纤维菌，细胞呈可弯曲杆状，兼性厌氧，有氧条件下分解纤维素产生乙酸、丙酸、琥珀酸、H2和C02等，同时可产生黄色素，菌株保藏编号ATCC19072，DSM9555;Jcefo&c&r/咖,^//伍氏醋酸杆菌，细胞椭圆或短杆，单生、成对偶尔成短链，严格厌氧，氧化氢、还原C02生成乙酸，也发酵果糖和其他底物产生乙酸，菌才朱保藏编号ATCC29683,顧1030;"e>s7///bF/^ATO/^r/s普通脱硫弧菌，弧状，以硫酸盐作为电子受体，还可以代谢碳水化合物、蛋白胨及其代谢中间产物，产生挥发酸，菌株保藏编号ATCC29579,DSM644;/7<37/^/2<3产黄纤维单胞菌，细长杆状，能分解纤维素，还可以利用葡萄糖和其他碳水化合物在好氧和厌氧条件下产酸，菌抹保藏编号ATCC482,DSM20109;^Oa^>/6r/o/76Wso/Fe;w溶纤维丁酸弧菌，弧状，严格厌氧，分解纤维素产生有机酸，同时可产生降解半纤维素的半纤维素酶，菌抹保藏编号ATCC19171,DSM3071;C/oWri力'，w;/rwo7Fe;w溶纸梭菌，直杆，严4各厌氧，水解纤维素产生乙酸、乙醇和H2等，菌抹保藏编号ATCC35413，DSM2782;"o^/vV/鹏ce/A^/o/ar咖产纤维二糖梭菌，弯曲或直杆状，水解纤维素产生纤维二糖等，菌株保藏编ATCC15832，DSM1351;67oWr/V/w/^r/ff/OV"弯曲或直杆状，水解纤维素产生乙酸、乙醇和H2等，菌抹保藏编号ATCC51846,DSM5398;iy"〃M力o卿/7M/^//W沃尔夫伴生单胞菌，轻微螺杆状，不产芽孢，分解丁酸产生乙酸和Hz，与产曱烷菌互营，菌株保藏编号DSM4212;J/eM^o^rc/朋^r^W巴氏曱烷八叠球菌不对称球形，能够不规则聚集成团，利用甲醇、三曱胺、乙酸和H2/C02生长产曱烷，菌抹保藏编号ATCC43241,DSM1538;i/"力犯o6reK/^"erar6or/p力/7/ci^嗜杉于木曱烷短^干菌，短杆菌，单生、成对或成串，只利用仏/(:02生长产甲烷，菌抹保藏编号ATCC33747,DSM1125;vl/ez^a/7M/7力aei^WaW鹏//se斯氏曱烷球形菌不规则球状，单生或成对，极端严格厌氧，利用H2/C02和曱酸盐生长产曱烷,要求乙酸等作为有机生长因子，菌抹保藏编号ATCC43021,DSM3091;ra/M/e///万氏曱烷3求菌，失见则或不失见则5求形，极端严;f各厌氧，利用H2/C02和曱酸盐生长产甲烷，菌林保藏编号ATCC35089,DSM1224。4.根据权利要求2所述的复合菌的制备方法，其特征在于所述的分属兼性厌氧和严格厌氧的发酵性细菌、产氢产乙酸细菌和产曱烷菌的各菌抹的细胞数占复合菌菌群总细胞数的百分比为0^o;力^a尸er/ze/2"w占5-10%，6705""/^/〃/;a/^ro5"o/Ke"s占25—35%,"esi/Z/oz/^r/ora/卵r/s占1-3%,》"^7"."'力"'o/"/6n'so/7e/5"2.5_5%，^c"o^3"er2'〃yz,od//占5—10%,CeZ/zz/cwo/^i"/7a占1—5%，6Voi"/r/fl7zy/ff/eryff/OV/s占1-5%,C7o"r油'咖ce77oW，r咖占2.5-5%，5y""o;力o灘加sIfo7/^/5-10%，#e^a;7c^<3rc//7<36arAer/占10—20%,yl/e^a/206re7/6a"er<3r6or//^///ci/s占10—15%，#e^^/w^》sera5^ad/7z^/2/ae5—8%，ifer力a/20coccwsra//2/e///占2.5—5%。全文摘要本发明公开了一种复合菌的利记博彩app，其步骤为将分属兼性厌氧和严格厌氧的发酵性细菌、产氢产乙酸细菌和产甲烷菌的微生物以一定比例混合后接种于含纤维素的培养液中，密封静置培养，培养温度为30-50℃，培养pH为3-10，所述含纤维素的培养液含CaCO₃，3-7‰NaCl，5-10‰纤维素，含尿素1-4‰，蛋白胨1-3‰，酵母粉0.5-1.5‰，以水为溶剂。本方法可以制作具有高效降解纤维素能力并且能产沼气的复合菌。文档编号C12N1/22GK101481676SQ20091010308公开日2009年7月15日申请日期2009年1月19日优先权日2009年1月19日发明者代丽蓉,刘来雁,尹小波,辉张,张云飞,磊承,强李,辉罗,宇邓,马诗淳申请人:农业部沼气科学研究所