专利名称：一种甘蔗抗黑穗病鉴定方法
技术领域：
本发明属于植物抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种甘蔗抗黑穗病鉴定方法。
背景技术：
甘蔗黑穗病是世界性的主要甘蔗病害之一，培育抗黑穗病的新品种是防治和控制 该病最经济、环保而有效的措施，抗黑穗病作为甘蔗品种选育中一个不可缺少的目标，在育 种过程中需要进行抗黑穗病鉴定筛选。抗黑穗病鉴定的方法影响着抗病育种的成效，迄今 为止，国内的甘蔗品种对黑穗病的抗性鉴定采用人工接种和田间种植鉴定法，根据最终累 积的丛感病率和茎感病率，采用固定的1 9级分类法进行抗性分级，收获后继续留宿根观 察，最后进行评价和定级，目前采用的方法受环境互作影响较大，不易控制，试验操作复杂， 分级标准不易掌握，鉴定的结果与田间抗性差异大，不能准确反映品种的抗病性。
发明内容
本发明的目的是提出一种克服上述不足的甘蔗抗黑穗病鉴定方法，该方法能够更 客观地反映甘蔗鉴定材料的固有抗性水平，可以把环境的互作影响减少到最小，使鉴定结 果更准确。 本发明采用标准品种回归分析鉴定法，即在供试品种中包含一套已知抗性的品 种，作为标准对照品种，通过回归分析把待测无性系的抗性表现与标准对照品种相比较，进 行评价和定级。 本发明包括以下步骤 1、通过至少3次试验，筛选出一套标准对照品种，其中包含至少两个高抗，两个中 抗和两个感病标准对照品种。 2、将标准对照品种与参与试验鉴定材料同时进行人工浸渍接种鉴定试验，参试材 料放入悬浮液中浸渍接种10min，取出后置25t:左右的温室内24小时后种植于大田，在试 验中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种。 3、甘蔗出苗后记录出苗数，在5-6月后收获时进行评价，计数每行上总丛数和感 染丛数；留宿根，同样记录出苗数和计数每行上总丛数和感染丛数，根据总丛数和感染丛数 进行丛感病率评价，计算感病率。 4、通过感染百分率进行变异分析通过感染标准百分率(X)及它们的标准分级 (Y)的回归方程来计算测定无性系从而进行分级。
本发明的优点和有益效果 1、本发明能够更客观地反映甘蔗鉴定材料的固有抗性水平，可以把环境的互作影 响减少到最小，使鉴定结果更准确，所确定的抗性等级或类型就能够更客观地反映所鉴定 品种固有的抗性水平。 2、试验中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种，多个标准对照 品种可使鉴定结果更准确。
3、本发明随着越来越多的标准品种的获得，标准分级通过多次试验结果的均值， 不断精确化，从而可以把环境互作的影响降低到最小，且分级值为精确到小数点后1位的 连续数值，使分级更加精细，参试材料感染百分率(X)及它们的分级(Y)回归曲线图为连续 的对数函数曲线。
具体实施例方式
本发明的方法步骤是
—、筛选标准对照品种 1、通过至少3次试验，筛选出一套标准对照品种。 2、在试验中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种。 二、人工浸渍接种鉴定试验 1 、采集甘蔗黑穗病病菌孢子。 a、收集带病的部分，从带病位置以下10-20cm剪下，除去绿叶，放在包里，只收集 带有很多孢子的部分。 b、把收集回来的带病部分放在相应较低温、干燥、但不结冰的地方，用塑料或者蜡
纸垫着。 c、让它们充分干燥1-2周直到彻底干燥为止，这对维持孢子的成活是很必要的。
孢子必须在湿度很低的环境下保存。 d、通过筛网筛带病部分从而收集孢子。 e、称量收集孢子的重量，然后放入一个大广口瓶中的纸包内，大广口瓶中放有硅 胶干燥剂，用凡士林给广口瓶封口 。 f 、在种植试验的前几个星期，对孢子进行存活试验。取2-3克的少量孢子，并数孢 子数-100毫升消过毒的蒸馏水放入最少0. 1克孢子(加0. 05%的Tween 20来使孢子分 散，为了方便准确计数，稀释液可能需要调节到和孢子数量相当的水平)，数血球计中的孢 子，计算每克中的孢子数。成活情况——在琼脂液中放0. 5ml孢子悬浮液，以28-3(TC过夜 并计数萌发孢子的百分比。 2、每个供试材料取80个均为双芽茎段的健康芽，分成四捆，检测接种黑穗病病菌 孢子萌芽率，并配制黑穗病病菌浓度为5X 106孢子/ml的悬浮液，将参试材料放入悬浮液 中浸渍接种10min，取出后用塑料袋保湿，置25t:左右的温室内24小时后播种于大田，试验 采用随机区组设计，设4个重复，单行区，行长5. 0米，行距1. 0米，每小区每品种20个芽， 接种后种植大田。 3、在鉴定试验中将标准对照品种与参试鉴定材料同时进行人工浸渍接种鉴定，在 试验中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种。
三、感病百分率调查 1、甘蔗出苗后记录出苗数，在5-6个月后进行评价，计数每行上总丛数和感染丛 数。留宿根，5-6个月后进行评价，计数每行上总丛数和感染丛数。
2、根据总丛数和感染丛数进行丛感病率评价，计算感病率。
四、结果分析 1、将抗黑穗病标准品种各次试验的平均感病百分率(X)和标准分级(Y)用SPSS或SAS统计软件进行回归分析，回归分析采用对数函数模型(Logarithmic)，推出回归方程 和回归曲线图。 随着越来越多的标准品种的获得，标准分级通过多次试验结果的均值，不断精确 化，从而可以把环境互作的影响降低到最小。 2、将试验材料的平均感病百分率通过对数函数回归方程式及回归曲线图来计算 试验无性系的分级值，从而进行分级，最后确定抗病类型。 权利要求
一种甘蔗抗黑穗病鉴定方法，其特征在于包括以下步骤1)、通过至少3次试验，筛选出一套标准对照品种，其中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种；2)、将标准对照品种与参与试验鉴定材料同时进行人工浸渍接种鉴定试验，参试材料放入悬浮液中浸渍接种10min，取出后置25℃左右的温室内24小时后种植于大田，在试验中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种；3)、甘蔗出苗后记录出苗数，在5-6月后收获时进行评价，计数每行上总丛数和感染丛数；留宿根，同样记录出苗数和计数每行上总丛数和感染丛数，根据总丛数和感染丛数进行丛感病率评价，计算感病率；4)、通过感染百分率进行变异分析通过感染标准百分率(X)及它们的标准分级(Y)的回归方程来计算测定无性系从而进行分级。
全文摘要
一种甘蔗抗黑穗病鉴定方法，通过至少3次试验，其中包含至少两个高抗，两个中抗和两个感病标准对照品种；筛选出一套标准对照品种，将标准对照品种与参与试验鉴定材料同时进行人工浸渍接种鉴定试验，甘蔗出苗后记录出苗数，收获时计数每行上总丛数和感染丛数；留宿根，同样记录出苗数和计数每行上总丛数和感染丛数，根据总丛数和感染丛数进行丛感病率评价，计算感病率；通过感染标准百分率(X)及它们的标准分级(Y)的回归方程来计算测定无性系从而进行分级；该方法能够更客观地反映甘蔗鉴定材料的固有抗性水平，可以把环境的互作影响减少到最小，使鉴定结果更准确。
文档编号C12Q1/18GK101696446SQ20091009508
公开日2010年4月21日 申请日期2009年10月26日 优先权日2009年10月26日
发明者卢文杰, 吴才文, 夏红明, 尹兴祥, 崔杰, 罗志明, 范源洪, 赵培方, 黄应昆 申请人:云南省农业科学院甘蔗研究所;