专利名称：一种生物催化转化松果菊苷生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法
技术领域：
本发明涉及一种利用生物催化转化生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法。
背景技术：
肉苁蓉(HerbaCistanches)是列当科(Orobanchaceae)肉灰蓉属(C7Wawc/ze Hoffmg.et Link)多年寄
生草本植物。现代分析表明'，肉苁蓉的主要活性成分为苯乙醇苷类、苯甲醇苷类、环烯醚賠苷类、木 脂素苷类、低聚糖类衍生物、D-甘露醇和甜菜碱等。苯乙醇苷类(Phenylethanoid Glycosides, Ph Gs) 包括松果菊苷(Echinacoside)、毛蕊花糖苷(Acteoside)等活性物质。通过肠内菌代谢研究发现，苯 乙醇苷类成分在胃肠道中的运动轨迹，包括体内吸收、分布、代谢和排泄过程变化规律，随个体间肠 内菌群的差别及对药物前体代谢能力的差别，而表现出生物利用度与疗效很大的差异。毛蓝花糖苷单 体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸收率和特殊的药理活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用肉苁蓉提取物，通过工业固定化酶催化转化松果菊苷生产毛蓝花糖 苷单体化合物的生产方法。
本发明的方法是以肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常固定化酶工业生产中的吸附法固定 方式获得的(3-葡萄糖苷酶工业酶制剂固定化酶作为生物催化剂，催化水解底物中苯乙醇苷类成分的松 果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂、定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物；将反应液通过通常 的分离提纯及浓縮、干燥工艺，获得毛蕊花糖苷单体化合物；所述的肉灰蓉提取物是以肉欢蓉为原料， 经通常提取分离工艺获取的肉苁蓉提取物，其苯乙醇苷类化合物含量不低于3.2%;催化反应过程初始 底物浓度为0.1% 30%;温度为38'C 6(TC; pH为4.0 5.8;时间为3.5h 10h;催化反应过程反应 物中的(3-葡萄糖苷酶活力为lU/g 1000U/g。通过调整分离提纯工艺条件，收获的毛蕊花糖苷单体化 合物纯度百分比含量可达40% 卯％。
本发明方法的具体步骤包括
1、采用肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常固定化酶工业生产中的吸附法固定方式获得的 (3-葡萄糖苷酶工业酶制剂固定化酶作为生物催化剂，经通常工业固定化酶反应器进行催化反应，催化 水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催 化反应过程初始底物浓度为0.1% 30%,最佳初始底物浓度为1% 15%;温度为38°C 60°C，最佳 温度为42。C 50。C; pH为4,0 5.8，最佳pH为4.5 5.3;时间为3.5h 10h，最佳时间为4h 6h;催
4化反应过程反应物中的P-葡萄糖苷酶活力为lU/g 1000U/g，最佳酶活力为10U/g 100U/g;亦可再添 加K+、 Na+、 Mi^+或C(^+作为催化反应的激活剂以促进酶的活性，添加的激活剂在初始反应物中的浓 度为0.1mol/L 3mol/L，最佳浓度为0.5mol/L 1.5mol/L;经测定，催化反应过程松果菊苷转化为毛蕊 花糖苷单体化合物的转化率达77.6% 95.1%;
2、 采用通常工业膜分离工艺装置超滤膜或陶瓷膜，选择性筛分及截留除去经步骤1反应后的反应 液中的多糖、蛋白质等大分子杂质以及微粒和亚微粒等杂质；亦可再通过纳滤膜，进一步选择性筛分 及截留除去氨基酸、D-甘露醇、甜菜碱等小分子杂质，或/和采用通常工业大孔树脂吸附分离工艺，或 /和采用通常工业层析柱分离纯化工艺，或/和采用通常模拟移动床色谱分离系统工艺或通常多功能色谱 分离工艺进一步分离纯化；获得不同纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、 将步骤2获得的毛蕊花糖苷成分提取液，通过通常工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓縮工艺， 获得固形物含量为30% 56%的浓縮物；再通过工业喷雾干燥工艺或通常的其它工业干燥方法，获得 毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物。收获的毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量可达40% 90%。
本发明方法涉及的肉苁蓉提取物，可以是选用符合《中华人民共和国药典》2005年版收载的列当 科植物肉苁蓉C7W""cfe <ieseW/co/a Y.C.Ma或管花肉欢蓉C7stowc/ze ^to/ora (Schrenk) Wight干燥带鳞叶 的肉质茎，经通常工业中药提取分离工艺获取的商品级肉苁蓉提取物，可以是水或/和乙醇提取物，其 主要指标成分苯乙醇苷类化合物含量不低于3.2%;也可以是按照申请号为200710032810.5， 200710032807.3, 200710032806.9或200710032803.5的专利申请公开的方法得到的肉灰蓉提取物。
本发明方法涉及的工业生产中的吸附法固定方式获得固定化酶，通常是将p-葡萄糖苷酶工业酶制 剂酶液与吸附剂接触，再经洗涤除去不吸附的酶液便可以制得固定化酶，包括物理吸附法、离子吸附 法；吸附剂包括微孔玻璃、羟基磷灰石、赛珞玢、大孔型合成树脂、特种陶瓷、DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖凝胶、AmberliteIRA-93、 IRA-410、 IRA-900、 Dowex-50、 Amberlite CG-50、 IRC-50、 IR-120， 可选用通常国外及国内商品。
本发明方法涉及的(3-葡萄糖苷酶工业酶制剂，包括p-葡萄糖苷酶及富含p-葡萄糖苷酶的纤维素酶、 植物提取复合酶、植物水解复合酶。
本发明方法涉及的工业固定化酶反应器可以是通常工业搅拌罐式反应器、固定化床反应器或流化 床反应器。
本发明方法涉及的工业膜分离工艺装置的超滤膜或陶瓷膜的相对分子质量为1000 4500，最佳的 相对分子质量为1500 3500;纳滤膜相对分子质量为200 300，最佳的相对分子质量为250 280;超 滤膜可选用CA或CTA、 PAN、 PS、 PSA、 PES、 PVDF、 PEK、 SPS的系列膜型号等商品超滤膜；陶 瓷膜可选用A1203、 Zr02、 Si02、 Ti02、 SiOrAl203、陶瓷氧化物或陶瓷系列型号等商品陶瓷膜；纳滤 膜可选用4040-UHT-ESNA、 8540-UHY-ESNA、 ESNA-FREE650、 ESNA-FREE1700、 NTR7450HG、 NTR729HG、 NF-CA膜、NF-CA巻式元件或中空纤维件的系列膜型号等商品纳滤膜；大孔吸附树脂可 选用XAD、 Diaion、 SP、 Posapak或Chromosorb,或者非离子型高分子吸附剂AB-8、 CHA-III、 CAD-40、DlOl、 D301、 D296、 D396R、 D4006、 D4020、 D3520、 DA201、 DM301、 D130、 GDX104、 HPDIOO、 HPD450、 HPD500、 HPD600、 HPD8、 H107、 JD-KW、 LD601、 LD605、 ME-1、 ME-2、 ME-3、 NKA-2、 NKA-9、 R-A、 S8、 SIP、 WLD或X-5型等商品大孔吸附树脂；模拟移动床色谱分离系统，多功能色 谱分离系统，可以选用MB、 MD、 ME、 MF制备型色谱分离层析仪、SMBC实验型、SMBC中试型、 XZ12E-4L型、XZ20Z-2L型及SMBC工业化连续制备色谱型的色谱分离系统。本发明方法涉及的超滤 膜、陶瓷膜、纳滤膜、大孔吸附树脂、非离子型高分子吸附剂、工业层析柱、移动床色谱分离系统、 多功能色谱分离系统，可选用通常国外及国内商品。
本发明方法涉及的工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓縮工艺的温度一般为42'C 8(TC，最佳温 度为45。C 65'C;采用的工业喷雾干燥工艺，干燥塔进风温度一般为125。C 285。C，最佳进风温度为 135°C 185°C。
本发明方法涉及的其它工业干燥的方法包括通常工业滚筒干燥、气流干燥、流化床干燥、微波真 空干燥、微波干燥、真空干燥及热风循环干燥，干燥温度一般为50 100°C,最佳为60 8(TC。
药理实验表明，毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸 收率和特殊的药理活性，易于被小肠吸收而通过血脑屏障进入脑内，对脑细胞保护具有显著的药理活 性，可应用于防治脑神经退行性疾病和抑制脑细胞神经元凋亡、老年痴呆症等脑疾病的无毒副作用天 然药物开发，可望开发成为屈家二类新药。本发明方法的推广实施，将使肉双蓉这一名贵的中药更好 地造福于人类的健康。
本发明方法生产的毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物，可直接用于医药原料，或作为化妆 品原料，也可作为原料或复方原料生产口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂、冲剂、丸剂或袋泡茶等功能 性保健食品。
本发明方法中涉及的各种量的百分比(％)，除了另有说明外，均为重量百分比。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例一
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为42%的肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中的 物理吸附法羟基磷灰石作为吸附剂的固定方式，获得p-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经通常 固定化床反应器进行连续式催化反应，加入在初始反应物中浓度为0.1mol/L的K+作为催化反应的激活 剂，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化 合物；催化反应过程初始底物浓度为15%，温度为42'C， pH为4.8,每批次催化反应时间为5.5h，连 续进行催化反应10批次；催化反应过程反应物中的(3-葡萄糖苷酶活力为60U/g;经检测，底物中松果 菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达95.1 %;
2、 采用相对分子质量为1500的超滤膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为200的纳滤膜进行纳滤，然后采用AB-8型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离，并经工业层析柱分离纯化工艺进 一步分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、通过工业真空浓縮工艺，温度为50'C，获得固形物含量为30%的浓縮物；进一步通过工业喷 雾千燥，干燥塔进风温度为125°C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状 物中(以干物质计)毛蕊花糖苷单体化合物纯度(百分比含量)为89.8%。
实施例二
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为3.2%的肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中 的物理吸附法赛珞玢作为吸附剂的固定方式，获得P-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经通常固 定化床反应器进行连续式催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、 定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程初始底物浓度为5%，温度为50'C， pH为4.2，每 批次催化反应时间为7h，连续进行催化反应12批次；催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为 4U/g;经检测，底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达82.2%;
2、 采用相对分子质量为4000的超滤膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为250的纳 滤膜进行纳滤，然后采用CHA-III型的工业大孔吸附树脂进行吸附分离提纯，收获较高纯度的毛蕊花糖 苷成分提取液；
3、 通过工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为4S'C，获得固形物含量为38%的浓縮物；进一步通过工 业真空干燥工艺，干燥温度为60'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干 燥物中(以干物质计)毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为51.2%。
实施例三
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为25%的肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中的 物理吸附法大孔型合成树脂作为吸附剂的固定方式，获得P-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经 通常工业流化床反应器进行连续式催化反应，加入在初始反应物中的浓度为0.5mol/L的Na+作为催化 反应的激活剂，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花 糖苷单体化合物；催化反应过程初始底物浓度为10%，温度为42'C, pH为4.8，每批次催化反应时间 为4.5h，连续进行催化反应8批次；催化反应过程反应物中的(3-葡萄糖苷酶活力为1000U/g;经检测， 底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达94.1%;
2、 采用相对分子质量为4000的陶瓷膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为300的纳 滤膜进行纳滤，然后采用XAD大孔吸附树脂进行吸附分离，并进一步经工业层析柱分离纯化工艺，再 采用XZ12E-4L型多功能色谱分离系统工艺分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、 通过工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为45°C，获得固形物含量为40%的浓缩物；进一步通过工 业喷雾干燥工艺，干燥塔进风温度为220'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收 获的粉状物中(以干物质计)毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为88.6%。
7实施例四
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为28.5%的肉灰蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中 的物理吸附法DEAE-葡聚糖凝胶作为吸附剂的固定方式，获得(3-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂， 经通常工业搅拌罐式反应器进行连续式催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的 一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程初始底物浓度为29.5%，温度为6(TC， pH为5.2,每批次催化反应时间为5h，连续进行催化反应16批次；催化反应过程反应物中的p-葡萄 糖苷酶活力为200U/g;底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达82.1%;
2、 采用相对分子质量为1500的超滤膜对催化反应液进行超滤，再采用XZ20Z-ZL型多功能色谱 分离系统进行分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、 通过工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为56°C，获得固形物含量为35%的浓縮物；进一步通过滚 筒干燥，干燥温度为IO(TC，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以 干物质计)毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为51.3%。
实施例五
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为8.2%的肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中 的物理吸附法IRC-50作为吸附剂的固定方式，获得p-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经通常工 业搅拌罐式反应器进行连续式催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄 糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程初始底物浓度为0.1%，温度为58'C， pH为 4.0，每批次催化反应时间为4h，连续进行催化反应4批次；催化反应过程反应物中的(3-葡萄糖苷酶活 力为2U/g;底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达78.6%;
2、 采用相对分子质量为2000的超滤膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为250的纳 滤膜进行纳滤，获得较高纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、 经进一步通过工业微波真空干燥工艺，干燥温度为50'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物； 经分析测定，所收获的干燥物中(以干物质计)毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为40.3%。
实施例六
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为12%的肉双蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中的 物理吸限C-120作为吸附剂的固定方式，获得植物水解复合酶固定化酶作为生物催化剂，经通常工业 搅拌罐式反应器进行间断式催化反应，加入在初始反应物中浓度为3mol/L的Cc^+作为催化反应的激活 剂，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化 合物；催化反应过程初始底物浓度为30%,温度为38'C, pH为5.8，时间为3.8h，催化反应过程反应 物中的(3-葡萄糖苷酶活力为8U/g;底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达77.6%;
2、 采用相对分子质量为2000的陶瓷膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为200的纳 滤膜进行纳滤，获得较高纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、 通过工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为46°C,获得固形物含量为36%的浓缩物；进一步通过工业气流干燥工艺，干燥温度为100'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉 状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为45.2%。
实施例七
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为22.3%的肉苁蓉提取物催化反应底物，采用通常工业生产中的物 理吸附法羟基磷灰石作为吸附剂的固定方式，获得p-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经通常固 定化床反应器进行连续式催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、 定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程初始底物浓度为9%，温度为49'C， pH为5.3,每 批次催化反应时间为4.5h，连续进行催化反应11批次；催化反应过程反应物中的(3-葡萄糖苷酶活力为 120U/g;底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达83.2%;
2、 采用相对分子质量为3000的陶瓷膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为250的纳 滤膜进行纳滤，然后采用SMBC工业化连续制备色谱型分离系统工艺分离提纯，获得较高纯度的毛森 花糖苷成分提取液；
3、 通过工业真空浓縮工艺，温度为65°C，获得固形物含量为40%的浓縮物；进一步通过微波干 燥，干燥温度为9(TC,获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥物中(以干 物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为51.5%。
实施例八
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为38.9%的肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中 的物理吸附法DEAE-纤维素作为吸附剂的固定方式，获得纤维素酶固定化酶作为生物催化剂，经通常 固定化床反应器进行连续式催化反应，加入在初始反应物中的浓度为0.1mol/L的Na+作为催化反应的 激活剂，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蓝花糖苷单 体化合物；催化反应过程初始底物浓度为8%，温度为54'C， pH为4.7，每批次催化反应时间为3.5h， 连续进行催化反应7批次；催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为100U/g;经检测，底物中松 果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达88.2%;
2、 采用相对分子质量为1500的超滤膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为300的纳 滤膜进行纳滤，然后采用X-5大孔吸附树脂进行吸附分离提纯，获得较高纯度的毛蕊花糖苷成分提取 液；
3、 通过工业真空浓缩工艺，温度为60°C，获得固形物含量为43%的浓縮物；进一步通过工业喷 雾干燥工艺，干燥温度为185°C,获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的粉状物 中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为75.2%。
实施例九
1、采用苯乙醇苷类化合物含量为8.5%的肉欢蓉提取物作为催化反应底物，采用通常工业生产中 的物理吸附法羟基磷灰石作为吸附剂的固定方式，获得P-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经通常固定化床反应器进行连续式催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄 糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；催化反应过程初始底物浓度为5%，温度为4(TC, pH为4.5， 每批次催化反应时间为8.5h，连续进行催化反应13批次；催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力 为1.3U/g;底物中松果菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达77.7%;
2、 采用相对分子质量为3000的陶瓷膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为300的纳 滤膜进行纳滤，然后采用SP大孔吸附树脂进行吸附分离，获得较高纯度的毛蓝花糖苷成分提取液；
3、 通过工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为48°C,获得固形物含量为45%的浓縮物；通过工业热风 循环干燥工艺，干燥温度为10(TC,获得毛蕊花糖苷单体化合物的干燥物；经分析测定，所收获的干燥 物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为50.3%。
实施例十
1、 采用苯乙醇苷类化合物含量为35.8%的肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常]:业生产中 的物理吸附法IR-120作为吸附剂的固定方式，获得p-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，经通常同 定化床反应器进行连续式催化反应，加入在初始反应物中的浓度为0.3mol/L的K+作为催化反应的激活 剂，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化 合物；催化反应过程初始底物浓度为3.8%,温度为48'C, pH为4.8，每批次催化反应时间为10h,连 续进行催化反应10批次；催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为20U/g;经检测，底物中松果 菊苷转化为毛蕊花糖苷单体化合物转化率达84.3%;
2、 采用相对分子质量为2000的超滤膜对催化反应液进行超滤，再通过相对分子质量为250的纳 滤膜进行纳滤，然后采用R-A大孔吸附树脂进行吸附分离，并进一步经工业层析柱分离提纯，获得较 高纯度的毛蕊花糖苷成分提取液；
3、 通过工业薄膜蒸发浓縮工艺，温度为4rC,获得固形物含量为43%的浓縮物；经进一步通过 工业喷雾干燥工艺，干燥温度为285'C，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物；经分析测定，所收获的 粉状物中(以干物质计)，毛蕊花糖苷单体化合物纯度百分比含量为83.2%。
权利要求
1.一种利用生物催化转化生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法，以肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用通常固定化酶工业生产中的吸附法固定方式，获得β-葡萄糖苷酶工业酶制剂固定化酶作为生物催化剂，催化水解底物中的松果菊苷定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物；将反应液通过通常的分离提纯及浓缩、干燥工艺，获得毛蕊花糖苷单体化合物；所述的肉苁蓉提取物是以肉苁蓉肉质茎，经通常提取分离工艺获取的肉从蓉提取物，其苯乙醇苷类化合物含量不低于3.2％；催化反应过程初始底物浓度为0.1％～30％；温度为38℃～60℃；pH为4.0～5.8；时间为3.5h～10h；催化反应过程反应物中的β-葡萄糖苷酶活力为1U/g～1000U/g。
2. 按照权利要求1所述的方法，其特征是该方法的具体步骤包括(1) 、采用肉苁蓉提取物作为催化反应底物，利用通常固定化酶工业生产中的吸附法同定方式，获 得p-葡萄糖苷酶工业酶制剂固定化酶作为生物催化剂，经通常工业固定化酶反应器进行催化反应，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配体末端的一个葡萄糖基、定向转化为毛蕊花糖苷单体化合物； 催化反应过程初始底物浓度为0.1% 30%，温度为38'C 60。C, pH为4.0 5.8,时间为3.5h 10h，催 化反应过程反应物中的(3-葡萄糖苷酶活力为lU/g 1000U/g;(2) 、采用通常工业膜分离工艺装置超滤膜或陶瓷膜，选择性筛分及截留除去经步骤(l)反应后的反 应液中的多糖、蛋A质人分子杂质以及微粒和亚微粒杂质，或再通过纳滤膜，进一步选择性筛分及截 留除去氨基酸、D-甘露醇、甜菜碱小分子杂质；获得毛蕊花糖苷成分提取液；(3) 、将步骤(2)获得的毛蕊花糖苷成分提取液，通过通常工业真空浓縮工艺或T.业薄膜蒸发浓縮1: 艺，获得固形物含量为30% 56%的浓縮物；再通过工业喷雾干燥工艺，或通常的其它工业干燥方法， 获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物。
3. 按照权利要求1或2所述的方法，其特征是催化反应过程初始底物浓度为1% 15%;温度为 42°C 50°C; pH为4.5 5.3;时间为4h 6h;催化反应过程反应物中的p-葡萄糖苷酶活力为10U/g 100U/g。
4. 按照权利要求1或2所述的方法，其特征是催化反应过程中再添加K+、 Na+、 Mr^+或C^+作为 催化反应的激活剂，添加的激活剂在初始反应物中的浓度为0.1mol/L 3mol/L。
5. 按照权利要求4所述的方法，其特征是添加的K+、 Na+、 Mn"或Co"激活剂在初始底物中浓度 为0.5mol/L 1.5mol/L。
6. 按照权利要求2所述的方法，其特征是在步骤(2)中再采用通常工业大孔树脂吸附分离T:艺，或/和通常i:业层析柱分离纯化工艺，或/和通常模拟移动床色谱分离系统r.艺或通常多功能色谱分离r. 艺，进一步分离纯化。
7. 按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中所述的超滤膜或陶瓷膜的相对分子质量为 1000 4500;纳滤膜相对分子质量为200 300。
8. 按照权利要求1或2所述的方法,其特征是所述的p-葡萄糖苷酶丄业酶制剂包括p-葡萄糖苷酶、纤维素酶、植物提取复合酶或/和植物水解复合酶。
9. 按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(3)中所述的工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓縮 l::艺的温度为42。C 80'C,工业喷雾干燥工艺的干燥塔进风温度为125。C 285X:，其它工业干燥的方法干燥温度为50 1(XTC。
10. 按照权利要求2所述的方法，其特征是步骤(3)中所述的工业真空浓縮工艺或工业薄膜蒸发浓 縮工艺的温度为45'C 65'C，工业喷雾干燥工艺的干燥塔进风温度为135'C 185'C，其它工业干燥的 方法干燥温度为60 8(TC。
全文摘要
本发明提供一种生物催化转化松果菊苷生产毛蕊花糖苷的方法。利用肉苁蓉提取物作为催化反应底物，采用β-葡萄糖苷酶固定化酶作为生物催化剂，催化水解底物中的松果菊苷使其葡萄糖基配体末端断裂、定向转化为高活性的毛蕊花糖苷单体化合物；再通过分离提纯、浓缩及干燥工艺，获得毛蕊花糖苷单体化合物的粉状物或干燥物。收获的毛蕊花糖苷单体化合物粉状物或干燥物纯度百分比含量可达40％～90％。毛蕊花糖苷单体化合物具有小分子和低极性的特征，在药物吸收中展示良好的吸收率和特殊的药理活性。
文档编号C12P19/00GK101619337SQ200910041560
公开日2010年1月6日 申请日期2009年7月31日 优先权日2009年7月31日
发明者昕 刘, 刘小卓, 庄沿磊, 徐运娟, 招淑燕, 曾小红, 爽 赵, 钟倩莉, 黄建威 申请人:中山大学;深圳学者生物有限公司;广州绿色盈康生物工程有限公司