专利名称：批量生产乳状病芽孢杆菌的方法
技术领域：
本发明批量生产乳状病芽孢杆菌的方法涉及生物技术领域，尤其涉及釆用 生物学手段制取芽孢应用于农林牧业控制金龟子和蛴螬的危害技术。
背景技术：
金龟子是种类多、危害大的地上害虫，取食植物叶片，蛴螬是金龟子的幼虫，
也是种类多、危害大的地下害虫，取食农作物或花草林木的根系，危害近150 种植物，危害严重时可造成农作物缺苗断条或草木成片枯死。由于金龟子一生 经过的卵、幼虫、蛹和成虫四个虫态阶段中，前三个虫态都是在耕地内度过， 目前防治方法以种子拌药和浇灌农药为主，用药又多以内吸性强的剧毒农药为 主，如敌杀死、久效磷、3911、 1059、呋喃丹等，不仅防治费用高，效果差， 而且还成为农作物农药残留量居高不下的主要原因，更是无公害蔬菜栽培的主 要障碍，由于化学除草技术的普及，农田中耕大幅度减少，目前农田中金龟子 和虫齐螬都呈发展趋势，控制金龟子和蛴螬发展，已为全社会关注。国外在上世 纪用活体跻螬已成功研制出金龟甲芽孢杆菌，这种乳状病芽孢杆菌为专性寄生， 对人、畜、家禽无毒无害，属绿色环保型产品，是一种理想的微生物杀虫剂， 并能在土壤中长期存活，而染病的金龟子和蛴螬又不断增加土壤中芽孢菌的数 量，通过自然传播产生长期的防治效果，其对金龟子和蛴螬毒性之强、控制时 间之久已卓见成效，为了开发这一产品，全世界对金龟子芽孢杆菌形成芽孢的 过程进行了广泛的的研究，但至今尚无一种较好的方法在离体条件下产生大量 具有侵染力的芽孢，要生产菌剂又必须通过活体进行培养，近年来国内外专家 正试图用人工培养该菌，但从金龟子体内获得的芽孢很难在人工培养基上萌发， 解除休眠的营养体对营养要求苛刻，人工培养几乎没有进展，能尽快寻求规模 化生产乳状病芽孢杆菌的方法，来突破这一生物制剂生产、应用的瓶颈，将对 从传统农业向优质高效和可持续发展的现代农业转变有着极其重要的意义。技术方案
本发明的目的是给农作物防治金龟子和蛴螬害虫提供乳状病芽孢杆菌生物 农药原料，不仅要具有培育方法简便、生产成本低廉，并要能规模化生产，而 且要能周年期培养出活性强的乳状病芽孢杆菌，及时提供生产应用。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是批量生产乳状病芽孢杆菌 的方法以活体基质培养为途径，利用金龟子生态特性，釆用封闭式养殖栏建造、 诱捕金龟子集中产卵孵化铜养、分选适龄蛴螬、接种感染培养、制取乳状病芽 孢杆菌五道步骤，首先选用有机物质配置疏松饲养基料，在田间建造网栅，网 栅内建养殖栏，栏底铺设网纱，网纱上覆饲养基料得封闭式养殖栏；再在金龟 子出土活动期，晚间在其聚集活动区架设趋光灯，断其灯管外铁丝网电源，诱 捕金龟子后及时投放网栅中，并在养殖栏插上带叶鲜果枝条，供金龟子取食和 适时交配产卵，并孵化得小挤螬集中饲养；及时给养殖栏洒水与排水，保持饲 养基料湿度在30——40%之间，当蛴螬长至2——3克重时，选取出3龄大蛴螬； 用芽孢杆菌加无菌水配置成每亳升含1亿个以上芽孢悬液，给每头大蛴螬体腔 内注射0.01亳升，放入有饲养基料的饲育缸中，在20-30。C温度下饲养；鲚螬 感染得败血症后，体内芽孢大量积累，致相继死亡后，充满芽孢时，取出跻螬 研成碎浆，加无菌水和少量滑石粉稀释并调配成每亳升含1亿个以上芽孢菌液， 再在室温下凉干，最后研粉过100目筛成细粉分装，得乳状病芽孢杆菌。
本发明的创新点有五点， 一是养殖栏上建网栅下辅网纱，不仅能有效防止 金龟子外飞和挤螬钻入土层，而且能遮阴、渗水，给金龟子和鲚螬提供了良好 的生存环境；二是养殖栏剪插鲜果枝条，不仅给金龟子提供了食物，同时也给 金龟子提供了交配场所；三是用有机物质配制疏松饲养基料，即能方便金龟子 白天藏于饲养基料中并产卵，也能确保蛴螬有足够的食物和疏松的生活环境； 四是选取三龄蛴螬接菌感染后在词育缸中控温培养，有利于萌发芽孢菌营养体 快速均匀生长，来获得高生产量的乳状菌孢子粉；五是利用了不同品种金龟子 产卵时间和蛴螬龄期差异，可以实现周年期生产，给农作物病虫害防治提供活 性强的乳状病芽孢杆菌。本发明的有益效果是规模化生产乳状病芽孢杆菌的方法简便，生产成本 低廉，并能周年期批量生产活性强的乳状病芽孢杆菌，能够满足生产应用，来 有效控制金龟子和跻螬对农作物的危害。
具体实施例方式
一、 封闭式养殖栏建造
— 先选用有机物质配制饲养基料，以禾杆粉粒、植物油粕、木渣混拌为宜，
加水发酵后得粒状饲养基料；再在田间或院落建养殖栏，栏深20厘米左右，栏 底铺尼龙网纱，栏内覆铜养基料厚15厘米左右，栏外架设高度不低于2米的网 栅，网纱孔和网栅孔都要小，要确保小鲚螬不能钻入地下和金龟子飞出网外。
二、 诱捕金龟子集中产卵孵化饲养
在金龟子出土活动期，晚间在其群集活动区架设趋光灯，断其灯管外铁絲 网电源，避免金龟子触电并在不受损伤的状态下趺入灯下底箱袋中，每半小时 收取一次，先投放入大径桶中加网盖存放，给金龟子提供较大的活动范围，避 免相互挤撞伤害，再及时投放入网栅中，网栅中插上鲜果枝条，3-5天换一次， 提供金龟子晚上取食和交配，白天钻入疏松基料中藏身与产卵，孵化出小跻螬 集中饲养。
三、 分选适龄跻螬
当蛴螬长至2-3克时，在网栅中取词养基料过粗筛，挑选出三龄大鲚螬， 把小蛴螬投入饲养基料中继续集中饲养。
四、 接种感染培养
取3龄大蛴螬，用芽孢杆菌加无菌水配制成每亳升1亿个以上芽孢悬液， 用微型注射器给每头蛴螬体腔内注射O.Ol毫升，放入有饲养基料的饲育叙内， 在20-30°(:温度下继续甸养，让鲚螬感病。
五、 制取乳状病芽孢杆菌
待感染蛴螬得败血症后，体内芽孢大量积累，致相继死亡后，充满芽孢时， 挑出病死虫体，研成碎浆，加无菌水和少量滑石粉稀释并调配成每亳升含l亿
个以上芽孢菌液，再在室温下凉干，研粉过100目筛分装，得乳状病芽孢杆菌。
权利要求
1、一种批量生产乳状病芽孢杆菌的方法，其特征是首先选用有机物质配置疏松饲养基料，在田间建造网栅，网栅内建养殖栏，栏底铺设网纱，网纱上覆饲养基料得封闭式养殖栏；再在金龟子出土活动期，晚间在其聚集活动区架设趋光灯，断其灯管外铁丝网电源，诱捕金龟子后及时投放网栅中，并在养殖栏插上带叶鲜果枝条，供金龟子取食和适时交配产卵，并孵化得小蛴螬集中饲养；及时给养殖栏洒水与排水，保持饲养基料湿度在30-40％之间，当蛴螬长至2-3克重时，选取出3龄大蛴螬；用芽孢杆菌加无菌水配置成每毫升含1亿个以上芽孢悬液，给每头大蛴螬体腔内注射0.01毫升，放入有饲养基料的饲育缸中，在20-30℃温度下饲养；蛴螬感染得败血症后，体内芽孢大量积累，致相继死亡后，充满芽孢时，取出蛴螬研成碎浆，加无菌水和少量滑石粉稀释并调配成每毫升含1亿个以上芽孢菌液，再在室温下凉干，最后研粉过100目筛成细粉分装，得乳状病芽孢杆菌。
全文摘要
本发明批量生产乳状病芽孢杆菌的方法，提供了采用生物手段以活体基质培养为途径生产乳状病芽孢杆菌的技术，本项技术分为封闭式养殖栏建造、诱捕金龟子集中产卵孵化饲养蛴螬、分选适龄蛴螬、接种感染培养和制取乳状病芽孢菌五道步骤，结合农时批量生产出乳状病芽孢杆菌，且培养生产方法简便，成本低廉，乳状病芽孢杆菌活性强，能及时批量提供生产应用，来有效控制金龟子和蛴螬对农作物的危害。
文档编号C12N1/20GK101619295SQ200910023548
公开日2010年1月6日 申请日期2009年8月10日 优先权日2009年8月10日
发明者赵振良 申请人:赵振良