专利名称：大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂的利记博彩app
大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂技术领域 本发明涉及一种大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂。特别是最常见的在 外环境中生活力较强，在44° C下可以生长，十分耐热、耐千燥、耐酸环境(pH2.5)，有时还 可以抵抗辐射和抗生素，在水、牛乳及肉类食品中能生存几个月，更糟糕的是很低剂量的大 肠埃希氏菌0157:H7就可以致病，最适温度下繁殖迅速的大肠埃希氏菌0157的快检试剂。正 常的消化道内有大量细菌竞争生存空间和营养。在这个环境里通常需要有上千个沙门氏菌才 会致病，而大肠埃希氏菌0157:H7的最低感染剂量是少于50个，对细菌来讲极小的数量。大 肠埃希氏菌0157食物中毒多由动物性食品，特别是肉类引起(如病死牲畜肉、熟肉制品)， 也可由家禽、蛋类、奶类食品引起。以急性胃肠炎为主，主要症状有呕吐，腹泻，腹痛，粪 便为黄绿色水样便。发热3 8°C—4 (TC。重病人出现寒战，惊厥，抽搐和昏迷。老人，儿 童和体弱者如不及时进行急救处理也可导致死亡。传统常规检测诊断方法要经过细菌分离培 养及生化鉴定、血清学试验、肠毒素试验才能确诊。整个检测过程耗时长、 一般需要5-6天， 灵敏度不高，对快速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手 段，在快速鉴别诊断食物中毒致病菌大肠埃希氏菌0157的应用上具有明显的优势。从而减少 由于检测手段落后而造成对人体健康的危害，具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方 法更具有应用价值，对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。
背景技术：
本发明的目的在于提供一种引起食物中毒大肠埃希氏菌0157快检试剂，大肠 埃希氏菌，它是人畜肠道中的常见菌，不仅无害，还能合成维生素B、维生素K及叶酸供给 人畜，它产生的大肠埃希氏菌素可抑制某些病原微生物在肠道内繁殖。同时它能够抑制正常 发酵，并和乳酸菌共生，对食物的消化、吸收和各种机能的调节有促进作用， 一般不致病。 但有少数大肠埃希氏菌可引起人体局部炎症、婴儿腹泻和食物中毒，为致病性大肠埃希氏菌。 大肠埃希氏菌为革兰氏阴性(Gram' s negative)短小杆菌，它能在普通营养琼脂上生长，能 分解乳糖和葡萄糖，产酸和气体，最适生长温度为37i:，最适pH7.4 7.6，皆可生长，繁殖 速度快，在适宜条件下其世代时间仅17 19min。致病性与非致病性大肠埃希氏菌，不能从形 态、生理、生化等性状区分，只能用血清学方法，从抗原性质不同加以区分。致病性大肠埃 希氏菌的种类有数百个，引起的症状也不相同，肠致病性大肠埃希氏菌能产生一种与痢疾志 贺菌相似的毒素如肠出血性大肠埃希氏菌0157: H7。其毒力最强，造成肠出血，约有10%可 发展成肾出血。主要症状是突发性腹痛，并危及肝、肾。在小儿中常导致溶血性尿毒综合症， 威胁生命。牛是大肠埃希氏菌0157的宿主，而由带菌牛产出的牛肉或牛乳中都可含有病菌。 这种病菌污染是通过牛粪所致。当土壤、水源受粪便污染时可带有此菌，曾发生过由于水污 染致病性大肠埃希氏菌而引起食物中毒。该菌所引起的食物中毒大多发生于夏季，以熟肉和 凉拌食品为多见，污染源是人和动物大便，经手、苍蝇和不洁用具等而污染食品，在适宜细 菌大量繁殖的条件下，所食食品放置时间较长，从而引起食物中毒。传统常规检测诊断方法 是要经过标本采集、分离鉴定、生化鉴定、血清学试验、肠毒素试验才能确诊。整个检测过程 耗时长、传统生化鉴定试验周期长，操作繁琐， 一般需要5-6天，灵敏度不高，试剂质量无 法保证，严重影响了致病菌确认工作、选择性分离培养的培养基上挑选可疑菌落需要经验， 存在漏检的可能，对快速准确诊断，抢救病人带来极大的不便，本发明打破传统常规分步检测手段，在快速鉴别诊断食物中毒致病菌大肠埃希氏菌0157的应用上具有明显的优势。本发 明是将培养增菌液中增加了特异性的大肠埃希氏菌0157多价及单价血清，使检测确诊过程縮 短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的血清凝集反应，鉴定的准确率均在97%以上。检 测致病菌时耗时少、灵敏度高，准确性强。
发明内容
本发明的要点在于选择合适的培养基组分，并进行合理混配，经加温、溶解、 混合、冷却、分装、高温灭菌、无菌制备血清等工艺而成一种引起食物中毒大肠埃希氏菌Ol 57快检试剂。本发明选择的快检试剂配方如下(克/每升蒸馏水)蛋白胨10.0-12.0;牛肉膏3.5-4.5; 氯化钠4.5.0-5. 5;复合生长因子10.0-20.0;琼脂3. 5-4. 0;无菌大肠埃希氏菌0157多价 及单价血清10-20ml;蒸馏水加至1000 mL，调pH7. 1快检试剂呈无色或淡黄色透明液体，无任何沉淀物。将质控菌做生长的灵敏度试验，大 肠埃希氏菌0157达10-3稀释度；食物源性中毒样品在接种培养2-6小时时，液面交界有处 有白色沉淀凝集，镜下有凝集包团，为阳性，即可确诊。此培养基中的蛋白胨品种很重要， 因此无论国产或国外蛋白胨在使用前必须先作细菌学检测。制备O抗原悬液，稀释至与Mac Farland3号比浊管相当的浓度。原效价为l:16(Tl:320的O血清，用0. 5%盐水稀释至1:40。 稀释血清与抗原悬液在10mmX75mffl试管中等量混合，做单管凝集试验。混匀后放于5(TC水 浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。琼脂为半固体的成分，大肠 埃希菌等细菌能使粪便标本接种量约占培养基体积的1/10，或将含有粪便的棉拭子插入培养 基中，尿液标本可等量加入双倍浓度增菌液中。增菌时间应根据标本污染情况而定，污染严 重的在2h以内，反之可适当延长增菌时间，但不得超过12h，即行转种于选择性分离培养基， 因延长增菌时间可使大肠菌群迅速生长繁殖，影响大肠埃希菌凝集包团检出。本发明产品的制备方法是1) 、先将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、复合生长因子、琼脂混合于IOOO mL蒸馏水加热溶解，调pH7. 1， 121°C15min高压灭菌；2) 、冷却后以无菌操作将无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清混匀； .3) 、分装于灭菌安培试管内备用。本发明具有以下优点(1)快检试剂营养丰富、配制简单；(2)临床应用效果满意，解 决了床边接种的困难，污染小；(3)检测方法简单、时间短、选择性强、检出率高；(4) 接种样本2-6小时后，即能得到液体筛选增菌凝集包团，便于观察菌落生长情况，稳定性好； (5)对快速准确诊断，抢救病人对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据(克/每升蒸熘水)及其所述步骤进行配置 配方一蛋白胨10.0-12.0;牛肉膏3. 5-4. 5;氯化钠4. 5.0-5. 5;复合生长因子10. 0-20. 0;琼 脂3.5-4.0;无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清10-20ml;蒸馏水加至1000 mL，调pH 7. 1。配方二蛋白胨11.0-12.0;牛肉膏4. 0-4. 5;氯化钠4. 6.0-5. 5;复合生长因子14. 0-20. 0;琼脂3. 6-4.0;无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清12-20ml;蒸馏水加至1000 mL，调pH 7. 1。配方三蛋白胨10.0-11.0;牛肉膏3. 5-4. 0;氯化钠4.5.0-5.0;复合生长因子10. 0-18. 0;琼 脂3. 5-3.8;无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清12-18ml;蒸馏水加至1000 mL，调pH 7. 1。
权利要求
1、本发明涉及一种大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂，特别是食物中毒造成肠出血大肠埃希氏菌0157快检试剂的配方及其制备方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸馏水)蛋白胨10.0-12.0；牛肉膏3.5-4.5；氯化钠4.5.0-5.5；复合生长因子10.0-20.0；琼脂3.5-4.0；无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清10-20ml；蒸馏水加至1000mL，调pH7.1
2、 一种权利要求1所述大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂的制备方法，其特征 在于具有如下的步骤1) 、先将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、复合生长因子、琼脂混合于IOOO mL蒸馏水加热溶解，调pH7. 1， 12rCl5min高压灭菌；2) 、冷却后以无菌操作将无菌大肠埃希氏菌0157多价及单价血清混匀；3) 、分装于灭菌安培试管内备用。
全文摘要
本发明涉及一种大肠埃希氏菌0157引起食物中毒快检试剂。特别是食物中毒造成肠出血大肠埃希氏菌0157快检试剂的配方及其制备方法。本发明打破传统常规分步检测手段，将培养增菌液中增加了特异性的大肠埃希氏菌0157多价及单价血清，使检测确诊过程缩短至2-6小时，增菌时能够利用特异血清的血清凝集反应，鉴定的准确率均在97％以上。该快检试剂具有快速、准确、灵敏度高等特点。较传统方法更具有应用价值，对指导临床诊断和治疗，防止滥用抗菌药物具有重要意义。在快速鉴别诊断食物中毒致病菌大肠埃希氏菌0157的应用上具有明显的优势。
文档编号C12Q1/22GK101566623SQ20081009345
公开日2009年10月28日 申请日期2008年4月21日 优先权日2008年4月21日
发明者于维森 申请人:于维森