专利名称：：一种咪草烟农药残留降解菌及其生产的菌剂的利记博彩app
技术领域：
：本发明一种咪草烟农药残留降解菌及其生产的菌剂，属于生物高
技术领域：
，是利用微生物的方法降解化学农药残留，适用于现代农业生产中绿色无公害农产品的生产与加工。二
背景技术：
：化学农药的使用大大地促进了现代农业的发展，为农业生产挽回了大量因草害等原因造成的损失，并极大地提高了农业生产的劳动效率和机械化程度，在农业生产的现代化进程中起了不可估量的作用。但同时农药都是一些有毒有害化学物质，它们进入生态环境后，不仅杀死了对人类有害的生物，同时也对生态系统造成了严重的危害。农药的大量使用引起农产品中农药残留超标，严重影响了人民的身体健康及农产品的出口创汇。随着人们生活水平的提高和环境保护意识的增强，全社会对农药残留带来的直接危害和潜在影响亦愈来愈关注，人们迫切需要无农药残留污染的清洁的绿色农产品。但从目前我国的农业生产形式和人口状况来看，以停止农药使用降低农业产量为代价的无公害生产模式是行不通的，农药作为控制草害的有效手段还将继续在农业生产中发挥巨大的作用。如何能解决农业生产中的这个两难问题就成为各个学科的研究热点。实验室和实际应用研究都表明利用微生物来降解消除土壤中的农药残留"库"容量，从而降低粮食、蔬菜、茶叶等农产品中的农药残留，提高农产品的品质和经济价值是可行的。现有技术中本课题组已拥有降解菌的发明专利(ZL96106317.3，公开号CN1145408A，公开日1997年3月19日)，该专利是一株芽胞杆菌J5,能有效地降解甲胺磷。
发明内容技术问题本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，开发研制出一种新型的农药残留降解菌剂，可以使咪草烟的残留量降低，生产和使用成本较低。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行草害防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求。技术方案下面为本发明的主要内容本发明提供一种消除咪草烟农药残留的降解菌剂，所用菌株为革兰氏染色阴性菌IM-4，2007年6月18日寄存于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.2093,经鉴定为假单胞菌属(尸w^owomwsp.)。主要生物学特性为G'，菌体为短杆状，大小为2.2x0.75um，氧化酶、接触酶、硝酸盐还原、柠檬酸利用反应为阳性；脂酶反应V.P.反应、M.R反应、H引哚反应为阴性；不能水解淀粉。使用上述咪草烟除草剂农药残留降解菌生产菌剂的工艺为:斜面种一摇瓶种一种子罐一生产罐一产品(包装剂型为液体菌剂或固体吸附菌剂)。本发明的详细实施步骤为-1.将咪草烟农药残留降解菌IM-4试管种接种于肉汤培养基摇瓶中，振荡培养至对数期；2.将上述培养好的菌种按种子罐培养基的10%接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，种子罐所用的培养基配方(质量百分比)葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HP040.2%，MgS040.05%，NaCl0.01%，CaC030.3%，酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3.将种子液按生产罐培养基的10%接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1:0.6—1.2，搅拌速度为180—240转/分，培养温度为30—35'C，整个工艺流程培养时间为36—48小时。发酵完成后培养液即为菌剂。有益效果使用该发明生产的农药残留降解菌剂具有生产使用成本低，使用方便，去除效果好的优点，适合在全国粮油蔬菜生产出口基地或有绿色食品商标标志的地方大面积推广使用。本发明对于保护生态环境，保护人民的身体健康，提高农产品的附近值具有重要的意义。试验证明，降解菌IM-4能使土壤中咪草烟的残留量降低65%以上，可以使5%。LB液体培养基咪草烟的残留量降低85%以上。使用该降解菌剂可以在农作物的正常生长过程中正常使用化学农药进行草害防治而保证农产品中农药残留含量符合绿色食品要求。并且该菌为革兰氏阴性菌，在田间的存活时间适当不会影响以后农药使用的效果。本发明成功地解决了农业生产中咪草烟农药残留超标问题，既充分发挥了化学农药在草害防治中的髙效快速的作用，又可以生产出无毒无公害的绿色农产品。具体实施例方式从受咪草烟长期污染的农田土壤中分离到咪草烟高效降解菌iM-4，经鉴定为假单胞菌属(Z^i^o/womwsp.)。2007年6月18日保藏于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.2093。5Q^LB液体培养基中降解菌IM-4降解特性测定挑取IM-4单菌落于5mlLB液体培养基中，30°C、165r/min振荡培养24h,获得新鲜菌液。在100ml的50mg/L咪草烟5^LB液体培养基中，接入5ml离心悬浮后的菌液，于3(TC摇床培养(170r/min)，定时取样测定，测定咪草烟的含量，结果见表l，5^LB液体培养基中降解菌IM-4降解咪草烟达到85.42%。土壤中降解菌咪草烟降解特性测定称取1000g土壤，加入咪草烟，使土壤中含药浓度为10mg/kg,加入IM-4菌液，混匀，置于3(TC培养箱中黑暗条件下恒温培养，定时取样测定咪草烟在土壤中的残留量，结果见表1，土壤中降解菌IM-4降解咪草烟达到66.70%。表1:菌株IM-4在5%。LB液体培养基中和土壤中对咪草烟的降解特性<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注.降解教c)对照样品残留量-处理样品残留量::100注.降解煞/。)一对照样品残留量x100将本发明的除草剂农药残留的降解菌IM-4的原种在培养皿上活化，并测定降解性能，接种于试管斜面上备用。试管种接种于含200ml肉汤培养基1000ml摇瓶中，恒温振荡培养至对数期，准备接种种子罐。种子罐500升，投料量400升，培养基配方(质量百分比)葡萄糖0.8%,NH4N031%,K2HPO40.2%，MgSO40,05%，NaC10.01%，CaC030.3%,酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5。投料完毕后12rC高压湿热灭菌，冷却至33'C后，将上述培养好的摇瓶菌种按10%的接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，搅拌速度为220转/分，无菌空气通入量为l:0.8。将到达对数期的种子液按10%的接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基成分与种子罐培养基相同。生产罐容量5吨，投料量4.5吨。投料后的生产罐l.lkg/cm2的压力下，12rC高压湿热灭菌，灭菌后冷却至35'C以下，通无菌空气保持无菌状态备用。接种后的生产罐温度控制在30—35。C，生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1:O.S—l.O，搅拌速度为240转/分，整个工艺流程培养时间为36—48小时。发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上。发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。降解菌产品的施用可使使土壤中咪草烟的残留量降低65%以上。权利要求1.一种咪草烟农药残留降解菌，为革兰氏染色阴性的假单胞菌属(Pseudomonassp.)的菌株IM-4，2007年6月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.2093。2.—种用权利要求1所述的咪草烟农药残留降解菌生产的农药残留降解菌剂，是通过以下方法生产而成1)将咪草烟农药残留降解菌IM-4试管种接种于肉汤培养基摇瓶中，振荡培养至对数期；2)将上述培养好的菌种按种子罐培养基的体积比10%接种量接种入500升种子罐，培养至对数生长期，种子罐所用的质量百分比培养基配方为葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HP040.2%，MgS040.05%，NaCl0.01%，CaC030.3%，酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3)将种子液按生产罐培养基的10%接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；4)在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为1:0.6—1.2,搅拌速度为180—240转/分，培养温度为30—35'C，全流程培养时间为36—48小时，发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上，发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂型或采用泥炭吸附用包装袋分装成固体菌剂剂型。全文摘要本发明提供一种消除咪草烟农药残留的降解菌剂，所用菌株为革兰氏染色阴性菌IM-4，经鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp.)。将IM-4菌种接种量接种入种子罐，培养至对数生长期；将种子液接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；通气量为1∶0.6-1.2，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，整个工艺流程培养时间为36-48小时，发酵完成后培养液即为菌剂。降解菌产品的施用可使使土壤中咪草烟的残留量降低65％以上，使5‰LB液体培养基咪草烟的残留量降低85％以上。使可以解决农业生产中咪草烟农药残留超标问题，可生产出无毒无公害的绿色农产品。文档编号C12R1/38GK101348771SQ20071013326公开日2009年1月21日申请日期2007年9月26日优先权日2007年9月26日发明者李顺鹏,青洪,潘继杰,星黄申请人:南京农业大学被以下专利引用(1),