专利名称：重组人膜铁转运蛋白腺病毒、其制备方法及应用的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种利用重组腺病毒载体携带人膜铁转运蛋白(Ferroportin)基因、从而在生物体内能够自主表达 膜铁转运蛋白的重组人膜铁转运蛋白腺病毒、其制备方法及应用。
技术背景1831年，Fordisch证明缺铁性贫血患者血液中铁含量比健康人低,确认 了铁是人体必需微量元素之一。铁广泛参与机体的代谢过程，如血红蛋白、 肌红蛋白、激素以及DNA等的合成，还能增强中性粒细胞杀菌及吞噬功能， 维护T、 B细胞增殖、分化及抗体的产生(Folin等.1991)。长期以来,人们对铁与健康的关系，多着眼于铁缺乏的危害,如导致缺铁性贫血、缺铁吞咽困 难综合征等疾病。然而，近年来有关铁过多引起的健康问题越来越引起人们的关注，研究发现，过多的铁会产生有毒性的自由基，继而损伤细胞， 造成遗传性血色素病、神经退行性疾病等。因此，体内必需具有严格的调节 机制，以保持铁代谢的平衡。膜铁转运蛋白(Ferroportin， FPN)，又称铁调 节转运体l (Fe2regulated transporter 1， IREG1)或金属转运蛋白(metal transport protein 1, MTP1)，是一种跨膜的铁输出蛋白。2000年,三个研究小组几乎同时分离鉴定了编码该蛋白的基因。 Donovan等首先采用定位克隆的方法从低血色素贫血的斑马鱼中分离鉴定 出导致该症的基因，命名为Ferroportin(FPN)。与此同时，Abboud和McKie等 分别用指数富集配体系统进化技术和消减杂交法鉴定了该基因，并分别命 名为MTP1和REG1 。目前对Ferroportin的研究已成为铁代谢研究的热点问题 之一。人的FPN基因定位于2号染色体上，长度20kb,含8个外显子，其 mRNA的5'末端非翻译区含有一个典型的铁反应元件IRE。 FPNmRNA编 码的蛋白有571个氨基酸，分子量约62000，至少含有10个跨膜结构域，是 一种膜蛋白。FPN广泛分布于机体多种组织中，其主要功能可能与机体的铁代谢有
关，有可能是细胞内铁输出细胞的唯一通道，其在铁代谢中有着非常独特的重要地位。此外，FPN也可能参与锌、铜等金属离子的转运。铁转运紊 乱导致的疾病如斑马鱼的低血色素贫血,人的遗传性血色素沉着症等均与 FPN异常有关。根据现有的研究资料,FPN主要功能有以下几方面(一) 铁离子转运功能DMT1是哺乳动物细胞摄取铁的蛋白。那么铁的释放又是如何进行的 呢？在一些己经进行的研究当中，将非洲爪蟾的卵母细胞预先负载55Fe , 然后分别注射FP1 cRNA和DMT1 cRNA ，在铜蓝蛋白和转铁蛋白的存在 下,注射FP1 cRNA的卵母细胞将80 %的55Fe释放出来,而注射DMT1 cRNA的卵母细胞,则极少释放ssFe 。 Donovan等也证明了表达FPN的卵 母细胞释放铁的量比不表达FPN的要高5倍。这些结果证明FPN蛋白具 有将铁从细胞内释放出来的功能。FPN在与铁吸收密切相关的组织内的表 达也进一步说明了它的铁转运功能。FPN在十二指肠绒毛细胞的基底膜， 特别是肠绒毛顶端吸收细胞的基底膜有表达,在空肠、回肠不表达。肝和脾 也有较多的FPN表达。小鼠免疫组化表明，FPN表达在枯否细胞的细胞质， 肝细胞表面靠近肝血窦一侧和脾的巨噬细胞。肝和脾在铁的再循环中发挥 重要的作用,肝的枯否细胞、脾的巨噬细胞可吞噬衰老的红细胞,在溶酶体的 作用下将红细胞裂解，血红蛋白降解后在血红素氧化酶的作用下释放铁。因 此FPN在这些部位的表达表明其可能与铁的贮存和重新利用有关。FPN在 胎盘合体滋养层细胞也有表达,并且在妊娠的最后三个月最高,这一时期也 是胎儿需要铁较多的时期,这表明FPN在铁从母体到发育的胎儿的转运中 有着重要作用。急慢性肺病患者机体的铁都有高度积累，由铁引起的自由基 产生将导致组织伤害，铁的正常转运对肺的防御功能很重要,因此,FPN在肺 和支气管上皮细胞也有表达,并受铁的正调控。(二) 其它功能许多金属转运体并非专一的转运铁。如Gunshin等证明，在转染DMT1 的爪蟾卵母细胞中，DMT1对Mg2十、Co2+ 、 Cd2 + 、 Cu2 + 、 Zn2 + 、 Ni2+ 、 Pb2+也有转运功能。因此，FPN转运其它离子的功能有待研究。 FPN还具有一个NADP/腺嘌呤结合位点序列IFVCGP ，该结构域在NADH 和NADPH还原酶家族(包括酵母铁还原酶和嗜中性白细胞氧化还原酶)
中都存在，这表明FPN可能具有铁转运还原酶活性。二价和三价铁都存在 于细胞复杂的平衡之中，这两种氧化还原价态之间的转化在铁的转运和螯 合中有很重要的作用。FPN的发现对铁超载或铁缺乏疾病的诊断和治疗有重要的医学应用前 景。例如，斑马鱼weh突变导致低血色素贫血症,人类也存在相似的由FPN突 变引起的疾病。最近，有研究表明，在第2号染色体上人的FPN基因的第5个外 显子内734位核苷酸突变,引起氨基酸的改变(Asp变为His)。这一改变可 能引起过多的铁被转运进入血液循环,因此导致遗传性血色素病的病症。显 然，FPN的发现有助于相关疾病的诊断和治疗。很多先天性或者后天性的铁相关疾病都与FPN有关，传统的药物无法 达到治疗效果，或者仅仅可以减轻患者的症状，因此，迫切需要开发新的给 药形式。 发明内容本发明的目的就是针对现有技术的上述问题，提供一种在生物体内能 够自主表达膜铁转运蛋白、从而提升体内膜铁转运蛋白(ferroportin)水平 的重组人膜铁转运蛋白腺病毒。本发明的另一目的在于提供上述重组人膜铁转运蛋白腺病毒的制备方法。本发明的再一目的在于提供上述重组人膜铁转运蛋白腺病毒在制备药 物方面的应用。为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案本发明公开了一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)，其包含有 人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因与腺病毒载体。所述人膜铁转运蛋白基因插入所述腺病毒基因组中。所述人膜铁转运蛋白基因为通道型人膜铁转运蛋白基因。所述人膜铁转运蛋白基因的表达读码框包含巨细胞病毒(CMV)启动 子、通道型人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因以及下游的polyA信号。所述人膜铁转运蛋白基因含有序列表中SeqIDNal所示的序列。所述腺病毒为缺陷型腺病毒。所述腺病毒为1型腺病毒。所述腺病毒为缺失了 El区的缺陷型腺病毒。
本发明还公开了上述重组人膜铁转运蛋白腺病毒的制备方法，所述方 法包括a、 将人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因与所述腺病毒的Ad-tmck穿 梭质粒连接构建Ad-track-ferroportin重组载体；b、 使所述Ad-track-ferroportin重组载体线性化；c、 腺病毒的骨架质粒转化感受态细胞；d、 Ad-track-ferroportin与腺病毒骨架质粒进行同源重组；e、 使重组的病毒骨架质粒线性化后转染细胞进行病毒包装。 其中步骤e的细胞优选为HEK293细胞。本发明进一步公开了上述重组人膜铁转运蛋白腺病毒在制备用于治疗铁代谢紊乱疾病的药物中的应用。优选的，所述铁代谢紊乱疾病为任何类型铁过载引起的疾病。 由于采用了以上技术方案，使本发明具备了以下技术效果 本发明针对FPN在体内铁代谢中的独特地位，构建FPN重组腺病毒以基因替换的模式，可以针对性的对体内铁水平代谢进行调节，本发明的FPN重组腺病毒，在老年性痴呆以及心肌梗死等常见疾病上有着良好的预防以及治疗效果。本发明是利用缺陷型腺病毒将人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因引入 机体组织细胞，使病毒能在患者体内自主表达膜铁转运蛋白，提升体内膜 铁转运蛋白的水平，调节细胞内铁的浓度，降低铁对于细胞的毒性，达到 治疗神经退行性疾病等铁代谢相关疾病的目的。这种方法能够克服外源蛋 白质不稳定、活性低、成本高以及免疫原性等缺点，并且能够保持蛋白质 二级以及高级空间结构的自然特性，使得这一疗法成为大多数患者能够接 受并有能力支付的治疗途径。利用缺陷型腺病毒作为载体，具有以下优点1. 腺病毒载体工艺流程简单，病毒滴度高；2. 腺病毒载体转染率高，可操作性好；3. 腺病毒载体宿主范围广，安全可靠，致病性低；4. 腺病毒载体免疫反应弱，外源基因表达稳定持久；5. 由CMV启动子控制膜铁转运蛋白(ferroportin)高效表达，调节体 内血清铁水平；6. 由于在真核细胞内自主表达蛋白，其产物具有天然蛋白的构象与活 性，能完全模拟天然表达情况。
图1是腺病毒穿梭质粒的多克隆位点图；图2是重组人膜铁转运蛋白(ferroportin)生产工艺流程图；图3是Ad-FPN系统mRNA表达情况图；图4是以GFP为标记，观察Ad-FPN系统感染细胞情况图；图5是Ad-FPN系统蛋白表达情况图。图6是构建高血清铁动物模型并利用Ad-FPN系统进行体内实验的组 织铁水平结果图。
具体实施方式
本发明针对膜铁转运蛋白构建重组腺病毒表达体系(Ad-FPN)，提升 体内膜铁转运蛋白(ferroportin)的水平，调节细胞内铁的浓度，降低铁对 于细胞的毒性，达到治疗神经退行性疾病等铁代谢相关疾病的目的。本发明的重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)，包含有通道型人膜 铁转运蛋白基因和缺陷型腺病毒。缺陷型腺病毒为1型腺病毒(Adeasy-1， Adl)。在本发明优选的实施方式中，选择了构建膜铁转运蛋白的重组腺病毒， 其载体系统为Adeasy-l。 Adeasy-l是缺陷性腺病毒的骨架质粒，通过其穿梭 质粒Ad-track-CMV将外源性基因与病毒骨架整合，从而包装出具有广泛感 染性的重组腺病毒。包装成功的重组腺病毒在一般的细胞内不能复制，具 有安全、高效、简单易行等优点。Ad-FPN结构重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)载体缺失了E1 区，在普通细胞内不能包装为成熟病毒颗粒，为缺陷型病毒。人膜铁转运 蛋白(ferroportin)基因为目的基因。我们将人通道型膜铁转运蛋白基因插 入病毒的基因组中，以双CMV为其启动子，绿色荧光蛋白(GFP)为其 标记物，下游polyA尾为其终止信号区。本发明的目的基因人膜铁转运蛋白基因含有序列表中SeqIDNo.l所 示的序列。重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)生产工艺流程包括重组载体 构建、载体线性化制备、转染HEK293细胞、扩大培养、分离纯化、冷冻 千燥以及包装制剂。具体地，重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)生产工艺流程包括 a、将人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因与所述腺病毒的Ad-track穿 梭质粒连接构建Ad-track-ferroportin重组载体； b、 使所述Ad-track-ferroportin重组载体线性化；c、 腺病毒的骨架质粒转化感受态细胞；d、 Ad-track-ferroportin与腺病毒骨架质粒进行同源重组；e、 使重组的病毒骨架质粒线性化后转染细胞进行病毒包装。 其中步骤e的细胞优选为HEK293细胞。本发明的重组人膜铁转运蛋白腺病毒可用于制备药物组合物，该药物 组合物可用于治疗铁代谢紊乱疾病，包括任何类型铁过载引起的疾病与任 何类型缺铁性贫血。可用于制备药物组合物时，本发明的重组人膜铁转运蛋白腺病毒可以 制备成液体制剂，偏碱性，PH8.0,冻干后为白色粉末，可跟水与任何比 例混合，无味，可作为针剂、喷剂。本发明是利用缺陷型腺病毒将人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因引入 机体组织细胞，使病毒能在患者体内自主表达膜铁转运蛋白。这种方法能 够克服外源蛋白质不稳定、活性低、成本高以及免疫原性等缺点，并且能 够保持蛋白质二级以及高级空间结构的自然特性，使得这一疗法成为大多 数患者能够接受并有能力支付的治疗途径。利用缺陷型腺病毒作为载体，具有以下优点1、 腺病毒载体工艺流程简单，病毒滴度高；2、 腺病毒载体转染率高，可操作性好；3、 腺病毒载体宿主范围广，安全可靠，致病性低；4、 腺病毒载体免疫反应弱，外源基因表达稳定持久，-5、 由CMV启动子控制膜铁转运蛋白(ferroportin)高效表达，调节 体内血清铁水平；6、 由于在真核细胞内自主表达蛋白，其产物具有天然蛋白的构象与活 性，能完全模拟天然表达情况。下面通过具体实施例对本发明作进一步详细的描述。 实施例1膜铁转运蛋白基因插入重组如图1所示，pTrack-CMV为重组腺病毒的穿梭质粒。我们将膜铁转 运蛋白基因两端接上Bgl II与Sal I酶切位点，并加上polyA尾作为终止信 号区。酶切膜铁转运蛋白基因与穿梭质粒，并将两者用T4连接酶进行连 接转化，经筛选后，得到正确克隆，送测序公司测序鉴定。
Ad-FPN结构重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)载体缺失了 El区，在普通细胞内不能包装为成熟病毒颗粒，为缺陷型病毒。人膜铁转 运蛋白(ferroportin)基因为目的基因。我们将人通道型膜铁转运蛋白基因 插入病毒的基因组中，以双CMV为其启动子，绿色荧光蛋白(GFP)为 其标记物，下游polyA尾为其终止信号区。实施例2重组人膜铁转运蛋白腺病毒制备重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)生产工艺流程包括重组载体 构建、载体线性化制备、转染HEK293细胞、扩大培养、分离纯化、冷冻 干燥以及包装制剂。具体见以下详述及其生产工艺流程图(见图2)。1、目的基因ferroportin的获取以含人基因组cDNA的作为模板，Pfo高保真酶PCR扩增。PCR热扩 增条件为95。C变性5min， 95。C 80s， 58。C馳，72°C 120s， 30个循环， 最后72'C保温5min。产物约1710bp。其引物序列为 上游引物(SeqlDNo.2):CTCAC AGATCT ATGACCAGGG CGGGAGATCA 下游引物(SeqlDNo.3):TCAAT GTCGAC TCAAAC AACAGATGATATTTGCAA PCR反应条件如下.-无菌水38/d10x PCR Buffer5pl4x dNTP4pl引物l引物2模板0.5^1PfU聚合酶总体积-50)Li2、 Ad-track-ferroportin穿梭质粒的构建A.双酶切PCR产物与Ad-track质粒，37。C酶切过夜。酶切体系构建
如下PCR产物 20jLd1 Ox buffer 10/xlddH20 60jiilBgl-II 5/dSal-I_M_总体积Ad-track质粒 20W 1 Ox bufferddH20 60jWlBgl-II 5/ilSal-I_总体积 lOOplB . QIAquick Gel extraction kit试剂盒法凝胶回收酶切片段； C . 0.8%琼脂糖凝胶电泳，利用定量Marker初步估计核酸浓度； D.T4连接酶4"C过夜，连接凝胶回收PCR产物与酶切质粒，连接体 系如下Ad-track质粒酶切片断5julPCR产物酶切片断7/>tl1 Ox buffer2/xlddH204.5/dT4连接酶1.5jul总体积注先加入DNA片段与ddH2Q， 45'C温浴5min，且所有试剂加入前于(TC预冷。E .将连接产物转化入DH-5ce感受态细菌中，涂板37"C过夜16h; F .次日每个平板挑取较小的克隆10个，小量法提取质粒； G .双酶切重组质粒；H. 酶切产物5n/。聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显色；I. 挑选切出相应小片断的克隆扩增，提取质粒； J.保存菌种与质粒，送样品测序鉴定，结果与预期一致。
3、 Pme-I线性化重组质粒
利用Pme-I内切酶线性化穿梭质粒，凝胶回收线形化片断。 酶切系统构建如下.-
1 Ox buffer 5/xl 腦x BSA 0,5W 质粒DNA 25/il Pme-I l川
ddH20_18.5^1
总体积 50pd
4、 Adeasy-1质粒转化BJ5183，构建Ad-BJ5183细菌株
A .用冷却的无菌吸头，吸取BJ5183感受态细胞200/^1至无菌离心管
中；
B .按照比例稀释Adeasy-1质粒； C .每组取lOAd加入感受态细胞中；
D. 混匀内容物，冰浴30min;
E. 将管置42"C循环水浴中，恰恰放置90s，不要摇动；
F. 迅速转至冰浴中，冷却2min;
G .每管加800/^1无抗生素LB培养基；37'C缓慢(45rpm)振荡45min; H .取200^1至含氨节青霉素的LB琼脂平板，均匀涂布菌液； I.倒置平板，37°C， 16h。
J.次日观察结果，看生长菌落多寡是否与浓度梯度一致。
5、 Ad-track-ferroportin穿梭质粒与Adeasy-l同源重组
A. 将目的基因插入穿梭载体的多克隆位点，转化E.coli - DH5a，铺卡 那霉素抗性LB平板，挑取克隆，接种于5ml卡那霉素抗性LB液体培养 基中，37'C震摇过夜，次晨提取质粒，PCR或酶切鉴定。
B. 提取的穿梭质粒经Pme-I酶切过夜，充分线性化(不完全消化往 往产生较高的背景，从而降低重组率，将线性化质粒去磷酸化有助于降低 背景信号)，凝胶纯化。
C. 将回收的线性化载体转入Ad-BJ5183感受态细胞内，铺卡那霉素 抗性LB平板，置于37"C孵箱内培养14-16小时。
D. 挑取较小的克隆15-20个，接种于卡那抗性液体LB培养基5ml 中，37。C震摇过夜。次晨收菌，立即提取质粒，酶切鉴定，选择成功重组
的克隆，大量扩增，命名为Ad-ferroportin。 6、病毒骨架Pac-I线性化
利用Pac-I内切酶线性化上述病毒骨架质粒，37r酶切过夜，以便在 293A细胞中包装病毒。酶切体系构建如下
10x buffer 5pd 画xBSA 0.5jd Pac-I
Ad-ferroportin DNA 40jtd ddH20
总体积
7、 病毒骨架鉴定与纯化灭菌
取10/d线形化病毒骨架双酶切鉴定，体系同前所述。
鉴定后纯化酶切产物
A .收集多管酶切产物，等体积酚-氯仿抽提2次；
B.等体积氯仿单独抽提l次；
C .加入1/10体积3M NaAC (PH5.2)以及2.5倍体积冰的无水乙醇， 至于-8(TC 1小时；
D. 4。C， 16000r/min，离心10min;
E. 冰冷的75。/。乙醇洗涤沉淀，4。C放置过夜；
F. 4°C， 12000r/min，离心5min，移至超净台上操作；
G. 弃上清，无菌环境下干燥15min; H .50/d无菌ddH20溶解沉淀； 1.取2pl电泳，测定核酸浓度。
8、 病毒包装
A. 将线性化质粒转染入HEK292细胞；
B. 放置15天左右，每隔3天换液一次。待细胞出现彗星状荧光收毒;
C. 大量扩增病毒，约培养100个9cm培养皿的细胞量后，进行超速 梯度离心纯化；
D. 透析后测定滴度，分装后保存于-80度。
实施例3
Ad-FPN系统感染以及表达实验
1、 接种C6细胞1.5Xl()7个细胞于9cm培养皿(Corning)中，37°C，
5。/。C02培养过夜；
2、 感染前换5ml无血清培养基；
3、 每个培养皿加0.5ul实施例2中制备得到的纯化病毒；
4、 分别培养0h， 6h， 12h， 24h， 48h
5、 按照时间点收集细胞；
6、 Real-time PCR与westen-blot定量检测不同时间点膜铁转运蛋白 表达情况；
7、 统计结果。
结果如图3、 4、 5所示，12小时左右膜铁转运蛋白mRNA水平表达 已经达到空白对照组的15倍，并且持续表达。
实施例4
Ad-FPN体内实验(组织铁测定)
1. 选择3月龄SD大鼠雄雌各10只，按性别随机分为两组；
2. 两组实验鼠均以高铁词料(购自SIGMA)喂养3个月，构建高血 清铁大鼠模型，并测定血清铁浓度；
3. 实验组注射Ad-FPN病毒稀释液，每次剂量为约1乂1012个病毒颗 粒，每3天注射一次，3次为一疗程；对照组注射PBS等渗盐水；
4. —疗程结束后，分别于3、 6、 9、 12、 15、 18天抽取血清，按常 规方法利用生化仪器测定血清铁浓度。
5. 最后处死大鼠，分别取心脏、大脑组织标本，冻千后利用测铁试 剂盒测定组织铁含量。
结果发现，从第6天开始，组织铁测定显示实验组的组织含铁量显著 降低。结果如图6示。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说 明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术 领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若 干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。<formula>formula see original document page 14</formula>aatattgc犯atttggccag tactgctact gcaatcacaa tcc朋agggs ttggattgtt 480
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〈210〉 3
《211> 35
〈212〉 薩 〈213〉人工序列
〈400〉 3
tcaatgtcga ctcaaacaac agatgatatt tgcaa 3权利要求
1、一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)，其特征在于包含有人膜铁转运蛋白(ferroportin，FPN)基因与腺病毒载体。
2、 根据权利要求1所述的一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒，其特征在 于所述人膜铁转运蛋白基因插入所述腺病毒基因组中。
3、 根据权利要求1或2所述的一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒，其特 征在于所述人膜铁转运蛋白基因为通道型人膜铁转运蛋白基因。
4、 根据权利要求3所述的一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒，其特征在 于所述人膜铁转运蛋白基因的表达读码框包含巨细胞病毒(CMV)启动 子、通道型人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因以及下游的polyA信号。
5、 根据权利要求1或2所述的一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒，其特 征在于所述腺病毒为缺陷型腺病毒。
6、 根据权利要求5所述的一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒，其特征在 于所述腺病毒为1型腺病毒。
7、 根据权利要求5所述的一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒，其特征在 于所述腺病毒为缺失了 El区的缺陷型腺病毒。
8、 权利要求1 7中任意一项所述的重组人膜铁转运蛋白腺病毒的制备方法，所述方法包括a、 将人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因与所述腺病毒的Ad-tmck穿 梭质粒连接构建Ad-track-ferroportin重组载体；b、 使所述Ad-track-ferroportin重组载体线性化；c、 腺病毒的骨架质粒转化感受态细胞；d、 Ad-track-ferroportin与腺病毒骨架质粒进行同源重组；e、 使重组的病毒骨架质粒线性化后转染细胞进行病毒包装。
9、 权利要求1 7中任意一项所述的重组人膜铁转运蛋白腺病毒在制 备用于治疗铁代谢紊乱疾病的药物中的应用。
10、 根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述铁代谢紊乱疾病 为铁过载引起的疾病。
全文摘要
本发明公开了一种重组人膜铁转运蛋白腺病毒(Ad-FPN)，包含有人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因与腺病毒载体。本发明还公开了上述重组人膜铁转运蛋白腺病毒的制备及其应用。本发明是利用缺陷型腺病毒将人膜铁转运蛋白(ferroportin)基因引入机体组织细胞，使病毒能在患者体内自主表达膜铁转运蛋白。
文档编号C12N15/861GK101210255SQ20071012546
公开日2008年7月2日 申请日期2007年12月24日 优先权日2007年12月24日
发明者汪程远, 葛啸虎, 钱忠明 申请人:钱忠明;葛啸虎;汪程远