专利名称：诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法
技术领域：
本发明涉及一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，尤其是NL895品种的胚性细胞发生方法，包括其激素水平及培养日令的选择。
背景技术：
NL895是黑杨派杨树品种，具有速生、优质、高产、树干通直圆满、尖削度小、树皮薄、单板出材率高及湿心材含量低等优点，不同立地条件下，平均7年生材积生长量超过对照24.22％～53.22％，木材密度提高3.2％～5％，单板出材率提高12.4％～15.0％，湿心材含量低的无性系比对照降低15.0％～16.0％。其次，还具有较强的适应性和遗传稳定性，在黄淮地区花斑盐碱地上生长良好，材积生长量可超过对照92.44％～138.68％。抗虫抗病性较强，尤其对蛀干害虫和叶部病害表现较强抗性。适种黄淮、江淮及长江中下游的广大平原地区。
黑杨派杨树为木本植物，因个体大存在不易处理和不易大量处理的困难，如何快速组织培养是科学界关注的热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导黑杨派杨树(NL895)胚性细胞发生方法，为NL895胚性细胞的培育提供重要参考资料。
本发明目的通过下述方法方案实现一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取NL895优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基中培养，其中，脱分化培养基为MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D0.1-0.6mg/L，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织，然后，对愈伤组织进行再分化培养。
所述的脱分化培养72～144小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
所述的再分化培养基为MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
所述的再分化培养时间为72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
利用诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
本发明的优点是通过培养基培养，克服了林木生活周期长，个体大的劣势，获得大量的，具有细胞全能性的NL895胚性细胞，为NL895诱变育种中筛选耐盐碱、耐旱、抗病、高产等优良突变体提供了重要技术前提。
具体实施例方式
实施例1一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基，即MS+KT0.2mg/L+2，4-D 0.2mg/L中培养，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织。
培养72～144小时后，将愈伤组织转移至再分化培养基，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L中进行再分化培养，培养72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。此时为胚性细胞发生率最高，为50～80％。
利用该诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
实施例2一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基，即MS+KT 0.1mg/L+2，4-D0.6mg/L中培养，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织。
培养72～144小时后，将愈伤组织转移至再分化培养基，即MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.3mg/L中进行再分化培养，培养72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。此时为胚性细胞发生率最高，为50～80％。利用该诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
实施例3一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana CL“NL895”)优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基，即MS+KT 0.4mg/L+2，4-D0.1mg/L中培养，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织。
培养72～144小时后，将愈伤组织转移至再分化培养基，即MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L中进行再分化培养，培养72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。此时为胚性细胞发生率最高，为50～80％。利用该诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
权利要求
1.一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取NL895优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基中培养，其中，脱分化培养基为MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D 0.1-0.6mg/L，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织，然后，对愈伤组织进行再分化培养。
2.根据权利要求1所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，其特征在于所述的脱分化培养72～144小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
3.根据权利要求1或2所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，其特征在于所述的再分化培养基为MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。
4.根据权利要求3所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，其特征在于所述的再分化培养时间为72～120小时，培养温度为22～26℃，光照时间为12～14小时/天，光照强度为2000～3000lux。
5.利用权利要求3所述的诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，培育出大量黑杨派杨树(NL895)胚性细胞，从而通过诱变获得变异体。
全文摘要
一种诱导黑杨派杨树胚性细胞发生方法，选取NL895优质组培苗切成0.1～0.2cm的小段作为外植体，接种于脱分化培养基中培养，其中，脱分化培养基为MS+KT0.1－0.4mg/L+2，4－D 0.1－0.6mg/L，使外植体器官脱分化，形成愈伤组织，然后，对愈伤组织进行再分化培养。本发明的优点是通过培养基培养，克服了林木生活周期长，个体大的劣势，获得大量的，具有细胞全能性的NL895胚性细胞，为NL895诱变育种中筛选耐盐碱、耐旱、抗病、高产等优良突变体提供了重要技术前提。
文档编号C12N5/04GK101066040SQ20071004103
公开日2007年11月7日 申请日期2007年5月22日 优先权日2007年5月22日
发明者林煜, 章振华, 张承妹, 王凌健, 苏敏, 宋学孟 申请人:上海光兆植物速生技术有限公司