专利名称：黑木耳降脂产品的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种黑木耳降脂产品的制备方法，属于一种多糖类的制备方法领域。
背景技术：
黑木耳(Auricularia auricula(Hook)Underw)是我国珍贵的药食两用的胶质真菌。明代李时珍在《本草纲目》中已记载，“主治，益气不饥，轻身强志，断谷治痔”。木耳多糖是黑木耳的主要活性成分，具有降低血脂胆固醇、抗凝血、抗动脉粥样硬化等作用。但由于黑木耳多糖主要存在于细胞壁上，而细胞壁由真菌几丁质成分组成，影响了黑木耳多糖等有效成分的吸收，因此只有充分破壁才能有效提取及利用黑木耳多糖等有效成分。
由于黑木耳是富含胶质的真菌，常规的热水提取工艺具有提取液粘稠，难于进行浓缩等后处理。目前，主要的黑木耳提取加工方法有(1)黑木耳酶法提取工艺。利用果胶酶、木瓜蛋白酶等复合酶提取黑木耳多糖；(2)采用酸提取法或碱提取法提取黑木耳多糖；(3)黑木耳深层液体发酵。(4)直接将黑木耳磨成粉。传统的提取方法多采用单纯酸法或碱法，容易破坏多糖结构，影响人体吸收。专利申请号为CN200410020591.5的发明专利“一种木耳多糖的提取方法”，以木耳为原料，采用醇提、微波或超声波处理，并结合复合酶法酶解，将木耳中的多糖物质充分溶解出来，提高了木耳多糖的得率，保持了多糖物质的生物活性，有利于人体吸收。同时，利用木耳多糖加工过程中剩余的残渣提取碱性木耳多糖，最大限度地利用了原料，节约了资源。采用酶法提取工艺具有一定的降低提取液粘性的作用，提高了提取得率，但是该方法加工过程繁琐。
发明内容本发明的目的是提供一种成分全面，具有有效降低血脂功能的黑木耳降脂产品的制备方法。
本发明所述的制备方法的过程为按重量百分比取50～100％的黑木耳菌丝体粉与0～50％的黑木耳粉末混合均匀而成。
本发明中使用的黑木耳菌丝体粉的制备方法为将黑木耳发酵菌丝体连同发酵液一起经胶体磨处理10～20分钟后干燥而成。
其中，发酵过程为按重量百分比取3～5％碳源(蔗糖、葡萄糖、高梁粉、糊精、玉米粉、淀粉等碳源中的一种)、5～8％麸皮煮汁、0.5～1％氮源(酵母膏、蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、硫酸铵、尿素等氮源中的一种)、0.1～0.2％KH2PO4、0.1～0.2％MgSO4、消泡剂适量，pH自然，液体发酵罐装量1∶0.7，二级种接种量为2～10％，25～30℃，通风量控制在1∶0.2～0.5，100～180r/min培养3d。
进一步优选的发酵过程为按重量百分比取5％蔗糖、8％蔗糖、0.5％酵母膏、0.2％KH2PO4、0.1％MgSO4、0.05％泡敌，pH自然，液体发酵罐装量1∶0.7，接种量为5％，25～30℃，通风量控制在1∶0.5，100～180r/min培养3d。
其中，菌种优选Au-5菌株，由广东省微生物研究所菌种保藏中心。菌种的制备过程为1)菌种活化从母种试管中切出5～10×5～10mm大小的菌丝块接种于PDA斜面的中部，于25～28℃培养7～10d；2)一级种子培养100ml麦芽汁(Bx3)、0.2g蛋白胨、0.2g KH2PO4、0.1gMgSO4，pH自然，采用500ml三角瓶，装液量为100ml，接入活化菌种，28～30℃，100r/min培养5d；3)二级种子培养于500ml三角瓶装上述一级种子培养液100ml，接入一级种子种量为5％，28～30℃，100r/min培养3d。
本发明中黑木耳粉末的制备方法为将黑木耳子实体泡开、洗净后煮熟并晾干，粉碎20目以上，优选采用超微粉碎机粉碎3分钟以上。
本发明通过优选黑木耳深层液体发酵条件，并经胶体磨细胞破壁处理，最后与经过细胞破壁处理的黑木耳超微粉混合均匀。本发明方法利用细胞破壁技术全面提取黑木耳深层发酵菌丝体及黑木耳子实体的胞内和胞外多糖，成分全面，所制得的黑木耳降脂产品具有明显的降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白作用，可用于高血脂症病人的辅助治疗或正常人预防高血脂症的产生。
该实验是在广东省医学实验动物中心进行，在该实验中使用雄性SPF级SD大鼠(体重150～200g，由广东省医学实验动物中心提供[合格证号SCXK(粤)2006A015])。灌胃的“实验品”为按本发明所述的方法获得的降脂产品，“对照品”为绞股兰皂甙片(广州白云山制药厂生产)。
将大鼠在实验环境下喂基础饲料7天，然后取尾巴血，分别测定凝血时间、TC、TG、HDL-C、LDL-C值。然后将大鼠随机分组，每组10只；给药前，各组动物的凝血时间、TC、TG、HDL-C和LDL-C值等指标与空白组间无显著性差异(见表1)。空白组每天喂普通饲料及生理盐水灌胃，高脂对照组每天喂高脂饲料及生理盐水灌胃，用药组每天喂高脂饲料及实验品灌胃(灌胃剂量见表1)，阳性对照组每天喂高脂饲料及对照品灌胃(灌胃剂量见表1)。
表1用药前大鼠血脂情况表
喂养45天后，结束实验。在结束前禁食16小时，结束时取尾巴血，分别测定凝血时间、TC、TG、HDL-C、LDL-C值，结果见表2。
喂养45天后，大部分动物给药后精神活动正常、皮毛光亮洁净，眼、口及肛门无异常分泌物；表2中的结果表明，各组间凝血时间无显著性差异；与空白组比较，高脂对照组大鼠的总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)均极其显著地升高(P＜0.01)，说明造模基本成功。用药中剂量组及高剂量组、阳性对照组的总胆固醇极其显著低于高脂对照组(P＜0.01)；用药中剂量组的大鼠甘油三脂极其显著低于高脂对照组(P＜0.01)，用药高剂量组的大鼠甘油三脂显著低于高脂对照组(P＜0.05)。用药高剂量组的高密度脂蛋白(HDL-C)极其显著高于高脂对照组(P＜0.01)。用药各组的低密度脂蛋白(LDL-C)均极其显著低于高脂对照组(P＜0.01)。
表2用药后大鼠血脂情况表
注与空白组比较，#表示p＜0.05；##表示p＜0.01。与高脂对照组比较，*表示p＜0.05；**表示p＜0.01。
因此，根据《保健食品检验与评价技术规范》中辅助降血脂功能检验方法的结果判定规则，本发明所制得的黑木耳降脂产品在血清总胆固醇、甘油三酯均有两项指标阳性，可判定具有辅助降血脂功能。
具体实施方式实施例1黑木耳降脂产品的制备方法1(1)黑木耳液体菌种的制备。
①菌种活化从母种试管中切出蚕豆大小的菌丝块接种子于PDA斜面的中部，于26℃培养7d。
②一级种子培养以1000mL培养液计，取麦芽汁(Bx3)1000mL、2g蛋白胨、2g KH2PO4、1g MgSO4，pH自然，采用500mL三角瓶，装液量为100mL。培养液在0.11MPa压力条件下灭菌30分钟，然后在无菌接种室中将活化后的斜面母种培养基，切成0.5×0.5cm大小，接入7-8块/瓶，最后于28℃摇床培养5d，其中前18小时转速80r/min，18小时后转速改为100r/min。
③二级种子培养以1000mL培养液计，取蔗糖50g，麸皮80g(加入10倍水煮沸后过滤去渣)，酵母膏5g，KH2PO4 2g、MgSO4 1g，加水补足至1000mL，于500ml三角瓶装培养基100ml，培养液在0.11MPa压力条件下灭菌30分钟。然后在无菌接种室接入5mL上述一级种子，28℃，100r/min培养3d。
(2)黑木耳菌丝体发酵。以27L培养基计，按重量百分比取1350g蔗糖、2160麸皮煮汁(加入10倍水煮沸后过滤去渣)、135g酵母膏、54g KH2PO4、27g MgSO4、13.5g泡敌，pH自然，于40L液体发酵罐中补足水至27L，然后在0.11MPa压力条件下灭菌30分钟。待培养液冷却至30℃左右时接入上述二级发酵液1350mL，25～30℃，通风量控制在1∶0.5，180r/min培养3d。
(3)黑木耳菌丝体提取精制过程。发酵结束，将发酵菌丝体连同发酵液一起经胶体磨反复处理10分钟后，用中药喷雾干燥设备瞬间喷雾干燥而成。
(4)黑木耳超微粉的制备方法将黑木耳子实体用冷水泡开、洗净，用100℃热水煮熟、捞起，晾干，超微粉碎机粉碎5分钟。
(5)取90克的黑木耳菌丝体粉与10克的黑木耳粉混合均匀，装入胶囊即可。
实施例2黑木耳降脂产品的制备方法2(1)黑木耳液体菌种的制备。按实施例1所述方法制备。
(2)黑木耳菌丝体发酵。以27L培养基计，按重量百分比取1350g葡萄糖、2160麸皮煮汁(加入10倍水煮沸后过滤去渣)、135g蛋白胨、54g KH2PO4、27g MgSO4、13.5g泡敌，pH自然，于40L液体发酵罐中补足水至27L，然后在0.11MPa压力条件下灭菌30分钟。待培养液冷却至30℃左右时接入上述二级发酵液1350mL，25～30℃，通风量控制在1∶0.5，150r/min培养3d。
(3)黑木耳菌丝体提取精制过程。发酵结束，将发酵菌丝体连同发酵液一起经胶体磨15分钟反复，喷雾干燥设备喷干或干燥箱烘干。
(4)黑木耳超微粉的制备方法将黑木耳子实体用冷水泡开、洗净，用100℃热水煮熟、捞起，晾干，超微粉碎机粉碎3分钟。
(5)取80克的黑木耳菌丝体提取物与20克的黑木耳粉混合均匀，装入胶囊即可。
实施例3黑木耳降脂产品的制备方法3(1)黑木耳液体菌种的制备。按实施例1所述方法制备。
(2)黑木耳菌丝体发酵。以27L培养基计，按重量百分比取1350g玉米粉、2160麸皮煮汁(加入10倍水煮沸后过滤去渣)、135g牛肉膏、54g KH2PO4、27g MgSO4、13.5g泡敌，pH自然，于40L液体发酵罐中补足水至27L，然后在0.11MPa压力条件下灭菌30分钟。待培养液冷却至30℃左右时接入上述二级发酵液1350mL，25～30℃，通风量控制在1∶0.5，120r/min培养4d。
(3)黑木耳菌丝体提取精制过程。发酵结束，将发酵菌丝体连同发酵液一起经胶体磨20分钟反复，热风循环干燥箱烘干。
(4)黑木耳超微粉的制备方法将黑木耳子实体用冷水泡开、洗净，用100℃热水煮熟、捞起，晾干，超微粉碎机粉碎8分钟。
(5)取50克的黑木耳菌丝体提取物与50克的黑木耳粉混合均匀，装袋即可。
权利要求
1.黑木耳降脂产品的制备方法，其特征在于包括以下步骤按重量百分比取50～100％的黑木耳菌丝体粉与0～50％的黑木耳粉末混合均匀而成。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的黑木耳菌丝体的制备方法为将黑木耳液体发酵菌丝体连同发酵液一起经胶体磨处理10～20分钟后干燥即可。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于制备黑木耳菌丝体所使用的黑木耳发酵菌丝体的发酵过程为按重量百分比取3～5％碳源、5～8％麸皮煮汁、0.5～1％氮源、0.1～0.2％ KH2PO4、0.1～0.2％ MgSO4、消泡剂适量，pH自然，液体发酵罐装量1∶0.2～0.7，接种量为2～10％，25～30℃，通风量控制在1∶0.2～0.5，100～180r/min培养3d。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于制备黑木耳菌丝体所使用的黑木耳发酵菌丝体的发酵过程为按重量百分比取5％蔗糖、8％麸皮煮汁、0.5％酵母膏、0.2％ KH2PO4、0.1％ MgSO4、0.05％泡敌，pH自然，液体发酵罐装量1∶0.7，接种量为5％，25～30℃，通风量控制在1∶0.5，100～180r/min培养3d。
5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于发酵菌种选用Au-5菌株。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于菌种的制备过程为1)菌种活化从母种试管中切出5～10×5～10mm的菌丝块接种子于PDA斜面的中部，于25～28℃培养7～10d；2)一级种子培养100ml麦芽汁、0.2g蛋白胨、0.2g KH2PO4、0.1g MgSO4，pH自然，采用500ml三角瓶，装液量为100ml，接入活化菌种，28～30℃，100r/min培养5d；3)二级种子培养于500ml三角瓶装上述一级种子培养液100ml，接入一级种的种量为5％，28～30℃，100r/min培养3d。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的黑木耳粉末的制备方法为将黑木耳子实体泡开、洗净后煮熟并晾干，粉碎20目以上即可。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于粉碎过程采用超微粉碎机粉碎3分钟以上。
全文摘要
本发明涉及一种黑木耳降脂产品的制备方法，属于一种多糖类的制备方法领域。本发明通过采用黑木耳深层液体发酵技术，经胶体磨细胞破壁处理后全面提取黑木耳深层发酵培养物的胞内及胞外多糖，最后与经过细胞破壁处理的黑木耳粉精制而成。本发明所制得的黑木耳降脂产品，具有明显的降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白作用，可用于高血脂症病人的辅助治疗或正常人预防高血脂症的产生。
文档编号A23L1/29GK101057659SQ20071002810
公开日2007年10月24日 申请日期2007年5月22日 优先权日2007年5月22日
发明者谢意珍, 李崇, 周静文, 张智, 李森柱 申请人:广东粤微食用菌技术有限公司