人Prox1蛋白及其抗乙肝病毒感染的用途的利记博彩app

专利名称：人Prox1蛋白及其抗乙肝病毒感染的用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及蛋白质工程、基因工程和生物医药领域，具体涉及人Proxl蛋白、其核苷酸编码序列以及它们在治疗乙肝病毒感染或乙型肝炎中的应用。
背景技术：
中国是乙肝病毒感染的高危区，人口的10％以上为乙肝病毒携带者，由乙肝病毒感染引起的慢性乙型肝炎易发展为肝硬化和肝癌。
乙肝病毒的基因组含有四个基本阅读框架，编码四种蛋白，它们分别是表面蛋白(又称为表面抗原)、核心蛋白(核心抗原)、聚合酶和X蛋白。乙肝病毒基因的表达受到病毒的四个启动子和两个增强子的调控(Seeger，C.and Mason，W.S.2000.Microbiol.Mol.Biol.Rev.6451-68)，存在四个调控区，即核心蛋白启动子/增强子II(Cp/ENII)、前表面蛋白启动子(Sp1)、表面蛋白启动子(Sp2)和X蛋白启动子/增强子I(Xp/ENI)。一些细胞内转录调控因子通过结合上述调控区，调节调控区的活性，进而调控乙肝病毒基因的表达。由于乙肝病毒基因组复制过程反转录的模板是前基因组RNA，因此，乙肝病毒基因的表达，特别是由Cp/ENII启动的前基因组RNA的表达直接关系乙肝病毒能否顺利复制和增殖，在病毒的生活史中具有中心的地位。
目前，临床上对慢性乙肝患者的治疗手段仅有有限的治疗效果。目前使用的治疗慢性乙肝的药物主要是两种干扰素和贺普丁(lamivudine)，前者有效率较低，副作用大，且价格昂贵。后者如长期使用，可能由于耐药变异株的产生而影响疗效。因此，本领域仍然迫切需要研制出更为有效的新型治疗慢性乙肝的药物。抑制乙肝病毒基因表达和复制的分子具有潜在的药物开发价值。

发明内容
本发明者在前期其它工作中曾发现人转录调控因子hB1F的辅抑制因子Proxl(Qin，J.et al.2004.Mol.Endocrinol.182424-2439)。由于hB1F是调控乙肝病毒Cp/ENII活性的关键调控因子，因此，在本发明中，本发明者对Proxl是否抑制Cp/ENII的活性，并进而抑制乙肝病毒基因表达和复制，进行了详尽的研究。研究结果显示，Proxl不仅抑制Cp/ENII的活性，而且还抑制Sp1和Xp/ENI的活性，对乙肝病毒基因表达和复制有全面的抑制作用，显示其作为强有力的抑制蛋白在抗乙肝病毒感染中的应用可能性。从而完成了本发明。
具体而言，本发明第一方面提供了一种分离的蛋白，其特征在于，所述蛋白包含选自以下的氨基酸序列，(a)序列表SEQ ID NO1所示的氨基酸序列；(b)相对于SEQ ID NO1所示的氨基酸序列有一个或多个氨基酸缺失、替代或插入且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列；(c)相对于SEQ ID NO1所示的氨基酸序列有90％以上同源性且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列。
本发明另一方面提供了一种编码本发明蛋白的核苷酸序列。
本发明另一方面提供了一种构建物，所述构建物含有本发明上述核苷酸序列以及与所述核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。
本发明另一方面提供了一种细胞，所述细胞含有本发明上述的蛋白、核苷酸序列或构建物。
本发明另一方面还提供了本发明上述的蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞在制备治疗乙肝病毒感染或乙型肝炎的药物中的用途，以及含有所述蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明获得的蛋白能抑制Cp/ENII以及Sp1和Xp/ENI的活性，从而能够抑制乙肝病毒基因的表达和病毒DNA的复制，显示出该蛋白作为特异的抑制剂在抗乙肝病毒感染中的应用前景，为研制新型抗乙肝病毒感染药物奠定了基础。


图1、显示了受乙肝病毒不同调控区控制的荧光素酶报告基因在过表达Proxl的人肝癌细胞株HepG2中的活性变化。Cp/ENII(a)、Xp/ENI(b)、Sp1(c)和Sp2(d)。
图2、显示了受乙肝病毒不同调控区控制的荧光素酶报告基因在过表达缺失(aa1-107)突变体Prox1的人肝癌细胞株HepG2中的活性变化。Cp/ENII(a)、Xp/ENI(b)和Sp1(c)。
图3、显示了乙肝病毒基因在过表达全长或缺失突变体Prox1的人肝癌细胞株HepG2中的表达情况。第1道、空白对照(C)；第2道、空载体(pcDNA3)；第3道、过表达全长Prox1；第4道、过表达缺失突变体Prox1。
图4、显示了乙肝病毒全基因组在过表达全长或缺失突变体Prox1的人肝癌细胞株HepG2中的复制情况。第1道、空白对照(C)；细胞内(Intracellular)病毒基因组复制中间物第2道、空载体(pcDNA3)；第3道、过表达全长Prox1；第4道、过表达缺失突变体Prox1；细胞外病毒基因组(Extracellular)第5道、空载体(pcDNA3)；第6道、过表达全长Prox1；第7道、过表达缺失突变体Prox1。RC部分环状；DL双链；SS单链。
具体实施例方式
本发明第一方面提供了一种分离的蛋白Prox1，其特征在于，所述蛋白包含选自以下的氨基酸序列，(a)序列表SEQ ID NO1所示的氨基酸序列；(b)相对于SEQ ID NO1所示的氨基酸序列有一个或多个氨基酸缺失、替代或插入且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列；(c)相对于SEQ ID NO1所示的氨基酸序列有90％以上同源性且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列。
在本发明中，术语“分离的”在用于核酸或蛋白质时，表示核酸或蛋白质基本上不含其它在天然状态下相关的细胞成分，其最好呈均质状态，但也可以是干的或水溶液。纯度和均一性通常可用分析化学方法如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法来测定。
术语“蛋白质”、“肽”或“多肽”可互换使用。它们指通过肽键或酰胺键连接在一起的两个或多个氨基酸的链，无论是否经过翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)。本发明中的全长Prox1蛋白即是具有序列表SEQ ID NO1所示氨基酸序列的蛋白。然而，本发明定义内还包括与所述Prox1具有进化相关性的其它物种的Prox1蛋白。
本发明的蛋白还包括了所述蛋白多肽的具有相同或相似生物活性或功能的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)相对于天然蛋白的氨基酸序列有若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代。另外，所述缺失或插入(增加)也可发生在C末端和/或N末端(通常有20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内的氨基酸缺失或增加)。在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。提供功能相似氨基酸的保守性置换表是本领域所熟知的。下列5组各自含有能相互保守置换的氨基酸脂族甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)；芳族苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；含硫甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)；碱性精氨酸(R)、赖氨酸(K)、组氨酸(H)；酸性天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)。另外，该术语还包括了蛋白的片段或衍生物，条件是该片段或衍生物保留了所希望的蛋白生物活性。
上述变异形式还包括上述蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然蛋白的差别可以是氨基酸序列上的差异和/或不影响序列的修饰形式上的差异。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。修饰(通常不改变一级结构)形式包括体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。
本发明的蛋白多肽还包括与其相同(同源)或基本上相同(同源)的多肽，例如，有至少60％、更佳70％、还要佳80％、90％、甚至95％以上的同源性或相同性的多肽。
在两个或多个核酸或多肽序列的情况下，术语“相同”或“相同性百分数”是指，当比较和排列对比其最大一致性(用下列序列对比算法之一(或本领域技术人员可获得的其他算法)或目视观察来测定)时，两个或多个序列或亚序列相同，或具有指定百分数的相同氨基酸残基或核苷酸。术语“基本上相同”是指，当比较和排列对比其最大一致性(用下列序列对比算法之一或目视观察来测定)时，两个或多个序列或亚序列具有至少60％、较佳的80％、最佳的90-95％的核苷酸或氨基酸残基相同性。这样的“基本上相同的”序列通常被认为是同源的。为了比较序列和确定同源性，通常将一个序列作为参比序列与测试序列比较。当用序列对比算法时，将测试和参比序列输入计算机内，指定亚序列坐标，如果需要，指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指定的程序参数计算测试序列相对于参比序列的序列相同性百分数。序列比较的最优序列排列对比可采用例如Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2482(1981)中的局部同源性算法、Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48443(1970)中的同源性排列算法、Pearson和Lipman Proc.Natl.Acad.Sci(USA)852444(1988)中的相似性搜寻方法、这些算法的计算机化操作(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Wisconsin Genetics软件包，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，WI)来进行。
本发明所用的术语“(所希望的)生物活性”指该蛋白通过抑制Cp/ENII、Sp1和Xp/ENI的活性来全面抑制乙肝病毒基因表达和复制。
本发明的蛋白还可与其它基因或基因片断形成融合蛋白。适用于本发明的所述其它基因没有特别限制，几乎所有的基因、基因片断或多聚核苷酸都可用于本发明。代表性的例子包括(但并不限于)谷胱甘肽S-转移酶(GST)或麦芽糖结合蛋白(MBP)。
本发明另一方面还涉及编码本发明上述蛋白的核苷酸序列，以及含有所述核苷酸序列以及与所述核苷酸序列操作性相连的表达调控序列的构建物。所述核苷酸序列可以是DNA形式或RNA形式。
本发明的核苷酸序列通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，通常可通过重叠(overlapping)扩增，例如进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
本文所用的术语“可操作连接”是指核苷酸序列与包括指导转录起始、翻译起始、转录终止和翻译终止的调控序列之间的连接。“构建物”是指包含编码本发明的寡肽、短肽、多肽或蛋白的核苷酸序列以及指导其转录起始、翻译起始、转录终止和翻译终止的调控序列的载体或质粒。“载体”指本领域熟知的原核或真核克隆和表达质粒、病毒载体(噬菌体、植物病毒、昆虫病毒、哺乳动物病毒)或其他载体。此外，载体包含一个或多个选择性标记基因，以用于选择转化或转染的宿主细胞的表型，如真核细胞使用的新霉素抗性，大肠杆菌使用的四环素或氨苄青霉素抗性等。
在本发明中，使用本领域的技术人员熟知的方法将包含编码本发明的蛋白的核苷酸序列插入到载体中。这些方法包括但不限于体外重组DNA技术、体内重组技术等(Sambrook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory.New York，1989)。
上述载体可用于转化或转染适当的原核和真核细胞，以使其能够表达所编码的本发明的蛋白。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如昆虫细胞和哺乳动物细胞。代表性例子有大肠杆菌、毕赤酵母、果蝇S2或Sf9细胞、哺乳动物CHO、COS、293细胞等。可采用的转化、转染方法包括但并不限于磷酸钙共沉淀法、显微注射、电穿孔、脂质体介导等。
因此，本发明另一方面还提供了含有本发明上述的蛋白、核苷酸序列或构建物的细胞。
本发明的蛋白可在细胞内表达、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种方法分离和纯化表达产物。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
本发明还涉及上述蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞在制备治疗乙肝病毒感染或乙型肝炎的药物中的用途，以及含有所述蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞和药学上可接受的载体的药物组合物。本文所用的术语“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。本文所用的“药学上可接受的载体”应当与本发明的蛋白、核苷酸序列、构建物或细胞相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物的效果。可作为药学上可接受的载体或其组分的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。
本发明的药物组合物可根据需要制成各种剂型，并可由医师根据患者种类、年龄、体重和大致疾病状况、给药方式等因素确定对病人有益的剂量进行施用。为了提高用药效果，本发明的蛋白也可以与其他药物共同使用。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。除非另有描述，本发明的实施将采用分子生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，这些均是本领域技术人员所知的。这些技术在下列文献中有完整的描述例如，Sambrook《分子克隆实验指南》第2版(1989)；《DNA克隆》第I和II卷(D.N.Glover编辑1985)；《寡核苷酸合成》(M.J.Gait编辑，1984)；《核酸杂交》(B.D.Hames和S.J.Higgins编辑.1984)；《蛋白质纯化原理和实践》第2版(Springer-Verlag，N.Y.)，以及《实验免疫学手册》I-IV卷(D.C.Weir和C.C.Blackwell编辑1986)。或者，可按照试剂生产商所提供的说明书进行。
实施例1Prox1蛋白抑制乙肝病毒多个调控区的活性将含有编码全长Prox1蛋白的核苷酸序列的表达质粒pcDNA3-Prox1(见文献Qin，J.et al.2004.Mol.Endocrinol.182424-2439)转染肝癌细胞株HepG2，同时分别共转染受乙肝病毒不同调控区控制的荧光素酶报告基因质粒pENII/Cp-Luc、pENI/Xp-Luc、pSp1-Luc和pSp2-Luc，转染48小时后，收获并破碎细胞，收集细胞上清进行荧光素酶活性的测定。以共转染空载体和相应荧光素酶报告基因质粒的细胞上清为对照，比较不同调控区在过表达Prox1蛋白后的活性变化。如附图1a-d分别所示，Prox1能抑制乙肝病毒四个调控区中的三个的活性，即Cp/ENII、Xp/ENI和Sp1，但对Sp2调控区的活性则没有影响。
实施例2Prox1蛋白N-端的氨基酸1-107是抑制Cp/ENII和Sp1调控区活性所需要的。
将含有编码全长和缺失了N-端氨基酸序列1-107的Prox1蛋白的核苷酸序列的表达质粒分别转染肝癌细胞株HepG2，同时分别共转染受乙肝病毒不同调控区控制的荧光素酶报告基因质粒，转染48小时后，收获并破碎细胞，收集细胞上清进行荧光素酶活性的测定。以共转染空载体和荧光素酶报告基因质粒的细胞上清为对照，比较不同调控区在过表达上述全长或缺失突变的Prox1蛋白后的活性变化。如附图2a-c分别所示，缺失突变体Prox1对Cp/ENII和Sp1的抑制作用明显减弱，但对Xp/ENI调控区活性的抑制作用与全长Prox1相比没有影响。
实施例3Prox1蛋白抑制乙肝病毒基因的表达将含有编码全长和缺失了N-端氨基酸序列1-107的Prox1蛋白的核苷酸序列的表达质粒分别转染肝癌细胞株HepG2，同时分别共转染含有具复制能力的乙肝病毒全基因组的表达质粒pWT(Dr.Yu Xianming，密歇根州立大学赠送)，转染96小时后，收获并破碎细胞，按供应商的操作指示，用TRIzol试剂(Invitrogen Life Technologies)提取细胞内RNA，进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，以Prime-a-gene试剂盒标记(按Promega公司提供的操作指示)的乙肝病毒基因组为探针，进行Northern杂交检测乙肝病毒特异的转录产物。以共转染空载体和pWT的细胞RNA为对照，比较乙肝病毒基因在过表达全长或缺失突变的Prox1蛋白后的表达情况。如附图3所示，全长Prox1有效地抑制乙肝病毒基因的表达，而缺失突变体Prox1对乙肝病毒基因表达的抑制作用明显减弱。
实施例4乙肝病毒基因的表达Prox1蛋白抑制乙肝病毒的复制将含有编码全长和缺失了N-端氨基酸序列1-107的Prox1蛋白的核苷酸序列的表达质粒分别转染肝癌细胞株HepG2，同时分别共转染含有具复制能力的乙肝病毒全基因组的表达质粒pWT，转染96小时后，按下述方法提取细胞外病毒DNA用PEG8000(配制在25mM Tris-HCl(pH7.5)中，终浓度10％)在4℃下沉淀培养液中的乙肝病毒颗粒，在16,000g下离心30分钟收集病毒颗粒，将病毒颗粒重悬在含有10mM MgCl2的50mM Tris-HCl(pH7.5)中。污染的转染质粒经DNaseI(100ug/ml，Sigma)37℃1小时处理去除，病毒蛋白经proteinase K(100ug/ml，AmershamPharmacia Biotech，配制在25mM EDTA，150mM NaCl和1％SDS中)50℃3小时处理去除。
按下述方法提取细胞内病毒基因组复制中间物用1％NP-40，50mM Tris-HCl(pH7.5)和8％sucrose在37℃15分钟处理裂解细胞，污染的质粒和病毒核心蛋白按前节所述方法处理去除，酚/氯仿抽提后，病毒DNA用酒精沉淀离心获得。
提取的病毒DNA，进行非变性琼脂糖凝胶电泳，以Prime-a-gene试剂盒标记(按Promega公司提供的操作指示)的乙肝病毒基因组为探针，进行Southern杂交检测乙肝病毒特异的复制中间产物。分别以共转染空载体和pWT的细胞内外DNA为对照，比较乙肝病毒基因组在过表达上述全长或缺失突变的Prox1蛋白后的复制情况。如附图4所示，全长Prox1有效地抑制乙肝病毒的复制，而缺失突变体Prox1对乙肝病毒基因组复制的抑制作用明显减弱。
上述结果显示出本发明的Prox1蛋白作为特异的抑制剂抗乙肝病毒感染的应用前景，为研制新型抗乙肝病毒感染药物奠定了基础。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表<110>中国科学院上海生命科学研究院<120>人Prox1蛋白及其抗乙肝病毒感染的用途<130>058176<160>1<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>737<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>1Met Pro Asp His Asp Ser Thr Ala Leu Leu Ser Arg Gln Thr Lys Arg1 5 10 15Arg Arg Val Asp Ile Gly Val Lys Arg Thr Val Gly Thr Ala Ser Ala20 25 30Phe Phe Ala Lys Ala Arg Ala Thr Phe Phe Ser Ala Met Asn Pro Gln35 40 45Gly Ser Glu Gln Asp Val Glu Tyr Ser Val Val Gln His Ala Asp Gly50 55 60Glu Lys Ser Asn Val Leu Arg Lys Leu Leu Lys Arg Ala Asn Ser Tyr65 70 75 80Glu Asp Ala Met Met Pro Phe Pro Gly Ala Thr Ile Ile Ser Gln Leu85 90 95Leu Lys Asn Asn Met Asn Lys Asn Gly Gly Thr Glu Pro Ser Phe Gln100 105 110Ala Ser Gly Leu Ser Ser Thr Gly Ser Glu Val His Gln Glu Asp Ile115 120 125Cys Ser ASn Ser Ser Arg Asp Ser Pro Pro Glu Cys Leu Ser Pro Phe130 135 140Gly Arg Pro Thr Met Ser Gln Phe Asp Met Asp Arg Leu Cys Asp Glu145 150 155 160His Leu Arg Ala Lys Arg Ala Arg Val Glu Asn Ile Ile Arg Gly Met165 170 175Ser His Ser Pro Ser Val Ala Leu Arg Gly Asn Glu Asn Glu Arg Glu180 185 190Met Ala Pro Gln Ser Val Ser Pro Arg Glu Ser Tyr Arg Glu Asn Lys195 200 205Arg Lys Gln Lys Leu Pro Gln Gln Gln Gln Gln Ser Phe Gln Gln Leu2l0 215 220
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权利要求
1.一种分离的蛋白，其特征在于，所述蛋白包含选自以下的氨基酸序列，(a)序列表SEQ ID NO1所示的氨基酸序列；(b)相对于SEQ ID NO1所示的氨基酸序列有一个或多个氨基酸缺失、替代或插入且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列；(c)相对于SEQ ID NO1所示的氨基酸序列有90％以上同源性且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列。
2.一种分离的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列编码权利要求1所述的蛋白。
3.一种构建物，其特征在于，所述构建物含有权利要求2所述的核苷酸序列以及与所述核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。
4.一种细胞，其特征在于，所述细胞含有权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的核苷酸序列或权利要求3所述的构建物。
5.权利要求1所述的分离的蛋白、权利要求2所述的分离的核苷酸序列、权利要求3所述的构建物或权利要求4所述的细胞在制备治疗乙肝病毒感染或乙型肝炎的药物中的用途。
6.一种用于治疗乙肝病毒感染或乙型肝炎的药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1所述的分离的蛋白、权利要求2所述的分离的核苷酸序列、权利要求3所述的构建物或权利要求4所述的细胞，以及药学上可接受的载体。
全文摘要
本发明涉及了一种蛋白Prox1，所述蛋白包含SEQ ID NO1所示的氨基酸序列，本发明还涉及所述蛋白的核苷酸序列、构建物、细胞和应用。所述蛋白能抑制乙肝病毒基因的表达和病毒基因组的复制，显示出该蛋白在抗乙肝病毒感染中的应用前景。
文档编号C12N5/08GK1951961SQ20051003058
公开日2007年4月25日 申请日期2005年10月17日 优先权日2005年10月17日
发明者谢幼华, 汪垣, 秦骏 申请人:中国科学院上海生命科学研究院