专利名称：一种微生物培养基及其用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及一种微生物培养基及其用途，特别是一种改进的硫乙醇酸盐培养基，该培养基适用于厌氧菌或兼性厌氧菌的菌落形成单位(Colony Forming Units，CFU)计数，特别是生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)菌落形成单位(ColonyForming Units，CFU)计数，并用于无菌试验培养基灵敏度试验，属于生物制品领域。
背景技术：
微生物培养基(简称培养基)作为科学研究和应用科学的重要支撑条件，发挥着其他手段不可替代的作用。除专门规定的之外，药品、生物制品、敷料、缝合线、无菌器具以及药典中要求无菌检查的品种都需要进行无菌检查。无菌试验培养基是药品、生物制品无菌检验的重要手段。如果无菌试验培养基本身存在质量问题，将影响被测药品、生物制品的无菌检查结果，而临床上一旦使用含菌的药品、生物制品，将可能导致十分严重的后果。无菌试验培养基质量的优劣直接关系被检测药品、生物制品的质量，并进一步关系到用药的安全性。
目前我国进行无菌检测的培养基主要为《中华人民共和国药典》(2000年版，简称《药典》)和《中国生物制品规程》(2000年版，简称《规程》)中公开的硫乙醇酸盐流体培养基I&II、改良马丁培养基、选择性培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基和改良马丁琼脂培养基。
需氧性和厌氧性杂菌的无菌检查常用硫乙醇酸盐培养基，现有技术中公开的硫乙醇酸盐培养基都是流体状，主要成分为酪胨(胰酶水解)15.0g酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g 氯化钠2.5g
L-胱氨酸0.5g琼脂 0.5～0.7g硫乙醇酸钠 0.5g新配制的0.1％刃天青溶液1.0ml(或硫乙醇酸0.3ml) (或新配制的0.2％亚甲基蓝溶液0.5ml)水 1000ml现有技术中认为，由于上述培养基具有一定的黏度，不适宜检测某些被测样品，如粘稠供试品，在这种情况下，通常去除上述配方中的琼脂和刃天青，在美国，这种不含有琼脂和刃天青的硫乙醇酸盐培养基也叫做选择性硫乙醇酸盐培养基，国内则称为不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。此培养基应在厌氧条件下培养。
现有技术中，无菌试验培养基灵敏度检查法是质控无菌试验用培养基的手段，其方法主要公开在2000年版的《药典》和《规程》中，《药典》中规定的需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法都包括菌液的制备和接种，并基本上通过接种培养基管数的2/3以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度，3次试验中，以2次达到的最高灵敏度为判定标准。
2005版《药典》的征求意见稿中公开了如下的无菌试验培养基灵敏度试验方法，其中涉及需氧菌、厌氧菌的检查方法为将某一菌种的新鲜培养物分别接种于被检的培养基中养培一定时间，上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每毫升含菌10～100菌落形成单位(cfu)的菌悬液。取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种菌种各2支，每支接种量为1ml(含菌10～100cfu)，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。若空白对照管无菌生长，加菌的培养基管均生长良好，则该培养基的灵敏度检查符合规定。
欧洲、美国、英国等发达国家和地区的药典中主要采用微生物促生长试验法，在液体培养基中接种少量(10-100CFU)菌，培养一定时间后观察是否出现清晰可见的微生物生长。对于需氧菌和厌氧菌，所采用的培养基亦为液体硫乙醇酸盐培养基或选择性硫乙醇酸盐培养基。
现有的研究证明，《规程》中无菌试验培养基灵敏度试验法的准确性欠佳(参见高尚先等人“对无菌试验培养基灵敏度试验法准确性的初步研究”，《药物分析杂志》，2004，24(1)52-58)。而《药典》中，采用比浊稀释法制备菌悬液，误差较大，难以准确加入质控菌的活菌数。2005版《药典》中公开的质控菌的CFU计数为稀释法，并非真实的CFU计数，生孢梭菌的CFU计数缺乏可操作性。国外亦未见生孢梭菌的CFU计数方法。
此外，培养基也是疾病诊断的重要手段之一。尽管分子和免疫学诊断技术不断发展，采用微生物培养法鉴定某些致病菌仍然是至关重要的手段。
如果培养基含有某种或多种细菌生长所需要的营养成分时，将菌株接种于培养基上，在合宜温度下培养，1-2天内菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，现有技术中，通过平板或平皿培养来检查细菌的数量和类型。
菌落形成单位(Colony Forming Units，CFU)计数是在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖形成肉眼可见的菌落，称为菌落形成单位，这种使用菌落形成单位表达样品中活菌的数量被称为菌落形成单位计数(CFU)。也就是说，采用CFU计数时，样品中活菌含量总数为在一定的培养条件下单位容量中的菌落形成单位，缩写可表示为CFU/mL，CFU/25cm2，CFU/皿；而不是样品中绝对菌数。目前，菌落形成单位计数广泛应用于采用微生物培养基诊断疾病，参见中国专利申请01117809.4。
因此开发能够用于无菌试验培养基灵敏度试验中质控菌CFU计数的培养基或疾病诊断的培养基是非常迫切而又具有实际意义的。
发明内容
本发明目的在于提供一种微生物培养基，该培养基适宜于厌氧或兼性厌氧菌，特别是生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)菌落形成单位(Colony Forming Units，CFU)计数，其CFU计数能够接近最大活菌数，大大提高无菌试验培养基灵敏度试验中质控菌生孢梭菌CFU计数的准确性，以及疾病诊断的准确性，具有良好的可操作性。
本发明的另一目的在于提供上述微生物培养基在无菌试验培养基灵敏度试验中生孢梭菌CFU计数以及疾病诊断中的用途。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种微生物培养基，其在1000重量份的水中含有胰酪蛋白胨5-30重量份，酵母浸出粉0.5-20重量份，葡萄糖0.5-20重量份，氯化钠1-15重量份，L-胱氨酸0.1-5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.1-8重量份，，其特征在于所述微生物培养基中，还含有琼脂，琼脂的含量为使所述的微生物培养基的凝胶强度为50-500g/cm2。
优选琼脂的含量为使所述的微生物培养基的凝胶强度为100-400g/cm2。更优选琼脂的含量为使所述的微生物培养基的凝胶强度为140-350g/cm2。
优选其他组分的含量为胰酪蛋白胨12-18重量份，酵母浸出粉3-8重量份，葡萄糖3-8重量份，氯化钠2-4重量份，L-胱氨酸0.2-0.8重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.2-0.8重量份。
更优选在1000重量份水中含有胰酪蛋白胨15.0重量份，酵母浸出粉5.0重量份，葡萄糖5.0重量份，氯化钠2.5重量份，L-胱氨酸0.5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.5重量份。
本发明的微生物培养基还包括0.0005-0.01重量份的刃天清或新配制的0.2％亚甲基蓝溶液0.2---0.8重量份。
在本发明的另一种实施方式中，所述微生物培养基为在1000重量份的水中含有胰酪蛋白胨5-30重量份，酵母浸出粉0.5-20重量份，葡萄糖0.5-20重量份，氯化钠1-15重量份，L-胱氨酸0.1-5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.1-8重量份，其特征在于所述微生物培养基中，还含有2-10重量份的琼脂。
其中琼脂的含量优选为4-6重量份；更优选为5重量份。
优选其他组分的含量为在1000重量份水中，胰酪蛋白胨12-18重量份，酵母浸出粉3-8重量份，葡萄糖3-8重量份，氯化钠2-4重量份，L-胱氨酸0.2-0.8重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.2-0.8重量份。
更优选在1000重量份水中含有胰酪蛋白胨15.0重量份，酵母浸出粉5.0重量份，葡萄糖5.0重量份，氯化钠2.5重量份，L-胱氨酸0.5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.5重量份。
上述培养基中还进一步包括0.001-0.003g刃天清或新配制的0.2％亚甲基蓝溶液0.2-0.8ml。
本发明的培养基的制备方法为除葡萄糖、刃天青外，取上述成分加入水中，在低于40度下溶解后，调节PH为弱碱性，煮沸，滤请，加入葡萄糖和/或刃天青，摇匀，调节PH6.5-7.5，灭菌并分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色)不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的颜色不得超过培养基深度的1/3，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20分钟)，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
本发明的培养基可以用于厌氧菌或兼性厌氧菌的菌落形成单位(ColonyForming Units，CFU)计数，特别是生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)菌落形成单位(Colony Forming Units，CFU)计数，以及在无菌试验培养基灵敏度试验上的应用。
本发明的研究人员在对生孢梭菌CFU计数试验的研究中意外地发现，与现有技术中的教导相反，当硫乙醇酸盐培养基中琼脂的用量增加至使该培养基的凝胶强度为50-500时，在各组分的综合作用下，本发明的培养基为软固体状并具有良好的成型性，成型后富有弹性和韧性，厌氧菌或兼性厌氧菌的活菌在该培养基上分布和生长良好；这使得采用该培养基进行生孢梭菌CFU计数成为可能。进一步研究发现，采用该培养基可使该菌的CFU计数接近最大活菌数，菌落直径较大、形态良好、呈单个典型菌落。因此，采用本发明培养基进行生孢梭菌CFU计数，具有更高的灵敏度、准确性及可操作性。
本发明中的菌落形成单位(colony forming unit，CFU)计数，是指在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以此表达活菌的数量。
大量的实验证明，生孢梭菌在本发明的微生物培养基中的CFU计数结果，明显优于现有技术中公开的其它各种培养基，包括但不限于厌氧菌琼脂培养基、硫乙醇酸盐(1.4％琼脂)固体培养基、营养琼脂培养基、含琼脂浓度为0.5％的营养琼脂培养基等。特别是凝胶强度为140-250g/cm2或琼脂含量为4-8重量份的微生物培养基，效果远远好于现有技术中公开的任何一种培养基，这可能是由于当凝胶强度过低时，琼脂仅仅起到增稠的作用，而不能凝固，当凝胶强度过高时，不利于菌的生长。
虽然本发明的培养基在有氧条件下的菌落形成单位计数结果优于现有技术中的其他微生物培养基，但厌氧条件下培养的结果明显优于有氧条件。
本发明还涉及一种厌氧菌或兼性厌氧菌CFU计数的方法，包括以下步骤(1)制备菌含量为1×10-6菌/ml的厌氧菌或兼性厌氧菌菌液；(2)将菌液加入无菌培养皿中，用本发明的微生物培养基浇注，(3)厌氧条件下25-38℃培养，12-72小时内进行平皿CFU计数。
步骤(1)中，菌液的制备方法为将菌种接种于不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基中，经30-35℃培养12-72小时后，将其置于装有无菌生理盐水的试管内并稀释至均匀菌液，再将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度，并作10倍稀释至菌含量为1×10-6菌/mL。
其中的稀释液也可以采用0.1％蛋白胨水。
菌液的制备也可以采用《规程》和《药典》中公开的方法。
步骤(2)中，取上述菌液1mL，置直径约90mm的平皿中，注入室温至50℃左右的灭菌后的本发明的培养基约15mL，混匀。
菌株可采用浇注法或L棒涂抹法接种于本发明的微生物培养基上。优选浇注法。
步骤(2)中待培养基凝固后再进行培养，倒置培养。同时用未接种的平皿做对照。
步骤(3)中，分别在12、14、18、24、48、72小时点计菌落数。
本发明还进一步涉及一种厌氧菌或兼性厌氧菌无菌试验培养基灵敏度的检查方法，包括以下步骤(1)制备菌含量约相当于10-100菌/mL的菌液；(2)将菌液接种到至少两管被检培养基中，培养；其特征在于同时将菌液接种于平皿进行菌落计数，当平皿菌落形成单位计数结果为10-100CFU/mL时，根据该菌株接种后接种管内是否均呈现生长判定该无菌试验用培养基的灵敏度检查是否符合要求。
其中所述的平皿菌落计数是将菌液置于适宜菌落计数的相应培养基制成的平皿中或平板上，培养、计数。
进一步，所述的平皿菌落计数是将菌液各1mL，置直径约90mm的平皿中，再注入约45℃的相应培养基约15mL。
其中的培养基为凝胶强度为50-500g/cm2的微生物培养基。优选本发明的微生物培养基及其优选的组成。
在进行平皿菌落计数时，还包括将菌液与培养基混匀，凝固和倒置培养。培养温度为25-38℃，培养时间为12-72小时，并分别在12、14、18、24、48、72小时点计菌落数。优选在厌氧条件下培养18h计数，此时菌落呈单个典型菌落，无融合和扩散，CFU计数最多，菌落形态良好，最接近最大活菌数。
本发明中的厌氧菌包括破伤风梭菌、胨链球菌、胨球菌，或兼性厌氧菌包括生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌，Clostridium sporogenes，CMCC 64941株)、白喉棒状杆菌、短棒状杆菌。
上述无菌试验培养基灵敏度检查方法中，菌液的制备方法为将菌种接种于被检培养基，经30-35℃培养10-48小时后，将其置于装有无菌生理盐水的试管内并稀释至均匀菌液，再将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度，然后用生理盐水作10倍系列稀释或稀释至10-100CFU/mL的菌液。菌液的制备也可以采用《规程》和《药典》中公开的方法。
接种时，通常取上述菌液1mL，接种到9mL被检培养基中。菌株可采用浇注法或L棒涂抹法接种于本发明的微生物培养基上。优选浇注法。
本发明所述的培养基可用于生孢梭菌及其它兼性或厌氧菌的CFU计数等，最适宜生孢梭菌CFU计数。
本发明中，在菌液接种培养的同时，还要用未接种的被测培养基相同培养条件下对照，并逐日记录结果。平皿进行菌落计数的同时，至少应同时作2个平皿的计数，并同时进行平皿未接种的对照。
在平皿计数结果均为10-100CFU/mL的情况下，以该菌株接种被测培养基后2管均呈现生长为该培养基的灵敏度检查符合要求。若该菌株接种后2管均不呈现生长，为该培养基的灵敏度检查不符合要求，若该菌株接种后1管呈现生长，1管不呈现生长，按上述方法重试。
采用本发明的方法进行无菌检查时，应保证菌种分散度良好，如果必要，本发明的菌液制备过程还包括离心和取上层菌液。并用生理盐水作为稀释液。
CFU计数的高低及菌落形态直接反映了某种培养基是否适宜进行相应质控菌的CFU计数。采用本发明的微生物培养基并结合所述的菌落计数及无菌试验培养基灵敏度检查法，在浇注混匀及厌氧培养条件下的CFU计数最多，菌落形态良好，CFU计数最接近最大活菌数，使现有的无菌试验培养基灵敏度检查法中生孢梭菌的CFU计数有了标准、保证和可操作性，保证了被检无菌试验用培养基的质量，进而保证了被检药品或生物制品的质量。
具体实施例方式
下面结合实施例进一步描述本发明，但所述实施例用于说明本发明而不是限制本发明。
实施例1将胰酪蛋白胨15.0g、酵母浸出粉5.0g、氯化钠2.5g、L-胱氨酸0.5g、硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.5g、葡萄糖8.0、琼脂5g加入1000ml水中混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖5.0g，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，灭菌、分装，琼脂浓度为0.5％。
实施例2同实施例1，不同的是，琼脂为6g，琼脂浓度为0.6％。
实施例3同实施例1，不同的是，琼脂为7g，琼脂浓度为0.7％。
实施例4同实施例1，不同的是，还包括0.001g刃天清。
实施例5同实施例1，不同的是培养基中包括胰酪蛋白胨18.0g，酵母浸出粉3.0g，葡萄糖8.0g，氯化钠1g，L-胱氨酸0.8g，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.8g，琼脂5g，0.003g刃天清或新配制的0.2％亚甲基蓝溶液0.2-0.8ml，1000ml水。
实施例6同实施例1，不同的是培养基包括胰酪蛋白胨，酵母浸出粉g，葡萄糖3.0g，氯化钠4g，L-胱氨酸0.2g，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.4g，琼脂6g，1000ml水。
实施例6-9参照实施例1，按照表1的配比制备培养基表1.
实验例1采用中国科学院青岛海洋研究所生产的凝胶强度测定仪测定凝胶强度，结果见表2。
表2.本发明微生物培养基CFU的凝胶强度
结果3个培养基的凝胶强度有显著性差异(p＜0.05)。
其它实施例的凝胶强度为50-500g/cm2。
实验例2本实验例在于研究所述的微生物培养基的CFU计数及菌落形态。
1.材料和方法1.1菌种生孢梭菌(菌种号CMCC64941)，由中国药品生物制品检定所提供。
1.2培养基硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂)为北京三药科技开发公司产品、按照实施例1-3制备琼脂浓度为0.5％、0.6％和0.7％的三个本发明的微生物培养基。营养琼脂培养基由美国Difco公司生产。琼脂由美国Difco公司生产。
1.3方法1.3.1将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂)，置35℃培养24-48h；将生孢梭菌的新鲜培养物置无菌离心管中，500rpm离心5min。取上层菌液，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释至与标准比浊管相同浓度，并作10倍系列稀释至约1×10-6备用。
1.3.2制备琼脂浓度为0.5％、0.6％和0.7％的3个三个本发明的微生物培养基，将灭菌后的3个本发明的微生物培养基冷至45℃左右，将稀释好的生孢梭菌菌液1mL加入直径为90mm的无菌培养皿中，再用约20mL培养基浇注，混匀10s，待培养基凝固后(简称浇注法)置厌氧条件下35℃培养。于第12h、14h、16h、18h、24h、30h、48h和72h进行CFU/mL计数，并观察菌落形态。
2结果参见表3，琼脂浓度为0.5％与0.6％的本发明的微生物培养基CFU计数结果比较无显著性差异(P＞0.05)，但其菌落直径差异明显(P＜0.05)，在琼脂浓度为0.5％的本发明的微生物培养基上，生孢梭菌的菌落直径较大，形态良好；琼脂浓度为0.5％与0.7％的生孢梭菌CFU计数培养基CFU计数结果比较有显著性差异(P＜0.05)；琼脂浓度为0.6％与0.7％的生孢梭菌CFU计数培养基CFU计数结果比较有显著性差异(P＜0.05)。12h时，菌落很小且少。18h时，呈单个典型菌落，无融合和扩散。24h时，有明显融合和扩散，不宜计数，且未见新生菌落形成。30h之后，呈大片融合，无法计数，故生孢梭菌在琼脂浓度为0.5％的本发明的微生物培养基上培养18h时最适宜CFU计数。
表3三个本发明的微生物培养基CFU计数及菌落形态(18h)
注1#本发明的微生物培养基(0.5％琼脂)，2#本发明的微生物培养基(0.6％琼脂)，3#本发明的微生物培养基(0.7％琼脂)。
△P＜0.05，2#、3#与1#比较
■P＞0.05，2#与1#比较▲P＜0.05，3#与2#比较实验例3本实验例的目的在于研究生孢梭菌在不同培养基、不同培养条件及时间的CFU计数结果，以确定本发明微生物培养基在CFU计数及确定无菌检查培养基灵敏度上的用途。
1.材料和方法1.1菌种生孢梭菌(菌种号CMCC64941)，由中国药品生物制品检定所提供。
1.2培养基厌氧菌琼脂培养基(参见《中华医学检验全书》97年8月版，李影林主编，人民卫生出版社出版)、硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂，见中国生物制品规程2000年版第32页)、硫乙醇酸盐(1.4％琼脂)固体培养基(同上述硫乙醇酸盐培养基，但琼脂含量1.4％)、营养琼脂培养基(参见中华人民共和国药典2000年版二部附录P89)、含琼脂浓度为0.5％的营养琼脂培养基均由北京三药科技开发公司制备。按照实施例1制备琼脂浓度为0.6％的本发明的微生物培养基。
1.3方法1.3.1将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂)，置35℃培养24-48h；将生孢梭菌的新鲜培养物置无菌离心管中，500rpm离心5min。取上层菌液，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释至与标准比浊管相同浓度，并作10倍系列稀释至1×10-6备用。
1.3.2取稀释好的生孢梭菌菌液1mL，(1)以浇注法分别接种于本发明的培养基和含琼脂浓度为0.5％的营养琼脂培养基，(2)以L棒涂抹分别接种(0.25mL菌液/平皿)(下称L棒涂抹法)厌氧菌琼脂培养基、硫乙醇酸盐(1.4％琼脂)固体培养基、营养琼脂培养基。将厌氧菌琼脂培养基、本发明的培养基、硫乙醇酸盐(1.4％琼脂)固体培养基、营养琼脂培养基、含琼脂浓度为0.5％的营养琼脂培养基置厌氧条件下，同时营养琼脂培养基和本发明的培养基置有氧条件下，35℃培养。于12h、14h、16h、18h、24h、30h、48h和72h进行CFU/mL计数并观察菌落形态。每种培养基同时重复接种10份并设培养基空白对照。重复3次试验。
2.结果生孢梭菌在厌氧菌琼脂培养基、本发明的培养基、硫乙醇酸盐(1.4％琼脂)固体培养基、营养琼脂培养基、含琼脂浓度为0.5％的营养琼脂培养基上厌氧培养及在本发明的培养基和营养琼脂培养基上有氧培养，于第12h、14h、16h、18h、24h、27h、30h、48h和72h进行CFU/mL计数并观察菌落形态。
12h、14h时，菌落很小且少。16h时，菌落有所增大，但菌落数目较18h时为少，18h时呈单个典型菌落，无融合和扩散，且与24h相比菌落数未见增加，而24h时及之后，有明显融合和扩散，不宜计数。故18h为最佳计数时间，表3为18h的计数结果。表明用本发明的培养基对生孢梭菌进行CFU/mL计数，其结果明显优于其他培养基(P＜0.05)且厌氧条件培养明显优于有氧条件(P＜0.05)。
表3生孢梭菌在5个不同培养基及不同培养条件的CFU/mL计数结果
注1厌氧菌琼脂培养基，2营养琼脂(Difco)，3营养琼脂，4硫乙醇酸盐固体培养基，5本发明的培养基。
按照上述方法试验，本发明其它实施例(2-9)培养基的生孢梭菌CFU/mL计数以及对于其他厌氧菌或兼性厌氧菌的CFU/mL计数结果也都高于现有技术的结果。
*代表有氧条件下培养，其它均在厌氧条件下培养。
▲P＜0.05与3比较■P＜0.05与6比较上述结果说明，本发明的培养基可以用于厌氧菌或兼性厌氧菌的菌落形成单位(Colony Forming Units，CFU)计数，尤其用于生孢梭菌CFU计数，并进一步用于无菌试验培养基灵敏度的试验。
权利要求
1.一种微生物培养基，其在1000重量份的水中含有胰酪蛋白胨5-30重量份，酵母浸出粉0.5-20重量份，葡萄糖0.5-20重量份，氯化钠1-15重量份，L-胱氨酸0.1-5重量份，硫乙醇酸钠0.1-8重量份，其特征在于所述微生物培养基中，还含有琼脂，琼脂的含量为使所述的微生物培养基的凝胶强度为50-500g/cm2。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，优选琼脂的含量为使所述的微生物培养基的凝胶强度为100-400g/cm2，更优选凝胶强度为140-350g/cm2。
3.一种微生物培养基，所述微生物培养基为在1000重量份的水中含有胰酪蛋白胨5-30重量份，酵母浸出粉0.5-20重量份，葡萄糖0.5-20重量份，氯化钠1-15重量份，L-胱氨酸0.1-5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.1-8重量份，其特征在于所述微生物培养基中还含有2-10重量份的琼脂。
4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，琼脂的含量优选为3-7重量份；更优选为4-6重量份，更优选5重量份。
5.根据权利要求1-4任何一项所述的培养基，其特征在于含有胰酪蛋白胨12-18重量份，酵母浸出粉3-8重量份，葡萄糖3-8重量份，氯化钠2-4重量份，L-胱氨酸0.2-0.8重量份，硫乙醇酸钠0.2-0.8重量份。
6根据权利要求1-4任何一项所述的培养基，其特征在于胰酪蛋白胨15.0重量份，酵母浸出粉5.0重量份，葡萄糖5.0重量份，氯化钠2.5重量份，L-胱氨酸0.5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.5重量份。
7.根据权利要求1-4任何一项所述的培养基，其特征在于所述培养基中还进一步包括0.001-0.003重量份的刃天清或新配制的0.2％亚甲基蓝溶液0.2-0.8重量份。
8.权利要求1-7所述培养基的制备方法，包括除葡萄糖、刃天青外，按比例将培养基的成分加入水中溶解，调节PH为弱碱性，煮沸，滤清，再加入葡萄糖和/或刃天青，摇匀，调节PH6.5-7.5，灭菌并分装至适宜的容器中。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其中灭菌后其pH值为6.9-7.4。
10.权利要求1-7所述培养基在厌氧菌或兼性厌氧菌的菌落形成单位(ColonyForming Units，CFU)计数，尤其在生孢梭菌CFU计数上的用途，以及在无菌试验培养基灵敏度试验上的用途。
全文摘要
本发明公开了一种微生物培养基，在1000ml水中包括胰酪蛋白胨5－30重量份，酵母浸出粉0.5－20重量份，葡萄糖0.5－20重量份，氯化钠1－15重量份，L－胱氨酸0.1－5重量份，硫乙醇酸钠或硫乙醇酸0.1－8重量份，其特征在于所述微生物培养基中还含有琼脂，琼脂的含量为使所述的微生物培养基的凝胶强度为50－500g/cm
文档编号C12N1/20GK1746289SQ200410074538
公开日2006年3月15日 申请日期2004年9月7日 优先权日2004年9月7日
发明者高尚先, 孙彬裕, 康国华 申请人:中国药品生物制品检定所