专利名称：高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法以及试剂的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及试样中的高密度脂蛋白(以下简称HDL)中的胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒。
背景技术：
生物中的脂蛋白按照其比重，可以分为高密度脂蛋白、低密度脂蛋白(以下，简称为LDL)、极低密度脂蛋白(以下，简称为VLDL)、乳糜微粒(CM)，主要由于脱辅基蛋白的种类不同，因此，各自在生物体中的作用有很大差别，脂质组成也是各种各样的。其中，已知知道HDL与为了从包括动脉管壁的各组织接受胆固醇而除去蓄积在细胞内的胆固醇的作用有关，并且是以冠状动脉硬化症为代表的各种动脉硬化症的危险预防要素，其在血液中的水平是预知动脉硬化性疾病病发的有效指示。
以前的HDL中的胆固醇(以下，简称HDL胆固醇)的测定方法是由利用超离心方法、免疫化学的方法、电泳法、沉淀法等级分操作和胆固醇定量操作2步骤组成。然而，级分操作的操作复杂，且需要很长时间，而且还存在安全性的问题。因此，带有这些级分操作的测定方法的效率非常差，是不适于实用化的方法。
近年来，为了解决上述问题，报道了各种测定方法。例如，已经知道了下列方法在含有胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶以及胆汁酸盐、胆汁酸衍生物或者琥珀酸二辛酯磺酸盐的缓冲液中，使血清或者血浆与该酶反应，在使VLDL以及LDL中的胆固醇率先反应成HDL胆固醇，测定生成的过氧化氢后，向反应液添加非离子类的含有聚环氧乙烷氧化物基团的表面活性剂，使HDL胆固醇和该酶反应，特异性地对HDL胆固醇进行鉴别定量的方法(特开昭62-69999号公报)；通过在特定的pH以及特定的温度下，在含有来自胰脏的胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、胆汁酸组的表面活性剂以及非离子类表面活性剂的缓冲液中，使血清与该酶反应而测定HDL胆固醇的方法(特开昭63-126498号公报)。在专利文献2中记载的测定方法中，首先，LDL胆固醇和该酶进行反应，接着，HDL胆固醇和该酶进行反应，可以测定HDL胆固醇。然而，这些测定方法需要长时间进行测定，而且，对于HDL胆固醇未必是特异性地测定方法。
作为使HDL以外的脂蛋白凝聚而测定HDL胆固醇的方法，已经公知了下列方法，例如，使用硫酸葡聚糖等使HDL以外的脂蛋白凝聚的试剂、2价的金属盐以及经过化学修饰的酶的测定方法(特开平8-131197号公报)、使用聚阴离子等与HDL以外的脂蛋白形成复合体的试剂和聚环氧乙烷-聚环氧丙烷缩合物等不溶解脂蛋白的表面活性剂的测定方法(特开平8-201393号公报)、使用硫酸葡聚糖等聚阴离子、2价的金属盐、特定的非离子表面活性剂以及与来自试样的白蛋白不同的白蛋白的测定方法(特开平9-285298号公报)、对血清或者血浆中的HDL胆固醇进行测定的方法，其特征在于利用含有脂蛋白分离剂(硫酸葡聚糖等聚阴离子和镁离子等2价阳离子的组合)处理血清或者血浆，并且不对所得混合液进行固体以及液体的分离处理，并在阴离子表面活性剂(烷基磺酸或者胆汁酸或其衍生物)的存在下，使所得混合液与胆固醇酯酶以及胆固醇氧化酶反应，并对生成的过氧化氢进行测定(特开平8-116996号公报)、向生物试样中添加聚阳离子等与HDL以外的脂蛋白质形成复合体的物质和不溶解脂蛋白的特定的表面活性剂后，以酶进行测定HDL胆固醇的方法(特开平8-201393号公报)等。
然而，这些使HDL以外的脂蛋白凝聚的HDL胆固醇的测定方法虽然与现有的标准方法具有良好的关联性，但是，存在下列问题由反应产生的凝聚物引起的浊度而导致的不精密度、在对反应室进行碱洗涤的时候，与反应液中的金属盐的反应生成的金属氢氧化物的沉淀而引起对自动分析装置的过度载荷等。
作为不使HDL以外的脂蛋白凝聚而测定HDL胆固醇的方法，例如，已经公知了下列方法在胆汁酸或其盐以及白蛋白存在下，使生物试样和来自胰脏的胆固醇酯酶以及胆固醇氧化酶反应，并通过测定由该酶反应消耗或者产生的化合物而测定生物试样中的HDL胆固醇的方法(国际公开第97/40376号小册子)、在对HDL级分具有选择性的HLB值为16以上的非离子性表面活性剂的存在下，使优先作用于HDL级分的脂蛋白脂酶和/或胆固醇酯酶以及胆固醇氧化酶反应，测定试样中的HDL胆固醇的方法(国际公开第00/52480号小册子)等。另外，还公知了如下方法利用酰基聚环氧乙烷脱水山梨糖醇酯优先地把HDL以外的脂蛋白中的胆固醇转化成过氧化氢，除去产生的过氧化氢后，通过添加聚环氧乙烷烷基醚，以酶进行测定HDL胆固醇的方法(特开平9-299号公报)。
然而，在这些不使HDL以外的脂蛋白凝聚的HDL胆固醇的测定方法中，有时存在下列问题HDL以外的脂蛋白中胆固醇的不完全除去或者由对于HDL以外的脂蛋白中的胆固醇的非特异反应而引起的测定值的不准确性。
另外，当利用光学方法测定试样中的特定物质时，在来自M蛋白血症或者骨髓瘤等患者的试样中，由不溶性蛋白引起的混浊带来光学影响，这一点成为很大的问题。为了避免这种光学上的影响，一般公知如下方法使反应液中的盐类成为高浓度，使由不溶性蛋白引起的浊度消除。然而，在HDL胆固醇的测定中，由于存在高浓度的盐类，有时对HDL胆固醇特异性会下降或者进一步引起所含酶的失活，因此，在高浓度盐类的存在下测定HDL胆固醇大多情况会非常困难。
发明的公开本发明的目的是提供能够简便、且正确测定的HDL胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒。
本发明涉及下述[1]～[37]。
试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶、或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
如[1]所述的测定方法，其中，水性介质进一步含有胆汁酸衍生物。
如[2]所述的测定方法，其中，胆汁酸衍生物为阴离子性胆汁酸衍生物。
如[1]～[3]任一项所述的测定方法，其中，非离子性表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。
如[1]～[4]任一项所述的测定方法，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有非离子性表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有非离子性表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶。
如[7]所述的试剂，其中，进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
如[6]～[8]任一项所述的试剂，其中，进一步含有胆汁酸衍生物。
如[9]所述的试剂，其中，胆汁酸衍生物是阴离子性胆汁酸衍生物。
如[6]～[10]任一项所述的试剂，其中，非离子表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。
如[6]～[11]任一项所述的试剂，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有聚阴离子、非离子性表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂，在第二试剂中含有胆固醇氧化酶。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇氧化酶的第二试剂，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、非离子性表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、非离子性表面活性剂、白蛋白以及氧化型辅酶，第二试剂中含有胆固醇脱氢酶。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇脱氢酶的第二试剂，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、非离子性表面活性剂、白蛋白以及氧化型辅酶。
如[15]或者[16]所述的试剂盒，其中，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
如[13]～[17]任一项所述的试剂盒，其中，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都进一步含有胆汁酸衍生物。
如[18]所述的试剂盒，其中，胆汁酸衍生物为阴离子性胆汁酸衍生物。
如[13]～[19]任一项所述的试剂盒，其中，非离子性表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。
如[13]～[20]任一项所述的试剂盒，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有i)非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白或者ii)聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
如[23]所述的方法，其中，进一步含有聚阴离子。
如[23]或者[24]所述的方法，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
如[23]～[25]任一项所述的方法，其中，进一步含有白蛋白。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶。
如[28]所述的试剂，其中，进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
如[27]～[29]任一项所述的试剂，其中，进一步含有聚阴离子。
如[30]所述的试剂，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
如[27]～[31]任一项所述的试剂，其中，进一步含有白蛋白。
高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于由第一试剂以及第二试剂组成，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者任意地含有胆固醇酯水解酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定试剂，在第二试剂含有胆固醇氧化酶。
高密度脂蛋白质中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于由第一试剂以及第二试剂组成，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者任意地含有胆固醇酯水解酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶，在第二试剂中含有胆固醇脱氢酶。
如[34]所述的试剂盒，其中，第一试剂和第二试剂的其中之一或者两者进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
如[33]～[35]任一项所述的试剂盒，其中，第一试剂和第二试剂的其中之一或者两者进一步含有聚阴离子。
如[33]～[37]任一项所述的试剂盒，其中，第一试剂和第二试剂的其中之一或者两者进一步含有白蛋白。
本发明的HDL胆固醇的测定方法是不除去HDL以外的脂蛋白中的胆固醇而特异性地测定HDL胆固醇的方法。
作为本发明的测定方法中使用的试样，可以列举，例如，全血、血浆、血清、脊髓液、唾液、羊水、尿、汗、胰液等，优选血浆以及血清。
作为本发明中的胆固醇酯水解酶，只要对胆固醇酯具有水解能力的酶，就没有特别的限制，例如，可以使用来自动物、植物或者微生物的胆固醇酯酶、脂蛋白脂酶，此外还可以使用利用基因工程的方法而制造的胆固醇酯酶、脂蛋白脂酶等。
作为胆固醇酯水解酶，可以使用无修饰的胆固醇酯水解酶，还可以使用经过化学修饰的胆固醇酯水解酶。另外，作为胆固醇酯水解酶，还可以使用市售品。
作为市售的胆固醇酯水解酶，可以列举，例如胆固醇酯酶“Amano”2(CHE2；天野酶公司制)、胆固醇酯酶“Amano”3(CHE3天野酶公司制)、脂蛋白脂酶(LPL311；东洋纺绩公司制)、脂蛋白酯酶“Amano”6(LPL6；天野酶公司制)、胆固醇酯酶[COE313(经过化学修饰的胆固醇酯酶)；东洋纺绩公司制]等。另外，在本发明中，也可以组合2种以上的胆固醇酯水解酶而使用。
作为在胆固醇酯水解酶的化学修饰中修饰该酶的基团(化学修饰基)，可以列举，例如以聚乙二醇为主要成分的基团、以聚丙二醇为主要成分的基团、具有聚丙二醇和聚乙二醇共聚物的基团、含有水溶性多糖类的基团、磺基丙基、磺基丁基、聚氨酯基、具有螯合作用的基团，优选以聚乙二醇为主要成分的基。作为水溶性多糖类，例如，可以列举葡聚糖、支链淀粉、可溶性淀粉等。
作为对胆固醇酯水解酶进行化学修饰的试剂(化学修饰剂)，可以列举同时具有上述化学修饰基和能与酶的氨基、羧基、巯基等反应的官能团或者结构的化合物等。作为能与酶中的氨基反应的官能团或者结构，可以列举，例如羧基、活性酯基(N-羟基琥珀酰亚胺基等)、酸酐、酰基氯、醛、环氧基、1，3-丙磺酸内酯、1，4-丁磺酸内酯等。作为能与酶中的羧基反应的官能团或者结构，可以列举，例如氨基等。作为与酶中的巯基具有反应性的基团或者结构，可以列举，例如马来酰亚胺基、二硫化物、α-卤代酯(α-碘酯等)等。
还可以使用市售品作为化学修饰剂。作为市售的化学修饰剂，可以列举具有以聚乙二醇为主要成分的基团和具有N-羟基琥珀酰亚胺基的サンブライトVFM-4101、サンブライトMEAC-50HS以及サンブライトMEC-50HS(都由日本油脂公司制造)、具有以聚亚烷基二醇为主要成分的基团和酸酐结构的サンブライトAKM系列(例如，サンブライトAKM-1510等)、サンブライトADM系列以及サンブライトACM系列(都由日本油脂公司制造)、具有以聚环氧乙烷为主要成分的基团和环氧基的EPOX-3400以及M-EPOX-5000(都由Sheawater Polymers公司制)、含有具有螯合作用的基团和酸酐结构的二乙三胺-N，N，N’，N”，N”-五乙酸酐(DTPA酸酐；同仁化学公司制)等。
胆固醇酯水解酶的化学修饰方法没有特别的限制，例如，可以进行如下操作把胆固醇酯水解酶溶解于pH8.0以上的缓冲液(例如HEPES缓冲液)，在0～55℃下，添加0.01～500倍摩尔量的化学修饰剂，搅拌5分钟～5小时。作为本发明中使用的经过化学修饰的胆固醇酯水解酶，可以直接使用上述反应液，还可以使用根据需要利用超滤膜除去未反应的化学修饰剂等而得到的溶液。
作为本反应的方法中使用的胆固醇酯水解酶的浓度，只要是可以测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，在反应液中优选0.01～200U/mL的浓度，更优选0.02～100U/mL。
作为本发明中的胆固醇氧化酶，只要是具有氧化胆固醇而生成过氧化氢的能力的酶，就没有特别的限制，例如，可以使用来自动物、植物或者微生物的胆固醇氧化酶，此外还可以使用通过基因工程上的方法而制造的胆固醇氧化酶等，还能够使用胆固醇氧化酶“Amano”1(CHOD1；天野酶公司制)、胆固醇氧化酶(CO-PE；キツコ-マン公司制)、胆固醇氧化酶(COO321；东洋纺绩公司制)等市售品。另外，在本发明中，也可以组合2种以上的胆固醇氧化酶而使用。
胆固醇氧化酶可以为无修饰的酶，也可以是经过化学修饰的酶。经过化学修饰的胆固醇氧化酶，例如，可以使用上述的化学修饰剂，并利用上述的化学修饰方法而制造。
作为在本反应的方法中使用的胆固醇氧化酶的浓度，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，在反应液中优选0.01～200U/mL的浓度，更优选0.02～100U/mL的浓度。
作为本发明中的胆固醇脱氢酶，只要是具有在氧化型辅酶的存在下氧化胆固醇而产生还原型辅酶的能力的酶，就没有特别的限制，例如，可以使用来自动物、植物或者微生物的脱氢酶，此外还可以使用通过基因工程上的方法而制造的胆固醇脱氢酶等。还可以胆固醇脱氢酶“Amano”5(CHDH5；天野酶公司制)等市售品。另外，在本发明中，也可以组合2种以上的胆固醇脱氢酶而使用。胆固醇脱氢酶可以是无修饰的酶、也可以是经过化学修饰的酶。经过化学修饰的胆固醇脱氢酶，例如，可以使用上述化学修饰剂，并利用上述的化学修饰方法而制造。
作为本反应的方法中使用的胆固醇脱氢酶的浓度，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，在反应液中，优选为0.01～200U/mL的浓度，更优选0.02～100U/mL的浓度。
在使用胆固醇脱氢酶的测定方法中，使用氧化型辅酶。作为氧化型辅酶，例如，可以列举NAD、NADP、硫代-NAD、硫代-NADP等。
作为在本发明中使用的白蛋白，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的白蛋白，就没有特别的限制，例如，可以列举来自牛、马、羊、人的白蛋白等，优选牛血清白蛋白(BSA)。另外，还可以使用利用基因工程学上的方法而制造的白蛋白。在本发明中，也可以组合使用2种以上的白蛋白。作为本发明的HDL胆固醇的测定中的白蛋白的浓度，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，反应液中的浓度优选为0.001～10％，更优选为0.01-1％。
作为在本发明中使用的聚阴离子，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的聚阴离子，就没有特别的限制，例如，可以列举硫酸葡聚糖或其盐、肝素或其盐、磷钨酸或其盐、硫酸化环糊精或其盐、硫酸化低聚糖或其盐、角叉菜胶等，优选为硫酸葡聚糖或其盐。作为硫酸葡聚糖，例如，可以列举分子量为4万、8万、20万、50万、100万、200万等硫酸葡聚糖。作为硫酸化低聚糖，例如，可以列举硫酸化琼脂糖、硫酸化海藻糖、硫酸软骨素等。作为盐，例如，可以列举钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、镁盐等。另外，在本发明中，也可以使用2种以上的聚阴离子。
作为本发明的HDL胆固醇的测定中的聚阴离子的浓度，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，反应液中的浓度优选为0.001～10％，更优选为0.01～1％。
作为在本发明中使用的非离子性表面活性剂，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的非离子性表面活性剂，就没有特别的限制，例如，可以列举聚环氧乙烷烷基胺、聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷烷基醚、聚环氧乙烷烯基醚、聚环氧乙烷芳基醚衍生物、乙二胺四聚氧化亚烷基等。
作为非离子性表面活性剂，优选聚环氧乙烷烷基胺以及聚环氧乙烷烯基胺。
作为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺，例如，可以列举由通式(I) [式中，R表示直链或者支链状的烷基或者烯基，X表示氢原子或者(CH2CH2O)nH，m以及n相同或者不同，并表示1～100的整数，m+n为2～200的整数]表示的化合物[以下称为化合物(I)]。
作为在聚环氧乙烷烷基胺、化合物(I)以及聚环氧乙烷烷基醚中的烷基，可以列举直链或者支链状的碳原子数6～30的例如己基、庚基、辛基、异辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆蔻基)、十五烷基、十六烷基(鲸蜡基)、十七烷基、十八烷基(硬脂基)、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基(山萮烷基)等。
作为在聚环氧乙烷烯基胺、化合物(I)以及聚环氧乙烷烯基醚中的烯基，可以列举直链或者支链上的碳原子数6～30的例如己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、香茅烯基、十一碳烯基、十二碳烯基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、油烯基、十九碳烯基、二十碳烯基、二十一碳烯基、二十二碳烯基、二十三碳烯基、二十四碳烯基、二十五碳烯基、二十六碳烯基、二十七碳烯基、二十八碳烯基、二十九碳烯基、三十碳烯基等。
作为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺的具体例子(产品)，例如，可以列举ナイミ-ンL201(氧乙烯基十二烷基胺；日本油脂公司制造)、ナイミ-ンL207(聚环氧乙烷十二烷基胺；日本油酯公司制造)、ナイミ-ンS204、ナイミ-ンS210(聚环氧乙烷十八烷基胺；日本油脂公司制)、ニユ-コ-ルOD420(聚环氧乙烷十八烷基胺；日本乳化剂公司制)、パイォニンD3104(聚环氧乙烷月桂基胺；竹本油脂公司制)、パイォニンD3110(聚环氧乙烷月桂基胺；竹本油脂公司制)、パイォニンD3605[聚环氧乙烷烷基(大豆)胺；竹本油脂公司制]、パイォニンD3615T[聚环氧乙烷烷基(牛脂)胺；竹本油脂公司制]、BLAUNONO209(聚环氧乙烷油基氨基醚；青木油脂公司制)等。
作为聚环氧乙烷烷基醚或者聚环氧乙烷烯基醚的具体例子(产品)，例如，可以列举エマルミンL90S(聚环氧乙烷月桂基醚；三洋化成公司制)、ニユ-コ-ル1310(聚环氧乙烷十三烷基醚日本乳化剂公司制)、BLAUNON-EN1520(聚环氧乙烷油基醚；青木油脂公司制)等。
作为聚环氧乙烷芳基醚衍生物，例如，可以列举聚环氧乙烷苯乙烯化苯基醚、聚氧化亚烷基苯乙烯化苯基醚、聚环氧乙烷苯乙烯化甲基苯基醚、聚环氧乙烷苯乙烯基苯基醚缩合物、聚环氧乙烷烷基苯基醚、聚环氧乙烷烷基苯基醚甲醛缩合物等。
作为聚环氧乙烷芳基醚衍生物的具体例子(产品)，例如，可以列举ニユ-コ-ル2604、ニユ-コ-ル710(都是环氧乙烷多环苯基醚；日本乳化剂公司制)、ニユ-コ-ル2608F(聚氧化亚烷基多环苯基醚；日本乳化剂公司制)、パイォニンD6310、パイォニンD6320(都是聚环氧乙烷苯乙烯苯基醚缩合物；竹本油脂公司生产)、ニツコ-ルR1020(聚环氧乙烷壬基苯基醚甲醛缩合物；日光化学品公司生产)等。
作为乙二胺四聚氧化亚烷基，例如，可以列举乙二胺聚环氧乙烷-聚环氧丙烷缩合物、乙二胺四聚环氧乙烷、乙二胺四聚环氧丙烷等。
作为乙二胺四聚氧化亚烷基的具体例(产品)，可以列举例如アデカプルロニツクTR704、アデカプルロニツクTR701、アデカプルロニツクTR913R(都是乙二胺聚环氧乙烷-聚环氧丙烷缩合物；旭电化公司制)、ユニル-ブ32TY-65BI(乙二胺四聚氧化亚烷基；日本油脂公司制)等。
聚环氧乙烷烷基胺、聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷烷基醚、聚环氧乙烷烯基醚、聚环氧乙烷芳基醚衍生物以及乙二胺四聚氧化亚烷基中的氧化亚烷链(氧乙烯链或者氧丙烯链)的聚合度优选为1～100，更优选为1～60。
作为聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯，可以列举例如聚环氧乙烷苯乙烯化苯基醚硫酸酯、聚环氧乙烷苄基苯基醚硫酸酯等。
作为聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯的具体例(产品)，可以列举，例如ニユ-コ-ル707SF、707SN、714SF、723SF、740SF(都由日本乳化剂公司生产)等。聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯中的氧乙烯链的聚合度优选为1～100，更优选为5～40。
在本发明中，也可以使用2种以上的非离子表面活性剂。作为本发明HDL胆固醇的测定方法中的非离子表面活性剂的浓度，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，但是在反应液中的浓度优选为0.0001～10％，更优选为0.001～1％。
作为本发明中的胆汁酸衍生物，可以列举例如阴离子性胆汁酸衍生物、两性胆汁酸衍生物、非离子胆汁酸衍生物等，优选为阴离子性胆汁酸衍生物。
作为阴离子胆汁酸衍生物，可以列举例如胆酸或其盐、牛磺胆酸或其盐、甘氨胆酸或其盐、石胆酸或其盐、脱氧胆酸或其盐、鹅去氧胆酸或其盐、熊去氧胆酸或其盐、7-氧代石胆酸或其盐、12-氧代石胆酸或其盐、12-氧代鹅去氧胆酸或其盐、7-氧代脱氧胆酸或其盐、猪胆酸或其盐、猪脱氧胆酸或其盐、脱氢胆酸或其盐等。作为盐，可以列举例如铵盐、锂盐、钠盐、钾盐、镁盐、钙盐等。
作为两性胆汁酸衍生物，可以列举例如由通式(II)R1-CH2-CH(R2)-CH2-SO3-(II)[式中，R1为3-(3-胆酰胺丙基)二甲基铵基，R2为氢或羟基]表示的化合物[以下称为化合物(II)]等。以下，把R2是氢的化合物(II)称为CHAPS，把R2是羟基的化合物(I)称为CHAPSO。
作为非离子胆汁酸衍生物，可以列举例如通式(III) (X表示氢原子或者羟基，R3以及R4相同或不同，表示取代或非取代的烷基、或者取代或非取代的链烷酰基)表示的化合物[以下称为化合物(III)]等。作为烷基、链烷酰基中的烷基，可以列举直链或者分链的碳原子数1-10的例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。作为取代烷基以及取代链烷酰基中的取代基，可以列举例如羟基、卤原子等。卤原子是指氟、氯、溴、碘各种原子。在化合物(III)中，优选R3以及R4都是COCH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH2OH(以下称为取代基A)的化合物。以下，把X、R3以及R4分别为氢原子、取代基A以及取代基A的化合物称为deoxy-BIGCHAP，把分别为羟基、取代基A以及取代基A的化合物称为BIGCHAP。
作为胆汁酸衍生物的浓度，只要是能够测定本发明的HDL胆固醇的浓度，就没有特别的限制，优选在反应液中的浓度为0.001～10％，更优选为0.01～1％。
作为在本发明的HDL胆固醇测定方法中使用的水性介质，可以列举例如去离子水、蒸馏水、缓冲液等，优选使用缓冲液。
作为在缓冲液中使用的缓冲剂，可以列举例如三(羟基甲基)氨基甲烷缓冲剂、磷酸缓冲剂、硼酸缓冲剂、Good缓冲剂等。
作为Good缓冲剂，可以列举例如2-吗啉代乙烷磺酸(MES)、双(2-羟基乙基)亚氨基三(羟基甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酸(ADA)、哌嗪-N，N’-双(2-乙烷磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙烷磺酸(ACES)、3-吗啉代-2-羟基丙烷磺酸(MOPSO)、N，N-双(2-羟基乙基)-2-氨基乙烷磺酸(BES)、3-吗啉代丙烷磺酸(MOPS)、N-[三(羟基甲基)甲基]-2-氨基乙烷磺酸(TES)、2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(HEPES)、3-[N，N-双(2-羟基乙基)氨基]-2-羟基丙烷磺酸(DIPSO)、N-[三(羟基甲基)甲基]-2-羟基-3-氨基丙烷磺酸(TAPSO)、哌嗪-N，N’-双(2-羟基丙烷磺酸)(POPSO)、3-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-2-羟基丙烷磺酸(HEPPSO)、3-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]丙烷磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N，N-双(2-羟基乙基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羟基甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、N-环己基-2-氨基乙烷磺酸(CHES)、N-环己基-3-氨基-2-羟基丙烷磺酸(CAPSO)、N-环己基-3-氨基丙烷磺酸(CAPS)等。
缓冲液的浓度只要是适于测量的浓度，就没有特别的限制，优选为0.001-2.0mol/L、更优选为0.005-1.0mol/L。
下面，对本发明的HDL胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒进行具体描述。
(HDL胆固醇的测定方法)作为本发明的HDL胆固醇的测定方法，例如，可以列举以下方式的方法。
测定方法1(1)在含有非离子表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白，根据需要还含有稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂、反应促进剂等的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，(2)根据需要，在过氧化氢测定用试剂或者还原型辅酶测定试剂的存在下，测定生成的过氧化氢或还原型辅酶，(3)通过由(2)测定的值和预先制作的校正曲线算出试样中的HDL胆固醇浓度，从而能够测定试样中的HDL胆固醇。
测定方法2(1)在含有非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白以及胆汁酸衍生物，根据需要还含有稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂、反应促进剂等的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，(2)根据需要，在过氧化氢测定用试剂或者还原型辅酶测定试剂的存在下，测定生成的过氧化氢或还原型辅酶，(3)通过由(2)测定的值和预先制作的校正曲线算出试样中的HDL胆固醇浓度，从而能够测定试样中的HDL胆固醇。
测定方法3(1)在含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物，根据需要还含有聚阴离子、白蛋白、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂、反应促进剂等水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，(2)根据需要，在过氧化氢测定用试剂或者还原型辅酶测定试剂的存在下，测定生成的过氧化氢或还原型辅酶，(3)通过由(2)测定的值和预先制作的校正曲线算出试样中的HDL胆固醇浓度，从而能够测定试样中的HDL胆固醇。
测定方法4(1)在含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯和阴离子性胆汁酸衍生物，根据需要还含有聚阴离子、白蛋白、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂、反应促进剂等水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，(2)根据需要，在过氧化氢测定用试剂或者还原型辅酶测定试剂的存在下，测定生成的过氧化氢或还原型辅酶，(3)通过由(2)测定的值和预先制作的校正曲线算出试样中的HDL胆固醇浓度，从而能够测定试样中的HDL胆固醇。
作为水性介质，例如，可以列举上述的水性介质等。作为稳定化剂，例如，可以列举乙二胺四乙酸(EDTA)、蔗糖、氯化钙等。作为防腐剂，例如，可以列举叠氮化钠、抗生素等。作为影响物质消除剂，例如，可以列举用于消除抗坏血酸影响的抗坏血酸氧化酶等。作为反应促进剂，例如，可以列举辅脂肪酶、磷脂酶等酶、硫酸钠、氯化钠等盐类等。
在本测定方法中，(1)以及的(2)反应在相同或不同的条件下，同时或者依次分别在例如10～50℃，优选为20～40℃下，进行1～60分钟，优选2～30分钟。
生成的过氧化氢的量，例如可以利用过氧化氢测定用试剂进行测定。过氧化氢测定用试剂是用于将生成的过氧化氢转变成能够检测的物质的试剂。作为能够检测的物质，例如，可以列举色素、光发射等，优选色素。当能够检测的物质是色素时，过氧化氢测定用试剂含有氧化显色型发色体以及过氧化物酶等过氧化活性物质。作为氧化显色型发色体，例如，可以列举所述的氧化显色型发色体。当能够检测的物质是光发射时，过氧化氢测定用试剂含有化学发光物质。作为化学发光物质，例如，可以列举鲁米诺、异鲁米诺、光泽精、吖啶酯等。
当使用含有氧化显色型发色体以及过氧化物酶等过氧化活性物质的试剂作为过氧化氢测定用试剂时，在过氧化活性物质的存在下，过氧化氢与氧化显色型发色体反应而生成色素，通过对生成的色素定量，就能够定量过氧化氢。另外，当使用含有化学发光物质的过氧化氢测定用试剂时，过氧化氢与化学发光物质反应而生成光子，通过对生成的光子定量，就能够定量过氧化氢。
作为氧化显色型发色体，例如可以列举隐色体型发色体、氧化偶联显色型发色体等。隐色体型发色体是在过氧化氢以及过氧化物酶等过氧化活性物质的促在下单独能够转化成色素的物质。
作为隐色体型发色体，例如可以列举10-N-羧基甲基氨基甲酰基-3，7-双(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪(CCAP)、10-N-甲基氨基甲酰基-3，7-双(二甲基氨基)-10H-吩噻嗪(MCDP)、N-(羧基甲基氨基羰基)-4，4’-双(二甲基氨基)二苯基胺钠盐(DA-64)、4，4’-双(二甲基氨基)二苯基胺、双[3-双(4-氯苯基)甲基-4-二甲基氨基苯基]胺(BCMA)等。
氧化偶联显色型发色体是在过氧化氢以及过氧化物酶等过氧化活性物质的存在下，2个化合物发生氧化偶合而生成色素的物质。作为2个化合物的组合，可以列举偶合剂和苯胺类的组合、偶合剂和苯酚类的组合等。
作为偶合剂，例如，可以列举4-氨基安替比林(4-AA)、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮肼等。作为苯胺类，可以列举N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3，5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N，N-二甲基-3-甲基苯胺、N，N-二(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-琥珀酰乙二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’-乙酰乙二胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-4-氟-3，5-二甲氧基苯胺(F-DAOS)等。
作为苯酚类，可以列举苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羟基-2，4，6-三碘苯甲酸(HTIB)等。
在过氧化氢的测定中，过氧化活性物质的浓度只要是适于测定的浓度，就没有特别的限制，当使用过氧化物酶作为过氧化活性物质时，浓度优选为1～100kU/L。另外，氧化显色型发色体的浓度只要是适于测定的浓度，就没有特别的限制，优选为0.01～10g/L。
作为还原型辅酶的测定方法，例如可以列举测定生成的还原型辅酶的吸光度的方法、使用还原型辅酶测定用试剂的方法等。在测定还原型辅酶吸光度的方法中的吸光度优选为300～500nm，更优选为330～400nm，特别优选为340nm附近。还原型辅酶测定用试剂是用于将生成的还原型辅酶转化成能够检测的物质的试剂。作为能够检测的物质，例如可以列举色素。当能够检测的物质是色素时，作为还原型辅酶测定用试剂，例如可以列举含有黄递酶、电子载体以及还原显色型发色体的试剂。作为电子载体，例如可以列举1-甲氧基-5-甲基吩嗪二甲硫醚等。当使用含有黄递酶、电子载体以及还原显色型发色体的试剂作为还原型辅酶测定用试剂的情况下，还原显色型发色体被转化而生成色素，通过定量所得色素，就能够定量还原型辅酶。
作为还原显色型发色体，可以列举例如3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-溴化四唑鎓(MTT)、2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2H-四唑鎓一钠盐(WST-1)、2-(4-碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2H-四唑鎓一钠盐(WST-3)等。
(HDL胆固醇测定用试剂)
作为本发明的HDL胆固醇测定用试剂，例如，列举以下式样的试剂。
试剂1含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂2含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂。
试剂3含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白以及氧化型辅酶的试剂。
试剂4含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶的试剂。
试剂5含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂试剂6含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆汁酸衍生物、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂7含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂8含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、阴离子性胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂9
含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯、阴离子性胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂试剂10含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯以及氧化型辅酶的试剂。
试剂11含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、阴离子性胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶的试剂。
试剂12含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯、阴离子性胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶的试剂。
试剂13含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂14含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、阴离子性胆汁衍生物、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂15含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、聚环氧乙烷烷基胺或聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯、阴离子性胆汁酸衍生物、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
在本发明的HDL胆固醇测定用试剂中，可以使用上述本发明的HDL胆固醇测定方法中列举的胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脱氢酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆汁酸衍生物、过氧化氢测定用试剂、氧化型辅酶、还原型辅酶测定用试剂。
(HDL胆固醇测定用试剂盒)本发明的HDL胆固醇测定用试剂也可以以试剂盒的形式保存、流通以及使用。作为试剂盒的形式，没有特别的限制，可以任意为2试剂体系、3试剂体系等，但是，优选为2试剂体系。
在由第一试剂和第二试剂组成的2试剂体系的HDL胆固醇测定用试剂盒中，可以在第一试剂和第二试剂中分别含有胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶，也可以在第二试剂中同时含有胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶，当在第一试剂和第二试剂中分别含有的情况下，优选在第一试剂中含有胆固醇酯水解酶，在第二试剂中含有胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶的方式。还可以在第一试剂、第二试剂或者两者中含有聚阴离子，优选在第一试剂中含有。还可以在第一试剂、第二试剂或者两者中含有非离子表面活性剂和白蛋白。还可以在第一试剂、第二试剂或者两者中含有采用胆固醇脱氢酶的测定方法中使用的氧化型辅酶。
可以在第一试剂、第二试剂或者两者中含有过氧化氢测定用试剂，当该试剂含有氧化偶联型发色体的情况下，优选在分别的试剂中含有氧化偶联型发色体的各自化合物的方式。还可以在第一试剂、第二试剂或者两者中含有还原型辅酶测定用试剂。另外，还可以在第一试剂、第二试剂或者两者中含有胆汁酸衍生物。
对于本发明的试剂盒，例如，列举如下的方式。
高密度脂白蛋白中的胆固醇测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于任意地在第一试剂、第二试剂或者两者中含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、非离子表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂，根据需要还含有胆汁酸衍生物、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂，在第二试剂中含有胆固醇氧化酶。
高密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇氧化酶的第二试剂，在第一试剂、第二试剂或者两者中任意地含有胆固醇酯水解酶、非离子表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂，根据需要还含有胆汁酸衍生物、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂。
高密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于在第一试剂、第二试剂或者两者中任意地含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、非离子表面活性剂、白蛋白以及氧化型辅酶，根据需要还含有还原型辅酶测定用试剂、胆汁酸衍生物、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂，在第二试剂中含有胆固醇脱氢酶。
高密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇脱氢酶的第二试剂，在第一试剂、第二试剂或者两者中任意地含有胆固醇酯水解酶、非离子表面活性剂、白蛋白以及氧化型辅酶，根据需要还含有还原型辅酶测定用试剂、胆汁酸衍生物、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂。
高密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于在第一试剂、第二试剂或者两者中任意地含有胆固醇酯水解酶、聚环氧乙烷烷基胺或聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定试剂，根据需要还含有聚阴离子、白蛋白、稳定剂、防腐剂以及影响物质消除剂，在第二试剂中含有胆固醇氧化酶。
高密度脂蛋白中的胆固醇测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于在第一试剂、第二试剂或者两者中任意地含有胆固醇酯水解酶、聚环氧乙烷烷基胺或聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶，根据需要还含有还原型辅酶测定试剂、聚阴离子、白蛋白、稳定剂、防腐剂以及影响物质消除剂，在第二试剂中含有胆固醇脱氢酶。
为了更详细地说明本发明，例如，列举如下方式的试剂盒，这些实施方式并不对本发明的范围构成任何限制。
试剂盒1第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒2第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒3第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇氧化酶、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒4第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒5第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒6第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒7第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白以及非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶的试剂。
试剂盒8第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及胆汁酸衍生物的试剂。
第二试剂含有胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶的试剂。
试剂盒9第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白以及非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇脱氢酶、胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶的试剂。
试剂盒10第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白以及非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂盒11第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及胆汁酸衍生物的试剂。
第二试剂含有胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂盒12第一试剂含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、白蛋白以及非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶、胆汁酸衍生物以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂盒13第一试剂含有聚阴离子、白蛋白以及非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶的试剂试剂盒14第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶以及胆汁酸衍生物的试剂。
试剂盒15
第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及胆汁酸衍生物的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶的试剂。
试剂盒16第一试剂含有聚阴离子、白蛋白以及非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂盒17第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶、还原型辅酶测定用试剂以及胆汁酸衍生物的试剂。
试剂盒18第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、非离子表面活性剂以及胆汁酸衍生物的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶、氧化型辅酶以及还原型辅酶测定用试剂的试剂。
试剂盒19第一试剂含有聚阴离子、白蛋白以及过氧化氢测定用试剂的试剂第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒20第一试剂含有聚阴离子、白蛋白、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒21第一试剂含有聚阴离子、白蛋白以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、非离子表面活性剂、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒22第一试剂含有聚阴离子以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、白蛋白、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒23第一试剂含有聚阴离子、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、白蛋白、非离子表面活性剂以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒24第一试剂含有聚阴离子以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、白蛋白、非离子表面活性剂、胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒25第一试剂含有阴离子性胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒26第一试剂含有过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、阴离子性胆汁酸衍生物、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒27第一试剂含有聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及过氧化氢测定用试剂的试剂。
试剂盒28第一试剂含有过氧化氢测定用试剂的试剂。
第二试剂含有胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及过氧化氢测定试剂的试剂。
在本发明的HDL胆固醇测定用试剂盒中，可以使用在上述本发明的HDL胆固醇的测定方法中列举的胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脱氢酶、非离子表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆汁酸衍生物、过氧化氢测定用试剂、氧化型辅酶、还原型辅酶测定用试剂。
在本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒中，根据需要还可以含有上述的水性介质、稳定剂、防腐剂、影响物质消除剂、反应促进剂等。
本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒可以是冷冻干燥的状态，也可以是溶解在水性介质中的状态。当使用冷冻干燥状态的试剂测定试样中的HDL胆固醇时，将该试剂溶解在水性介质中而使用。
本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒中的胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脱氢酶的含量优选在溶解于水性介质的状态下的浓度为0.01～800U/mL的含量，更优选为0.02～400U/mL的含量。本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒中的非离子表面活性剂的含量优选在溶解于水性介质的状态下的浓度为0.0001～10％的含量，更优选为0.001～5％的含量。本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒中的聚阴离子的含量优选在溶解于水性介质的状态下的浓度为0.001～10％的含量，更优选为0.01～5％的含量。
本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒中的白蛋白含量优选在溶解于水性介质的状态下的浓度为0.001～10％的含量，更优选为0.01～5％的含量。本发明的HDL胆固醇测定用试剂以及测定用试剂盒中的胆汁酸衍生物的含量优选在溶解于水性介质的状态下的浓度为0.001～10％的含量，更优选为0.01～5％的含量。
以下，通过实施例对本发明进行更详细地说明，但是，这些实施例并不对本发明的范围构成任何限制。而且，在本实施例中，使用下面的生产商的试剂以及酶。
HEPES(BDH Laboratory公司生产)、EMSE(ダイト-化学公司制)、硫酸葡聚糖钠(分子量50万)(Pharmacia公司制)、硫酶葡聚糖钠(分子量8万)(ICN公司制)、ι-卡拉胶(纯正化学公司制)、肝素锂(和光纯药公司制)、磷钨酸钠(关东化学公司制)、牛血清白蛋白(BSA；Oriental制)、4-氨基安替比林(琦京化成公司制)、过氧化物酶(东洋纺绩公司制)、LPL311(胆固醇酯水解酶；东洋纺绩公司制)、COO321(胆固醇氧化酶；东洋纺绩公司制)、LPL6(胆固醇酯水解酶；天野酶公司制)、ナイミ-ン L207(聚环氧乙烷十二烷基胺；日本油脂公司制)、ナイミ-ン S204(聚环氧乙烷十八烷基胺；日本油脂公司制)、ナイミ-ンS210(聚环氧乙烷十八烷基胺；日本油脂公司制)、ニユ-コ-ルOD420(聚环氧乙烷十八烷基胺；日本乳化剂公司制)、パイォニンD3104(聚环氧乙烷月桂基胺；竹本油脂公司制)、パイォニンD3110(聚环氧乙烷月桂基胺；竹本油脂公司制)、パイォニンD3605[聚环氧乙烷烷基(大豆)胺；竹本油脂公司制]、ニユ-コ-ル2608F(聚氧化亚烷基多环苯基醚；日本乳化剂公司制)、ニユ-コ-ルR1020(聚环氧乙烷壬基苯基醚甲醛缩合物；日光化学品公司公司制)、アデカプルロニツクTR704(乙二胺聚环氧乙烷-聚环氧丙烷缩合物；旭电化公司制)、エマルミンL90S(聚环氧乙烷月桂基醚；三洋化成公司制)、胆酸钠(ACROS公司制)、牛磺胆酸钠(东京化成公司制)、ニユ-コ-ル740-SF、ニユ-コ-ル707-SF(都是聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯盐；日本乳化剂公司制)。
实施发明的最佳方式参考例1化学修饰LP311(经过化学修饰的LPL311)的调制向HEPES缓冲液(pH8.5，0.15mol/L)中添加LPL311，并使其浓度为33g/L，冷却至5℃后，添加サンブライトVFM-4101(日本油脂公司制)，并使其浓度为330g/L，进一步反应3小时。不对所得修饰酶溶液进行精制分离，并直接用作为化学修饰LPL311。
实施例1 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂A)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万)1.0g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL60.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例2 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂A)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万)1.0g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例3 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂c)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L胆酸钠6.0g/L过氧化物酶20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO3213.0kU/L实施例4 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂A)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂d)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L胆酸钠6.0g/L过氧化物酶20kU/L化学修饰LPL3110.2kU/L
COO321 3.0kU/L比较例1 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒第一试剂(试剂B)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/LBSA 2.0g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0)10mmol/L4氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL60.05kU/LCOO321 3.0kU/L比较例2 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂C)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万)1.0g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL60.05kU/LCOO321 3.0kU/L比较例3 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂D)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/Lナイミ-ンL2070.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L比较例4 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂E)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA 2.0g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L比较例5 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂F)HEPES(pH7.5) 10mmol/F
EMSE 0.3g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL2070.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L比较例6 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂G)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/Lナイミ-ンL2070.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL60.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例5 HDL胆固醇的测定使用实施例1的试剂盒，并利用日立7170型自动分析装置而测定血清40个试样中的HDL胆固醇。
(1)校正曲线的制作使用生理盐水(HDL胆固醇浓度0.0mg/dL)以及血清(HDL胆固醇浓度60.0mg/dL)作为标准溶液，使用实施例1的试剂盒作为试剂盒，并利用日立7170型自动分析装置制作表示HDL胆固醇浓度和“吸光度”之间的关系的校正曲线。
这里所谓“吸光度”，表示在以下反应测定的2个吸光度(E1以及E2)的基础上，从E2减去E1而得到的值。
向反应池添加标准溶液(3μL)和第一试剂(0.24mL)，在37℃下加热5分钟，利用主波长600nm、副波长700nm测定反应液的吸光度(E1)，接着，向该反应液添加第二试剂(0.08mL)，进一步在37℃下加热5分钟，利用主波长600nm、副波长700nm测定反应液的吸光度(E2).
(2)通过人类血清试样和实施例1的试剂盒的反应而计算该试样的“吸光度”除了使用人类血清试样而替代在制作(1)的校正曲线中使用的标准溶液以外，利用与计算(1)的“吸光度”的方法相同的方法，计算该试样的“吸光度”。
(3)人类血清试样中的HDL胆固醇浓度的测定通过(2)计算的“吸光度”和(1)制作的校正曲线，测定各试样中的HDL胆固醇浓度。
实施例6 HDL胆固醇的测定除了使用实施例2的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例7 HDL胆固醇的测定除了使用实施例3的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例8 HDL胆固醇的测定除了使用实施例4的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例7 HDL胆固醇的测定除了使用比较例1的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例8 HDL胆固醇的测定除了使用比较例2的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例9 HDL胆固醇的测定除了使用比较例3的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例10 HDL胆固醇的测定除了使用比较例4的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例11 HDL胆固醇的测定除了使用比较例5的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例12 HDL胆固醇的测定除了使用比较例6的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5相同的测定方法，并利用日立7170自动分析装置而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
接着，利用实施例5～8以及比较例7～12的测定中使用的人类血清40个试样，并通过《临床化学》Clinical Chemistry-第45卷，10号(1999年)记载的DCM法(Designated Comparison Method)测定该试样中的HDL胆固醇，并与各实施例以及比较例的值进行比较。
在表1中表示实施例5～8以及比较例7～12各自的测定法与利用DCM法的测定法之间的相关系数。
表1
通过比较实施例5和比较例7～12，可以知道只有在使用除了胆固醇测定用酶以外而含有BSA、硫酶葡聚糖钠以及聚环氧乙烷烷基胺全部的试剂盒的测定中，才能够得到与通过DCM法的测定良好的相关系数。通过比较实施例5和实施例6，可以判断即使在使用经过化学修饰的胆固醇酯水解酶的测定中，也能够获得与通过DCM法的测定良好的相关系数。通过比较实施例5和实施例7，以及比较实施例6和实施例8，可以认识到在使用除了胆固醇测定用酶、BSA、硫酶葡聚糖钠、聚环氧乙烷烷基胺以外而添加作为胆汁酸衍生物之一的胆酸钠的试剂盒的测定中，也能获得与通过DCM法的测定良好的相关性。
实施例9 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂H)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量8万)0.5g/LBSA2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L
第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL60.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例10 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂I)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/Lι-卡拉胶 0.5g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL60.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例11 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂J)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L肝素锂 0.5g/LBSA 2.0g/L
ナイミ-ンL2070.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例12 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂K)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L磷钨酸钠 0.5g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL2070.07g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例13 HDL胆固醇的测定除了使用实施例9的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例14 HDL胆固醇的测定除了使用实施例10的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例15 HDL胆固醇的测定除了使用实施例11的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例16 HDL胆固醇的测定除了使用实施例12的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
在表2中表示实施例13～16各自的测定法与利用DCM法的测定法之间的相关系数。
表2
通过比较实施例5和实施例13～16，可以知道即使在使用除硫酶葡聚糖钠(分子量50万)以外的聚阴离子的情况下，也能够获得与通过DCM法的测定良好的相关系数。
实施例17 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂L)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L
硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA2.0g/Lニユ-コ-ルOD4200.05g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例18 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂M)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA2.0g/LパイォニンD36050.01g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例19 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂N)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA 2.0g/LエマルミンL90S 0.05g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例20 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂O)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA 2.0g/Lニツコ-ル2608F 0.2g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例21 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂P)
HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA2.0g/Lニツコ-ルR1020 0.2g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例22 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂Q)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA2.0g/LアデカプルロニツクTR7041.5g/L第二试剂(试剂a)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/LLPL6 0.05kU/LCOO321 3.0kU/L实施例23 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂Q)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA2.0g/LアデカプルロニツクTR7041.5g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例24 HDL胆固醇的测定除了使用实施例17的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例25 HDL胆固醇的测定除了使用实施例18的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例26 HDL胆固醇的测定除了使用实施例19的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例27 HDL胆固醇的测定除了使用实施例20的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例28 HDL胆固醇的测定除了使用实施例21的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例29 HDL胆固醇的测定除了使用实施例22的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例30 HDL胆固醇的测定除了使用实施例23的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。在表3中表示实施例24～30各自的测定法与通过DCM的测定法之间的相关系数。
表3
可以知道与实施例5相同，即使在使用ナイミ-ンL207(聚环氧乙烷十二烷基胺)以外的非离子表面活性剂的情况下，也能够获得与DCM法的测定良好的相关系数。另外，通过比较实施例29和实施例30，可以知道即使在使用经过化学修饰的胆固醇酯水解酶的测定中，也能够获得与通过DCM法的测定良好的相关系数。
实施例31 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂R)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L牛磺胆酸钠 2.7g/L第二试剂(试剂e)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/LパイオニンD3104 0.05g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例32 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂R)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L牛磺胆酸钠 2.7g/L第二试剂(试剂f)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/Lナイミ-ン S204 0.05g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例33 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂R)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L牛磺胆酸钠2.7g/L第二试剂(试剂g)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/Lナイミ-ン S2100.05g/L过氧化物酶20kU/L化学修饰LPL3110.2kU/LCOO3213.0kU/L实施例34 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂S)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L胆酸钠2.0g/L第二试剂(试剂g)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/Lナイミ-ン S2100.05g/L过氧化物酶20kU/L化学修饰LPL3110.2kU/LCOO3213.0kU/L实施例35 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂T)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L甘氨胆酸钠 2.4g/L第二试剂(试剂g)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/Lナイミ-ン S210 0.05g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例36 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂D)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂d)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L胆酸钠 6.0g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例37 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂F)
HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/LBSA 2.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂d)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L胆酸钠6.0g/L过氧化物酶20kU/L化学修饰LPL3110.2kU/LCOO3213.0kU/L实施例38 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂G)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/Lナイミ-ンL207 0.07g/L第二试剂(试剂d)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林0.3g/L胆酸钠6.0g/L过氧化物酶20kU/L化学修饰LPL3110.2kU/LCOO3213.0kU/L比较例13 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂R)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L牛磺胆酸钠 2.7g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例14 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂S)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L胆酸钠 2.0g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例15 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂T)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L
甘氨胆酸钠 2.4g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例16 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂U)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二试剂(试剂e)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例17 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂U)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二试剂(试剂f)HEPES(pH 7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/Lナイミ-ンS204 0.05g/L
过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL3110.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例18 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用的试剂盒。
第一试剂(试剂U)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L第二试剂(试剂g)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/Lナイミ-ンS210 0.05g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例39 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例40 HDL胆固醇的测定除了使用实施例32的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例41 HDL胆固醇的测定除了使用实施例33的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例42 HDL胆固醇的测定除了使用实施例34的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例43 HDL胆固醇的测定除了使用实施例35的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例44 HDL胆固醇的测定除了使用实施例36的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例45 HDL胆固醇的测定除了使用实施例37的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例46 HDL胆固醇的测定除了使用实施例38的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例19 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代比较例13的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例20 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代比较例14的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例21 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代比较例15的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例22 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代比较例16的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例23 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代比较例17的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例24 HDL胆固醇的测定除了使用实施例31的试剂盒而替代比较例18的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
在表4中表示实施例39～46以及比较例19～21各自的测定法与通过DCM的测定法之间的相关系数。
表4
通过比较实施例39～43和比较例19～24，可以知道含有阴离子性胆汁酸衍生物和聚环氧乙烷烷基胺的试剂盒的测定与通过DCM法的测定的相关系数优于只含有阴离子性胆汁酸衍生物或聚环氧乙烷烷基胺的试剂盒的测定。另外，通过比较实施例44和实施例45～46，可以认为在使用除了胆固醇测定用酶、阴离子性胆汁酸衍生物、聚环氧乙烷烷基胺外，还添加了葡聚糖硫酸或者白蛋白的试剂盒的测定中，也能够获得与通过DCM法的测定的良好的关联性。
实施例47 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂V)HEPES(pH7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/Lニユ-コ-ル740SF 0.5g/L第二试剂(试剂h)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/LパイオニンD3110 0.05g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例48 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂W)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/Lニユ-コ-ル707SF 0.5g/L第二试剂(试剂i)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/Lナイミ-ン L207 0.1g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例49 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂W)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L
ニユ-コ-ル707SF 0.5g/L第二试剂(试剂h)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/LパイォニンD3110 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例50 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂X)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万)1.0g/Lニユ-コ-ル707SF 0.5g/L第二试剂(试剂h)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/LパイォニンD3110 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例51 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂Y)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L
BSA2.0g/Lニユ-コ-ル707SF0.5g/L第二试剂(试剂h)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/Lパイォニン D3110 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例52 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂Z)HEPES(pH7.5) 10mmol/LEMSE 0.3g/L硫酶葡聚糖钠(分子量50万) 1.0g/LBSA2.0g/Lニユ-コ-ル707SF0.5g/L第二试剂(试剂h)HEPES(pH7.0) 10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/LパイォニンD31100.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例25 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂V)
HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/Lニユ-コ-ル740SF 0.5g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例26 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂W)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/Lニユ-コ-ル707SF 0.5g/L第二试剂(试剂b)HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L比较例27 HDL胆固醇测定用试剂盒调制由以下的第一试剂以及第二试剂组成的HDL胆固醇测定用试剂盒。
第一试剂(试剂U)HEPES(pH7.5)10mmol/LEMSE0.3g/L第二试剂(试剂h)
HEPES(pH7.0)10mmol/L4-氨基安替比林 0.3g/LパイォニンD3110 0.3g/L过氧化物酶 20kU/L化学修饰LPL311 0.2kU/LCOO321 3.0kU/L实施例53 HDL胆固醇的测定除了使用实施例47的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例54 HDL胆固醇的测定除了使用实施例48的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例55 HDL胆固醇的测定除了使用实施例49的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例56 HDL胆固醇的测定除了使用实施例50的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例57 HDL胆固醇的测定除了使用实施例51的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
实施例58 HDL胆固醇的测定除了使用实施例52的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例28 HDL胆固醇的测定除了使用比较例25的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例29 HDL胆固醇的测定除了使用比较例26的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
比较例30 HDL胆固醇的测定除了使用比较例27的试剂盒而替代实施例1的试剂盒以外，通过与实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析试剂盒而测定人类血清40个试样中的HDL胆固醇。
在表5中表示实施例53～58以及比较例28～30各自的测定法与通过DCM的测定法之间的相关系数。
表5
通过比较实施例53～55和比较例28～30，可以知道含有聚环氧乙烷多环苯基硫酸酯和聚环氧乙烷烷基胺的试剂盒的测定与通过DCM法的测定的相关系数优于只含有聚环氧乙烷多环苯基硫酸酯或聚环氧乙烷烷基胺的试剂盒的测定。另外，通过比较实施例55和实施例56～58，可以认为在使用除了胆固醇测定用酶、聚环氧乙烷多环苯基硫酸酯、聚环氧乙烷烷基胺之外，还添加了硫酸葡聚糖和/或白蛋白的试剂盒的测定中，也能够获得与通过DCM法的测定的良好的关联性。
实施例59 M蛋白血症患者的血清中的HDL胆固醇的测定使用取自M蛋白血症患者的血清作为试样，使用实施例1的试剂盒作为测定用试剂盒，并通过实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析装置而测定HDL胆固醇。向试样中添加第一试剂，反应5分钟，在表6中表示所得的吸光度，即添加第二试剂前的反应液的吸光度(E1)的值，在表7中表示HDL胆固醇的测定值。另外，作为比较值，在表7中还表示通过DCM法测定该取自M蛋白血症患者的血清时的测定值。
比较例31 M蛋白血症患者的血清中的HDL胆固醇的测定使用取自M蛋白血症患者的血清作为试样，使用比较例5的试剂盒作为测定用试剂盒，并通过实施例5的测定法，并利用日立7170自动分析装置而测定HDL胆固醇。向试样中添加第一试剂，反应5分钟，在表6中表示所得的吸光度，即添加第二试剂前的反应液的吸光度(E1)的值，在表7中表示HDL胆固醇的测定值。
表6
如表6所示，可以知道当使用比较例5的测定试剂盒时，即使在添加第二试剂前，由不溶于水的蛋白引起的混浊也不会消失，当使用含有硫酶葡聚糖钠的实施例1的测定试剂盒的情况下，在添加第二试剂前，由不溶于水的蛋白引起的混浊消失。
表7
如表7所示，使用实施例1的试剂盒的测定(实施例59)值与通过DCM法的测定值大致相同，使用比较例5的试剂盒的测定(比较例31)值与利用实施例59的方法或DCM法的测定值相差很大，并没有反映出正确的测定。如上所述，可以明白通过使用本发明的试剂盒，能够正确地测定M蛋白血症患者试样中的HDL胆固醇。
工业实用性本发明提供能够简便、且正确地测定的HDL胆固醇的测定方法、测定用试剂以及测定用试剂盒。
权利要求
1.试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶、或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
2.如权利要求1所述的测定方法，其中，水性介质含有胆汁酸衍生物。
3.如权利要求2所述的测定方法，其中，胆汁酸衍生物为阴离子性胆汁酸衍生物。
4.如权利要求1～3任一项所述的测定方法，其中，非离子性表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。
5.如权利要求1～4任一项所述的测定方法，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
6.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有非离子性表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂。
7.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有非离子性表面活性剂、聚阴离子、白蛋白、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶。
8.如权利要求7所述的试剂，其中，进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
9.如权利要求6～8任一项所述的试剂，其中，进一步含有胆汁酸衍生物。
10.如权利要求9所述的试剂，其中，胆汁酸衍生物是阴离子性胆汁酸衍生物。
11.如权利要求6～10任一项所述的试剂，其中，非离子表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。
12.如权利要求6～11任一项所述的试剂，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
13.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，由第一试剂以及第二试剂组成，其特征在于第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、非离子性表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂，在第二试剂中含有胆固醇氧化酶。
14.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇氧化酶的第二试剂，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、非离子性表面活性剂、白蛋白以及过氧化氢测定试剂。
15.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于第二试剂中含有胆固醇脱氢酶，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、聚阴离子、非离子性表面活性剂、白蛋白以及氧化型辅酶。
16.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于包括含有聚阴离子的第一试剂和含有胆固醇脱氢酶的第二试剂，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都含有胆固醇酯水解酶、非离子性表面活性剂、白蛋白以及氧化型辅酶。
17.如权利要求15或者16所述的试剂盒，其中，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
18.如权利要求13～17任一项所述的试剂盒，其中，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者都进一步含有胆汁酸衍生物。
19.如权利要求18所述的试剂盒，其中，胆汁酸衍生物为阴离子性胆汁酸衍生物。
20.如权利要求13～19任一项所述的试剂盒，其中，非离子性表面活性剂为聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺。
21.如权利要求13～20任一项所述的试剂盒，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
22.试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有i)非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白或者ii)聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
23.试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法，其特征在于在含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
24.如权利要求23所述的方法，其中，进一步含有聚阴离子。
25.如权利要求23或者24所述的方法，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
26.如权利要求23～25任一项所述的方法，其中，进一步含有白蛋白。
27.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物、胆固醇酯水解酶、胆固醇氧化酶以及过氧化氢测定用试剂。
28.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂，其特征在于含有聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物、胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶以及氧化型辅酶。
29.如权利要求28所述的试剂，其中，进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
30.如权利要求27～29任一项所述的试剂，其中，进一步含有聚阴离子。
31.如权利要求30所述的试剂，其中，聚阴离子为硫酸葡聚糖或其盐。
32.如权利要求27～31任一项所述的试剂，其中，进一步含有白蛋白。
33.高密度脂蛋白中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于由第一试剂以及第二试剂组成，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者任意地含有胆固醇酯水解酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物以及过氧化氢测定试剂，在第二试剂含有胆固醇氧化酶。
34.高密度脂蛋白质中胆固醇的测定用试剂盒，其特征在于由第一试剂以及第二试剂组成，第一试剂、第二试剂的其中之一或者两者任意地含有胆固醇酯水解酶、聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺、聚环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或者阴离子性胆汁酸衍生物以及氧化型辅酶，在第二试剂中含有胆固醇脱氢酶。
35.如权利要求34所述的试剂盒，其中，进一步含有还原型辅酶测定用试剂。
36.如权利要求33～35任一项所述的试剂盒，其中，进一步含有聚阴离子。
37.如权利要求33～36任一项所述的试剂盒，其中，进一步含有白蛋白。
全文摘要
试样中的高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法以及试剂，其特征在于在含有i)非离子性表面活性剂、聚阴离子以及白蛋白或者ii)聚环氧乙烷烷基胺或者聚环氧乙烷烯基胺以及环氧乙烷多环苯基醚硫酸酯或阴离子胆汁酸衍生物的水性介质中，使试样和i)胆固醇酯水解酶以及胆固醇氧化酶、或者ii)胆固醇酯水解酶、氧化型辅酶以及胆固醇脱氢酶反应，测定生成的过氧化氢或者还原型辅酶。
文档编号C12Q1/60GK1694965SQ200380100779
公开日2005年11月9日 申请日期2003年10月16日 优先权日2002年10月16日
发明者片山有基, 藤中真由美 申请人:协和梅迪克斯株式会社