针对引起SARS冠状病毒基因的siRNA核酸序列及其药物用途的利记博彩app

专利名称：：针对引起SARS冠状病毒基因的siRNA核酸序列及其药物用途的利记博彩app
技术领域：
：本发明涉及一种针对引起SARS冠状病毒基因的小干扰RNA序列及含有该小干扰RNA序列的药物及其用途。
背景技术：
：严重急性呼吸系统综合症(以下简称SARS)，又称非典型性肺炎，是由一种新的冠状病毒引起的一种传染病，最先爆发于中国广东，随后向周边国家和地区蔓延，截止到2003年5月17日，已经扩散到32个国家和地区，共报道了超出7000例的SARS病例。其发病特征为高烧、全身不适、头疼、干咳、呼吸困难、血氧过少、肺部出现空洞，能够发现全身性间隙浸润液，严重的需要采用插管法或呼吸机帮助病人进行呼吸，死亡率高达15％左右(KanchanAnand，JohnZiebuhr，ParveshWadhwaniandetal.，Science，2003，Science3001763-1767；)。SARS临床诊断表现为淋巴细胞减少、白细胞减少、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶水平升高。世界卫生组织负责传染病的执行干事戴维·海曼于2003年4月16日宣布，经过全球科研人员的通力合作，正式确认冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体，科学家将其命名为“SARS病毒”。SARS冠状病毒是一种正义、单链RNA病毒，是RNA病毒中基因组最大的病毒，它本身没有细胞结构，不能自主复制，但一旦进入人体细胞，就能利用细胞中的各种资源在宿主细胞中不断进行复制(QINE’de，ZHUQingyu，YUManandetal.，AcompletesequenceandcomparativeanalysisofaSARS-associatedvirus(IsolateBT01)，ChineseScienceBulletin，2003，48(10)941-948；MarcoA.Marra，StevenJ.M.Jones，CarolineR.Astellandetal.，TheGenomeSequenceoftheSARS-AssociatedCoronavirus，2003，Science3001399-1404；ChristianDrosten，StephanGunther，WolfgangPreiserandetal.，Identificationofanovelcoronaviralinpatientswithsevereacuterespiratorysyndrome，theNewEnglandJournalofMedicine，April10，2003)。SARS冠状病毒主要通过呼吸道传播，由于病毒的寄生特性，很难找到合适的药物，因为药物在杀死病毒的同时，往往也会误伤健康细胞(PaulA.Rota，M.StevenOberste，StephanS.Monroeandetal.，CharacterizationofaNovelCoronavirusAssociatedwithSevereAcuteRespiratorySyndrome，2003，Science3001394-1399；)。1995年，康奈尔大学的SuGuo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年，AndrewFire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA(FireA，XuS，MelloCC.etal.Potentandspecificgeneticinterferencebydouble-strandedRNAinCaenorhabditiselegansNature1998；391(6669)806-11)。这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的。这种双链RNA对基因表达的阻断作用被称为RNA干预(RNAinterference，以下简称RNAi)。近几年来，RNAi的研究取得了很大的进展，被《Science》杂志评为2001年的十大科学成就之一。2002年RNAi的研究又有了新的突破，发现它在基因表达调控中发挥重要作用，从而使其名列2002年《Science》杂志评选的十大科学成就之首。由于RNAi可以非常简单地替代基因敲除制备基因缺失表型的个体，从而研究某个基因的功能，并且可以大规模地开展研究，在世界各地，越来越多的研究人员开始迫不及待地开展研究RNAi或者在自己的研究领域使用这项崭新的技术。生物体内的双链RNA可来自于RNA病毒感染，转座子的转录产物，外源导入的基因。这些来源的双链RNA诱发了细胞内的RNAi机制，结果是病毒被清除，转座子的表达被阻断，外源导入基因表达被阻断同时，与其同源的细胞基因组中的基因表达也被阻断。RNAi还具有很高的特异性。19个核苷酸的双链RNA几乎可以完全抑制基因的表达，而将其中的一个核苷酸突变掉后，它对基因的抑制作用就消失了(Brummelkamp.T.R，Bernads.R，Agami.R.AsystemforstableexpressionofshortinterferingRNAsinMammaliancells.Science.2002；296550-553)，这对双链RNA的应用是非常重要的，这可以避免双链RNA降解与靶mRNA同家族的其他的mRNA。最有效的小分子干扰RNA(smallinterferenceRNA，以下简称siRNA)是21个碱基大小、3’端有两个碱基突出的双链RNA。SiRNA的序列专一性要求非常严格，与靶mRNA之间的一个碱基错配都会显著削弱基因沉默的效果(BrownD，JarvisR，PallottaVandetal.，RNAinterferenceinmammaliancellculturedesign，executionandanalysisofthesiRNAeffect，Technotes，9(1)3-5；MiyagishiMandTairaK.，U-6promoter-drivensiRNAswithfoururidine3’-overhangsefficientlysuppresstargetedgeneexpressioninmammaliancells，NatureBiotechnology，20497-500)。在细胞内部，一个拷贝的基因会产生200-300条mRNA，翻译出10万个具有生物学功能的蛋白质分子。传统药物一般是作用于具有生物学功能的蛋白质分子空间构型上的一两个位点，由于蛋白质立体结构非常复杂，药物可作用的靶位点又很少，因而特异性不会非常高。而siRNA是通过碱基配对的原理来识别所作用的靶基因，从理论上说，一条长度为17个碱基的siRNA分子，其碱基排列顺序在人体全部基因中是唯一的。所以，长度超过17个碱基的siRNA分子在人体全部基因中的结合位点即是唯一的，这就使siRNA具有高度的特异性。毒理学研究也证明，siRNA在体内具有很低的毒性。所以与传统药物相比，siRNA药物具有高选择性、高效性以及低副作用等优点，特别是在抑制肿瘤生长和抗病毒(如HIV-1、HCV和HBV等)繁殖等方面，已经有了一批相当出色的研究成果(JohnCapodici，KatalinKarikó，andDrewWeissman，InhibitionofHIV-1InfectionbySmallInterferingRNA-MediatedRNAInterference，J.Immunol.，Nov2002；1695196-5201；GlenA.CoburnandBryanR.Cullen，PotentandSpecificInhibitionofHumanImmunodeficiencyVirusType1ReplicationbyRNAInterference，J.Virol.，Sep2002；769225-9231；Wee-SungPark，NaokoMiyano-Kurosaki，MasaakiHayafuneandetal.，PreventionofHIV-1infectioninhumanperipheralbloodmononuclearcellsbyspecificRNAinterference，NucleicAcidsRes.，Nov2002；304830-4835；SharookhB.Kapadia，AmyBrideau-Andersen，andFrancisV.Chisari，InterferenceofhepatitisCvirusRNAreplicationbyshortinterferingRNAs，PNAS，Feb2003；1002014-2018；TakanoriYokota，NaoyaSakamoto，NobuyukiEnomotoandetal.，InhibitionofintracellularhepatitisCvirusreplicationbysyntheticandvector-derivedsmallinterferingRNAs；AntonPMcCaffrey，Hiroyukinakai，KusumPandeyandetal.，InhibitionofHepatitisBvirusinmicebyRNAinterference，NatureBiotechnology，volume21，number6，June2003，639-644)。
发明内容本发明的目的之一是提供严重急性呼吸系统综合症(SARS)的冠状病毒基因组上的靶序列，其特征在于当所筛选出的siRNA序列与这些靶序列中一个或几个特异性地作用，可以阻断引起SARS冠状病毒基因在人体或动物体内的复制或表达。本发明的目的之二是提供一种发夹状双链siRNA序列，该序列一个或其组合在感染了SARS的人或动物体内可特异性地与引起SARS冠状病毒基因的相应区域相结合，从而抑制引起SARS冠状病毒基因在体内的复制或表达。本发明的目的之三是提供一些人工合成的核苷酸序列对，该序列对在体外可与启动子拼接，进行PCR扩增后，得到小分子干扰RNA(siRNA)PCR产物，该产物在转入感染了SARS的人体或动物体内后，经转录酶转录得到的发夹状双链siRNA序列，特异性地与引起SARS冠状病毒基因的相应区域相结合，抑制引起SARS冠状病毒基因的复制。本发明的目的之四是提供含有上述人工合成的核苷酸序列对、小分子干扰RNA的PCR产物、siRNA序列及可药用载体或赋形剂的药物组合物。本发明的目的之五是提供上述人工合成的核苷酸序列对、小分子干扰RNA的PCR产物、siRNA序列用于制备抗SARS药物的用途。本发明的目的之六是提供上述人工合成的核苷酸序列对、小分子干扰RNA的PCR产物、siRNA序列用于制备SARS冠状病毒导致的其他药物的用途。本发明以严重急性呼吸系统综合症(SARS)病毒全基因组序列为攻击位点，我们选择的SARS冠状病毒为BJ01SARS毒株，测序工作由中国科学院北京华大基因研究中心和中国军事医学科学院微生物与流行病学研究所合作完成；在GenBank中的登陆号(ACCESSIONNUMBER)为AY278488；3.相关文章发表于2003年5月2日的《中国科学通报》电子版上；筛选出一系列的靶序列，该靶序列系列及其在基因上的位点为target-1S5’AAGAACGGTAATAAGGGAGCC3’637-657target-2S5’AATAAGCGTGCCTACTGGGTT3’1516-1536target-3S5’AAGAAGAAGAGGAAGACTGGC3’3188-3208target-4S5’AAAAAGGCTGGTGGCACTACT3’4102-4122target-5S5’AACCCTAAGACACCCAAGTAT3’10284-10304target-6S5’AATGTGGAAAGGTTATGGCTG3’13044-13064target-7S5’AATGGACTCACTGGTACTGGT3’22352-22372target-8S5’AACATCATCCGGTGATGCTAC3’15134-15154target-9S5’AAGCTGTTACAGCCAATGTAA3’15190-15210target-10S5’AATGAAGTACAACTATGAACC3’10703-10723根据筛选出来的引起SARS冠状病毒基因上的靶序列，设计出相应的核苷酸序列对。采用亚磷酰胺固相合成法合成了针对上述靶位点的对应核苷酸序列对如下，其长度均为57个或47个核苷酸残基。将合成后经纯化的寡核苷酸用碘处理，将磷酸硫酯键转化为磷酸二酯键，然后用常规的DNA测序方法对所有合成的序列对进行序列测定，结果证明与设计序列一致，以毛细管电泳法测定所有核酸序列对的分子量，发现与理论分子量近似相等。将合成好的核苷酸序列对通过体外与启动子拼接，优选地为U6，进行PCR扩增后，形成双链DNA，称为小分子干扰(siRNA)PCR产物，在这里我们标识为Silencer系列序列，然后纯化、回收扩增产物。Silencer系列序列可以用脂质体或其他载体等转入细胞中，借助细胞内存在的转录酶转录为siRNA，特异性地与导致严重急性呼吸系统综合症(SARS)的冠状病毒的特定基因的不同区域相结合，使得引起SARS冠状病毒基因在感染的人或动物体内的复制或表达过程被阻断。将含有Silencer系列序列及或将上述药物组合物送P3实验室，进行验证。各Silencer序列(siRNAPCR产物)或其组合在转染剂脂质体的作用下进入经SARS冠状病毒BJ-01感染的非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)细胞中，然后经细胞内的转录酶转录得到的发夹状双链siRNA序列，特异性地与引起SARS冠状病毒基因的相应区域相结合，介导RNA诱导沉默复合体(RISC)及其他相关机制起作用，从而使得引起SARS冠状病毒基因组的复制或表达被阻断，如下所示siRNA15’CCGAGGGAAUAAUGGCAAGAAACACAUCCUUGCCAUUAUUCCCUCGG3’siRNA25’UUGGGUCAUCCGUGCGAAUAAACACAUCAUUCGCACGGAUGACCCAA3’siRNA35’CGGUCAGAAGGAGAAGAAGAAACACAUCCUUCUUCUCCUUCUGACCG3’siRNA45’UCAUCACGGUGGUCGGAAAAAACACAUCUUUCCGACCACCGUGAUGA3’siRNA55’UAUGAACCCACAGAAUCCCAAACACAUCGGGAUUCUGUGGGUUCAUA3’siRNA65’GUCGGUAUUGGAAAGGUGUAAACACAUCACACCUUUCCAAUACCGAC3’siRNA75’UGGUCAUGGUCACUCAGGUAAACACAUCACCUGAGUGACCAUGACCA3’siRNA85’CAUCGUAGUGGCCUACUACAAACACAUCGUAGUAGGCCACUACGAUG3’siRNA95’AUGUAACCGACAUUGUCGAAACACAUCCGACAAUGUCGGUUACAUU3’siRNA105’CCAAGTATCAACATGAAGUAAACACAUCACUUCAUGUUGAUACUUGG3’筛选结果显示，其中7个Silencer序列或其组合均具有不同程度的抑制SARS冠状病毒损伤(大于12％)的特性，其中Silencer(1+2+7)组合和Silencer5具有较高的抑制SARS冠状病毒生长(大于50％)的活性。即所筛选出来的七个siRNA序列或其组合，都不同程度地对SARS病毒的复制有抑制作用，其中优先的是siRNA(1+2+7)组合和siRNA5。毋庸讳言，本发明提供了一系列在引起SARS冠状病毒基因上可以被siRNA或反义核酸序列攻击的靶序列，因此，凡是可以作用于本靶序列以阻断病毒基因在感染的人或动物体内复制或表达的核苷酸片段都是本发明所要求保护的内容。本发明提供的Silencer序列系列、siRNA系列序列、可与其他药用载体或赋形剂的组成药物组合物。通过对感染SARS冠状病毒的动物或人体进行各种方式的给药，以达到治疗SARS或其他由SARS冠状病毒导致的疾病。综上所述，本发明所述的互补于引起SARS冠状病毒基因不同部位的siRNA序列具有抑制SARS冠状病毒增殖的特性，在SARS的治疗方面显示出诱人的前景。可以通过不同的化学修饰，采用不同的长度和不同程度同源性的序列发展为具有临床应用价值的抗SARS冠状病毒的药物。图1加入Silencer系列反义核酸序列后，在siRNA作用下，感染了SARS冠状病毒的非洲绿猴肾细胞的存活率具体实施方式在下面的具体实施方式将进一步说明本发明，但并不限制本发明范围。实施例1S系列siRNA序列攻击靶位目标的确定及对应核苷酸序列对的合成。本发明选择的SARS冠状病毒为BJ01SARS毒株为攻击目标，BJ01SARS毒株测序工作由中国科学院北京华大基因研究中心和中国军事医学科学院微生物与流行病学研究所合作完成；在GenBank中的登陆号(ACCESSIONNUMBER)为AY278488；相关文章发表于2003年5月2日的《中国科学通报》电子版上；筛选出一系列的靶序列，该靶序列系列及其在基因上的位点为target-1S5’AAGAACGGTAATAAGGGAGCC3’637-657target-2S5’AATAAGCGTGCCTACTGGGTT3’1516-1536target-3S5’AAGAAGAAGAGGAAGACTGGC3’3188-3208target-4S5’AAAAAGGCTGGTGGCACTACT3’4102-4122target-5S5’AACCCTAAGACACCCAAGTAT3’10284-10304target-6S5’AATGTGGAAAGGTTATGGCTG3’13044-13064target-7S5’AATGGACTCACTGGTACTGGT3’22352-22372target-8S5’AACATCATCCGGTGATGCTAC3’15134-15154target-9S5’AAGCTGTTACAGCCAATGTAA3’15190-15210target-10S5’AATGAAGTACAACTATGAACC3’10703-10723在整个引起SARS冠状病毒基因图谱(约30Kb)的各个基因区段上选定siRNA攻击的位点即靶序列，长为21个碱基。然后根据确定的靶序列设计出相应的S系列核苷酸序列对，其长度均为57个或47个核苷酸残基。1S15’TACACAAAGAACGGTAATAAGGGAGCCGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’1S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGGCTCCCTTATTACCGTTCCTACACAAAGA3’2S15’TACACAAATAAGCGTGCCTACTGGGTTGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’2S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAAACCCAGTAGGCACGCTTACTACACAAATA3’3S15’TACACAAAGAAGAAGAGGAAGACTGGCGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’3S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGCCAGTCTTCCTCTTCTTCCTACACAAAGA3’4S15’TACACAAAAAAGGCTGGTGGCACTACTGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’4S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAAGTAGTGCCACCAGCCTTTCTACACAAAAA3’5S15’TACACAAACCCTAAGACACCCAAGTATGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’5S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAATACTTGGGTGTCTTAGGGCTACACAAACC3’6S15’TACACAAATGTGGAAAGGTTATGGCTGGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’6S25’CGAAAAGGCCTAAAAAACAGCCATAACCTTTCCACACTACACAATG3’7S15’TACACAAATGGACTCACTGGTACTGGTGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’7S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAACCAGTACCAGTGAGTCCACTACACAAATG3’8S15’TCAACAAACATCATCCGGTGATGCTACGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’8S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGTAGCATCACCGGATGATGCTACACAAACA3’9S15’TACACAAAGCTGTTACAGCCAATGTAAGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’9S25’CGAAAAGGCCTAAAAAATTACATTGGCTGTAACAGCCTACACAAAGC3’10S15’TACACAAATGAAGTACAACTATGAACCGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’10S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGGTTCATAGTTGTACTTCACTACACAAATG3’使用美国PE公司应用生物系统部(APPLIEDBIOSYSTEMS)制造的392型DNA-RNA合成仪及其配套试剂，以亚磷酰胺固相合成法合成所设计的siRNA。合成原料均由合成仪生产厂商提供。操作步骤为本领域常规方法，在此不再赘死述。纯化产物冻干后得到白色粉末状物质，储存于-20℃，进行产品分析。1.用质谱(MALDI-TOF-MS)测定分子量；2.用毛细管凝胶电泳测定其纯度；3.DNA测序法测定序列；MALDI-TOF-MS测定的分子量与寡核苷酸的理论分子量相符。毛细管凝胶电泳纯度分析结果显示本发明中的SARS系列siRNA纯品的纯度大于95％。序列测定证明本发明中的S系列核苷酸序列对与设计序列相同。实施例2S系列核苷酸序列对的化学组成结构将合成后经纯化的S系列核苷酸序列对用碘处理，将磷酸硫酯键转化为磷酸二酯键，然后用常规的DNA测序方法对所合成的核苷酸序列对进行序列测定，结果显示得到的核苷酸序列与设计序列一致；以毛细管电泳法测定所有核苷酸序列的分子量，发现与理论分子量近似相等。实施例3体外通过PCR方法将各S系列核苷酸序列对和U6启动子进行拼接和扩增，纯化、回收扩增产物根据常规分子生物学实验步骤，以特异性引物通过PCR方法对从人的细胞中扩增、纯化得到全长的U6启动子DNA片段。以超纯水将合成纯化的S系列核苷酸序列对对稀释成10pM。通过PCR方法分别将各S系列核苷酸序列对中的两条链分别与U6启动子进行拼接和扩增，随后对得到的PCR产物进行回收纯化，得到Silencer系列样品。Silencer15，AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGGCTCCCTTATTACCGTTCTTTGTGTAGGAACGGTAATAAGGGAGCCTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer25，AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCAACCCAGTAGGCACGCTTATTTGTGTAGTAAGCGTGCCTACTGGGTTTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer35’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGCCAGTCTTCCTCTTCTTCTTTGTGTAGGAAGAAGAGGAAGACTGGCTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer45’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCAGTAGTGCCACCAGCCTTTTTTGTGTAGAAAGGCTGGTGGCACTACTTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer55’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCATACTTGGGTGTCTTAGGGTTTGTGTAGCCCTAAGACACCCAAGTATTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer65’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCCAGCCATAACCTTTCCACATTTGTGTAGTGTGGAAAGGTTATGGCTGTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer75’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCACCAGTACCAGTGAGTCCATTTGTGTAGTGGACTCACTGGTACTGGTTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer85’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGTAGCATCACCGGATGATGTTTGTGTAGCATCATCCGGTGATGCTACTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer95’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCTTACATTGGCTGTAACAGCTTTGTGTAGGCTGTTACAGCCAATGTAATTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer105’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGGTTCATAGTTGTACTTCATTTGTGTAGCCCTAAGACACCCAAGTATTTTTTTAGGCCTTTTCG3’实施例4Silencer系列siRNA药物的制备将Silencer系列样品用PBS(500ml溶液中含有9.566克十二水Na2HPO4，0.977克二水NaH2PO4和2.2克NaCl)溶解，BeckmanDU640分光光度计定量，根据实验所需样品量分别取样，如表1所示。表1注每孔体积均为100ul。溶液A脂质体+转染培养基144μl，于1.5ml灭菌EP管中，轻轻混匀，室温放置30-40分钟；(脂质体的量根据不同的Silencer浓度增减，每管中含3个复孔的量)；溶液B(ODNs+转染培养基)150μl，于1.5ml灭菌EP管中，轻轻混匀；所需ODNs的体积是根据转染液的体积×所需浓度×孔数/原始ODNs的摩尔浓度计算得到的，如100μl×1000nM×3孔/XnM；将溶液A与溶液B混合，轻轻混匀，室温放置15分钟；实施例5Si系列siRNA序列对于感染了SARS病毒的非洲绿猴肾细胞的抑制1.将实施例4中表1中所述药物组合物在培养感染了SARS病毒-BJ-01株的非洲绿猴肾细胞(Vero-E6)上进行验证。在P3实验室操作。2.SARS冠状病毒剂量为10-3(病毒半数感染剂量TCID50＝10-7，本实验所使用的病毒剂量高于病毒半数感染剂量四个数量级)，通常是2-3天病变。3.药物的剂量为1uM4.评判指标(用CPE法测定药效)细胞无病变细胞病变在25％以下+细胞病变在26-50％++细胞病变在51-75％+++细胞病变在76-100％++++细胞存活率的计算按上述的观察等级估算。细胞病变在+至+++之间则按细胞病变等级范围的中位数计算。例如当计数在一时，细胞病变等级为0。当计数为25％以下时，病变按12.5％计算。当计数在25-50％时，病变按38％计算。当计数在50-75％时，病变按63％计算。细胞病变在76-100％时，病变按100％计算。5.实验程序第一天铺板消化和收集VERO-E6细胞，用完全培养液配成2.5×105/ml的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl。37℃，5％CO2条件下培养18-24小时。第二天镜检观察细胞布满孔底面积80-90％成片，状态良好即可开始正式实验，将原来的细胞培养液全部吸弃，每孔加入100μl待筛选的药物于96孔细胞培养板中(含一定量的脂质体)，每个待检样品做3个复孔。1hr后，加入100μl/孔SARSBJ-01病毒(10-3)，2-3小时后吸弃100μl/孔，加入完全培养基100μl/孔，放入37℃，5％CO2培养箱继续培养。另外设定脂质体、脂质体+组，脂质体组只加转染培养基，不加脂质体及寡核苷酸；脂质体+组加入一定量的脂质体，不加脂质体。第三天-第四天当病毒对照孔全部病变时，观察药物对细胞的保护效应。6.实验初步结果实验设正常细胞对照和病毒对照。正常细胞对照为不加病毒亦不加药物；在实验全过程应当无病变。病毒对照为加病毒但不加药物；在实验终点应当全部病变。药物对照为加药物不加病毒，在实验全过程应当无病变。实验初步结果未加药物和未加SARS冠状病毒的正常细胞对照在实验全过程中未见病变加入SARS冠状病毒的病毒对照在实验终点全部病变，显示重度损伤或100％死亡，药物本身对VERO-E6细胞未显示毒性。筛选结果如表2所示表2与未加药物但加入SARS冠状病毒的严重损伤或100％死亡的细胞相比，药物序列Silencer(1+2+7)组合和Silencer5对感染SARS冠状病毒的VERO-E6细胞均显示具有明显的保护作用(＞50％)；药物序列Silencer1、Silencer2、Silencer7和Silencer(3+4+6)显示有一定程度的保护作用(12～50％)。勿需赘言，本发明的抗SARS具有很大的可能采用不同的长度和不同程度同源性的序列发展为具有临床应用价值的抗SARS冠状病毒的药物。单独使用或与其他药物联合使用进行SARS的治疗，这对在本领域的普通技术人员看来是显而易见的。序列表<110>北京金赛狮反义核酸技术开发有限责任公司<120>针对引起SARS冠状病毒基因的siRNA核酸序列及其药物用途<160>20<170>PatentInVersion2.1<210>target-1S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(637)...(657)<223>n＝a或g或c或t<400>target-1SAAGAACGGTAATAAGGGAGCC21<210>target-2S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(1516)...(1536)<223>n＝a或g或c或t<400>target-2SAATAAGCGTGCCTACTGGGTT21<210>target-3S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(3188)...(3208)<223>n＝a或g或c或t<400>target-3SAAGAAGAAGAGGAAGACTGGC21<210>target-4S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(4102)...(4122)<223>n＝a或g或c或t<400>target-4SAAAAAGGCTGGTGGCACTACT21<210>target-5S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(10284)...(10304)<223>n＝a或g或c或t<400>target-5SAACCCTAAGACACCCAAGTAT21<210>target-6S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(13044)...(13064)<223>n＝a或g或c或t<400>target-6SAATGTGGAAAGGTTATGGCTG21<210>target-7S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(22352)...(22372)<223>n＝a或g或c或t<400>target-7SAATGGACTCACTGGTACTGGT21<210>target-8S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(15134)...(15154)<223>n＝a或g或c或t<400>target-8SAACATCATCCGGTGATGCTAC21<210>target-9S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(15190)...(15210)<223>n＝a或g或c或t<400>target-9SAAGCTGTTACAGCCAATGTAA21<210>target-10S<211>21<212>DNA<213>SARS冠状病毒BJ-01毒株(Coronaviridae)<220><221>Exon<222>(10703)...(10723)<223>n＝a或g或c或t<400>target-10SAATGAAGTACAACTATGAACC21<210>siRNA1<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA1CCGAGGGAAUAAUGGCAAGAAACACAUCCUUGCCAUUAUUCCCUCGG47<210>siRNA2<211>47<212>RNA<2l3>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA2UUGGGUCAUCCGUGCGAAUAAACACAUCAUUCGCACGGAUGACCCAA47<210>siRNA3<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA3CGGUCAGAAGGAGAAGAAGAAACACAUCCUUCUUCUCCUUCUGACCG47<210>siRNA4<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA4UCAUCACGGUGGUCGGAAAAAACACAUCUUUCCGACCACCGUGAUGA47<210>siRNA5<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA5UAUGAACCCACAGAAUCCCAAACACAUCGGGAUUCUGUGGGUUCAUA47<210>siRNA6<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA6GUCGGUAUUGGAAAGGUGUAAACACAUCACACCUUUCCAAUACCGAC47<210>siRNA7<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA7UGGUCAUGGUCACUCAGGUAAACACAUCACCUGAGUGACCAUGACCA47<210>siRNA8<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA8CAUCGUAGUGGCCUACUACAAACACAUCGUAGUAGGCCACUACGAUG47<210>siRNA9<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA9AUGUAACCGACAUUGUCGAAACACAUCCGACAAUGUCGGUUACAUU47<210>siRNA10<211>47<212>RNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(1)...(47)<223>n＝a或g或c或u<400>siRNA10CCAAGTATCAACATGAAGUAAACACAUCACUUCAUGUUGAUACUUGG4权利要求1.引起严重急性呼吸系统综合症(SARS)的冠状病毒基因组上的靶序列，其特征在于当所筛选出的人工序列与下列靶序列中的一个或几个特异性地作用，可以阻断该引起SARS冠状病毒基因在感染了SARS的人或动物体内的复制或表达，所述的靶序列如下target-1S5’AAGAACGGTAATAAGGGAGCC3’target-2S5’AATAAGCGTGCCTACTGGGTT3’target-3S5’AAGAAGAAGAGGAAGACTGGC3’target-4S5’AAAAAGGCTGGTGGCACTACT3’target-5S5’AACCCTAAGACACCCAAGTAT3’target-6S5’AATGTGGAAAGGTTATGGCTG3’target-7S5’AATGGACTCACTGGTACTGGT3’target-8S5’AACATCATCCGGTGATGCTAC3’target-9S5’AAGCTGTTACAGCCAATGTAA3’target-10S5’AATGAAGTACAACTATGAACC3’2.一种siRNA序列，其特征在于在给感染了SARS的人或动物有效量后，可特异性地与权利要求1所述的引起SARS冠状病毒基因上的靶序列结合，以阻断引起SARS冠状病毒基因在人体或动物体内的复制或表达。3.一些核苷酸序列对，其特征在于，在体外可与启动子拼接，进行PCR扩增后，得到小分子干扰RNA(siRNA)PCR产物，该产物转入感染了SARS的人体或动物体内后，经转录酶转录得到的发夹状双链siRNA序列，特异性地与引起SARS冠状病毒基因的相应区域相结合，抑制引起SARS冠状病毒基因的复制或表达，所述的核苷酸序列对选自1S15’TACACAAAGAACGGTAATAAGGGAGCCGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’1S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGGCTCCCTTATTACCGTTCCTACACAAAGA3’2S15’TACACAAATAAGCGTGCCTACTGGGTTGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’2S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAAACCCAGTAGGCACGCTTACTACACAAATA3’3S15’TACACAAAGAAGAAGAGGAAGACTGGCGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’3S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGCCAGTCTTCCTCTTCTTCCTACACAAAGA3’4S15’TACACAAAAAAGGCTGGTGGCACTACTGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’4S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAAGTAGTGCCACCAGCCTTTCTACACAAAAA3’5S15’TACACAAACCCTAAGACACCCAAGTATGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’5S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAATACTTGGGTGTCTTAGGGCTACACAAACC3’6S15’TACACAAATGTGGAAAGGTTATGGCTGGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’6S25’CGAAAAGGCCTAAAAAACAGCCATAACCTTTCCACACTACACAATG3’7S15’TACACAAATGGACTCACTGGTACTGGTGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’7S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAACCAGTACCAGTGAGTCCACTACACAAATG3’8S15’TCAACAAACATCATCCGGTGATGCTACGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’8S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGTAGCATCACCGGATGATGCTACACAAACA3’9S15’TACACAAAGCTGTTACAGCCAATGTAAGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’9S25’CGAAAAGGCCTAAAAAATTACATTGGCTGTAACAGCCTACACAAAGC3’10S15’TACACAAATGAAGTACAACTATGAACCGGTGTTTCGTCCTTTCCACAAGATATATAA3’10S25’CGAAAAGGCCTAAAAAAGGTTCATAGTTGTACTTCACTACACAAATG3’4.一种小分子干扰RNA(siRNA)PCR产物，其特征为该产物转入进入感染SARS的人或动物体内后，经转录酶转录得到发夹状双链siRNA序列，可特异性地与引起SARS冠状病毒基因的相应区域相结合，抑制引起SARS冠状病毒基因在体内的复制或表达，该siRNA的PCR产物为以下序列之一或其组合(标识为Silencer序列)Silencer15’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGGCTCCCTTATTACCGTTCTTTGTGTAGGAACGGTAATAAGGGAGCCTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer25’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGGTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCAACCCAGTAGGCACGCTTATTTGTGTAGTAAGCGTGCCTACTGGGTTTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer35’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGCCAGTCTTCCTCTTCTTCTTTGTGTAGGAAGAAGAGGAAGACTGGCTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer45’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCAGTAGTGCCACCAGCCTTTTTTGTGTAGAAAGGCTGGTGGCACTACTTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer55’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCATACTTGGGTGTCTTAGGGTTTGTGTAGCCCTAAGACACCCAAGTATTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer65’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCCAGCCATAACCTTTCCACATTTGTGTAGTGTGGAAAGGTTATGGCTGTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer75’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCACCAGTACCAGTGAGTCCATTTGTGTAGTGGACTCACTGGTACTGGTTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer85’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGTAGCATCACCGGATGATGTTTGTGTAGCATCATCCGGTGATGCTACTTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer95’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCTTACATTGGCTGTAACAGCTTTGTGTAGGCTGTTACAGCCAATGTAATTTTTTAGGCCTTTTCG3’Silencer105’AAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCAAACACCGGTTCATAGTTGTACTTCATTTGTGTAGCCCTAAGACACCCAAGTATTTTTTTAGGCCTTTTCG3’5.如权利要求4所述的一种小分子干扰RNA(siRNA)PCR产物，其中优选的为Silencer(1+2+7)序列组合。6.如权利要求4所述的一种小分子干扰RNA(siRNA)PCR产物，其中优选的为Silencer5序列。7.一种发夹状双链siRNA序列，其特征为在感染了SARS的人或动物体内可特异性地与引起SARS冠状病毒基因的相应区域相结合，抑制引起SARS冠状病毒基因在体内的复制或表达，该siRNA序列为以下序列之一或其组合siRNA15’CCGAGGGAAUAAUGGCAAGAAACACAUCCUUGCCAUUAUUCCCUCGG3’siRNA25’UUGGGUCAUCCGUGCGAAUAAACACAUCAUUCGCACGGAUGACCCAA3’siRNA35’CGGUCAGAAGGAGAAGAAGAAACACAUCCUUCUUCUCCUUCUGACCG3’siRNA45’UCAUCACGGUGGUCGGAAAAAACACAUCUUUCCGACCACCGUGAUGA3’siRNA55’UAUGAACCCACAGAAUCCCAAACACAUCGGGAUUCUGUGGGUUCAUA3’siRNA65’GUCGGUAUUGGAAAGGUGUAAACACAUCACACCUUUCCAAUACCGAC3’siRNA75’UGGUCAUGGUCACUCAGGUAAACACAUCACCUGAGUGACCAUGACCA3’siRNA85’CAUCGUAGUGGCCUACUACAAACACAUCGUAGUAGGCCACUACGAUG3’siRNA95’AUGUAACCGACAUUGUCGAAACACAUCCGACAAUGUCGGUUACAUU3’siRNA105’CCAAGTATCAACATGAAGUAAACACAUCACUUCAUGUUGAUACUUGG3’8.如权利要求7所述的发夹状双链siRNA序列，其中优选的为siRNA(1+2+7)序列组合。9.如权利要求7所述的发夹状双链siRNA序列，其中优选的为siRNA5序列。10.含有权利要求2-9中之一的所述的核苷酸序列及可药用载体或赋形剂的药物组合物。11.如权利要求2-9之一所述的核苷酸序列用于制备抗SARS药物的用途。12.如权利要求2-9之一所述的核苷酸序列用于制备其它由于SARS冠状病毒引起的疾病的药物的用途。全文摘要本发明涉及一种针对引起严重急性呼吸系统综合症(SARS)冠状病毒基因的小分子干扰(siRNA)序列，该序列可与引起SARS冠状病毒基因的特定位点上的核苷酸序列互补，根据碱基互补原理，该siRNA序列在感染SARS人体或动物体内与引起SARS冠状病毒基因的特定位点相结合，从而阻断该基因在人体或动物体内的复制或表达，以达到治疗该疾病的目的。本发明还涉及引起SARS冠状病毒基因上siRNA攻击的靶序列，以及含有siRNA序列及前期序列的药物组合物，及其药物用途。文档编号C12P19/00GK1569878SQ0315023公开日2005年1月26日申请日期2003年7月22日优先权日2003年7月22日发明者刘健平,宋霞申请人:北京金赛狮反义核酸技术开发有限公司